[摘要]目的探討血漿微小核糖核酸（microRNA，miR）-451a、miR-3613-5p和miR-125b-5p在子宮內(nèi)膜異位癥（endometriosis，EMT）中的診斷價(jià)值。方法選取2021年12月至2023年2月就診于福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬人民醫(yī)院婦科的子宮內(nèi)膜異位癥患者35例作為病例組，同期選取30名健康體檢無(wú)異常的育齡女性作為對(duì)照組。采用實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)檢測(cè)兩組納入者的miR-451a、miR-3613-5p和miR-125b-5p表達(dá)水平，并通過(guò)受試者操作特征曲線(xiàn)（receiveroperatingcharacteristiccurve，ROC曲線(xiàn)）評(píng)價(jià)其在EMT診斷中的價(jià)值。結(jié)果①病例組患者血漿中miR-451a、miR-3613-5p和miR-125b-5p的表達(dá)水平均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。②病例組中輕中度（Ⅱ～Ⅲ期）患者及重度（Ⅳ期）患者間miRNA表達(dá)水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），血漿中的糖類(lèi)抗原125（carbohydrateantigen125，CA125）表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。③通過(guò)ROC分析miRNA對(duì)EMT的診斷效能，miR-451a的敏感度為85.7%，特異性為40.0%；miR-3613-5p的敏感度為60.0%，特異性為90.0%；miR-125b-5p的敏感度為60.0%，特異性為76.7%；三者聯(lián)合診斷的敏感度為48.6%，特異性為96.7%。結(jié)論相較于健康女性，miR-451a、miR-3613-5p和miR-125b-5p在EMT患者血漿中表達(dá)水平升高，且不受臨床分期影響，有望作為EMT無(wú)創(chuàng)診斷的候選標(biāo)志物。

[關(guān)鍵詞]子宮內(nèi)膜異位癥；微小核糖核酸-451a；微小核糖核酸-3613-5p；微小核糖核酸-125b-5p

[中圖分類(lèi)號(hào)]R711.71[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A?;[DOI]10.3969/j.issn.1673-9701.2024.21.007

DiagnosticvalueofplasmamiRNAinendometriosis

HANChunlong，CHENJie，PENGZijie

DepartmentofGynecology，theAffiliatedPeople’sHospitalofFujianUniversityofTraditionalChineseMedicine，F(xiàn)uzhou350004，F(xiàn)ujian，China

[Abstract]ObjectiveToexplorethediagnosticvalueofmicroRNA（miR）-451a，miR-3613-5pandmiR-125b-5pinendometriosis（EMT）.MethodsAtatolof35patientswithEMTintheDepartmentofGynecology，theAffiliatedPeople’sHospitalofFujianUniversityofTraditionalChineseMedicinewereselectedasthecasegroupfromDecember2021toFebruary2023，30healthywomenofchildbearingagewereselectedasthecontrolgroupoverthesameperiod.TheexpressionlevelsofmiR-451a，miR-3613-5pandmiR-125b-5pintheplasmaoftwogroupsweremeasuredusingreal-timequantitativereversetranscriptionpolymerasechainreaction，thediagnosticvalueofthesemiRNAsinEMTwasevaluatedbyusingreceiveroperatingcharacteristic（ROC）curve.Results①TheexpressionlevelsofmiR-451a，miR-3613-5pandmiR-125b-5pincasegroupwerehigherthanthoseincontrolgroup，thedifferencewasstatisticallysignificant（P<0.05）.②Incasegroup，therewasnosignificantdifferenceinmiRNAexpressionlevelsbetweenmild-moderatepatients（stageⅡ-Ⅲ）andseverepatients（stageⅣ）（P>0.05）.Theexpressionlevelsofcarbohydrateantigen125（CA125）inplasmawassignificantlydifferent（P<0.05）.③ThediagnosticefficacyofmiRNAforEMTwasevaluatedthroughROCanalysis，withasensitivityof85.7%andspecificityof40.0%formiR-451a，asensitivityof60.0%andspecificityof90.0%formiR-3613-5p，andasensitivityof60.0%andspecificityof76.7%formiR-125b-5p.Combinedwithasensitivityof48.6%andspecificityof96.7%.ConclusionComparedtohealthywomen，theexpressionlevelsofmiR-451a，miR-3613-5pandmiR-125b-5pinplasmaofEMTareincreased，whicharenotaffectedbyclinicalstage，andareexpectedtobecandidatemarkersforthenon-invasivediagnosisofEMT，andarenotaffectedbyclinicalstaging，makingthempromisingcandidatebiomarkersfornon-invasivediagnosisofEMT.

