魏文芝 王天學(xué) 張敏娟

中圖分類號(hào) R927.2 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2018）18-2501-04

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.18.13

摘 要 目的：建立同時(shí)測定復(fù)方磷酸可待因口服溶液中3種有效成分（磷酸可待因、鹽酸麻黃堿、馬來酸氯苯那敏）及2種防腐劑（苯甲酸鈉、羥苯乙酯）含量的方法。 方法：采用高效液相色譜法。色譜柱為GL·Science WondaSil C18-WR，流動(dòng)相為乙腈-0.01 mol/L磷酸二氫鉀溶液（含2.5 mmol/L庚烷磺酸鈉和0.1%三乙胺，用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.5±0.1）（梯度洗脫），流速為1.0 mL/min，檢測波長為210 nm，柱溫為30 ℃，進(jìn)樣量為10 μL。 結(jié)果：磷酸可待因、鹽酸麻黃堿、馬來酸氯苯那敏、苯甲酸鈉、羥苯乙酯檢測質(zhì)量濃度線性范圍分別為0.365 8～457.20 μg/mL（r=0.999 9）、0.363 5～454.35 μg/mL（r=0.999 9）、0.124 8～155.98 μg/mL（r=0.999 9）、0.390 6～488.25 μg/mL（r=0.999 9）、0.121 3～151.65 μg/mL（r=0.999 9）；定量限分別為0.409 4、0.508 8、7.731 4、1.347 6、1.940 8 ng，檢測限分別為0.146 2、0.181 7、2.494 0、0.449 2、0.606 5 ng；精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)的RSD均小于1%；加樣回收率分別為98.10%～101.96%（RSD=1.4%，n=9）、97.65%～101.14%（RSD=1.2%，n=9）、97.30%～102.30%（RSD=1.8%，n=9）、97.71%～102.21%（RSD=1.5%，n=9）、97.03%～101.55%（RSD=1.7%，n=9）。 結(jié)論：該方法操作簡單，精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性均較好，可用于同時(shí)測定復(fù)方磷酸可待因口服溶液中磷酸可待因、鹽酸麻黃堿、馬來酸氯苯那敏、苯甲酸鈉和羥苯乙酯的含量。

關(guān)鍵詞 復(fù)方磷酸可待因口服溶液；高效液相色譜法；磷酸可待因；鹽酸麻黃堿；馬來酸氯苯那敏；苯甲酸鈉；羥苯乙酯；含量測定

ABSTRACT OBJECTIVE： To establish a method for simultaneous determination of 3 active components as codeine phosphate， ephedrine hydrochloride， chlorphenamine maleate and 2 preservatives as sodium benzoate and ethylparaben in Compound codeine phosphate oral solution. METHODS： HPLC method was adopted. The determination was performed on GL·Science WondaSil C18-WR column with mobile phase consisted of acetonitrile-0.01 mol/L potassium dihydrogen phosphate solution （containing 2.5 mmol/L sodium heptane sulfonate and 0.1% triethylamine， pH adjusted to 2.5±0.1 with phosphoric acid） （gradient elution） at the flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was set at 210 nm and column temperature was 30 ℃. The sample size was 10 μL. RESULTS： The linear ranges of codeine phosphate， ephedrine hydrochloride， chlorphenamine maleate， sodium benzoate and ethylparaben were 0.365 8-457.20 μg/mL （r=0.999 9）， 0.363 5-454.35 μg/mL （r=0.999 9）， 0.124 8-155.98 μg/mL （r=0.999 9）， 0.390 6-488.25 μg/mL （r=0.999 9）， 0.121 3-151.65 μg/mL（r=0.999 9）， respectively. The limits of quantitation were 0.409 4， 0.508 8， 7.731 4， 1.347 6， 1.940 8 ng； the limits of detection were 0.146 2， 0.181 7， 2.494 0， 0.449 2， 0.606 5 ng. RSDs of precision， stability and reproducibility tests were all lower than 1%. The average recoveries were 98.10%-101.96%（RSD=1.4%，n=9）， 97.65%-101.14%（RSD=1.2%，n=9）， 97.30%-102.30% （RSD=1.8%，n=9）， 97.71%-102.21%（RSD=1.5%，n=9）， 97.03%-101.55%（RSD=1.7%，n=9）， respectively. CONCLUSIONS： The method is simple， precise， stable and reproducible， and it can be used for simultaneous determination of codeine phosphate， ephedrine hydrochloride， chlorphenamine maleate， sodium benzoate and ethylparaben in Compound codeine phosphate oral solution.

