摘要 為探究湖北雜交枸杞濃漿飲料的營養(yǎng)品質與緩解運動疲勞的功效，以湖北雜交枸杞為原料制備枸杞濃漿飲料，并與市售北方枸杞濃漿飲料對比，分析其理化成分特性和抗氧化能力；動物實驗中，測定用不同劑量（4、8、12 mL/kg）枸杞濃漿飲料灌胃后小鼠的負重游泳力竭時間，以及運動后肝糖原（liver glycogen，LG）、肌糖原（muscle glycogen，MG）、血乳酸（blood lactic acid，BLA）、血尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量，超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）和谷胱甘肽還原酶（gluathione reductase，GR）的活性，并與空白組的各項指標進行對比。結果顯示，湖北雜交枸杞濃漿飲料含酚類（175.44 μg/g）、黃酮（98.91 μg/g）、蛋白質（1.90 mg/g）、甜菜堿（0.30 mg/mL）和Se（1.59 μg/kg）等活性物質，其含量均高于市售枸杞濃漿飲料，并具有較好的抗氧化活性。湖北雜交枸杞濃漿飲料的中、高劑量組（8、12 mL/kg）可以有效延長小鼠的負重游泳時間，對緩解小鼠運動疲勞效果均有顯著提高（Plt;0.05），分別是空白組的1.66 和2.10 倍，且高劑量組（12 mL/kg）是市售枸杞濃漿飲料組的1.32 倍，差異顯著（Plt;0.05）；運動后湖北雜交枸杞濃漿飲料高劑量組小鼠的MG、LG 含量相較空白組分別提高47.03%、116.22%，并且BLA、BUN、MDA 含量均顯著下降（Plt;0.05），SOD 和GR 活性均顯著增加（Plt;0.05）。結果表明，湖北雜交枸杞濃漿飲料含有豐富的營養(yǎng)物質，具有良好的抗氧化活性和較好的抗疲勞效果，為湖北雜交枸杞功能性食品開發(fā)提供了新思路。

關鍵詞 湖北雜交枸杞； 抗疲勞； 負重游泳； 肝糖原； 血尿素氮； 運動飲料

中圖分類號 TS255.44 文獻標識碼 A 文章編號 1000-2421（2024）06-0316-09

枸杞（Lycium barbarum），主要分布于我國西北和華北等地區(qū)，尤以寧夏、新疆和青海等地種植最為普遍，是藥食同源的營養(yǎng)保健型食品和傳統(tǒng)中藥材［1］。枸杞果實為鮮亮的橢球狀漿果，含有多種功能成分［2］?，F(xiàn)代藥理學研究表明，枸杞富含多糖、甜菜堿、類胡蘿卜素、黃酮、多種氨基酸以及微量元素等成分，具有抑菌、抗誘變、降血脂、降血糖、抗衰老和抗疲勞等多種功能活性［3-5］。

湖北雜交枸杞是通過先將寧夏枸杞誘導加倍，再與華夏枸杞（湖北當?shù)匾吧坭剑╇s交后成功選育，于1987 年定型并通過科技成果鑒定［3］。近年來，湖北省建始縣枸杞種植面積已近467 hm2，年產鮮果1 000 余t［6］，是當?shù)刂匾慕洕魑?，同時也是當?shù)剜l(xiāng)村振興的重要產業(yè)之一。研究表明，湖北雜交枸杞的藥用成分符合我國藥典的標準要求，其營養(yǎng)成分與寧夏枸杞基本持平［3］。

目前，國內外涌現(xiàn)出眾多以枸杞為原料開發(fā)的相關產品，主要針對中老年、青少年、辦公族和運動族等不同群體。由于湖北雜交枸杞鮮果的水分含量高達90% 以上，高水分含量導致加工干燥時間延長、干燥溫度升高，干制時容易破裂，內容物流出，不易加工成“枸杞子”制品，最終導致產品質量下降和能源消耗增加等問題。相較于加工成干果，將枸杞加工為濃漿飲料的方式不僅可以較好地保留枸杞的色香味及營養(yǎng)成分，還具有即飲、便攜的特點，已成為新型枸杞消費市場的主體產品。因此，將湖北雜交枸杞加工成枸杞濃漿飲料并探究其健康效應是高質化加工的有益探索。

