摘要： 【目的】通過(guò)運(yùn)動(dòng)癥狀表現(xiàn)和腦組織病理變化指標(biāo)評(píng)價(jià)皮下和肌內(nèi)注射1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫吡啶（1-methyl-4-phenyl-1，2，3，6-tetrahydropyridine，MPTP） 構(gòu)建的樹鼩帕金森?。≒arkinson’s disease，PD） 模型，為PD 研究提供理想的樹鼩模型?！痉椒ā客ㄟ^(guò)皮下和肌內(nèi)注射MPTP 藥液2 mg/kg 誘導(dǎo)樹鼩PD 模型，參考非人靈長(zhǎng)類和PD 患者運(yùn)動(dòng)癥狀量化評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)，從震顫、姿勢(shì)、運(yùn)動(dòng)、步態(tài)及平衡5 個(gè)方面建立樹鼩PD 模型行為評(píng)分表，觀察樹鼩PD 運(yùn)動(dòng)癥狀；通過(guò)酪氨酸羥化酶（tyrosine hydroxylase，TH） 和α-突觸核蛋白（α-synuclein，α-syn） 免疫組織化學(xué)染色觀察樹鼩中腦形態(tài)學(xué)的變化；通過(guò)qPCR 檢測(cè)分析樹鼩PD 模型腦組織中TH 和α-syn 的mRNA 表達(dá)。【結(jié)果】2 種注射方法均在第3 次注射后出現(xiàn)典型的PD 運(yùn)動(dòng)癥狀，第4 次注射后PD 運(yùn)動(dòng)癥狀最明顯，第7 次注射后PD 運(yùn)動(dòng)癥狀明顯減弱，第15 次注射時(shí)基本消失；TH 和α-syn 免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：皮下和肌內(nèi)注射模型組黑質(zhì)均有TH 陽(yáng)性神經(jīng)纖維數(shù)量減少、α-syn 異常增加的現(xiàn)象，均能模擬典型的PD 病理學(xué)表現(xiàn)。皮下和肌內(nèi)注射模型組腦組織TH mRNA 表達(dá)量極顯著降低，α-synmRNA 表達(dá)量極顯著升高?！窘Y(jié)論】重復(fù)皮下和肌內(nèi)注射2 mg/kg MPTP 藥液均能誘導(dǎo)樹鼩產(chǎn)生較一致的PD 典型運(yùn)動(dòng)癥狀和病理變化，均是較好的樹鼩PD 模型造模方法。

關(guān)鍵詞： 1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫吡啶 （MPTP）；帕金森模型；樹鼩

中圖分類號(hào)： S858.91 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)： 1004–390X （2024） 04?0045?09

帕金森?。≒arkinson’s disease，PD） 是中老年人常見的第二大中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，在中國(guó)65 歲以上人群中的患病率高達(dá)1.86%[1]，給患者家庭和社會(huì)帶來(lái)了巨大的醫(yī)療負(fù)擔(dān)。臨床上，PD 的運(yùn)動(dòng)癥狀主要包括震顫、姿勢(shì)障礙、運(yùn)動(dòng)障礙、步態(tài)不穩(wěn)、肌強(qiáng)直等；非運(yùn)動(dòng)癥狀則主要包括睡眠障礙、感覺障礙、胃腸功能障礙、精神障礙等。目前，PD 的病理生理機(jī)制仍不明確[2-3]，臨床治療以左旋多巴胺等藥物為首選治療方案，但只能暫時(shí)緩解PD 癥狀，無(wú)法減緩或逆轉(zhuǎn)疾病的惡化進(jìn)程，尚無(wú)根治和預(yù)防PD 的方法。因此，深入開展PD 的病理機(jī)制研究和研發(fā)抗PD藥物已迫在眉睫，而建立標(biāo)準(zhǔn)、理想的PD 疾病模型是開展相關(guān)研究的基礎(chǔ)。

1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫吡啶（1-methyl-4-phenyl-1，2，3，6-tetrahydropyridine， MPTP） 是一種主要針對(duì)多巴胺能神經(jīng)元的神經(jīng)毒素[4]，也是PD 模型的“金標(biāo)準(zhǔn)”神經(jīng)毒素[5]，它可以誘導(dǎo)靈長(zhǎng)類[6-8]、樹鼩[9-11]、小鼠[12-13]、大鼠[14]、斑馬魚[15]、貓[16]以及犬、豬、金魚等[17]出現(xiàn)PD 樣癥狀。雖然MPTP 對(duì)黑質(zhì)損傷具有一定的可逆性，但其誘導(dǎo)的PD 模型在病理進(jìn)程上更接近人類的PD 病理變化，如酪氨酸羥化酶（tyrosine hydroxylase，TH） 和α-突觸核蛋白（α-synuclein，α-syn） 的病理改變。因此，MPTP 被公認(rèn)為研究PD 的理想誘導(dǎo)藥物。

樹鼩是靈長(zhǎng)類動(dòng)物的近親[18-19]，由于其特殊的分類學(xué)地位和生物學(xué)特性，已被廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)的多個(gè)領(lǐng)域，是理想的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。樹鼩大腦發(fā)達(dá)，其神經(jīng)系統(tǒng)疾病模型的復(fù)制已成為研究熱點(diǎn)，目前已成功建立了阿爾茨海默病[20-21]、抑郁癥[22]、藥物成癮[23]、帕金森病[9， 24]等模型。本研究以實(shí)驗(yàn)室馴養(yǎng)的樹鼩為對(duì)象，采用操作簡(jiǎn)便、安全的皮下和肌內(nèi)注射MPTP，以期建立一種更為簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、可靠且運(yùn)動(dòng)癥狀與人類PD 臨床癥狀相似的樹鼩PD 模型， 為進(jìn)一步研究PD 發(fā)病機(jī)制和新藥開發(fā)提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

供試普通級(jí)成年滇緬樹鼩30 只，體質(zhì)量為（131.48±13.19） g，雌雄各半，由昆明醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部提供， 使用許可證號(hào)： SYXK （滇） K2015-0002。單籠飼養(yǎng)于普通環(huán)境實(shí)驗(yàn)室中，室內(nèi)溫度控制在（24±2） ℃。飼喂顆粒飼料，自由采食和飲水，每天飼喂蘋果10～15 g。供試樹鼩隨機(jī)分為2 個(gè)模型組（皮下注射組、肌內(nèi)注射組） 和1 個(gè)對(duì)照組，每組動(dòng)物10 只。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方案經(jīng)昆明醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理審查委員會(huì)審查并批準(zhǔn)，批準(zhǔn)號(hào)：KMMU2017002。

1.2 試劑與儀器

主要供試試劑包括： MPTP （Sigma 公司，M0896-100MG）、4% 多聚甲醛固定液（上海生工工程股份有限公司）、二甲苯（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）、蘇木精—伊紅（HE） 試劑盒（北京索萊寶科技有限公司）、TH 和α-syn 免疫組化試劑盒（福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司） 等。