蒲興 黨海斌 吳榮春 陳露 徐陽(yáng)

摘 要：傳染性法氏囊?。↖BD）是嚴(yán)重危害家禽業(yè)的疾病之一，該病目前呈全世界分布。近期我們進(jìn)行的IBD流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示，不同類型雞群都存在一定比例的IBD野毒感染情況，包括經(jīng)典毒株、超強(qiáng)毒株及新型變異株都有檢出，其中又以新型變異株為主。我們篩選了兩個(gè)具有代表性的毒株并命名為S1、S2，其與美國(guó)變異株在進(jìn)化樹(shù)上同屬一個(gè)分支，氨基酸序列一致性為96.81%～98.24%。為了對(duì)IBD的防控提供最新的參考依據(jù)，我們?cè)趯?shí)驗(yàn)室條件下使用不同的商品IBD疫苗免疫SPF雞后進(jìn)行攻毒試驗(yàn)，由此來(lái)評(píng)估其對(duì)新型變異株的免疫保護(hù)效果。試驗(yàn)結(jié)果表明：針對(duì)目前國(guó)內(nèi)普遍流行的IBDV變異株攻擊導(dǎo)致的法氏囊組織萎縮，HVT-IBD載體疫苗較抗原抗體復(fù)合物疫苗、中等偏強(qiáng)毒力活疫苗以及VP2亞單位疫苗在保護(hù)力上都具有一定優(yōu)勢(shì)，且HVT-IBD載體疫苗單獨(dú)免疫的保護(hù)效果也不比HVT-IBD載體疫苗與IBD活疫苗及HVT-IBD載體疫苗與VP2亞單位疫苗組合免疫的效果差。我們推薦在保證雛雞具有較高水平的母源抗體的基礎(chǔ)上1日齡免疫HVT+IBD載體疫苗，同時(shí)輔以良好的生物安全措施會(huì)取得比較理想的效果。

關(guān)鍵詞：傳染性法氏囊??；免疫保護(hù)；載體疫苗

中圖分類號(hào)：S852.5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B文章編號(hào)：1673-1085（2024）05-0032-06

傳染性法氏囊?。↖BD）是一種主要危害雛雞的烈性、高度接觸性傳染病，主要侵害雞的法氏囊組織，雛雞感染后會(huì)造成嚴(yán)重的免疫抑制，該病目前呈世界性分布。引起該病的病毒IBDV為無(wú)囊膜的雙股RNA病毒，其基因組由A、B兩個(gè)片段組成，其中B片段負(fù)責(zé)編碼法氏囊病毒五種主要蛋白中的VP1，而片段A負(fù)責(zé)編碼VP2、VP3、VP4及VP5蛋白，VP2蛋白主要誘導(dǎo)雞只產(chǎn)生中和性保護(hù)抗體。法氏囊病毒目前分為兩個(gè)血清型，血清Ⅰ型對(duì)雞有致病性，而血清Ⅱ型對(duì)雞不致病。

IBDV非常穩(wěn)定，對(duì)大多數(shù)消毒劑如乙醚、氯仿不敏感，在pH12條件下病毒失活，但在pH2時(shí)病毒不受影響，在污染的飼料、飲水及糞便中可以長(zhǎng)期存在。IBDV難以滅活的特性是它能夠在雞群長(zhǎng)期存在的主要原因，甚至清洗消毒后的雞舍也依然存在。目前防控IBD主要依靠疫苗免疫，同時(shí)輔以良好的生物安全措施。為了比較市面上的常規(guī)IBD疫苗對(duì)目前主要流行的新型變異毒株的免疫攻毒保護(hù)效果，我們進(jìn)行了如下對(duì)比試驗(yàn)，結(jié)果及分析如下。

1? 材料和方法

1.1? 材料

1.1.1? 疫苗及來(lái)源? HVT-IBD載體疫苗（Vaxxitek）由南昌勃林格殷格翰動(dòng)物保健有限公司生產(chǎn)及提供；VP2亞單位疫苗、中等偏強(qiáng)毒力IBD活疫苗、抗原抗體復(fù)合物疫苗分別來(lái)自國(guó)內(nèi)某疫苗公司A、B及某進(jìn)口疫苗廠家C。

1.1.2? 試驗(yàn)動(dòng)物? 試驗(yàn)用1日齡SPF雞，哈爾濱獸醫(yī)研究所自行孵化。

1.1.3? 隔離器? 由哈爾濱獸醫(yī)研究所提供。

1.1.4? 攻毒毒株? 由國(guó)內(nèi)某實(shí)驗(yàn)室提供，分離于田間的IBDV毒株S1、S2。雙向測(cè)通后的63株IBDV新型變異株序列分析顯示其與超強(qiáng)株、經(jīng)典株、減毒株、變異株的核苷酸一致性分別為91.76%～93.56%、93.48%～94.05%、92.90%～93.72%和93.97%～95.68%。新型變異株與美國(guó)變異株E、E/Del屬同一進(jìn)化樹(shù)分支，但明顯區(qū)分為2個(gè)亞支。新型變異株可分為2個(gè)組，新型變異組1和新型變異組2，兩組的核苷酸一致性為95.84%～99.9%。成功分型的變異株中，79.7%（59/74）為新型變異組1，樣品分別來(lái)自遼寧省、山東省、河北省和江蘇??；新型變異組2樣品來(lái)自遼寧省和河北省。本次試驗(yàn)中使用毒株S1、S2分別選自新型變異組1、新型變異組2。

