陳曦

甲醇蛋白是以甲醇為碳源，通過培養(yǎng)微生物生產(chǎn)的單細胞蛋白，具有成本低、質(zhì)量穩(wěn)定可控等優(yōu)點。甲醇蛋白也被認為是食用和飼用蛋白的有效替代品。

近日，中國科學(xué)院天津工業(yè)生物技術(shù)研究所吳信研究員帶領(lǐng)的營養(yǎng)資源合成生物學(xué)團隊，在“蛋白飼料生物工程制造前沿技術(shù)及新產(chǎn)品創(chuàng)制”項目的支持下，在一碳甲醇原料生物合成單細胞蛋白方面取得了新突破。該研究為解析畢赤酵母碳氮源高效利用以及甲醇一蛋白定向合成的調(diào)控機制提供了新策略，同時為突破甲醇蛋白生物制造經(jīng)濟閾值奠定了基礎(chǔ)。

甲醇蛋白可替代天然植物蛋白

目前，我國大宗農(nóng)產(chǎn)品對外依存度依然較高，其中，大豆等蛋白質(zhì)原料的對外依存度已連續(xù)十多年超過80%。營養(yǎng)資源高度依賴進口的局面嚴重威脅了我國食品供給安全。尋求新的蛋白質(zhì)資源，代替大豆等作物蛋白迫在眉睫。

“單細胞蛋白被視為食品及飼料蛋白生產(chǎn)的重要替代品。該蛋白是通過微生物發(fā)酵的方式生產(chǎn)的菌體蛋白?！眳切沤榻B，菌體中的蛋白質(zhì)含量高達40%～85%，遠高于天然植物中的蛋白質(zhì)含量。同時，菌體的氨基酸組分齊全，可利用率高，還含有維生素、無機鹽、脂肪和糖類等營養(yǎng)成分，可以部分代替魚粉、大豆、肉類及脫脂奶粉等。

與傳統(tǒng)種植方式獲取蛋白相比，單細胞蛋白的生產(chǎn)不受自然環(huán)境影響，且產(chǎn)率較高。在產(chǎn)量相同的情況下，單細胞蛋白生產(chǎn)用地使用效率比農(nóng)作物種植用地使用效率提高1000倍以上。

單細胞蛋白可由制糖、造紙、淀粉生產(chǎn)、木材加工等產(chǎn)生的副產(chǎn)物來發(fā)酵生產(chǎn)，但這些副產(chǎn)物的供應(yīng)不穩(wěn)定，使得單細胞蛋白產(chǎn)量較低。相較之下，甲醇蛋白則具有廣闊的工業(yè)化生產(chǎn)前景。“在一系列一碳化合物中，甲醇的來源豐富且廉價，更容易運輸和儲存，是化學(xué)工業(yè)和生物制造的理想一碳資源?！眳切沤榻B，甲醇還具有高度的還原性，可以為甲醇蛋白的生物合成提供更多驅(qū)動力。

此外，我國的煤炭資源較為豐富，以煤炭副產(chǎn)物甲醇作為碳源生產(chǎn)單細胞蛋白，不僅碳源供應(yīng)穩(wěn)定，而且還可通過微生物對一碳化合物的同化降低碳排放，有效推動飼料工業(yè)原料資源供給和煤炭副產(chǎn)物高效清潔利用。

改造菌株高效合成甲醇蛋白

目前，常見的能夠以甲醇為碳源合成甲醇蛋白的微生物包括畢赤酵母、谷氨酸棒狀桿菌等。在畢赤酵母的甲醇代謝途徑中，甲醇首先會被氧化為甲醛。一部分甲醛將進入異化途徑，進一步被氧化為二氧化碳和水；另一部分甲醛進入同化途徑，經(jīng)由單磷酸木糖途徑進入中心代謝，促進菌體的生長代謝。

