房玉良 霍雨佳 劉 博 許彥來

(1 青島大學(xué)研究生院,青島,266003; 2 海軍青島特勤療養(yǎng)中心中醫(yī)科,青島,266000; 3 青島市中心醫(yī)院藥劑科,青島,266000)

在過去幾十年中,中醫(yī)藥作為一種傳統(tǒng)的治療方法,已經(jīng)受到了廣泛的關(guān)注和認(rèn)可[1]。中藥制劑熱毒寧吸入粉霧劑作為一種重要的中藥,被用于治療呼吸系統(tǒng)感染和炎癥等疾病。通過吸入給藥途徑,熱毒寧吸入粉霧劑可以直接作用于呼吸道,提高藥物的局部療效,并減少全身藥物暴露的不良反應(yīng)[2-3]。然而,目前熱毒寧吸入粉霧劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)尚未完善,這給其在臨床應(yīng)用中帶來了一定的不確定性。與其他藥物相比,熱毒寧吸入粉霧劑作為中藥制劑具有復(fù)雜的成分和特殊的制備工藝,因此其質(zhì)量的評估和控制存在一些難題。此外,吸入給藥途徑的特殊性也給藥物評價和監(jiān)管帶來了新的挑戰(zhàn)。為了確保熱毒寧吸入粉霧劑的質(zhì)量和安全性,有必要進(jìn)行相關(guān)研究。這些研究可以包括對熱毒寧吸入粉霧劑的物理性質(zhì)、化學(xué)成分、藥效學(xué)等方面進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)和分析。同時,還需要建立一套完善的質(zhì)量控制方法和標(biāo)準(zhǔn),以指導(dǎo)熱毒寧吸入粉霧劑的生產(chǎn)和質(zhì)量管理。

本文旨在通過系統(tǒng)的研究和分析,確定熱毒寧吸入粉霧劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),并探討其制備工藝及相關(guān)性,確保熱毒寧吸入粉霧劑質(zhì)量和安全性,以促進(jìn)該制劑在呼吸系統(tǒng)感染和炎癥等疾病治療中的應(yīng)用。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 精密天平(賽多利斯公司,德國,型號：METTLER TOLEDO);紫外可見分光光度計(賽默飛有限公司,美國,型號：Multiskan SkyHigh);分析型液相色譜純化系統(tǒng)(安捷倫科技有限公司,美國,型號：1220 Infinity II);中試型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海尚普儀器設(shè)備有限公司,型號：SN-RE-201D)。

1.2 試劑 藥用乳糖(西安晉湘藥用輔料有限公司,批號：5989-81-1);純凈水[華潤怡寶飲料(控股)有限公司,批號：60220010200];無水乙醇(Sigma,德國,批號：64-17-5)。

1.3 分析樣品 研究選擇優(yōu)質(zhì)的中藥材作為原料,包括金銀花、青蒿及梔子,藥材均購自亳州仁益中藥材銷售有限公司,根據(jù)中藥理論和臨床經(jīng)驗(yàn)設(shè)計藥物配方。所有采購藥材均經(jīng)房玉良和同課題組中藥專業(yè)人員鑒定,一直認(rèn)定中藥材基源鑒定與性狀鑒定均符合藥用要求。

2 方法

2.1 藥物制備方法

2.1.1 藥物制備工藝考察 采用傳統(tǒng)的水提醇沉法提取有效成分。按比例將15 g金銀花和12 g青蒿藥材粉碎成粗粉狀,加水浸潤30 min,提取并收集揮發(fā)油,過濾藥液和藥渣。將藥液進(jìn)行合并濃縮,根據(jù)溶液總體積加入適量乙醇,調(diào)整乙醇含量為75%,靜置12 h,取上清液,減壓濃縮,調(diào)節(jié)pH值,加入適量的乙酸乙酯萃取,之后合并萃取液,回收乙酸乙酯,干燥獲得提取物。取20 g的梔子藥材,粉碎成粗粉,加入適量的乙醇溶液,提取2次后,將提取液進(jìn)行合并,回收乙醇,加熱濃縮,分次加入適量正丁醇(水飽和)溶液進(jìn)行萃取,合并萃取液,并回收正丁醇,干燥獲得提取物。將獲得的2種提取物混勻,加入乙醇溶液制成待噴霧溶液,并通過制粒、干燥等工藝制備成粉霧劑。

