侯金麗

（河南工業(yè)貿(mào)易職業(yè)學(xué)院，河南鄭州 451191）

飼料是所有飼養(yǎng)動(dòng)物的食物總稱(chēng)，飼料配方、營(yíng)養(yǎng)水平往往與動(dòng)物生長(zhǎng)性能、免疫功能、養(yǎng)殖效益息息相關(guān)。在規(guī)模化養(yǎng)殖背景下，對(duì)飼料成分檢測(cè)成為新常態(tài)。其中，抗?fàn)I養(yǎng)因子是較為寬泛的概念，可對(duì)動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育、消化吸收等產(chǎn)生負(fù)面影響，或讓動(dòng)物出現(xiàn)不良生理反應(yīng)的成分均可歸納到抗?fàn)I養(yǎng)因子范疇中（王金平，2022）。因此，抗?fàn)I養(yǎng)因子是飼料成分檢測(cè)的重要內(nèi)容，旨在保證飼料安全（梁洪慧等，2022）。但飼料原料和抗?fàn)I養(yǎng)因子的種類(lèi)具有多樣化的特點(diǎn)，為便于論述，下文主要針對(duì)豆粕飼料中的抗?fàn)I養(yǎng)因子進(jìn)行分析。

1 豆粕飼料的營(yíng)養(yǎng)成分及其在動(dòng)物養(yǎng)殖中的應(yīng)用

1.1 豆粕飼料的營(yíng)養(yǎng)成分 在飼料工業(yè)中，豆粕是最常見(jiàn)的一種植物性蛋白質(zhì)飼料，其富含的粗蛋白質(zhì)和氨基酸能有效滿(mǎn)足動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)需要。因此，諸多學(xué)者對(duì)豆粕飼料的營(yíng)養(yǎng)成分進(jìn)行檢測(cè)分析。張輝耀等（2022）利用化學(xué)成分分析對(duì)豆粕、棉籽粕、菜籽粕3 種植物性蛋白質(zhì)飼料進(jìn)行檢測(cè)，其中，豆粕的粗灰分（GB/T6438-2007）、粗纖維（GB/T6434-2006）、中性洗滌纖維（GB/T20806-2006）含量最低，分別為6.06%、6.6%、12.75% ；豆粕的粗脂肪（GB/T6433-2006）、天門(mén)冬氨酸（GB/T18246-2019）、蘇氨酸（GB/T18246-2019）含量最高，分別為1.15%、4.95%、1.72%。 江秋雨等（2021）對(duì)6 種人工豆粕的常規(guī)營(yíng)養(yǎng)（干物質(zhì)基礎(chǔ)）進(jìn)行檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)，其中干物質(zhì)為（90.27±0.88）%、粗 脂 肪 為（2.18±0.54）%、粗 蛋 白 質(zhì) 為（50.32±2.14）%、粗纖維為（6.14±2.61）%、中性洗滌纖維為（11.79±3.99）%、酸性洗滌纖維為（6.93±3.12）%、粗灰分為（6.80±0.25）%、蛋白溶解度為（78.81±1.97）%。由此可見(jiàn)，豆粕的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值豐富。

1.2 豆粕在動(dòng)物養(yǎng)殖中的應(yīng)用 豆粕具有蛋白質(zhì)含量高、氨基酸平衡、適口性好等優(yōu)點(diǎn)，雖然豆粕減量替代、蛋白飼料資源開(kāi)發(fā)、低蛋白日糧技術(shù)等降低了豆粕在飼料中的占比，但其依舊在動(dòng)物養(yǎng)殖中發(fā)揮了重要作用（張輝耀等，2024 ；林萌萌等，2023）。楊彩虹（2022）分析了不同蛋白質(zhì)飼料對(duì)湖羊的育肥效果，試驗(yàn)結(jié)果顯示，與豆粕飼料組相比，棉籽粕飼料組、花生粕飼料組、菜籽餅飼料組湖羊的料重比顯著提高，且總能、粗蛋白質(zhì)的消化率顯著降低。葛瑩等（2024）從飼料成本角度出發(fā)，以豆粕飼料設(shè)置90%、95%、100% 粗蛋白質(zhì)組，結(jié)果顯示，低豆粕飼料雖然能節(jié)約成本，但與100% 粗蛋白組相比，90%、95% 粗蛋白質(zhì)組黃羽肉雞的各階段末重均顯著下降，且1 ～6 w料重比極顯著升高。周小雙和劉海強(qiáng)（2023）對(duì)比了豆粕飼料和菜籽粕飼料在育肥豬養(yǎng)殖中的效果，經(jīng)過(guò)63 d 的試驗(yàn)期，與豆粕組相比，9% 菜籽粕替代組育肥豬的末重、平均日增重顯著降低，料重比顯著升高。由此可見(jiàn)，以豆粕作為蛋白飼料來(lái)源或在飼料中添加適當(dāng)水平的豆粕能促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育，提高生長(zhǎng)性能。