健康運動的興起使得運動疲勞恢復成為一大需求。疲勞是由于長時間運動導致機體工作能力短暫下降、能量供應短缺、代謝產物積聚和氧化應激作用等因素引發(fā)的一種生理現(xiàn)象，會削弱身體的運動能力，同時降低免疫能力、肌肉功能和神經系統(tǒng)的穩(wěn)定［7］。長期疲勞會引發(fā)急性循環(huán)器官疾?。ㄈ缒X血管疾病和心血管疾?。?-9］，甚至致命癥狀?，F(xiàn)代營養(yǎng)學研究認為，具有抗氧化活性的物質能改善細胞代謝，恢復失調的內環(huán)境，從而延緩或消除疲勞［7］。為緩解疲勞，目前常用的解決辦法是使用提取物、化學藥物和氨基酸等營養(yǎng)補充劑［10-12］，但皆存在一定的局限性。隨著人們健康意識的逐漸加強，人們更喜歡通過膳食攝入富含天然活性成分食物的方法去緩解運動疲勞。枸杞濃漿飲料憑借其豐富的營養(yǎng)價值和傳統(tǒng)的養(yǎng)生功效，有望成為緩解運動疲勞的理想選擇。當前關于枸杞飲料的研究主要聚焦于以我國北方枸杞為原料的產品加工工藝優(yōu)化及營養(yǎng)品質分析方面［13-15］，而以湖北雜交枸杞鮮果為原料展開的加工工藝和生理活性評價的研究鮮有報道。

本研究以湖北雜交枸杞為研究對象，制備枸杞濃漿飲料，并與市售北方枸杞為原料的濃漿飲料進行比較，分析其營養(yǎng)品質以及抗疲勞功效，旨在為湖北雜交枸杞高質化加工產品的開發(fā)提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

SPF 級昆明種小鼠80 只，雄性，體質量（20±2）g，河南斯克貝斯生物科技股份有限公司，實驗動物許可證號：SCXK（豫）2020-0005，實驗倫理審查編號：HZAUMO-2024-0069。在試驗期間，所有小鼠均在標準實驗室條件（溫度：20～26 °C，濕度：40%～70%，12 h 光/暗循環(huán)）下飼養(yǎng)，自由飲食。

湖北雜交枸杞鮮果，湖北枸杞珍酒業(yè)有限公司；紅牛飲料，北京紅牛維他命飲料有限公司；市售枸杞飲料（100% 原果漿；原料產地：寧夏），網上某商城采購；甜菜堿標品、沒食子酸、蘆丁、2，2-聯(lián)氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二銨鹽（ABTS），1，1-二苯基苦基苯肼（DPPH），上海源葉生物科技有限公司；甲醇、乙腈，賽默飛世爾科技（中國）有限公司；肝糖原（liver glycogen，LG）、肌糖原（muscle glycogen，MG）、血乳酸（blood lactic acid，BLA）、血尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）和谷胱甘肽還原酶（gluathione reductase，GR）試劑盒，南京建成生物工程研究所。

1.2 儀器與設備

JYL-Y32 高速破壁調理機，九陽電器有限公司；AH-MINI PLUS 大流量均質機，多寧生物有限公司；ATY-244 電子分析天平，日本島津；Multiskan Sky 全波長酶標儀，賽默飛世爾科技有限公司；UltiMate3000 UHPLC 液相色譜（二級陣列檢測器），ThermoFisher Scientific；Aglient7800 型電感耦合等離子體質譜儀，美國安捷倫科技有限公司；Allegra X-15R 低溫高速離心機，美國Beckman Coulter 有限公司；HH-2恒溫水浴鍋，國華電器有限公司。