[Keywords]Endometriosis;miR-451a;miR-3613-5p;miR-125b-5p

子宮內(nèi)膜異位癥（endometriosis，EMT）作為常見(jiàn)的婦科病癥，在育齡期女性中的發(fā)病率約為10%，其可導(dǎo)致痛經(jīng)、慢性盆腔痛、性交痛及不孕等一系列癥狀，嚴(yán)重影響女性的身心健康和生活質(zhì)量[1]。EMT的發(fā)病機(jī)制目前仍未完全明確，也缺乏準(zhǔn)確的診斷方法[2]，由于早期可能缺乏典型癥狀，患者癥狀明顯時(shí)病情往往已經(jīng)較為嚴(yán)重。因此，對(duì)EMT的早期診斷顯得尤為關(guān)鍵[3]。目前，糖類(lèi)抗原125（carbohydrateantigen125，CA125）是輔助診斷EMT的常用生物標(biāo)志物，但其特異性在單獨(dú)使用時(shí)并不理想。腹腔鏡檢查可作為診斷EMT的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但其高昂的成本和侵入性操作使其在臨床上的應(yīng)用受到限制。鑒于此，研究者們一直在尋找具有高特異性和敏感度的非侵入性診斷標(biāo)志物。微小核糖核酸（microRNA，miR）是一類(lèi)由大約22個(gè)核苷酸組成的單鏈RNA分子，并在多種細(xì)胞過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵調(diào)節(jié)作用[4]。研究表明miRNA在EMT的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中扮演重要角色，并有可能成為EMT的無(wú)創(chuàng)診斷標(biāo)志物[5]。本研究旨在通過(guò)分析EMT患者與健康女性血漿中miR-451a、miR-3613-5p和miR-125b-5p的表達(dá)差異，并采用受試者操作特征曲線(xiàn)（receiveroperatingcharacteristiccurve，ROC曲線(xiàn)）評(píng)估其在EMT診斷中的應(yīng)用價(jià)值，期望能為EMT的早期診斷提供新的策略。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2021年12月至2023年2月就診于福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬人民醫(yī)院婦科的35例EMT患者作為病例組，同期選取30名健康體檢無(wú)異常的育齡女性作為對(duì)照組。病例組患者的年齡（32.23±5.07）歲，體質(zhì)量指數(shù)（21.38±2.31）kg/m2，對(duì)照組納入者的年齡（32.50±4.45）歲，體質(zhì)量指數(shù)（21.26±2.85）kg/m2，兩組納入者的一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。病例組按術(shù)中所見(jiàn)以美國(guó)生殖醫(yī)學(xué)會(huì)（AmericanSocietyforReproductiveMedicine，ASRM）修正的子宮內(nèi)膜異位癥分期法[6]進(jìn)行分期：Ⅱ期患者4例，Ⅲ期患者11例，Ⅳ期患者20例。病例組納入標(biāo)準(zhǔn)：①接受腹腔鏡手術(shù)且術(shù)后病理確診EMT；②既往月經(jīng)規(guī)律；③本人及其家屬同意加入本研究，并簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①術(shù)前3個(gè)月內(nèi)接受促性腺激素釋放激素激動(dòng)劑類(lèi)似物或激素類(lèi)藥物治療；②同時(shí)患有其他婦科疾病或嚴(yán)重器質(zhì)性疾病者。本研究經(jīng)福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬人民醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（倫理審批號(hào)：2021-051-02）。