2.1.2 揮發(fā)油提取條件的優(yōu)選 按比例將15 g金銀花和12 g青蒿藥材粉碎成粗粉狀,加水浸潤30 min,同步分別選擇加入3、4、5倍水量提取5 h,篩選獲得揮發(fā)油的最優(yōu)加水倍數(shù)。在此之后分別在提取器中提取4、5、6、7 h,根據(jù)揮發(fā)油收集量篩選最優(yōu)提取時間。

2.1.3 金銀花、青蒿水提條件的優(yōu)化 根據(jù)藥物制備工藝方法,分別以加水倍數(shù)、提取時間和pH值作為3個因素,每個因素分別設(shè)置3個水平,制備9份不同的水提物,根據(jù)《中華人民共和國藥典》2020版的統(tǒng)一規(guī)定[4],以綠原酸、青蒿素得率的綜合評分為評價指標(biāo),通過正交法[5]優(yōu)選最佳工藝。

2.1.4 梔子醇提物條件的優(yōu)化 取3份梔子藥材,每份20 g,粉碎成粗粉狀,加入適量的乙醇溶液,以乙醇濃度(60%、70%、80%),加液倍數(shù)(4、6、8倍)和提取時間(120、180、240 min)為變量因素,每個因素設(shè)置3個水平,制備9份提取液,以梔子苷和浸膏得率的綜合評分為評價指標(biāo),優(yōu)選最佳工藝[5]。

2.1.5 噴霧微粉工藝的優(yōu)化 取總提取物100 g,加入不同濃度的乙醇(50%、55%、60%、65%、70%)溶解完全,進(jìn)而獲取待噴霧溶液。之后在80 ℃、600 L/h風(fēng)速的條件下,以3 mL/min的進(jìn)藥量進(jìn)行噴霧干燥,獲得噴霧微粉。以粒徑分布在1～5 μm的體積百分?jǐn)?shù)和得粉率為綜合評價指標(biāo)篩選最優(yōu)乙醇濃度[5]。

2.1.6 藥物穩(wěn)定性研究 研究提取藥粉在不同的儲存條件下的穩(wěn)定性,包括光照、溫度和濕度等因素的影響,以確定最佳的儲存條件和有效期。

2.2 質(zhì)量評價

2.2.1 外觀與形態(tài)評價 對熱毒寧吸入粉霧劑的外觀和形態(tài)進(jìn)行評價,包括顏色、氣味、形狀、均勻度等。

2.2.2 理化性質(zhì)評價 評估熱毒寧吸入粉霧劑的理化性質(zhì),包括溶解度、pH值、含水量、粉末流動性等。

2.2.3 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定 制定熱毒寧吸入粉霧劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),包括理化性質(zhì)、含量測定、微生物限度等指標(biāo)。主要步驟為：以乙腈為流動相A,0.1%磷酸溶液為流動相B,柱溫30 ℃,在327 nm檢測波長下,經(jīng)高壓液相色譜法(High Pressure Chromatography,HPLC)分析并計算各成分含量;精密度試驗(yàn)[6]：取質(zhì)量濃度為1.15 mg/mL的樣品6份,每份1 mL,重復(fù)上樣分析。穩(wěn)定性試驗(yàn)[7]：取質(zhì)量濃度為1.15 mg/mL的樣品,分別在0、2、4、6、8、12 h精密吸取供試品10 μL上樣,記錄峰面積。重復(fù)性試驗(yàn)[8]：精密稱取樣品6份,分別制備供試品,每份樣品精準(zhǔn)進(jìn)樣10 μL,記錄峰面積。加樣回收試驗(yàn)[9]：取供試品6份,每份5 g,分別加入綠原酸對照品1.5 mg,制備供試品溶液,進(jìn)行HPLC測定,記錄峰面積。

2.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用Graphad 8.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,2組之間采用t檢驗(yàn),多組之間采用方差分析,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 揮發(fā)油最優(yōu)條件 根據(jù)單一變量實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析發(fā)現(xiàn),15 g金銀花和12 g青蒿在3倍體積的水溶液中,可以獲得最佳的揮發(fā)油量。見表1。在3倍體積的水溶液中,提取6 h可以獲得3.5 mL的揮發(fā)油。見表2。

表1 不同加水倍數(shù)的最優(yōu)選擇

表2 不同提取時間的最優(yōu)選擇

3.2 金銀花、青蒿水提取條件的最優(yōu)條件 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,在6倍水體積,pH=2.5的條件下,提取240 min,為最佳提取條件。見表3。