KEYWORDS Compound codeine phosphate oral solution； HPLC； Codeine phosphate； Ephedrine hydrochloride； Chlorphenamine maleate； Sodium benzoate； Ethylparaben； Content determination

復(fù)方磷酸可待因口服溶液為復(fù)方口服制劑，主要成分為磷酸可待因、鹽酸麻黃堿、馬來酸氯苯那敏、氯化氨，為臨床常用鎮(zhèn)咳類藥物，對(duì)急、慢性咳嗽均具有良好的治療效果[1-2]。該藥現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為國家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS1-（X-098）-2002Z，收載于《國家食品藥品監(jiān)督管理局國家藥品標(biāo)準(zhǔn)新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)》（第3冊(cè)）[3]，但該標(biāo)準(zhǔn)未對(duì)其中防腐劑的含量進(jìn)行控制。復(fù)方磷酸可待因口服溶液中添加的防腐劑多為苯甲酸鈉和羥苯乙酯，防腐劑雖能夠抑制微生物在口服溶液中的生長和繁殖，但過量攝入會(huì)對(duì)人體造成危害[4-7]，故應(yīng)對(duì)其中防腐劑的含量加以控制。另其原標(biāo)準(zhǔn)中磷酸可待因、鹽酸麻黃堿、馬來酸氯苯那敏需采用兩種色譜系統(tǒng)分別進(jìn)行含量測定，操作較煩瑣。因此，筆者參考相關(guān)文獻(xiàn)[8-17]，建立了采用高效液相色譜法（HPLC）同時(shí)測定復(fù)方磷酸可待因口服溶液中磷酸可待因、鹽酸麻黃堿、馬來酸氯苯那敏、苯甲酸鈉和羥苯乙酯含量的方法，旨在為其質(zhì)量控制提供參考，在保證患者用藥安全的同時(shí)降低檢驗(yàn)成本。

1 材料

1.1 儀器

e2695-2998型HPLC儀，包括Empower 3色譜工作站、二極管陣列檢測器等（美國Waters公司）；CP225D型電子天平（德國Sartorius公司）。

1.2 藥品與試劑

磷酸可待因?qū)φ掌罚ㄅ?hào)：171203-201306，純度：100%）、鹽酸麻黃堿對(duì)照品（批號(hào)：171241-201007，純度：100%）、馬來酸氯苯那敏對(duì)照品（批號(hào)：100047- 200606，純度：99.7%）、苯甲酸鈉對(duì)照品（批號(hào)：100433- 200301，純度：100%）、羥苯乙酯對(duì)照品（批號(hào)：100847- 201203，純度：100%）均購自中國食品藥品檢定研究院；復(fù)方磷酸可待因口服溶液（生產(chǎn)廠家A，批號(hào)：130619、130620、130621，規(guī)格：120 mL/瓶；生產(chǎn)廠家B，批號(hào)：B20120102、B20120105，規(guī)格：60 mL/瓶；生產(chǎn)廠家B，批號(hào)：B20120815、B20121207，規(guī)格：120 mL/瓶）；庚烷磺酸鈉（德國Merck公司，純度：≥99.0%）；甲醇、乙腈（色譜純，德國Merck公司）；磷酸二氫鉀（分析純，天津市百世化工有限公司）；水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：GL·Science WondaSil C18-WR（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈（A）-0.01 mol/L磷酸二氫鉀溶液（含2.5 mmol/L庚烷磺酸鈉和0.1%三乙胺，用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.5±0.1）（B），梯度洗脫（0～40 min，15% A→30% A；40～45 min，30% A→15% A；45～50 min，15% A）；檢測波長：210 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合對(duì)照品溶液 精密稱取磷酸可待因?qū)φ掌?.030 48 g、鹽酸麻黃堿對(duì)照品0.030 29 g、馬來酸氯苯那敏對(duì)照品0.010 43 g、苯甲酸鈉對(duì)照品0.032 55 g、羥苯乙酯對(duì)照品0.010 11 g，分別置于10 mL量瓶中，加入乙腈-0.01 mol/L磷酸二氫鉀溶液（含2.5 mmol/L庚烷磺酸鈉和0.1%三乙胺，用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.5±0.1）（15 ∶ 85，V/V，以下簡稱“溶劑”）溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成單一對(duì)照品貯備液。分別精密量取上述單一對(duì)照品貯備液各3 mL，置于同一20 mL量瓶中，加入溶劑稀釋至刻度，搖勻，即得混合對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 精密量取樣品10 mL，置于100 mL量瓶中，加入溶劑稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液 以溶劑作為陰性對(duì)照溶液。

