吳宏舒

（廣西梧州制藥（集團）股份有限公司，廣西 梧州 530011）

新版GMP 也叫藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范，這份文件是2011 年3 月1 日修訂的，相較于傳統(tǒng)的GMP，新版GMP 的調(diào)整幅度較大，它關(guān)系到無菌制劑生產(chǎn)環(huán)境的相關(guān)要求，清潔度劃分等級也變成了四個層次。在環(huán)境監(jiān)測方面，我國無菌藥品的生產(chǎn)大環(huán)境需要和國際接軌，其側(cè)重點上更加注重動態(tài)監(jiān)測和在線管控，無菌藥品生產(chǎn)環(huán)境是保證藥品生產(chǎn)質(zhì)量的前提和基礎(chǔ)，如果藥品生產(chǎn)車間或廠房存在大量致病菌將會導(dǎo)致質(zhì)量受損，影響人民群眾的用藥健康。環(huán)境監(jiān)測工作至關(guān)重要，它的主要目的是評估生產(chǎn)環(huán)境的控制效果。環(huán)境監(jiān)測標準是有效的控制工具，對無菌藥品生產(chǎn)環(huán)境的監(jiān)測應(yīng)該做好全面監(jiān)督，監(jiān)督的項目和具體事項要包括空氣浮游菌、懸浮粒子、沉降菌以及表面微生物等諸多情況。

1 新版GMP 無菌藥品生產(chǎn)環(huán)境的相關(guān)要求

通過環(huán)境監(jiān)測可以達到對藥品生產(chǎn)加工環(huán)境進行控制的效果，因此環(huán)境監(jiān)測既是手段，也是目的，更是進行評價的重要工具。

在現(xiàn)代醫(yī)療行業(yè)不斷發(fā)展的過程中，無菌生產(chǎn)的環(huán)境幾乎是必要的門檻，生產(chǎn)無菌藥品需要保持廠房出入?yún)^(qū)域的清潔，不受其他外界因素的干擾和影響，每一個環(huán)節(jié)都應(yīng)當接受檢測和管理，使環(huán)境達標，防止出現(xiàn)外界微生物超標或其他因素的影響，導(dǎo)致藥品質(zhì)量下降。在醫(yī)藥行業(yè)中進行無菌藥品的環(huán)境監(jiān)測要注意警戒限度和糾偏限度兩個概念，其中警戒限度指的是如果在環(huán)境監(jiān)測時，有關(guān)工作人員發(fā)現(xiàn)環(huán)境質(zhì)量的相關(guān)參數(shù)已經(jīng)超過了臨界點和正常范圍，但是又沒有達到糾偏的臨界線，那么在警戒限度中的環(huán)境也需要加強整改，至少要引起生產(chǎn)管理者在思想上的重視，著重解決環(huán)境問題；而糾偏限度指的是環(huán)境監(jiān)測之后發(fā)現(xiàn)相關(guān)參數(shù)直接超過了可允許的范圍，需要立刻整改并調(diào)查污染源頭，只有確保環(huán)境質(zhì)量達標才可以繼續(xù)開展生產(chǎn)，滿足生產(chǎn)要求[1]。無菌藥品的生產(chǎn)監(jiān)測環(huán)境內(nèi)容是多方面的，例如設(shè)備表面是否存在微生物操作人員、個人的衛(wèi)生狀況如何、在操作過程中是否存在不衛(wèi)生表現(xiàn)，還要檢查空氣懸浮粒子含量是否超標、沉降菌數(shù)量如何，以上這些數(shù)據(jù)都需要經(jīng)過測量后記錄在表格中加以分析和評估。有關(guān)工作者需要建設(shè)有效的評價機制，并依托評價機制對生產(chǎn)環(huán)境的各方面要素展開有效規(guī)范與全面監(jiān)督。GMP 無菌藥品生產(chǎn)標準更新之后，新版的GMP 則要求無菌藥品生產(chǎn)廠房必須要達到更高的標準，生產(chǎn)無菌藥品意味著生產(chǎn)環(huán)境一定要高度無菌才能保障質(zhì)量的安全，因此對生產(chǎn)環(huán)境的檢測情況也成為藥品質(zhì)量檢測的一部分，無菌藥品的參數(shù)要求已經(jīng)和國際要求相互接軌，也就意味著無菌環(huán)境的打造也要跟上時代發(fā)展的步伐，做出全面調(diào)整。