2 豆粕的抗?fàn)I養(yǎng)因子及其對(duì)動(dòng)物的負(fù)面影響

2.1 豆粕的抗?fàn)I養(yǎng)因子 豆粕除了含有豐富的營(yíng)養(yǎng)成分外，還含有一定的抗?fàn)I養(yǎng)因子。李盛東（2022）列舉了豆粕飼料中較為常見(jiàn)的抗?fàn)I養(yǎng)因子，如胰蛋白酶抑制因子、大豆抗原蛋白、大豆凝集素和植酸，動(dòng)物養(yǎng)殖中可以采用微生物發(fā)酵的方法去除豆粕飼料的抗?fàn)I養(yǎng)因子。陳玥和龔玉石（2023）通過(guò)發(fā)酵前后豆粕飼料抗?fàn)I養(yǎng)因子的降解率來(lái)探索合適的益生菌，經(jīng)過(guò)試驗(yàn)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，與地衣芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌、釀酒酵母相比，米曲霉對(duì)大分子蛋白的降解能力最強(qiáng)，且對(duì)胰蛋白酶抑制因子、大豆球蛋白、β- 伴大豆球蛋白的降解率高達(dá)98.07%、64.71%、78.94%。而祝天賜等（2022）從抗?fàn)I養(yǎng)因子的角度分析了豆粕的利用現(xiàn)狀，并提出物理處理法、化學(xué)處理法、酶制劑處理法、生物發(fā)酵處理法都能有效去除抗?fàn)I養(yǎng)因子。由此可見(jiàn)，如何簡(jiǎn)單高效地去除豆粕的抗?fàn)I養(yǎng)因子成為當(dāng)下的研究熱點(diǎn)。

2.2 抗?fàn)I養(yǎng)因子對(duì)動(dòng)物的負(fù)面影響 豆粕中抗?fàn)I養(yǎng)因子的危害主要體現(xiàn)在抑制生長(zhǎng)、降低飼料利用率、胰腺腫大、過(guò)敏反應(yīng)等方面。為進(jìn)一步研究抗?fàn)I養(yǎng)因子的作用機(jī)理，諸多學(xué)者對(duì)細(xì)分領(lǐng)域加強(qiáng)了研究。張亞林（2021）在等氮情況下使用8% 大豆球蛋白飼喂幼草魚(yú)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，大豆球蛋白顯著降低了幼草魚(yú)末重、平均日增重和飼料效率。趙琳琳等（2018）以小鼠為試驗(yàn)對(duì)象，并在日糧中添加3.6 mg/g 的大豆胰蛋白酶抑制因子，進(jìn)行了小鼠胰腺氧化損傷造型。夏江英等（2021）則在仔豬基礎(chǔ)日糧中添加5 mg/mL 的β- 伴大豆球蛋白，與基礎(chǔ)日糧組相比，β- 伴大豆球蛋白組IPEC-J2 活力極顯著降低，且提高了促炎性因子濃度，降低了抗炎因子濃度?；萏烊坏龋?023）指出，大豆球蛋白、β- 伴大豆球蛋白是大豆中的主要過(guò)敏原，因?yàn)榇蠖惯^(guò)敏難以根治，最佳辦法就是預(yù)防和控制攝入量。由此可見(jiàn)，豆粕飼料中抗?fàn)I養(yǎng)因子能對(duì)動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育、免疫功能及機(jī)體健康起到負(fù)面影響。

3 豆粕飼料中抗?fàn)I養(yǎng)因子的檢測(cè)技術(shù)研究

鑒于抗?fàn)I養(yǎng)因子對(duì)動(dòng)物的負(fù)面影響，在規(guī)?；B(yǎng)殖背景下，對(duì)豆粕飼料中抗?fàn)I養(yǎng)因子的檢測(cè)成為新常態(tài)。