2.2.4 加樣回收率試驗(yàn)用混合對(duì)照品溶液 精密稱取磷酸可待因?qū)φ掌?4.65 mg、鹽酸麻黃堿對(duì)照品20.19 mg、苯甲酸鈉對(duì)照品51.19 mg、羥苯乙酯對(duì)照品12.64 mg，置于同一10 mL量瓶中；另精密稱取馬來酸氯苯那敏對(duì)照品24.56 mg，置于50 mL量瓶中，加入溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 mL，置于上述10 mL量瓶中；加入溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 mL，置于50 mL量瓶中，加入溶劑稀釋至刻度，搖勻，即得加樣回收率試驗(yàn)用混合對(duì)照品溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

取“2.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各適量，分別按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜圖，詳見圖1。由圖1可知，在該色譜條件下，磷酸可待因、鹽酸麻黃堿、馬來酸氯苯那敏、苯甲酸鈉、羥苯乙酯峰之間的分離度均大于1.5，各成分峰理論板數(shù)均大于5 000，且陰性對(duì)照對(duì)測定無干擾。

2.4 線性關(guān)系考察

精密量取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液0.016、0.08、0.4、2、10 mL，分別置于20 mL量瓶中，加入溶劑稀釋至刻度，搖勻，得線性關(guān)系工作溶液1～5；另取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液20 mL，作為線性關(guān)系工作溶液6。取上述線性關(guān)系溶液1～6各適量，分別按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。以各待測成分質(zhì)量濃度（x，μg/mL）為橫坐標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，回歸方程與線性范圍見表1。

2.5 定量限與檢測限考察

分別精密量取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量，倍比稀釋，并按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，以信噪比10 ∶ 1、3 ∶ 1分別計(jì)算定量限、檢測限。結(jié)果，磷酸可待因、鹽酸麻黃堿、馬來酸氯苯那敏、苯甲酸鈉、羥苯乙酯的定量限分別為0.409 4、0.508 8、7.731 4、1.347 6、1.940 8 ng，檢測限分別為0.146 2、0.181 7、2.494 0、0.449 2、0.606 5 ng。

2.6 精密度試驗(yàn)

取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測定6次，記錄峰面積。結(jié)果，磷酸可待因、鹽酸麻黃堿、馬來酸氯苯那敏、苯甲酸鈉、羥苯乙酯峰面積的RSD分別為0.4%、0.2%、0.3%、0.4%、0.3%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液（批號(hào)：130619）適量，分別于室溫下放置0、4、8、12、24 h時(shí)按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。結(jié)果，磷酸可待因、鹽酸麻黃堿、馬來酸氯苯那敏、苯甲酸鈉、羥苯乙酯峰面積的RSD分別為0.08%、0.11%、0.20%、0.04%、0.20%（n=5），表明供試品溶液在室溫下放置24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