1.2? 方法

1.2.1? 分組及處理? 將360只1日齡SPF雞隨機(jī)分成12組（G1～G12），G1～G3分別免疫HVT-IBD載體疫苗（Vaxxitek）、抗原抗體復(fù)合物疫苗、VP2亞單位疫苗；G9、G11分別為陽(yáng)性及陰性對(duì)照，21日齡攻毒S1。G4～G8分別免疫HVT-IBD載體疫苗（Vaxxitek）、中等偏強(qiáng)毒力活疫苗、HVT-IBD載體疫苗（Vaxxitek）+中等偏強(qiáng)毒力活疫苗、抗原抗體復(fù)合物疫苗+中等偏強(qiáng)毒力活疫苗、HVT-IBD載體疫苗（Vaxxitek）+VP2亞單位疫苗；G10、G12分別為陽(yáng)性及陰性對(duì)照，21日齡攻毒S2。具體見(jiàn)表1。

2? 試驗(yàn)結(jié)果

2.1? 毒株S1攻毒試驗(yàn)結(jié)果

G1（HVT+IBD載體疫苗Vaxxitek）、G2 （抗原抗體復(fù)合物疫苗）、G3 （VP2亞單位疫苗）、 G9（陽(yáng)性對(duì)照）、G11（陰性對(duì)照）對(duì)新型變異株S1攻毒的保護(hù)結(jié)果見(jiàn)表3、圖1～2。

國(guó)外有文獻(xiàn)研究指出，當(dāng)BBIX低于0.7時(shí)可以判定法氏囊萎縮[2]。此結(jié)果表明免疫攻毒前（21 d），G2（抗原抗體復(fù)合物疫苗組）已經(jīng)造成法氏囊的嚴(yán)重萎縮（BBIX=0.48）；變異株S1攻毒后一周（28 d）各組的BBIX都小于0.7，說(shuō)明新型變異株S1感染免疫雞都會(huì)發(fā)生法氏囊的萎縮。但在后期（35 d），G1（HVT+IBD載體疫苗Vaxxitek組）的BBIX為0.73，說(shuō)明法氏囊從攻毒后的萎縮狀態(tài)得到了一定程度的恢復(fù)；G2由于疫苗本身及攻毒毒株的雙重影響，法氏囊處于持續(xù)萎縮狀態(tài)（BBIX始終遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于0.7）；G3（VP2亞單位疫苗免疫組）的BBIX值雖有增長(zhǎng)，但仍低于0.7，說(shuō)明法氏囊也持續(xù)處于萎縮并未恢復(fù)。

綜上可見(jiàn)，HVT+IBD載體疫苗（Vaxxitek）針對(duì)新型變異株S1造成的雞只法氏囊萎縮的保護(hù)力優(yōu)于抗原抗體復(fù)合物、VP2亞單位疫苗。此結(jié)果也可由病理評(píng)分結(jié)果得到佐證，特別是G2在攻毒前法氏囊評(píng)分為3.1，說(shuō)明發(fā)氏囊已經(jīng)受到了損傷，其他時(shí)間各組病理評(píng)分結(jié)果變化規(guī)律與BBIX指數(shù)相一致，見(jiàn)圖2。

2.2? 毒株S2攻毒試驗(yàn)結(jié)果

G4～G8分別為HVT+IBD載體疫苗（Vaxxitek）、W2515活苗、HVT+IBD載體疫苗（Vaxxitek）+W2512活苗、抗原抗體復(fù)合物疫苗+W2512活苗、HVT+IBD載體疫苗（Vaxxitek）+VP2亞單位疫苗免疫組；G10為陽(yáng)性對(duì)照、G12為陰性對(duì)照，針對(duì)新型變異毒株S2的免疫攻毒保護(hù)試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4、圖3～ 4。

從結(jié)果來(lái)看，與G5（單獨(dú)免疫W2512活苗）、G7 （抗原抗體復(fù)合物+W2512活苗）相比較，G4（HVT+IBD載體疫苗）能更好地抵抗新型變異株S2的攻擊，雖然G4攻毒后法氏囊也會(huì)受到一定程度的影響，但是基本沒(méi)有發(fā)生萎縮（BBIX全程大于0.7）；而G5、G7攻毒前后法氏囊持續(xù)處于萎縮狀態(tài)（BBIX始終遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于0.7）；G6（Vaxxitek與W2512活苗聯(lián)合免疫組）與G5在21日齡的BBIX相比較，說(shuō)明以HVT+IBD載體疫苗（Vaxxitek）作為基礎(chǔ)免疫（1 d）可以提供針對(duì)中等偏強(qiáng)毒力活疫苗（W2515）免疫（10 d）對(duì)法氏囊造成的損傷，這也能反映出HVT+IBD載體疫苗（Vaxxitek）免疫后能快速刺激雞只產(chǎn)生中和抗體提供保護(hù)；同樣的，G4（HVT+IBD載體疫苗）與G8（VP2亞單位疫苗聯(lián)合免疫組）全程法氏囊都沒(méi)有發(fā)生萎縮（BBIX始終大于0.7），說(shuō)明有效抵抗了S2攻擊；G8與G4相比較沒(méi)有明顯優(yōu)勢(shì)。