3.1 胰蛋白酶抑制因子的檢測(cè)技術(shù)研究 胰蛋白酶抑制因子是能抑制或阻礙胰蛋白酶活力的物質(zhì)，在大豆及其副產(chǎn)物中較為常見(jiàn)。針對(duì)胰蛋白酶抑制因子的檢測(cè)，《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)- 大豆制品中胰蛋白酶抑制劑活性的測(cè)定》（GB5009.224-2016）指出，采用分光光度計(jì)在410 nm 處測(cè)定胰蛋白酶與L-BAPA 反應(yīng)前后的吸光度值可定量分析。該實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法的精準(zhǔn)度較高，但所需試劑、材料、儀器和設(shè)備較多，且檢測(cè)流程較為復(fù)雜，難以在基層中大面積推廣。王耀等（2019）以綜述形式對(duì)比了幾種胰蛋白酶抑制因子檢測(cè)技術(shù)的優(yōu)缺點(diǎn)，其中脲酶檢測(cè)法主要利用脲酶與胰蛋白酶抑制因子含量的相似性，通過(guò)脲酶分解的產(chǎn)氨量來(lái)間接檢測(cè)胰蛋白酶抑制因子，脲酶的穩(wěn)定性差，所以該方法的缺點(diǎn)較為明顯，難以精準(zhǔn)檢測(cè)出胰蛋白酶抑制因子含量；酶化學(xué)檢測(cè)法以DL-BAPA 作為底物，通過(guò)比色和抑制曲線(xiàn)來(lái)檢測(cè)胰蛋白酶抑制因子含量，但除了胰蛋白酶抑制因子外，豆粕飼料中的其他抗?fàn)I養(yǎng)因子也會(huì)對(duì)胰蛋白酶產(chǎn)生抑制作用，這就對(duì)檢測(cè)結(jié)果的真實(shí)性產(chǎn)生負(fù)面影響。李心珠等（2023）在利用熒光適配體傳感器檢測(cè)胰蛋白酶抑制因子時(shí)，采用Exo Ⅲ和CNPs 作為信號(hào)放大器，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在100 ～600 ng/mL 范圍出現(xiàn)線(xiàn)性相關(guān)，且回收率超過(guò)97%，這為胰蛋白酶抑制因子的快速檢測(cè)提供參考。

3.2 大豆抗原蛋白的檢測(cè)技術(shù)研究 大豆抗原蛋白是豆粕飼料中引起動(dòng)物過(guò)敏反應(yīng)的大分子蛋白質(zhì)，如大豆球蛋白、β- 伴大豆球蛋白。雖然采用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)大豆抗原蛋白具有簡(jiǎn)單、快速的特點(diǎn)，但酶聯(lián)免疫試劑盒的制作成本較高。為達(dá)到降低檢測(cè)成本的目的，張?jiān)妶虻龋?016）建立了一種大豆抗原蛋白的直接ELISA 檢測(cè)方法，與競(jìng)爭(zhēng)ELISA 法相比，該方法的大豆抗原蛋白檢出限顯著提高，且符合率超過(guò)72%。因?yàn)棣? 伴大豆球蛋白具有熱穩(wěn)定性高和酶耐受性強(qiáng)的特點(diǎn)，荀冉（2023）建立了β- 伴大豆球蛋白的適配體傳感器，該檢測(cè)方法的檢出限為3.94 nmol/L，檢測(cè)范圍為7 ～56 nmol/L，可適用于液態(tài)發(fā)酵豆粕飼料的檢測(cè)。因?yàn)閭鞲衅鳈z測(cè)技術(shù)有效兼顧了酶聯(lián)免疫法和分光光度法的優(yōu)點(diǎn)，但如何選擇傳感器及擴(kuò)大豆粕飼料中抗?fàn)I養(yǎng)因子的檢測(cè)范圍成為未來(lái)研究的主要方向。