1.2試劑與設(shè)備

mRNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒及miRNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒均購(gòu)自北京康為世紀(jì)生物科技有限公司。Trizol試劑購(gòu)自美國(guó)Thermo公司，CA125酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）試劑盒購(gòu)自南京博研生物科技有限公司。miR-451a、miR-3613-5p、miR-125b-5p及U6（內(nèi)參）引物由北京擎科合成。熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)儀購(gòu)自美國(guó)Thermo公司，型號(hào)PIKOREAL96；多功能酶標(biāo)分析儀購(gòu)自瑞士Tecan公司，型號(hào)Infinite200Pro。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1標(biāo)本收集所有納入者在清晨空腹?fàn)顟B(tài)下抽取5ml靜脈血，靜置于含抗凝劑的試管中，常溫3000轉(zhuǎn)/min離心15min取血漿，存于無(wú)菌離心管并冷凍于–80℃待測(cè)。

1.3.2miRNA檢測(cè)Trizol法提取細(xì)胞總RNA，分光光度計(jì)測(cè)定濃度并計(jì)算純度。先利用反轉(zhuǎn)錄試劑盒逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，以cDNA為模板進(jìn)行擴(kuò)增，再進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)。選用U6作為內(nèi)參，以Ct值為基礎(chǔ)，采用2-△△Ct法計(jì)算血漿miR-451a、miR-3613-5p及miR-125b-5p的相對(duì)表達(dá)量。引物序列見(jiàn)表1。

1.3.3CA125檢測(cè)使用ELISA試劑盒進(jìn)行測(cè)定，嚴(yán)格遵守試劑盒說(shuō)明書(shū)的規(guī)范步驟進(jìn)行操作。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS26.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；不符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以中位數(shù)（四分位數(shù)間距）[M（Q1，Q3）]表示，兩組間比較采用Mann-WhitnelyU檢驗(yàn)。診斷價(jià)值的比較采用ROC曲線(xiàn)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1病例組與對(duì)照組的血漿miRNA指標(biāo)比較

病例組患者的血漿miR-451a、miR-3613-5p和miR-125b-5p水平均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表2。

2.2病例組不同分期患者血漿miRNA和CA125的比較

輕中度（Ⅱ～Ⅲ期）患者及重度（Ⅳ期）患者血漿miR-451a、miR-3613-5p和miR-125b-5p的相對(duì)表達(dá)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；輕中度與重度CA125對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表3。

2.3ROC曲線(xiàn)分析miRNA診斷效能

血漿miR-451a診斷EMT的截?cái)嘀禐?.067，曲線(xiàn)下面積（areaunderthecurve，AUC）為0.653（95%CI：0.519～0.787），敏感度為85.7%，特異性為40.0%；血漿miR-3613-5p診斷EMT的截?cái)嘀禐?.523，AUC為0.794（95%CI：0.688～0.900），敏感度為60.0%，特異性為90.0%；血漿miR-125b-5p診斷EMT的截?cái)嘀禐?.671，AUC為0.694（95%CI：0.566～0.823），敏感度為60.0%，特異性為76.7%；三者聯(lián)合診斷EMT的截?cái)嘀禐?.708，AUC為0.801（95%CI：0.697～0.905），敏感度為48.6%，特異性為96.7%，見(jiàn)圖1。

3討論

EMT是生育年齡婦女常見(jiàn)的婦科疾病，不僅對(duì)患者的生命質(zhì)量產(chǎn)生負(fù)面影響，還給社會(huì)衛(wèi)生資源造成重大負(fù)擔(dān)[1]。因此，實(shí)現(xiàn)EMT的早期診斷和干預(yù)對(duì)改善患者預(yù)后至關(guān)重要[3]。發(fā)現(xiàn)非侵入性、具有高敏感度和特異性的生物標(biāo)志物對(duì)EMT的診斷、緩解患者的不適、減少醫(yī)療費(fèi)用、提升診斷的精確度和迅速性進(jìn)而優(yōu)化患者的整體治療過(guò)程具有重要意義。