表3 金銀花、青蒿水提條件的正交結(jié)果

3.3 梔子醇提物工藝的優(yōu)化 根據(jù)正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在乙醇濃度為70%,提取時間180 min,加液倍數(shù)為6倍的條件下,獲得最佳的梔子醇提物得率。見表4。

表4 梔子醇提物工藝的正交結(jié)果

3.4 噴霧微粉工藝的優(yōu)化 在80 ℃、600 L/h風(fēng)速,進(jìn)藥量為3 mL/min的條件下,乙醇含量為60%時是噴霧微粉工藝的最優(yōu)條件,其粒徑分布在1～5 μm的體積百分?jǐn)?shù)為67.6%,且得粉率為71.2%。見表5。

表5 單一因素變量的噴霧微粉工藝的優(yōu)化(%)

3.5 藥物穩(wěn)定性研究 噴霧微粉在常溫25 ℃條件下儲存1個月、3個月后,藥物的降解情況分別為0.25%和2.13%,水分增加情況分別為0.02%和0.05%,且在避光和正常光照條件下無明顯變化。

3.6 外觀與形態(tài)評價 噴霧微粉顏色為淡黃色粉末,有淡淡的刺激性氣味,1～5 μm粒徑百分比為71.2%。

3.7 理化性質(zhì) 熱毒寧微粉不溶于水,其pH值處于中性。受溶劑的影響,熱毒寧噴霧微粉具有良好的流動性,其含水量低于0.05%。

3.8 熱毒寧噴霧微粉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 高效液相色譜檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)熱毒寧噴霧微粉中綠原酸含量不低于5.0%、青蒿素含量不低于3.2%、梔子苷含量不低于6.8%。噴霧微粉中總菌落數(shù)低于1 000 cfu/g,真菌和酵母低于100 cfu/g,大腸桿菌沒有檢出。精密度分析結(jié)果顯示綠原酸含量相對標(biāo)準(zhǔn)差(Relative Standard Deviation,RSD)為0.97%(n=9),表明儀器的精密度良好。穩(wěn)定性分析結(jié)果顯示綠原酸含量的RSD為1.90%(n=6),重復(fù)性結(jié)果顯示綠原酸含量的RSD為1.90%(n=6),加樣回收結(jié)果顯示綠原酸的回收率為104.65%,RSD為0.98%(n=6)。

4 討論

本研究旨在構(gòu)建熱毒寧吸入粉霧劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),以確保其質(zhì)量和穩(wěn)定性。通過一系列實(shí)驗(yàn)和分析,對熱毒寧吸入粉霧劑進(jìn)行了全面的評估,并制定了相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

在熱毒寧吸入粉霧劑的制備過程中,關(guān)鍵參數(shù)包括藥物粉末的粒徑分布、流動性、密度、溶解度等[10]。這些參數(shù)對藥物質(zhì)量具有重要影響。例如,粒徑分布對藥物的吸入性能和藥效有著重要的影響。較合適的粒徑范圍可提高藥物的沉積效率和吸入性能,從而增強(qiáng)藥物的治療效果[11]。通過對熱毒寧吸入粉霧劑合格率分析,可以評估藥物的質(zhì)量。在質(zhì)量評價過程中,要注意對各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行全面的評估,包括理化性質(zhì)、化學(xué)成分、微生物限度等。合格率高的指標(biāo)說明制備過程中的關(guān)鍵參數(shù)被有效控制,藥物質(zhì)量較為穩(wěn)定。

通過分析不同粒徑范圍顆粒在粉霧劑中的濃度分布情況,可以理解藥物的吸入性能和藥效的關(guān)聯(lián)。在粉霧劑中,小粒徑的顆粒容易懸浮在空氣中,被呼吸系統(tǒng)吸入,從而提高藥物的吸入性能;而大粒徑的顆粒則容易沉積在咽喉部,降低藥物的吸入性能。因此,通過優(yōu)化粒徑分布,可提高藥物在呼吸系統(tǒng)中的沉積效率和藥效。