1.3 枸杞濃漿飲料的制備

湖北枸杞濃漿飲料的制備流程如圖1 所示。

1.4 枸杞濃漿飲料主要營養(yǎng)成分的測定

總酚、類黃酮和類胡蘿卜素含量的測定參照文獻［16］?？扇苄蕴?、還原糖、可溶性蛋白含量的測定參照文獻［17］。枸杞多糖的含量測定參考GB/T18672—2014《枸杞》中附錄A 分光光度法。甜菜堿的提取參照文獻［18］。礦物質元素的測定參考GB5009.268—2016《食品中多元素的測定》中第一法，采用電感耦合等離子體質譜法（ICP-MS）測定Na、K、Se、Mg、As、Pb 的含量。

1.5 體外抗氧化活性的測定

DPPH 和ABTS 自由基清除能力的測定參照范亦菲等［19］的方法。

1.6 動物實驗分組及給藥劑量

適應性飼養(yǎng)7 d 后，通過小鼠游泳實驗剔除掉游泳姿勢不正常的小鼠，剩余小鼠隨機分為6 組，每組10 只。6 組分別為空白對照組（Con），湖北雜交枸杞濃漿飲料低劑量組（L）、中劑量組（M）、高劑量組（H），市售枸杞濃漿飲料高劑量組（S）和陽性對照組（P），其中P 組為紅牛飲料。

灌胃劑量參照曹茸茸等［20］的方法，結合枸杞濃漿飲料的每日推薦用量稍作修改，紅牛飲料組劑量設為12 mL/kg，枸杞濃漿飲料低、中、高劑量組劑量分別為4、8、12 mL/kg，空白對照組按12 mL/kg 的劑量給予蒸餾水。灌胃期間，小鼠自由攝食、飲水，試驗周期為31 d。

1.7 負重游泳實驗

在灌胃期間，小鼠每周進行無負重游泳訓練2次，每次30 min。在實驗的第28 天，灌胃后30 min，在每只小鼠尾根部負荷5% 體質量的鉛絲，放入裝有（30±3） ℃溫水、水深30 cm 的游泳箱中進行負重游泳。自小鼠入水開始計時，不時攪動水，使小鼠保持四肢運動。直至小鼠頭部沉入水中，經7 s 仍不能浮起為力竭終點［21］，記錄每組小鼠游泳體力耗盡時間。

1.8 抗疲勞生化指標測定

經過負重游泳實驗后，將小鼠用吹風機吹干并休息2 d 后再進行無負重游泳40 min，水溫（30±3） ℃，將小鼠從水槽中撈出并吹干，休息30 min 后取血處死，并取肝臟和腓腸肌，用生理鹽水洗凈并用濾紙吸干，用試劑盒檢測LG、MG、BUN、BLA 含量［22］。

1.9 數(shù)據(jù)處理

設置3 次平行試驗，采用Excel 2016 對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，結果以“平均值±標準差”表示。采用SPSS 26.0 軟件進行統(tǒng)計學顯著性分析，GraphPadPrism6 進行繪圖。多組間比較采用單因素方差分析（ANOVA），在α=0.05 水平進行顯著性分析。

2 結果與分析

2.1 不同枸杞濃漿飲料的營養(yǎng)品質對比

湖北雜交枸杞濃漿飲料與市售枸杞濃漿飲料的營養(yǎng)品質測定結果見表1。由表1可見，湖北雜交枸杞濃漿飲料與市售枸杞濃漿飲料都呈弱酸性，市售枸杞濃漿飲料含有較高的可溶性固形物、可溶性糖、還原糖、粗多糖和胡蘿卜素，而湖北雜交枸杞濃漿飲料含有較多的酚類、黃酮、蛋白質和甜菜堿等活性物質。