2 新版GMP 無菌藥品生產(chǎn)環(huán)境監(jiān)測

2.1 監(jiān)測懸浮粒子

懸浮粒子指的是可以懸浮在空氣中存在的介于固體、液體之間的物質(zhì)，當然有些懸浮粒子也以固體或液體的形式存在，比如微生物粒子或者非微生物性粒子，空氣懸浮粒子的尺寸范圍差不多在0.1um～1000um左右，這是液體懸浮粒子和固體懸浮粒子的劃分范圍。測定懸浮粒子的時候經(jīng)常采用濃度計數(shù)法，檢測干凈環(huán)境之內(nèi)單位體積空氣中大于某一標準的懸浮粒子數(shù)，以此方式來界定該空氣是否清潔，根據(jù)潔凈度的不同級別做好空氣凈化的風(fēng)險評估，要考慮到藥品生產(chǎn)車間或?qū)嶋H生產(chǎn)區(qū)域的大小和環(huán)境布局，還要考慮到生產(chǎn)車間的使用用途，在實際的加工與生產(chǎn)過程中也要考慮到其他的因素，例如車間加工的工人活動頻繁的位置點需要展開重點監(jiān)測，堆放物品的通道也需要重點考量，要根據(jù)距離等要素做好位置取樣并展開日常監(jiān)督[2]。A 級潔凈區(qū)由于其要求較高，對懸浮粒子的檢測需要采用在線連續(xù)系統(tǒng)，在線連續(xù)系統(tǒng)可以對生產(chǎn)全過程展開全程監(jiān)督，防止離線監(jiān)測或者監(jiān)測中斷可能會對環(huán)境清潔造成的忽視或影響。監(jiān)測的時間、空間在選擇過程中應(yīng)當相對固定，不要調(diào)換得過于頻繁，在監(jiān)測空氣懸浮粒子時有一些事項需要注意，例如，在單向流系統(tǒng)中可以采用等動力學(xué)取樣頭，保持采樣管干凈整潔，防止出現(xiàn)滲漏現(xiàn)象，選擇合適長度的采樣管，長度數(shù)據(jù)應(yīng)當根據(jù)儀器的允許范圍來確定，一般情況下長度需要小于1.5m。粒子計數(shù)器需要和其他儀器保持同一氣壓和工作溫度，防止出現(xiàn)測量過程中的數(shù)值偏差，如果測量的對象是單向流潔凈式采樣口，和氣流方向要保持同頻，如果不是單向流潔凈式采樣口，需要對上而不能對下。在采樣點的布置過程中應(yīng)當盡可能避開回風(fēng)口，具體采樣時，測試人員要減少人為因素的活動影響，采樣結(jié)束后粒子計數(shù)器需要展開全面清潔。樣本的選取非常關(guān)鍵，樣本的保存也需要防止其他污染物對其造成不良影響，在檢測懸浮粒子時所選擇的儀器應(yīng)當穩(wěn)穩(wěn)地放在水平的臺面上，接下來再開始采樣不同級別的潔凈區(qū)，在日常監(jiān)測過程中要保持動態(tài)化。在選取樣本時，采樣點的數(shù)量要大于兩個，采樣次數(shù)要大于五次，當然根據(jù)不同級別的要求也可以稍有調(diào)整。