病理評(píng)分結(jié)果顯示： G4、G6、G8攻毒后法氏囊評(píng)分為2～3之間，說(shuō)明法氏囊也會(huì)受到一定程度影響，但只是輕微損傷；而G5、G7、陽(yáng)性對(duì)照組全程評(píng)分基本都在4左右，說(shuō)明法氏囊持續(xù)處于嚴(yán)重萎縮狀態(tài)；此組病理評(píng)分與BBIX指數(shù)同樣表現(xiàn)出相似的變化規(guī)律。

3? 討論

隨著田間流行IBDV毒株的不斷演變，其疫苗也在不斷的更新迭代，經(jīng)歷了從第一代的傳統(tǒng)減毒活疫苗及滅活疫苗到第二代的抗原抗體復(fù)合物疫苗，再到第三代的HVT-IBD載體疫苗。我們選擇IBD疫苗的基本原則首先是可以有效控制該病，第二是疫苗本身不應(yīng)該對(duì)免疫雞只造成法氏囊的損傷而引起免疫抑制，第三是盡量避免向環(huán)境排毒造成環(huán)境污染，最后就是免疫操作的時(shí)機(jī)及便捷性[3，4]。雞舍環(huán)境復(fù)雜，田間免疫IBD活疫苗后雞群容易發(fā)病，一是因?yàn)槊庖叨局甓玖赡芷珡?qiáng)；二是雞群本身可能處于其他病原的潛伏感染期，屬于典型的免疫應(yīng)激，因此目前在孵化場(chǎng)免疫IBD疫苗是首選。IBDV變異株在國(guó)內(nèi)外存在已久，其可能的來(lái)源為免疫逃逸及不同毒株之間的重組，其具有較強(qiáng)的突破雛雞母源抗體的能力，因此可以在一周之內(nèi)感染雛雞，這將造成嚴(yán)重的免疫抑制[5，6]。本次試驗(yàn)中，未發(fā)現(xiàn)攻毒后直接造成雞只死亡，而都是以法氏囊不同程度的萎縮為主要表現(xiàn)。綜合以上試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，針對(duì)目前新型IBDV變異株的防控，HVT-IBD載體疫苗（Vaxxitek）是最好的免疫選擇。雖然載體疫苗與活苗、載體疫苗與油苗組合也有不錯(cuò)的表現(xiàn)，但是商品雞群IBD免疫需要考慮到中毒偏強(qiáng)IBD活疫苗本身造成的法氏囊損傷進(jìn)而引起的免疫抑制問(wèn)題以及油苗的吸收、免疫應(yīng)激、母源抗體的影響等問(wèn)題。HVT-IBD載體疫苗具有可以在孵化場(chǎng)免疫、不受母源抗體影響、不損傷法氏囊、不向環(huán)境排毒、水苗易于吸收、快速啟動(dòng)免疫刺激雞只產(chǎn)生VP2中和性抗體等諸多優(yōu)勢(shì)，為目前無(wú)論是針對(duì)經(jīng)典毒株、強(qiáng)毒及新型變異株IBDV防控的首選疫苗，同時(shí)建議提供雛雞較高水平的母源抗體及輔以雞場(chǎng)良好的生物安全措施，這樣可以取得比較理想的效果。

參考文獻(xiàn)：

[1]孫德君，丁國(guó)杰，藏玉婷，等.傳染性法氏囊病毒感染雞脾臟病理變化的研究[J].中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2016，38（4）：279-283.

[2]Lucio B， Hitchner S B. Response of susceptible versus immune chicks to killed， live-modified， and wild infectious bursal disease virus vaccines[J]. Avian diseases， 1979： 1037-1050.

[3]孫建和，陳蘋(píng)，趙渝，等. 雞傳染性法氏囊病新型疫苗的研制策略[J]. 中國(guó)家禽，2002，24（1）：5-6.

[4]吳旭錦， 朱小甫， 尤永君. 不同法氏囊病活疫苗對(duì)雞法氏囊發(fā)育的影響和對(duì)新城疫免疫效果影響的評(píng)價(jià)[J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2009，18（6）：43-46.

[5]崔平，牛曉賽，董新榮，等. 蛋雞源傳染性法氏囊病病毒變異株的分離、鑒定及攻毒保護(hù)試驗(yàn)[J].中國(guó)家禽，2020，42（09）：35-39.

[6]程小果， 程寧，王慧. 雞傳染性法氏囊病毒新型變異株的流行現(xiàn)狀及綜合防控[J].上海畜牧獸醫(yī)通訊，2022（03）：56-58.