2.2 不同枸杞濃漿飲料的抗氧化活性與微量元素對比

由表2 可知，湖北雜交枸杞濃漿飲料的DPPH 清除率為61.72%、ABTS 清除率為81.34%，分別是市售枸杞濃漿飲料的1.06、1.09 倍。由微量元素測定結果可知，湖北雜交枸杞濃漿飲料的Se 含量為1.59μg/kg，約是市售枸杞濃漿飲料的2 倍。Pb 和As 含量符合NY/T1051—2014《綠色食品 枸杞及枸杞制品 農業(yè)行業(yè)標準》污染物的限量要求。綜上可知，湖北雜交枸杞濃漿飲料具有較好的抗氧化活性，且含有微量的Se 元素。

2.3 灌胃不同枸杞濃漿飲料后小鼠肝體比指標的對比

如圖2 所示，試驗期間，所有小鼠總體情況正常，存活率為100%。各組小鼠的肝臟質量與體質量的比值無顯著差異（Pgt;0.05）。在正常生理狀態(tài)下，各器官與體質量的比值保持相對穩(wěn)定。

2.4 灌胃不同枸杞濃漿飲料后運動疲勞小鼠力竭游泳時間的對比

由圖3 可知，與空白組的負重游泳力竭時間363.44 s 相比，紅牛陽性對照組小鼠的負重游泳力竭時間為531.00 s，顯著提高了46.10%（Plt;0.05）。湖北雜交枸杞濃漿飲料中、高劑量組和市售枸杞濃漿飲料高劑量組的負重游泳力竭時間分別為601.70、763.43、556.43 s，與空白組相比分別提高了65.56%、110% 和53.10%，且具有顯著性差異（Plt;0.05）。結合圖2B 的結果可知，枸杞濃漿飲料有效延長了小鼠的負重游泳時間，提升了小鼠的抗疲勞能力，且湖北雜交枸杞濃漿飲料高劑量組延長時間是市售枸杞濃漿飲料高劑量組的1.37 倍。結果表明，在本試驗條件下，湖北雜交枸杞濃漿飲料的抗疲勞效果更優(yōu)。

2.5 灌胃不同枸杞濃漿飲料后運動疲勞小鼠肌糖原和肝糖原的對比

由圖4 可知，連續(xù)灌胃28 d 后，陽性對照組小鼠的肌糖原和肝糖原分別為0.67、0.98 mg/g，與空白組相比顯著提高（Plt;0.05）。而湖北雜交枸杞濃漿飲料高劑量組小鼠的肌糖原和肝糖原含量分別為0.81、1.53 mg/g，顯著高于陽性對照組（Plt;0.05）。與空白對照組相比，湖北雜交枸杞濃漿飲料高劑量肌糖原、肝糖原含量分別提高47.03%、116.22%。結果表明，湖北雜交枸杞濃漿飲料可以有效提高運動小鼠肝糖原和肌糖原的積累，進而提高機體的能量供給，且其效果要優(yōu)于市售枸杞產品及陽性對照組。

2.6 灌胃不同枸杞濃漿飲料后運動疲勞小鼠BLA和BUN水平的對比

如圖5A 所示，恢復30 min 后，湖北雜交枸杞濃漿飲料中、高劑量與陽性對照組的BLA 濃度分別為9.72、9.25、9.53 mmol/L，與空白組（11.50 mmol/L）相比，差異顯著（Plt;0.05）。如圖5B 所示，灌胃28 d后，枸杞濃漿飲料組與陽性對照組中BUN 水平均顯著低于空白對照組（Plt;0.05）。同時，湖北雜交枸杞濃漿飲料高劑量組BUN 水平（1.63 mmol/L）顯著低于市售枸杞濃漿飲料組（2.17 mmol/L）（Plt;0.05）。結果表明，枸杞濃漿飲料能夠有效促進運動后小鼠體內的乳酸分解，并減少BUN 在體內的分解代謝，從而達到延緩疲勞的效果，在同等劑量條件下，湖北雜交枸杞濃漿飲料的效果優(yōu)于市售枸杞濃漿飲料。