2.2 對浮游菌展開監(jiān)測

對浮游菌的監(jiān)測可以按照GB 相關(guān)標準來收集懸浮空氣的活性微生物分子，利用培養(yǎng)基檢測在適宜的環(huán)境條件下浮游菌的生長和繁殖速度如何，以此來確定菌落群的數(shù)量。浮游菌測定可以利用技術(shù)濃度方法，也就是收集懸浮空氣的生物粒子放置在專門的培養(yǎng)基之中，等待一段時間，讓其生長在合適的環(huán)境條件下，計算繁殖的菌落總數(shù)，以此種方法來判定生產(chǎn)環(huán)境是否清潔，微生物濃度如何。要根據(jù)潔凈程度和空氣凈化程度來判定無菌藥品生產(chǎn)環(huán)境是否存在風(fēng)險，并對風(fēng)險展開評估，還要考慮到懸浮粒子之外的影響因素，在實際藥品生產(chǎn)與加工過程中是否有其他因素同樣可以引起污染，做好變量的控制。微生物容易滋生的位置需要做好定期的殺菌消毒，在定期清潔過程中進行樣本的取樣并展開日常監(jiān)測。尤其是對于A 級潔凈區(qū)來說，一定要通過動態(tài)在線的方式展開浮游菌檢測，防止浮游菌過于繁殖造成微生物大量污染[3]。但是浮游菌在采集樣本的過程中會受到氣流的影響，可以在生產(chǎn)快要結(jié)束的時候采集樣本。浮游菌檢測和采集也有一些事項需要注意：

第一個方面，有關(guān)工作者在具體采集樣本之前需要檢測培養(yǎng)皿的質(zhì)量是否達標，如果發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)皿本身具有破損變質(zhì)的情況，則確定該培養(yǎng)皿有污染物，應(yīng)當做好變量控制與排除。不同批次的培養(yǎng)皿需要做好對照實驗，來檢測其是否存在污染情況。一般來說，每一組要設(shè)置對照組和實驗組，在配置培養(yǎng)皿的時候做好分次取樣，采樣之后的樣本要和培養(yǎng)皿一起放在培養(yǎng)箱中觀察微生物的繁殖情況。

第二個方面，需要做好記錄，記錄的內(nèi)容包括培養(yǎng)基、實驗條件以及其他類型的不同參數(shù)。在具體數(shù)據(jù)計算時，需要觀察培養(yǎng)皿的正面和背面的微生物菌落生長情況，要分別微生物菌落和培養(yǎng)基沉淀物，防止造成混淆。如果肉眼觀察存在困難，可以采用顯微鏡輔助。

第三個方面，工作人員在檢測浮游菌時需要做好自身的消毒和使用工具的消毒，進入待測房間之前需要消毒采樣器的轉(zhuǎn)盤頂蓋，還要清潔消毒罩的內(nèi)外正反面，等待消毒劑中的酒精含量揮發(fā)之后再進行樣本的采集，防止監(jiān)測效果受到其他因素的干擾和影響，采樣結(jié)束之后要再次消毒以上設(shè)備。

2.3 檢測沉降菌

沉降菌的檢測可以用GBT-16294-2010 標準，收集空氣中存在的活性微生物顆粒，再將其放置在專門的培養(yǎng)菌之中，檢測繁殖的速度及數(shù)量。從某種意義上來說，沉降菌的檢測和浮游菌的檢測原理相通，測定沉降菌的時候可以采用沉降法，利用自然沉降的物理原理在空氣中將生物粒子收集在一起，放置在基底培養(yǎng)皿之中，在適當?shù)臈l件和適當?shù)臅r間之后觀察沉降菌的繁殖數(shù)量，判定在清潔環(huán)境之內(nèi)沉降菌的菌落數(shù)是多少，以此來測試該區(qū)域的潔凈程度是否達標。工作人員依然要采用動態(tài)方式做好沉降菌的監(jiān)測，常用的培養(yǎng)器皿是沉降碟，但是沉降碟監(jiān)測只能用作定性實驗的步驟，所獲數(shù)據(jù)的準確性也不高，但是沉降碟的優(yōu)勢也是顯著的，尤其是在層流區(qū)域，它不會污染空氣環(huán)境，使用較為輕便，價值較低，經(jīng)濟性價比較好，也不會干擾氣流的流向，不會產(chǎn)生過多的不可控變量，因此沉降碟監(jiān)測的方法能夠被廣泛地推廣[4]。具體使用時，沉降碟的放置時間至少要大于半個小時，小于四個小時，工作人員要確定沉降碟的暴露時間，暴露之后的培養(yǎng)基不能由于失水或其他因素影響到微生物的正常成長。在實驗檢測步驟中，要做好空氣凈化數(shù)值的風(fēng)險評估，可以將浮游菌作為對照組，沉降菌作為取樣實驗組，放置在合適的位置，做好日常監(jiān)測。沉降菌的數(shù)量需要大于最少采樣點數(shù)，還應(yīng)當大于最小培養(yǎng)器皿數(shù)，A 級清潔點采樣點數(shù)要大于14 個。在檢測方法上，對于A 級潔凈區(qū)，沉降菌的監(jiān)測需要展開連續(xù)不間斷的實時監(jiān)控，對無菌生產(chǎn)空間微生物的整體狀況進行評估，在注意事項方面，沉降菌的監(jiān)測和浮游菌的監(jiān)測大體相同，不再贅述。