吸入性能評價結(jié)果包括吸入劑量的準(zhǔn)確性、穩(wěn)定性以及其與藥物效果的關(guān)聯(lián)性[12]。準(zhǔn)確的吸入劑量能夠確保藥物在規(guī)定的劑量范圍內(nèi)到達(dá)肺部。穩(wěn)定的吸入性能保證了藥物在使用過程中的一致性,從而提高療效的可靠性。而藥物效果的關(guān)聯(lián)性則通過吸入性能評價結(jié)果與藥效評價結(jié)果的對比來觀察。吸入性能的優(yōu)化可以提高藥物在呼吸系統(tǒng)中的沉積效率,從而增強(qiáng)藥效[13]。

藥物的療效主要通過臨床試驗(yàn)或動物實(shí)驗(yàn)來評估[14-15]。通過藥效評價結(jié)果,可以判斷熱毒寧吸入粉霧劑在治療呼吸系統(tǒng)感染和炎癥方面的療效。評價結(jié)果中的療效指標(biāo)包括臨床癥狀改善情況、炎癥指標(biāo)變化、細(xì)胞因子水平等[16]。藥效評價結(jié)果能夠直接反映藥物在治療過程中的效果,并為制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供重要依據(jù)[17]。制定熱毒寧吸入粉霧劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時,需要考慮治療效果、質(zhì)量要求、法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)等因素。首先,治療效果是制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的最重要依據(jù)之一[18]。標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)能確保藥物在正常使用條件下的治療效果穩(wěn)定可靠。其次,質(zhì)量要求是制定標(biāo)準(zhǔn)的基本條件[19]。標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)能滿足藥物的物理、化學(xué)和微生物限度等要求,確保藥物的質(zhì)量可控和安全。此外,法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)也是制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的重要參考依據(jù)。遵循國家和國際相關(guān)的法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn),能夠保證制劑的合規(guī)性和可比性[20]。

首先,選擇了合適的制劑工藝和藥劑配方,以確保熱毒寧吸入粉霧劑中有效成分穩(wěn)定且均勻分布。通過物理性質(zhì)分析,發(fā)現(xiàn)熱毒寧吸入粉霧劑的外觀特征符合藥典要求,包括顏色、氣味和粉末的形態(tài)等。這表明該制劑工藝和藥劑配方的選擇是合理的,并且能夠滿足藥物的外觀要求。接下來,對熱毒寧吸入粉霧劑的藥劑學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了分析。藥劑學(xué)性質(zhì)的評估包括粉末的流動性、濕潤性和溶解度等。我們發(fā)現(xiàn)熱毒寧吸入粉霧劑的粉末具有良好的流動性和濕潤性,這有助于粉末在吸入器中的均勻分布和吸入過程的順利進(jìn)行。此外,熱毒寧吸入粉霧劑的溶解度也符合要求,表明藥物在吸入過程中能夠充分溶解并發(fā)揮作用。

最后,對熱毒寧吸入粉霧劑的化學(xué)成分進(jìn)行了分析。通過HPLC對其含量進(jìn)行了測定。結(jié)果顯示,熱毒寧吸入粉霧劑中的有效成分含量穩(wěn)定,符合藥典要求。這表明制劑工藝和藥劑配方的選擇能夠確保熱毒寧吸入粉霧劑中有效成分的穩(wěn)定性和一致性。

目前尚未有相關(guān)研究報道熱毒寧吸入粉霧劑在臨床上的藥物療效,而熱毒寧注射液的臨床有效性和安全性評估得到了廣泛研究[21-24]。這些研究指出熱毒寧注射液在臨床肺部感染的治療中可顯著縮短治療時間,優(yōu)化抗菌藥物的使用,增加重癥、危重癥的治愈率,提高總有效率,同時不增加藥物不良反應(yīng)。作為與熱毒寧注射液具有相同有效成分的藥物——熱毒寧吸入粉霧劑,我們推測其在臨床上與熱毒寧注射液具備同等的藥效與安全性。

本研究通過一系列實(shí)驗(yàn)和分析,對熱毒寧吸入粉霧劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了研究。結(jié)果表明,制劑工藝和藥劑配方的選擇對于確保熱毒寧吸入粉霧劑的質(zhì)量和穩(wěn)定性至關(guān)重要。這些研究成果為熱毒寧吸入粉霧劑的生產(chǎn)和質(zhì)量控制提供了重要的參考依據(jù),也為其他類似中藥制劑的研究和開發(fā)提供了借鑒。然而,本研究還存在一些局限性,未來的研究可以進(jìn)一步擴(kuò)大樣本數(shù)量,并優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件,以進(jìn)一步驗(yàn)證和完善熱毒寧吸入粉霧劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

利益沖突聲明：無。