王欽，易建華，王輝，宋慶洋，敖慧玲，曹詩(shī)宜，別漢晴，張彥，覃先武，戴晉軍

（1.農(nóng)業(yè)微生物資源發(fā)掘與利用全國(guó)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北宜昌 443003；2.湖北省酵母功能湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北宜昌 443003）

魚(yú)粉是水產(chǎn)養(yǎng)殖中最重要的飼料蛋白質(zhì)來(lái)源。然而，由于水產(chǎn)養(yǎng)殖的快速發(fā)展，魚(yú)粉的生產(chǎn)不能滿足對(duì)水產(chǎn)飼料的需求，導(dǎo)致飼料成本高，給水產(chǎn)養(yǎng)殖帶來(lái)了巨大挑戰(zhàn)。因此，尋找合適的新型替代物成為飼料工業(yè)當(dāng)務(wù)之急。

酵母培養(yǎng)物是一種在特定工藝條件下，由酵母細(xì)胞、代謝產(chǎn)物和酵母經(jīng)多級(jí)發(fā)酵形成的發(fā)酵培養(yǎng)基，其富含的有機(jī)酸、β- 葡聚糖和甘露聚糖，可提高水生動(dòng)物的腸道消化酶活性及免疫力，進(jìn)而促進(jìn)機(jī)體生長(zhǎng)（易建華等，2024）。目前，有關(guān)酵母培養(yǎng)物替代魚(yú)粉在水產(chǎn)飼料的應(yīng)用研究，在凡納濱對(duì)蝦（Litopenaeus vannamei）、大口黑鱸（Micropterus salmoides）、鯉魚(yú)（Carassius auratus gibelio）、鯽魚(yú)（Carassius auratus）、黃顙魚(yú)（Pelteobagrus fulvidraco）和淡水蝦（Macrobrachium rosenbergii）均有報(bào)道（Zhang 等，2022；Xv 等，2021；Nguyen 等，2019；程鑫等，2019）。

黃顙魚(yú)（Pelteobagrus fulvidraco）在我國(guó)被廣泛養(yǎng)殖，具有巨大的經(jīng)濟(jì)和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。黃顙魚(yú)是一種肉食性魚(yú)類(lèi)，因此商業(yè)飼料中魚(yú)粉和動(dòng)物蛋白的消費(fèi)量相對(duì)較高。本文以酵母培養(yǎng)物為替代蛋白源1 ∶1 替代魚(yú)粉，評(píng)價(jià)其對(duì)黃顙魚(yú)生長(zhǎng)性能、血清生化、體成分、抗氧化及免疫力的影響，為酵母培養(yǎng)物作為水產(chǎn)飼料替代蛋白質(zhì)來(lái)源提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)飼料 按照配方設(shè)計(jì)將飼料分為2 個(gè)組，以基礎(chǔ)飼料為對(duì)照組（CK），功能蛋白原料酵母培養(yǎng)物1 ∶1 替代基礎(chǔ)飼料中進(jìn)口蒸汽魚(yú)粉為試驗(yàn)組（LYF），飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。其中，酵母培養(yǎng)物（CP 57%）由安琪酵母股份有限公司提供，經(jīng)酵母蛋白等發(fā)酵酶解、調(diào)味工藝制得。將原料粉碎過(guò)80 目篩，經(jīng)逐級(jí)混合制粒膨化成3.0 mm 粒徑的顆粒飼料，冷藏儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

表1 試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)） %

1.2 飼養(yǎng)管理 黃顙魚(yú)購(gòu)自湖北省當(dāng)陽(yáng)市某養(yǎng)殖場(chǎng)，投喂對(duì)照組飼料暫養(yǎng)7 d 后，挑選大小均勻[（25.00±0.15）g]、健康活潑的試驗(yàn)魚(yú)隨機(jī)分配到 6 個(gè) 2400 L 塑料養(yǎng)殖桶中，每桶100 尾。每種試驗(yàn)飼料投喂3 桶試驗(yàn)魚(yú)，禁食24 h 后采用人工飽食投喂上述CK 組、LYF 組飼料，每天2 次（08 ：00 ～09 ：00 和 17 ：00 ～18 ：00），養(yǎng)殖試驗(yàn)持續(xù)42 d，每天記錄投喂量。整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中，水溫（26.00±2.00）℃，溶解氧濃度（7.00±0.35）g/L，pH 6.50 ～6.70，氨氮＜0.01 mg/L，亞硝酸鹽＜0.50 mg/L，保持自然光照。試驗(yàn)期間的日常管理及水質(zhì)條件同暫養(yǎng)期間保持一致。

