摘 要 依據(jù)標準方法NY/T 761—2008，采用氣相色譜法對蔬菜中16種有機磷類農(nóng)藥開展方法驗證，驗證內(nèi)容包括方法準確度、精密度、檢出限等。結果表明：16種有機磷類農(nóng)藥的標準曲線線性關系良好，線性相關系數(shù)均大于0.999，準確度、精密度、檢出限均滿足標準方法要求。因此，實驗室現(xiàn)有技術能力滿足標準方法的要求。

關鍵詞 氣相色譜法；有機磷農(nóng)藥；方法驗證

中圖分類號：O657.71；TS255.7 文獻標志碼：A DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2024.15.049

有機磷類農(nóng)藥是指含磷元素的有機化合物農(nóng)藥，是一類廣譜、高效的化學殺蟲劑[1]，具有效率高、易分解、經(jīng)濟、方便等優(yōu)點，因此為了有效地提高農(nóng)作物的產(chǎn)量，避免遭受蟲害的影響，其在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中被廣泛使用，但因種植戶不合理或過量使用，常導致農(nóng)作物中發(fā)生不同程度的殘留[2]，若人類長期食用此類高殘留量農(nóng)藥的農(nóng)產(chǎn)品，身體健康會受到嚴重威脅[3]。蔬菜、水果中農(nóng)藥殘留超標現(xiàn)象已成為影響農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全的關鍵因素之一，且有機磷農(nóng)藥對人體的危害作用從劇毒到低毒不等，因此，測定果蔬中有機磷農(nóng)藥的殘留量十分必要，且需大力發(fā)展測定精度高、效率高、針對性強的有機磷農(nóng)藥測定方法，目前應用于有機磷類農(nóng)藥的測定方法有氣相色譜法、氣質(zhì)連用法、高效液相色譜法等，其中，針對蔬菜、水果中多種農(nóng)藥殘留量的測定，目前應用最為廣泛的是氣相色譜法，該法具有分析效率高、準確度高、靈敏度高等優(yōu)點，因而廣泛應用于農(nóng)藥殘留分析方法[4-8]。但氣相色譜法在測定過程中，因進樣口溫度、柱溫箱溫度、升溫程序等參數(shù)指標不同，得到的結果也不同，甚至存在較大差距。

為了提升縣級農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測機構的檢測及監(jiān)管服務能力，更大程度發(fā)揮縣級質(zhì)檢機構在農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)管和服務基層等職能工作中的作用，本研究依據(jù)《蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留測定》（NY/T 761—2008）標準中第2部分的方法，對16種有機磷類農(nóng)藥開展方法驗證，并對驗證結果進行分析，以期檢查實驗室是否具備開展檢驗檢測的資源配置，檢測能力是否滿足標準方法的要求，人員、設施、環(huán)境、設備等與標準方法是否符合；同時通過實驗驗證結果的準確性和可靠性，如正確度、精密度、線性范圍、方法檢出限和方法定量限等方法特性指標。

1 "材料與方法

1.1 "試材、試劑及儀器設備

驗證樣品為冬瓜，來源于本地種植農(nóng)戶。

倍硫磷、丙溴磷、毒死蜱、對硫磷、甲胺磷、甲基毒死蜱、甲基對硫磷、樂果、三唑磷、水胺硫磷、乙酰甲胺磷、治螟磷、氧樂果、特丁硫磷、敵敵畏和甲拌磷標準溶液共16種，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護科研檢測所（天津），濃度100 μg·mL-1；乙腈，正己烷，丙酮（HPLC級，成都市科隆化學品有限公司）；氯化鈉（分析純，西隴化工股份有限公司）。

GC2010 Plus型氣相色譜儀（日本島津公司），火焰光度檢測器（FPD磷濾光片），T18高速勻質(zhì)機（德國IKA公司），氮吹儀（美國Organomation公司），小型渦旋勻質(zhì)機（德國IKA公司）；恒溫水浴震蕩儀（SHY-2A常州市杰瑞爾），電子天平[日本，島津TXB622L（0.01g），0.001 g]，固相萃取裝置得泰儀器 QSE-12。毛細管色譜柱：DB-17，30 m×0.25 mm×0.25 μm，Agilent（安捷倫）。