2.7 灌胃不同枸杞濃漿飲料后運動疲勞小鼠MDA水平的對比

由圖6 可知，與對照組相比，湖北雜交枸杞濃漿飲料低、中、高劑量組和市售枸杞濃漿飲料組以及陽性對照組都可以明顯降低血清中MDA 的含量，下降率分別為22.64%、36.93%、48.79%、43.79%、31.50%，而且中、高劑量組和市售枸杞濃漿飲料組的降低效果要優(yōu)于陽性對照組。結果表明，湖北雜交枸杞濃漿飲料具有良好的抗氧化效果，有助于清除小鼠體內的自由基，阻止MDA 的生成，減輕細胞的氧化損傷程度，發(fā)揮抗疲勞作用。

2.8 灌胃不同枸杞濃漿飲料后運動疲勞小鼠的SOD水平的對比

由圖7 可知，與對照組相比，湖北雜交枸杞濃漿飲料低、中、高劑量組和市售枸杞濃漿飲料組以及陽性對照組都可以明顯提高血清中SOD 的活性，其中高劑量湖北雜交枸杞濃漿飲料與市售枸杞濃漿飲料組SOD 活性分別為73.99、68.98 U/mL，與空白組（38.97 U/mL）相比，分別提高了89.86%、77.00%。結果表明，枸杞濃漿飲料能增加小鼠體內SOD 活性，且同等劑量下，湖北雜交枸杞濃漿飲料效果要優(yōu)于市售枸杞濃漿飲料。

2.9 灌胃不同枸杞濃漿飲料后運動疲勞小鼠的GR水平的對比

由圖8 可見，湖北雜交枸杞濃漿飲料的低、中、高劑量組和市售枸杞濃漿飲料組以及陽性對照組的小鼠血清GR 活性分別為21.65、23.48、29.29、24.41、18.65 U/L，與空白組（14.49 U/L）對比，均顯著提高（Plt;0.05）。結合圖5C 的結果，表明湖北雜交枸杞濃漿飲料有利于維持紅細胞膜的完整性，防止血紅蛋白的氧化，減少細胞的氧化損傷，增加抗疲勞效果。

3 討論

湖北雜交枸杞作為建始縣鄉(xiāng)村振興的支柱產業(yè)，在經濟與社會層面的貢獻不容小覷。然而，目前圍繞湖北雜交枸杞精深加工方面的研究相對匱乏，通過適度加工，將其融入到大健康產業(yè)中可能是推動其加工轉化的有益嘗試。因此，制備湖北雜交枸杞濃漿飲料，在分析其營養(yǎng)成分的基礎上，采用動物模型，科學評估其緩解運動疲勞的效果，可為此類產品的研發(fā)提供科學依據(jù)。

負重游泳實驗是一種被廣泛應用的運動模型實驗方法，通過迫使小鼠游泳，直至其精疲力竭，觀察游泳時間的變化從而評估小鼠的耐疲勞能力是否得到提升［23］。本試驗中，湖北雜交枸杞濃漿飲料中、高劑量組和市售枸杞濃漿飲料高劑量組的負重游泳力竭時間與空白組相比都有顯著提高（Plt;0.05），這可能與枸杞濃漿飲料中含有酚類、黃酮、甜菜堿和多糖等具有抗疲勞作用的活性成分相關。酚類化合物作為植物中重要的次生代謝物，是天然抗氧化劑的主要來源，可通過減少機體自由基過度積累表現(xiàn)出良好的抗疲勞活性，與多糖延緩疲勞的作用機制相似［24］；甜菜堿等生物堿類化合物不僅可以促進骨骼肌利用葡萄糖、乳酸和脂肪酸等產能作用，還能通過增加肝糖原含量等方式來增強耐力［25-26］；而蛋白質在體內經酶或酸的作用下生成活性肽，具有更易消化、吸收和利用的特點，可以完整的形式經小腸吸收后進入循環(huán)系統(tǒng)，為機體提供營養(yǎng)和能量［27］。