1.3 誘食試驗(yàn) 投喂對(duì)照組飼料暫養(yǎng)7 d 后，挑選大小均勻[（9.00±0.05）g]、無(wú)病、體表無(wú)傷的黃顙魚(yú)66 尾，隨機(jī)放入6 個(gè)玻璃缸（0.8 m×0.6 m×0.3 m）中，每缸黃顙魚(yú)11 尾。在玻璃缸上方用細(xì)鐵絲懸掛2 個(gè)餌料球（質(zhì)量為5.00 g，雙球間距20.00 cm，離桶底高度5.00 cm）用于黃顙魚(yú)對(duì)餌料球的啄咬，馴化期約為3 d（馴化至餌料球放入，黃顙魚(yú)馬上開(kāi)始咬食為止）。

誘食試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)，每個(gè)玻璃缸同時(shí)放入2 個(gè)餌料球（魚(yú)粉球/LYF 球，餌料球：魚(yú)粉/LYF、小麥面粉和水=27.0 g：73.0 g：54.0 g 混合而成），記錄放入時(shí)間，20 min 后取出，每次設(shè)3 個(gè)處理，記錄餌料球重量。每2 d 為1 個(gè)試驗(yàn)周期，每天上午1 次，下午1 次，兩次試驗(yàn)需要交換LYF 球和魚(yú)粉球的懸掛位置（避免餌料球位置干擾）。兩次試驗(yàn)結(jié)束后，給試驗(yàn)魚(yú)投喂商品顆粒飼料至飽食。試驗(yàn)期間，保持對(duì)照組和試驗(yàn)組每次試驗(yàn)條件都一致。

1.4 樣品采集 攝食生長(zhǎng)試驗(yàn)結(jié)束后，所有試驗(yàn)魚(yú)饑餓 24 h，經(jīng) 120 mg/L MS-222 麻醉后進(jìn)行稱重及計(jì)數(shù)。每桶隨機(jī)挑選 6 尾魚(yú)，用一次性注射器從尾靜脈中抽血，離心（5000 r/min，10 min，4℃）獲得血清，-80℃保存，用于血清生化指標(biāo)、抗氧化酶活性及免疫指標(biāo)檢測(cè)。取血后的 6 尾魚(yú)被解剖獲取肝臟和內(nèi)臟，稱重并計(jì)算肝體比和內(nèi)臟比。每組取6 條，用于全魚(yú)體成分分析。

1.5 生化分析 血清谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、尿素（UREA）、葡萄糖（GLU）、總膽固醇（CHOL）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、堿性磷酸酶（ALP）、總超氧化物歧化酶（T-SOD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）、丙二醛（MDA）及溶菌酶（LZM）等生化指標(biāo)均由宜昌市第一人民醫(yī)院測(cè)定，相關(guān)試劑盒均來(lái)源于南京建成生物工程研究所。

1.6 全魚(yú)體成分分析 參考 AOAC 標(biāo)準(zhǔn)方法，測(cè)定全魚(yú)樣品中粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、水分及灰分的含量。樣品于烘箱中 105℃至恒重，測(cè)定水分含量；碳化后的樣品置于馬弗爐中 600℃至恒重，測(cè)定灰分含量；蛋白質(zhì)含量測(cè)定采用 FP-528 全自動(dòng)蛋白質(zhì)分析儀（Leco 公司，美國(guó)密歇根）；脂肪含量測(cè)定采用2055 全自動(dòng)索氏抽提儀（Foss 公司，瑞典赫加奈斯）。

1.7 計(jì)算公式

1.7.1 相對(duì)誘食率 相對(duì)誘食率計(jì)算公式如下：

相對(duì)誘食率（RAR）/%=[W1-W2]/[W3-W4] ×100；

式中：W1為L(zhǎng)YF 餌料球的初重；W2為L(zhǎng)YF餌料球的末重；W3為魚(yú)粉餌料球的初重；W4為魚(yú)粉餌料球的末重。

1.7.2 生長(zhǎng)性能 生長(zhǎng)性能相關(guān)計(jì)算公式如下：

存活率（SR）/%=（Nt/ N0）×100 ；

增重率（WGR）/%=（Wt-W0）/W0×100 ；

特定生長(zhǎng)率（SGR）/%=[（ln Wt-ln W0）/ t]×100；

飼料系數(shù)（FCR）=F /（Wt+ Wd-W0）；

肝體比（HSI）/%=（Wz/Wt）×100 ；

臟體比（VSI）/%=（Wv/Wt）×100 ；

肥滿度（CF）/%=（Wt/L3）×100。

式中：Nt為試驗(yàn)?zāi)~(yú)數(shù)量，尾；N0為魚(yú)初始數(shù)量，尾；Wt為試驗(yàn)終末均體質(zhì)量，g ；Wd為試驗(yàn)期間死亡魚(yú)均體質(zhì)量，g ；W0為試驗(yàn)初始均體質(zhì)量，g ；t 為試驗(yàn)天數(shù)，d ；F 為總攝食量，g ；L為終末平均體長(zhǎng)，cm ；Wz為試驗(yàn)終末平均肝胰臟質(zhì)量，g ；Wv為試驗(yàn)終末平均內(nèi)臟團(tuán)質(zhì)量，g。