1.2 "樣品前處理

準確稱取25.0 g樣品于200 mL燒杯中，加入50.0 mL乙腈，放入高速勻漿機中高速勻漿2 min后轉(zhuǎn)移至裝有5～7 g氯化鈉的具塞量筒中過濾，收集濾液30.0～40.0 mL，蓋上塞子，劇烈震搖1 min，在室溫下靜置30 min，使乙腈相與水相分層。吸取上層提取液10.0 mL，放入100 mL燒杯中，于80 ℃水浴鍋上吹蒸至近干。將蒸至近干的樣品加入2.0 mL丙酮，蓋上錫箔紙備用。用3.0 mL丙酮分3次沖洗燒杯，并轉(zhuǎn)移至離心管，最后定容至5.0 mL，過0.45 μm濾膜后轉(zhuǎn)移至進樣瓶，待測。

1.3 "色譜分析條件

進樣口溫度：220 ℃，載氣為N2，恒流模式，3.3 mL·min-1；分流比：10∶1；進樣方式：不分流進樣；進樣體積：1 μL。柱溫：采用程序升溫，初始溫度150 ℃，保持2 min，以8 ℃·min-1升至250 ℃，保持3 min。FPD檢測器溫度：250 ℃；氫氣：62.5 mL· min-1；空氣：90 mL·min-1；尾吹氣流速：30.0 mL·min-1。

1.4 "標準曲線繪制

因敵敵畏和甲胺磷、甲拌磷和治螟磷在色譜柱DB-17（Agilent）中的保留時間重合，因此把16種農(nóng)藥分為兩組。以丙酮為溶劑，將濃度為100 μg·mL-1的標準農(nóng)藥逐一配置為20 μg·mL-1的標準儲備液，然后逐一準確吸取一定體積的20 μg·mL-1倍硫磷、丙溴磷、毒死蜱、對硫磷、甲胺磷、甲基毒死蜱、甲基對硫磷、樂果、三唑磷、水胺硫磷、乙酰甲胺磷、治螟磷、氧樂果、特丁硫磷標準儲備液（組I）和敵敵畏、甲拌磷標準儲備液（組II）配制成濃度為1 μg·mL-1的兩組混合標準中間液，再用1 μg·mL-1的兩組混合標準中間液分別配制成兩組濃度為0.01、0.03、0.05、0.07、0.1、0.2、0.4 μg·mL-1的一系列混合標準工作液。按要求，驗證中校準用的標準點盡可能均勻地分布在關注的濃度范圍內(nèi)并能覆蓋該范圍。不同濃度的校準溶液獨立配制，低濃度的校準點不應通過稀釋校準曲線中高濃度的校準點進行配制。按要求配置后將上述不同濃度的混合標準溶液依次從低濃度到高濃度放入樣品架中進行氣相色譜法分析，然后以保留時間定性，外標法定量，以峰面積（y）對濃度（x）繪制16種農(nóng)藥標準曲線。

2 "結果與分析

2.1 "定性與定量

在設定的氣相色譜分析條件下，兩組混合標準溶液各農(nóng)藥出峰情況如圖1、圖2所示。圖1表明，第一組甲胺磷、乙酰甲胺磷、治螟磷、氧樂果、特丁硫磷、樂果、甲基毒死蜱、甲基對硫磷、毒死蜱、對硫磷、倍硫磷、水胺硫磷、丙溴磷、三唑磷14種混合標準溶液的保留時間分別為3.309、5.560、7.563、7.926、8.255、9.580、10.446、10.738、11.241、11.414、12.034、12.476、13.705、16.925 min。圖2表明，第二組敵敵畏、甲拌磷混合標準溶液保留時間為2.702、7.579 min。由圖1、圖2可知，兩組混合標準溶液的各農(nóng)藥保留時間、色譜峰和相鄰的色譜峰分離度良好，色譜峰峰形正常，沒有峰形拖尾和較大柱流失，信號值響應較高，因此能夠達到氣相色譜法定性、定量分析的要求。

分別對濃度為0.01、0.03、0.05、0.07、0.1、0.2、0.4 μg·mL-1的兩組混合標準溶液進行分析測定，不同濃度的各組份峰面積及線性關系見表1，并以此系列溶液的濃度x為橫坐標，對應的峰面積y為縱坐標，繪制16種農(nóng)藥的標準曲線。由表1可知，16種農(nóng)藥的線性范圍均為0.01～0.4 μg·mL-1，且16種農(nóng)藥標準曲線的線性相關系數(shù)R均大于0.999。實驗結果表明，在該標準系列濃度范圍內(nèi)線性相關性良好。