精密量取樣品（批號(hào)：130619）適量，共6份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積并計(jì)算樣品含量。結(jié)果，磷酸可待因、鹽酸麻黃堿、馬來酸氯苯那敏、苯甲酸鈉、羥苯乙酯的平均含量分別為0.985、0.788、0.195 0、2.050、0.489 mg/mL，RSD分別為0.4%、0.7%、0.5%、0.6%、0.6%（n=6），表明本方法重復(fù)性較好。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

精密量取已知含量的樣品（批號(hào)：130619）0.5 mL，共9份（每份約相當(dāng)于含磷酸可待因45.25 μg、鹽酸麻黃堿39.40 μg、馬來酸氯苯那敏0.99 μg、苯甲酸鈉102.50 μg、羥苯乙酯24.45 μg），分別置于100 mL量瓶中，精密加入“2.2.4”項(xiàng)下加樣回收率試驗(yàn)用混合對(duì)照品溶液適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表2。

2.10 樣品含量測定

取各批樣品適量，分別按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，平行測定3次，記錄峰面積并按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算樣品含量，結(jié)果見表3。

3 討論

口服溶液為臨床常用劑型，因其加入矯味劑，患者用藥依從性較好，尤其是對(duì)于兒童或吞咽困難的患者。但因口服溶液為多劑量包裝產(chǎn)品，為防止發(fā)霉、酸敗、變色、產(chǎn)生氣體或其他變質(zhì)等情況，需加入防腐劑。而防腐劑（尤其是對(duì)羥基苯甲酸酯類防腐劑）對(duì)人體的危害較大（如干擾內(nèi)分泌、影響男性生殖系統(tǒng)和誘發(fā)女性乳腺癌等）[7]，因此口服溶液中防腐劑含量的控制就顯得非常必要。

預(yù)試驗(yàn)中考察了乙腈-0.1%磷酸鹽溶液、甲醇-0.1%磷酸鹽溶液、乙腈-0.01 mol/L磷酸鹽溶液、甲醇-0.01 mol/L磷酸鹽等為流動(dòng)相時(shí)的分離度，結(jié)果，以乙腈-0.01 mol/L磷酸二氫鉀溶液（含2.5 mmol/L庚烷磺酸鈉和0.1%三乙胺，用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.5±0.1）為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫時(shí)的分離效果最佳，峰形較好。故選擇乙腈-0.01 mol/L磷酸二氫鉀溶液（含2.5 mmol/L庚烷磺酸鈉和0.1%三乙胺，用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.5±0.1）為流動(dòng)相。

本試驗(yàn)分別考察了柱溫為20、25、30、35、40 ℃時(shí)的分離效果，結(jié)果，當(dāng)柱溫為20、25 ℃時(shí)，分離效果欠佳；當(dāng)柱溫超過35 ℃時(shí)，磷酸可待因與鹽酸麻黃堿峰的分離效果下降。故選擇柱溫為30 ℃。

本試驗(yàn)分別考察了不同品牌及不同型號(hào)的色譜柱[Waters SunFire C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）、Waters XBrige C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）、Agilent Eclipse XDB C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）、AkzoNobel Kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）、GL·Science WondaSil C18-WR（250 mm×4.6 mm，5 μm）]對(duì)分離度的影響，結(jié)果，當(dāng)色譜柱為GL·Science WondaSil C18-WR（250 mm× 4.6 mm，5 μm）時(shí)的分離效果較好。故選擇GL·Science Wondasil C18-WR（250 mm×4.6 mm，5 μm）為色譜柱。

綜上所述，本方法操作簡單，精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性均較好，可用于同時(shí)測定復(fù)方磷酸可待因口服溶液中磷酸可待因、鹽酸麻黃堿、馬來酸氯苯那敏、苯甲酸鈉和羥苯乙酯的含量。

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（收稿日期：2018-05-02 修回日期：2018-07-17）

（編輯：陳 宏）