1.8 統(tǒng)計(jì)分析 采用 Minitab 21.3.1.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行Tukey 檢驗(yàn)，結(jié)果以“平均值± 標(biāo)準(zhǔn)誤”表示，P＜0.05 代表差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 酵母培養(yǎng)物對(duì)黃顙魚(yú)的誘食效果 由表2可知，與CK 組（100%）相比，酵母培養(yǎng)物（LYF 110.43%）對(duì)黃顙魚(yú)的相對(duì)誘食率要明顯高于魚(yú)粉，提高了10.43%。

表2 酵母培養(yǎng)物對(duì)黃顙魚(yú)相對(duì)誘食率的影響

2.2 酵母培養(yǎng)物替代魚(yú)粉對(duì)黃顙魚(yú)生長(zhǎng)性能的影響 由表3 可知，酵母培養(yǎng)物替代魚(yú)粉能提高黃顙魚(yú)的增重率和特定生長(zhǎng)率、降低飼料系數(shù)，對(duì)黃顙魚(yú)生長(zhǎng)有一定的促進(jìn)作用，但與CK 組相比，LYF 替代魚(yú)粉對(duì)黃顙魚(yú)生長(zhǎng)沒(méi)有顯著影響（P＞0.05）

表3 酵母培養(yǎng)物替代魚(yú)粉對(duì)黃顙魚(yú)生長(zhǎng)性能的影響

2.3 酵母培養(yǎng)物替代魚(yú)粉對(duì)黃顙魚(yú)全魚(yú)體成分的影響 由表4 可知，與CK 組相比，LYF 替代魚(yú)粉對(duì)黃顙魚(yú)全魚(yú)體成分無(wú)顯著影響（P＞0.05）。

表4 酵母培養(yǎng)物替代魚(yú)粉對(duì)黃顙魚(yú)全魚(yú)體成分的影響 %

2.4 酵母培養(yǎng)物替代魚(yú)粉對(duì)黃顙魚(yú)血清生化指標(biāo)的影響 由表5 可知，與CK 組相比，LYF 組黃顙魚(yú)血清谷草轉(zhuǎn)氨酶顯著降低（P＜0.05），降低25.73%。其余各項(xiàng)指標(biāo)兩組間均無(wú)顯著差異。

表5 酵母培養(yǎng)物替代魚(yú)粉對(duì)黃顙魚(yú)血清生化的影響

2.5 酵母培養(yǎng)物替代魚(yú)粉對(duì)黃顙魚(yú)血清抗氧化和免疫力的影響 由表6 可知，與CK 組相比，LYF 組黃顙魚(yú)丙二醛含量顯著降低（P＜0.05），降低71.80% ；LYF 組黃顙魚(yú)溶菌酶和堿性磷酸酶活性顯著提高（P＜0.05），分別提高61.22%和65.63% ；其余各項(xiàng)指標(biāo)均兩組間無(wú)顯著差異。

表6 酵母培養(yǎng)物替代魚(yú)粉對(duì)黃顙魚(yú)血清抗氧化及免疫指標(biāo)的影響

3 討論

3.1 酵母培養(yǎng)物對(duì)黃顙魚(yú)的誘食效果 酵母培養(yǎng)物含有的呈味核苷酸（鳥(niǎo)苷酸和肌苷酸）具有誘食劑的功能，可以作為良好的酵母類(lèi)誘食劑（孫雪梅等，2017）。在本試驗(yàn)條件下，酵母培養(yǎng)物顯著提高了黃顙魚(yú)的相對(duì)誘食（P＜0.05）。目前關(guān)于酵母培養(yǎng)物的誘食機(jī)理報(bào)道較少，其誘食作用可能是酵母培養(yǎng)物具有特有的味道和口感，如鳥(niǎo)苷酸和肌苷酸等呈味核苷酸，酵母培養(yǎng)物中的氨基酸、小肽和免疫多糖等成分也可刺激味覺(jué)和嗅覺(jué)感受系統(tǒng)而促進(jìn)水產(chǎn)動(dòng)物采食。