miRNA是一類(lèi)由大約22個(gè)核苷酸組成的單鏈RNA分子，在真核生物中高度保守，可以多種方式調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄或翻譯，單個(gè)miRNA甚至可對(duì)一個(gè)靶基因進(jìn)行雙重或多重調(diào)控[4]。近年來(lái)研究顯示miRNA在EMT的發(fā)生和發(fā)展中廣泛參與，包括細(xì)胞的增殖遷移、血管的生成、炎癥信號(hào)的傳導(dǎo)及激素的調(diào)節(jié)等多個(gè)方面，對(duì)EMT的進(jìn)展具有決定性影響[5]。Bendifallah等[7]利用人工智能和機(jī)器學(xué)習(xí)技術(shù)開(kāi)發(fā)基于miRNA的EMT診斷程序，其敏感度、特異性和AUC分別達(dá)96.8%、100.0%和98.4%，這表明miRNA作為診斷標(biāo)志物具有巨大潛力。Moustafa等[8]采用miRNA檢測(cè)組合作為EMT的非侵入性診斷方法，發(fā)現(xiàn)miR-451a、miR-3613-5p和miR-125b-5p在EMT患者中的表達(dá)水平顯著高于健康對(duì)照者，而miR-3613-5p和let-7b水平則顯著低于健康對(duì)照者。Vanhie等[9]基于全基因組miRNA表達(dá)譜分析，識(shí)別包括miR-125b-5p、miR-451a和miR-3613-5p在內(nèi)的42種具有區(qū)分潛力的血漿miRNA，并構(gòu)建3種診斷模型。Gao等[10]的研究發(fā)現(xiàn)miR-451a在正常子宮內(nèi)膜中的表達(dá)減少，其可能通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞增殖和減少凋亡促進(jìn)EMT的發(fā)病。Li等[11]在小鼠EMT模型上使用miR-451a抑制劑治療后，觀(guān)察到EMT病變體積顯著減小。但根據(jù)Wang等[12]的研究，在患有EMT并伴有不孕癥狀的個(gè)體中，miR-451a在組織樣本及細(xì)胞系的表達(dá)水平顯著低于正常人群。Walasik等[13]的前瞻性研究也發(fā)現(xiàn)EMT患者血漿中的miR-451a和miR-3613-5p水平顯著降低，但miR-125b-5p和miR-199a-3p水平在EMT患者和健康對(duì)照者間沒(méi)有差異。Cosar等[14]研究發(fā)現(xiàn)在經(jīng)過(guò)治療的狒狒EMT模型中，miR-451a和miR-150-5p水平顯著降低，而miR-3613-5p水平顯著升高。此外，研究發(fā)現(xiàn)miR-3613-3p在調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡中發(fā)揮不可或缺的作用[15]。

盡管?chē)?guó)內(nèi)外已有許多研究致力于評(píng)估m(xù)iRNA作為EMT診斷標(biāo)志物的潛力，并采取多種策略標(biāo)準(zhǔn)化miRNA表達(dá)數(shù)據(jù)，但所得結(jié)果卻并不一致[16]。這種不一致可歸因于采血時(shí)的月經(jīng)周期時(shí)間、患者的炎癥狀態(tài)、樣本儲(chǔ)存時(shí)間或樣本溶血等[17]。另外本研究還使用ROC曲線(xiàn)評(píng)價(jià)miRNA對(duì)EMT的診斷效能，其中miR-451a具有較高的敏感度但特異性不足；相反，miR-3613-5p具有較高的特異性而敏感度不高，miR-125b-5p的敏感度和特異性均一般，三者聯(lián)合診斷時(shí)雖敏感度不足但特異性極高，有望彌補(bǔ)CA125單獨(dú)診斷EMT時(shí)特異性不足的缺點(diǎn)。

綜上所述，本研究在探索miRNA作為EMT診斷生物標(biāo)志物方面取得一定的進(jìn)展，但同時(shí)也暴露一些局限性。首先，研究的樣本量相對(duì)較小，其次，主要集中于中重度EMT患者，這可能限制研究結(jié)果在更廣泛人群中的適用性。為克服這些局限性，未來(lái)的研究應(yīng)考慮擴(kuò)大樣本量，進(jìn)行多中心研究，并涵蓋不同臨床分期的EMT患者，為miRNA在EMT診斷中的應(yīng)用提供更堅(jiān)實(shí)的科學(xué)基礎(chǔ)。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。

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（收稿日期：2024–01–08）

（修回日期：2024–07–08）