運動過程中，肌肉需要大量的能量來維持運動。當體內的糖原、脂肪和蛋白質等能源物質消耗殆盡，尤其是肌肉和肝臟中的糖原儲備減少時，供能不足會導致疲勞，糖原是短時間內高強度運動的主要能源，糖原的耗竭與運動性疲勞密切相關［28］。與空白對照組相比，湖北雜交枸杞濃漿飲料高劑量肌糖原、肝糖原含量顯著提高，這可能與枸杞濃漿飲料含有豐富的酚類等生物活性物質從而具有較高的抗氧化活性有關，其在清除超氧陰離子自由基的同時，可修復運動氧化過激造成的肝細胞損傷，并能夠阻止細胞中產生氧化性更強的氧化自由基，進而提高體內肌糖原與肝糖原的含量，促進ATP 合成，增加能量供應［29］。運動性疲勞主要由氧化應激、產能不足及體內酶的相互作用引起。劇烈運動導致自由基積累，引發(fā)氧化應激，損傷細胞膜、蛋白質和DNA，削弱體內抗氧化酶的活性，進一步加重疲勞。MDA 是脂質過氧化的主要副產物，也是細胞氧化損傷的重要指標，較低的MDA 含量表明機體內抗氧化活性的提高［30］。本研究中，湖北雜交枸杞濃漿飲料的Se 含量為1.59 μg/kg，約是市售枸杞濃漿飲料的2 倍。硒元素攝入體內后能夠參與體內抗氧化物酶的合成，提高機體抗氧化物酶的活性，降低脂質過氧化產物的濃度，從而緩解疲勞［31-32］，這可能也是湖北雜交枸杞濃漿飲料具有抗氧化、緩解運動疲勞作用的原因之一。

在劇烈運動過程中，體內的代謝產物如BLA、BUN 等會大量積累。尤其是在無氧運動時，BLA 增多，導致體內酸堿平衡失調，BLA 含量的增加會影響循環(huán)系統(tǒng)和骨骼肌系統(tǒng)功能，導致肌肉運動能力下降，從而引起疲勞感［33］。此外，BUN 作為蛋白質分解的代謝產物，水平的升高也與運動負荷密切相關，在運動過程中，蛋白質和氨基酸的分解代謝加強，導致BUN 含量增加，機體對負荷的適應性越差［33-34機體內酶的活性與疲勞的關系密切，SOD 在清除自由基及其代謝產物以及維持正常的細胞生理機能，促進免疫力和預防各種疾病方面起著至關重要的作用，其酶活力的高低可以間接反映機體清除氧自由基的能力［35］。此外，GR 是由輔酶NADPH 提供氫氣催化谷胱甘肽的氧化和還原型谷胱甘肽的形成，還原型谷胱甘肽可以使含巰基的酶保持還原和活性狀態(tài)，因此，較高的GR 水平與較強的SOD 活性相關［36］。枸杞濃漿飲料可以提高小鼠體內的GR 活性，GR 可以催化機體內氧化型谷胱甘肽還原成谷胱甘肽，谷胱甘肽進一步可以與氧自由基結合，清除機體內產生的氧合自由基，從而減少自由基對機體的侵害，增加抗疲勞效果［30］。

綜上，湖北雜交枸杞濃漿飲料的酚類、黃酮、蛋白質、甜菜堿和 Se 元素等活性物質更為豐富，具有更好的抗氧化活性，并能通過清除體內自由基，降低小鼠運動后血液中 BLA、BUN 和 MDA 含量，提高 SOD、GR 活性以及 LG、MG 儲備量，每日飲用劑量為12 mL/kg 時，延緩小鼠運動疲勞效果較好。

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（責任編輯：趙琳琳）

基金項目：湖北省技術創(chuàng)新專項-民族專項（2017AKB074）；中央預算內投資國家服務業(yè)發(fā)展引導資金項目（鄂發(fā)改投資［207］296 號）