2.4 檢測表面微生物

空氣微生物取樣的方式可以檢測無菌藥品生產(chǎn)環(huán)境中微生物的總數(shù)以及繁殖情況，從而判定污染水平。除此之外，還要做好表面監(jiān)測和人員微生物的監(jiān)測，這主要指的是接觸到藥品生產(chǎn)流程的相關(guān)器皿，還包括工作人員。監(jiān)測方法的選擇需要具有典型代表性，所獲取的數(shù)據(jù)也要盡可能精準，基本的檢測方式包括擦拭法、沖洗法和接觸碟法，以上這幾種方式適合檢測操作者的衣服、手套、生產(chǎn)車間的工具設(shè)備、地面、墻等表面[5]。對微生物的檢測依然要全過程不間斷地進行，為了減少人為操作造成的負面影響，表面微生物和人員微生物的采樣需要等到生產(chǎn)工作結(jié)束時、人員離場后再進行取樣。

具體而言，接觸碟法的采樣操作起來相對較為容易，并且可以進行定量控制，因此被廣泛推薦和采納。接觸碟法可以檢測趨向于光滑的表面，例如地面瓷磚、設(shè)備表面以及工作人員的衣服、手套，棉簽擦拭的方法可以檢測表面不太整齊的管道和衛(wèi)生死角，表面沖洗的方式比較適合大面積的檢測區(qū)域，比如蓄水罐和清潔池。

3 可選擇的糾偏措施

對無菌藥品生產(chǎn)環(huán)境展開質(zhì)量監(jiān)測時，有關(guān)工作者需要設(shè)定環(huán)境的警戒線，同時設(shè)置好糾偏限度。在這一過程中常用的數(shù)學(xué)工具是正態(tài)分布，正態(tài)分布的方式可以科學(xué)地劃分警戒限度和糾偏限度的范圍，統(tǒng)計歷史數(shù)據(jù)并展開新的平均數(shù)計算，以平均數(shù)為基礎(chǔ)，加上2 倍的標準差，這是警戒限度數(shù)值的計算方式。同樣，對于統(tǒng)計的歷史數(shù)據(jù)要做好平均分析，用平均數(shù)加上3 倍標準差便得到了糾偏限度，在監(jiān)測無菌藥品生產(chǎn)環(huán)境的時候，如果監(jiān)測結(jié)果多次超過警戒范圍之外需要展開糾偏，常見的糾偏方法如下：

第一，需要檢測操作人員的技術(shù)是否合格，是否能夠符合新版GMP 的要求，同時還要查看監(jiān)控錄像，了解工作人員更衣、洗手等相關(guān)操作是否符合殺菌消毒的要求，還要查看殺菌消毒的方式并做好檢查記錄。

第二，需要對設(shè)備表面的微生物進行監(jiān)測和擦拭，這一過程需要多次連續(xù)進行。

第三，監(jiān)測過程中如果多次超過警戒限度范圍外，需要考慮監(jiān)測的樣本是否具有代表性，樣本檢測準確性如何，監(jiān)測結(jié)果超出可接受的范疇需要加強對環(huán)境問題的重視和檢測，發(fā)現(xiàn)問題需要及時整改，并找到長期存在的環(huán)境原因。

4 結(jié)語

按照新版GMP 的要求，對無菌藥品生產(chǎn)環(huán)境展開監(jiān)測需要選擇合適的方式和手段，常見的監(jiān)測對象包括懸浮粒子、浮游菌、沉降菌，還包括表面微生物的檢測，要選擇合適的糾偏措施，保持環(huán)境的清潔衛(wèi)生，只有在監(jiān)測過程中確保環(huán)境的整潔并達到相關(guān)衛(wèi)生標準，才能防止污染物的污染和威脅，提高無菌藥品的生產(chǎn)質(zhì)量。