“甲醇代謝途徑復(fù)雜，進入異化途徑的比例難以調(diào)控。并且甲醇本身具有生物毒性，造成的碳損失往往超過原料整體利用率的20%。無法實現(xiàn)甲醇代謝流高效定向轉(zhuǎn)化為菌體蛋白，是目前制約甲醇蛋白合成成本進一步降低的主要技術(shù)瓶頸?！眳切耪f。

為解決上述問題，團隊從全國多個省份的葡萄園、森林、沼澤地等采集了2萬多份樣本，從中篩選獲得了可以高效利用多種糖源和低元醇等碳源的菌株，并以野生型畢赤酵母菌株為出發(fā)菌株，利用適應(yīng)性實驗室進化獲得了一株甲醇利用率高、耐高溫的巴斯德畢赤酵母菌株。轉(zhuǎn)錄組學(xué)和表型分析顯示，這一菌株的同化途徑和異化途徑的通量均有所減少，酵母細胞達到新的代謝平衡，實現(xiàn)了代謝途徑中碳損失的減少。

團隊在進一步的研究中發(fā)現(xiàn)，細胞壁重塑是巴斯德畢赤酵母細胞在進化過程中響應(yīng)高溫脅迫的適應(yīng)性反應(yīng)。研究人員通過強化氮代謝途徑關(guān)鍵基因和削弱細胞壁合成，來提高獲得的巴斯德畢赤酵母菌株的蛋白質(zhì)含量，最終在33。C條件下的中試規(guī)模補料分批培養(yǎng)中，實現(xiàn)以甲醇為唯一碳源高水平生產(chǎn)單細胞蛋白。

進一步突破工業(yè)菌株生產(chǎn)閾值

從20世紀60年代起，世界上就有不少國家開始進行甲醇蛋白的研究與開發(fā)生產(chǎn)。至20世紀70年代后期，全球從事該項研究工作的單位達到近千家。我國對甲醇蛋白的研究并不算晚，早在1984年，我國就把甲醇蛋白列為飼料工業(yè)發(fā)展的重要產(chǎn)品之一。但目前，國內(nèi)甲醇蛋白行業(yè)的競爭程度仍相對較低，大部分企業(yè)技術(shù)水平有限，產(chǎn)品質(zhì)量差異較大，市場競爭力不足。

“早些年，我們的設(shè)備裝置比較落后，技術(shù)難以突破，缺乏優(yōu)良的野生菌種資源和先進的生產(chǎn)工藝。這些問題導(dǎo)致生產(chǎn)成本較高，在一定程度上限制了我國甲醇蛋白的大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化發(fā)展。”中國科學(xué)院天津工業(yè)生物技術(shù)研究所副研究員高樂說。

此次研究創(chuàng)制了具有自主知識產(chǎn)權(quán)且可使甲醇蛋白高效合成的巴斯德畢赤酵母菌株，粗蛋白含量達到67.2%，甲醇一蛋白轉(zhuǎn)化效率達到理論值的92%，為以甲醇為唯一碳源生產(chǎn)單細胞蛋白提供了一個經(jīng)濟的巴斯德畢赤酵母細胞工廠。目前，研究團隊已將這項成果嘗試投入應(yīng)用，在企業(yè)實現(xiàn)了萬噸級工業(yè)化示范。

“未來我們還將引入人工智能系統(tǒng)，加快現(xiàn)有自主知識產(chǎn)權(quán)菌株的迭代升級，實現(xiàn)工業(yè)菌株一工業(yè)原料一發(fā)酵工藝/設(shè)備高度擬合，進一步突破工業(yè)菌株的生產(chǎn)閾值?！眳切疟硎?，提升甲醇蛋白的生理學(xué)功能和營養(yǎng)價值，拓展以甲醇蛋白為核心的衍生功能蛋白市場，是未來甲醇蛋白發(fā)展的兩個重要方向。這能夠進一步降低甲醇蛋白的生產(chǎn)成本，提高甲醇蛋白的附加值，促進甲醇蛋白的規(guī)模化生產(chǎn)。