3.2 酵母培養(yǎng)物替代魚(yú)粉對(duì)黃顙魚(yú)生長(zhǎng)性能的影響 本研究中，酵母培養(yǎng)物1 ∶1 替代魚(yú)粉能提高黃顙魚(yú)的增重率和特定生長(zhǎng)率，降低飼料系數(shù)，對(duì)黃顙魚(yú)生長(zhǎng)有一定的促進(jìn)作用，但作用效果不顯著。Zhang 等（2018）在魚(yú)粉含量為100 g/kg 飼料中，以60 g/kg 酵母培養(yǎng)物（粗蛋白質(zhì)含量67.7 %）替代60% 魚(yú)粉，對(duì)異育銀鯽生長(zhǎng)性能沒(méi)有產(chǎn)生不利影響。Wang 等（2022）在魚(yú)粉含量為340 g/kg 的石斑魚(yú)飼料中，以40 g/kg 酵母培養(yǎng)物（粗蛋白質(zhì)含量50.0 %）替代30 g/kg 魚(yú)粉，顯著提高了魚(yú)體增重率，降低了飼料系數(shù)。程鑫等（2019）研究表明，在飼料中添加酵母培養(yǎng)物（粗蛋白質(zhì)含量55.0%）能有效提高黃顙魚(yú)增重率、蛋白沉積率，降低飼料系數(shù)。酵母培養(yǎng)物能改善水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng)性能和飼料利用率，可能與其含有豐富的有機(jī)酸、γ- 氨基丁酸、呈味核苷酸等物質(zhì)，能促進(jìn)水產(chǎn)動(dòng)物攝食（黃維，2024 ；侯冬強(qiáng)等，2023）有關(guān)。

3.3 酵母培養(yǎng)物替代魚(yú)粉對(duì)黃顙魚(yú)血清生化的影響 谷丙轉(zhuǎn)氨酶可以反映水產(chǎn)動(dòng)物肝功能的健康狀態(tài)。本試驗(yàn)中，在黃顙魚(yú)飼料中添加酵母培養(yǎng)物1 ∶1 替代魚(yú)粉可以顯著降低血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性，表明酵母培養(yǎng)物在一定程度上有利于減緩對(duì)肝臟的損傷，促進(jìn)脂肪代謝，與王成強(qiáng)等（2022）在珍珠龍膽石斑魚(yú)的結(jié)果類(lèi)似。

3.4 酵母培養(yǎng)物替代魚(yú)粉對(duì)黃顙魚(yú)血清抗氧化和免疫力的影響 丙二醛水平通常用于評(píng)估體內(nèi)的過(guò)氧化程度，丙二醛具有強(qiáng)大的毒性，可損害細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能（Parvez 等，2005）。在本研究中，酵母培養(yǎng)物組黃顙魚(yú)丙二醛含量顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），表明酵母培養(yǎng)物替代魚(yú)粉提高了黃顙魚(yú)的抗氧化水平。溶菌酶、堿性磷酸酶等指標(biāo)常用來(lái)表征水產(chǎn)動(dòng)物的免疫力，在機(jī)體抵御外來(lái)病原的免疫反應(yīng)中起重要作用（朱春華等，2012）。在本研究中，酵母培養(yǎng)物組黃顙魚(yú)溶菌酶和堿性磷酸酶活性顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），表明酵母培養(yǎng)物替代魚(yú)粉提高了黃顙魚(yú)的免疫力。原因可能是酵母培養(yǎng)物含有大量源自酵母細(xì)胞壁的β- 葡聚糖和甘露寡糖，在許多研究中已在免疫促進(jìn)作用方面得到驗(yàn)證。Dou 等（2023）在飼料中補(bǔ)充β- 葡聚糖（4 ～8 g/kg）可提高羅非魚(yú)（Oreochromis niloticus）的抗氧化酶活性，并降低腸道和肝臟中丙二醛的含量。β- 葡聚糖可提高多數(shù)魚(yú)類(lèi)的溶菌酶活性，如南亞野鯪（Misra 等，2006）、大黃魚(yú)（Ai 等，2007）、石斑魚(yú)（Bagni 等，2005）等。此外，Gu 等（2011）證實(shí)，β- 葡聚糖和甘露聚糖具有協(xié)同作用，能共同提高機(jī)體抗氧化能力及免疫力。

4 小結(jié)

綜上所述，酵母培養(yǎng)物1 ∶1 替代魚(yú)粉，不會(huì)影響黃顙魚(yú)的生長(zhǎng)性能、肝臟健康、體成分，還能提高黃顙魚(yú)的抗氧化能力和免疫力。