2.2 "準確度驗證

采用加標回收率實驗驗證實驗室準確度，《蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留檢測方法》（NY/T 761—2008）標準方法無回收率測定要求，因此本實驗加標回收率在方法測定低限、2.5倍方法測定低限和10倍方法測定低限進行三水平試驗；已制定最高殘留量（MRL）的，回收率應在方法測定低限、MRL中選一合適點進行三水平試驗；未制定MRL的，回收率應在方法測定低限、常見限量指標中選一合適進行三水平試驗。本實驗室準確度試驗是將16種農(nóng)藥分為兩組（組I、組II），向未檢出16種農(nóng)藥的冬瓜樣品中加入0.02、0.05、0.2 μg·mL-1不同質(zhì)量濃度的混合標準溶液，每個濃度做3個平行試驗，與空白樣品在相同條件下進行前處理和上機測試，分析結果如表2所示。由表2可知，各組份在0.02 μg·mL-1的回收率范圍在71.7%～106.7%，0.05 μg·mL-1的回收率范圍在76.0%～96.1%，0.2 μg·mL-1的回收率范圍在80.0%～96.5%，3種加標水平的回收率均符合《合格評定化學分析方法確認和驗證指南》（GB/T 27417—2017）附錄A中的要求。各組分低、中、高3種質(zhì)量濃度的總平均RSD范圍在5.0%～10.8%，RSD≤15%，均符合GB/T 27417—2017附錄B中的要求[9]。

2.3 "檢出限驗證

NY/T 761—2008方法中已給出16種農(nóng)藥的檢出限（MDL），因此在給出的MDL濃度水平上，通過分析該濃度水平的樣品，測定該濃度的儀器信噪比，當信噪比（S/N）不小于3時，評價滿足標準方法的要求[10]。按照方法要求，甲胺磷、乙酰甲胺磷、治螟磷、氧樂果、特丁硫磷、樂果、甲基毒死蜱、甲基對硫磷、毒死蜱、對硫磷、倍硫磷、水胺硫磷、丙溴磷、三唑磷、敵敵畏、甲拌磷的檢出限分別為0.01、0.03、0.01、0.02、0.02、0.02、0.03、0.02、0.02、0.02、0.02、0.03、0.04、0.01、0.01、0.02 mg·kg-1，經(jīng)表1、表2結果分析上述各組分在相應檢出限濃度水平下的樣品，信噪比均S/N＞3，滿足標準方法的要求。

2.4 "精密度驗證

精密度采用方法重復性和儀器重復性進行驗證，其中，方法重復性實驗方法為向未檢出16種農(nóng)藥的冬瓜樣品中加入0.05 μg·mL-1的混合標準溶液，在較短的時間間隔內(nèi)由同一個分析員在相同的前處理條件和色譜分析條件下重復7個平行試驗，然后計算平均值、標準偏差和相對標準偏差。儀器重復性測試方法為：取濃度為0.07 μg·mL-1的混合標準溶液，在相同的分析條件下連續(xù)進樣測定7次，然后計算平均值、標準偏差，分析結果如表3所示。

由表3可知，各組分方法重復性的平均回收率在75.1%～98.9%，RSD在5.1%～9.5%。儀器重復性的RSD在0.8%～5.0%。由此可知，本次測試的方法重復性和儀器精密度RSD≤15%，均符合GB/T 27417—2017附錄B的要求。

3 "結論

本試驗采用乙腈提取樣品中的16種有機磷農(nóng)藥，用DB-17毛細管柱分離，火焰光度檢測器測定。通過對方法性能指標的驗證，在實驗室現(xiàn)有條件下，16種有機磷類農(nóng)藥的標準曲線線性關系良好，線性相關系數(shù)均大于0.999；16種有機磷類農(nóng)藥的準確度、方法重復性及儀器精密度均符合GB/T 27417—2017的要求。本研究對照標準檢查了開展檢測的資源配置充分滿足標準的要求，還通過試驗驗證了實驗室具備滿足標準要求的檢測能力，且相應的人員、設施、環(huán)境、設備等與標準方法相符合；最后經(jīng)過試驗證明了結果的準確性和可靠性。驗證結果表明，實驗室現(xiàn)有技術能力滿足NY/T 761—2008標準方法的要求，方法具有適用性和可操作性。

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[10] 國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局，中國國家標準化管理委員會.蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基己酸在類農(nóng)藥多殘留測定 GB/T 27417—2017[S]. 北京：中國標準出版社， 2017.

（責任編輯：易 "婧）

收稿日期：2024-03-12

作者簡介：韋菲（1985—），高級農(nóng)藝師，主要從事農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測。E-mail：425702663@qq.com。