3.3 大豆凝集素的檢測(cè)技術(shù)研究 大豆凝集素是具有生物活性的糖蛋白，因?yàn)榕c動(dòng)物細(xì)胞上的特異糖基親和度高，能凝集動(dòng)物血液中的紅細(xì)胞。針對(duì)大豆凝集素的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，《植物代謝產(chǎn)物大豆凝集素測(cè)定- 酶聯(lián)免疫吸附法》（GB/T40220-2021）指出，在大豆凝集素與凝集素抗體結(jié)合后，再與酶標(biāo)抗體結(jié)合，以酶標(biāo)底物顯色，可在450 nm 波長(zhǎng)下根據(jù)吸光度值繪制曲線(xiàn)，從而計(jì)算出大豆凝集素含量。胡驍飛等（2020）采用體內(nèi)誘生腹水法制備了高親和力大豆凝集素單克隆抗體，該抗體的效價(jià)高于1 ∶409600，親和力為1.83×109L/mol，且與豆粕中其他抗?fàn)I養(yǎng)因子無(wú)交叉反應(yīng)，為大豆凝集素免疫學(xué)檢測(cè)提供了良好的抗體基礎(chǔ)。為探索快速準(zhǔn)確、靈敏特異的大豆凝集素檢測(cè)方法，龐杏豪（2022）利用夾心檢測(cè)的原理，通過(guò)雜交瘤細(xì)胞株篩選方式建立了間接ELISA 檢測(cè)方法，經(jīng)測(cè)試，該方法的檢測(cè)限為3.65 ng/mL，回收率為92.30% ～111.75%，具有準(zhǔn)確度高、特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)。

3.4 植酸的檢測(cè)技術(shù)研究 植酸是植物種子中普遍存在的一種有機(jī)磷類(lèi)化合物，其中豆科植物種子（大豆、花生、蠶豆、豌豆等）的植酸含量較高。在動(dòng)物體內(nèi)，植酸能與鈣、鐵、鋅等礦物質(zhì)生成不溶性植酸鹽，影響礦物質(zhì)的吸收。因此，諸多學(xué)者對(duì)大豆及豆粕中的植酸檢測(cè)進(jìn)行了深入研究。為有效檢測(cè)出豆類(lèi)和谷物食物中的植酸含量，袁長(zhǎng)梅等（2021）對(duì)比了直接測(cè)定法和間接測(cè)定法的優(yōu)劣勢(shì)，為檢測(cè)技術(shù)的改進(jìn)和研發(fā)提供了參考價(jià)值。楊露等（2019）指出，因?yàn)榛瘜W(xué)沉淀法難以從肌醇磷酸鹽中分離植酸，離子交換法難以有效區(qū)分植酸和肌醇磷酸鹽，容易出現(xiàn)檢測(cè)值偏高的情況，所以當(dāng)前常用高效液相色譜來(lái)提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性和靈敏度。袁建等（2015）在植酸檢測(cè)中對(duì)高效液相色譜作出適當(dāng)改進(jìn)，即采用C18 色譜柱，甲醇- 水流動(dòng)相，1.0 mL/min 流速和35℃柱溫，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在0.25 ～5 mg/mL 范圍線(xiàn)性關(guān)系良好，檢出限為40 μg/mL，回收率超過(guò)90%。因?yàn)樵摲椒ň哂锌焖?、?zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)，可用于豆粕中植酸的檢測(cè)。

4 結(jié)語(yǔ)

綜上所述，豆粕蛋白質(zhì)含量高，是最常見(jiàn)的植物性蛋白質(zhì)飼料。在正視豆粕營(yíng)養(yǎng)成分和飼用價(jià)值的同時(shí)，也應(yīng)充分認(rèn)識(shí)到豆粕中抗?fàn)I養(yǎng)因子對(duì)動(dòng)物的負(fù)面影響。對(duì)抗?fàn)I養(yǎng)因子作用機(jī)理和檢測(cè)技術(shù)的相關(guān)研究有利于促進(jìn)動(dòng)物的正常生長(zhǎng)和發(fā)育，提高養(yǎng)殖效益。雖然降解豆粕中抗?fàn)I養(yǎng)因子的方法眾多，但只能最大程度地減少抗?fàn)I養(yǎng)因子的含量，而無(wú)法做到徹底去除，飼喂動(dòng)物前最好對(duì)抗?fàn)I養(yǎng)因子進(jìn)行檢測(cè)。因此，只有不斷探索兼具低成本、高精度、易操作的檢測(cè)技術(shù)才能切實(shí)保證飼料安全。