張東玲， 唐 欣， 王志勇

(集美大學(xué)，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部東海海水健康養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建 廈門 361021)

包含泛素調(diào)節(jié)性X 結(jié)構(gòu)域的蛋白家族(ubiquitin regulatory X domain-containing protein，UBXN)是一種具有泛素相關(guān)蛋白基序的蛋白亞類。在哺乳動(dòng)物，該家族有13 個(gè)成員，即UBXN1、UBXN2A-2C、UBXN3A-3B、UBXN4、UBXN6～11，每個(gè)成員蛋白質(zhì)C 末端都具有一個(gè)UBX 結(jié)構(gòu)域，但N 端結(jié)構(gòu)域是多種多樣的，并且因?yàn)樵诩?xì)胞內(nèi)定位方式的不同而發(fā)揮著不同的作用。根據(jù)結(jié)構(gòu)的不同，UBXN 家族分為2 類，第一類UBAUBX 組成員(UBXN1/2C/3A-3B/7)包含一個(gè)N 端UBA 結(jié)構(gòu)域和一個(gè)C 端UBX 結(jié)構(gòu)域；第二類UBX 組成員(UBXN2A-2B/4/6/8-11)只含有一個(gè)C端UBX 結(jié)構(gòu)域。Alexandru 等[1]通過蛋白質(zhì)組學(xué)研究表明，UBA-UBX 組成員能夠識(shí)別K48 和K11 鏈，優(yōu)選K11，并與不同家族的E3 泛素連接酶結(jié)合，表明UBA-UBX 組成員在泛素-蛋白酶體途徑中發(fā)揮著重要作用。泛素-蛋白酶體途徑在免疫應(yīng)答、抗原提呈、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞周期調(diào)控等生物學(xué)功能中發(fā)揮著重要作用，因此，UBXN家族蛋白極可能涉及生物的免疫過程。

UBXN1 是一個(gè)含有UBA 與UBX 結(jié)構(gòu)域的泛素結(jié)合蛋白，最開始被鑒定為一個(gè)含有UBA 結(jié)構(gòu)域的人類(Homo sapiens) Y33K 蛋白[2]，后被發(fā)現(xiàn)廣泛分布于真核生物中[3-5]。研究發(fā)現(xiàn)，UBXN1不僅參與p97 依賴的調(diào)控內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中錯(cuò)誤折疊蛋白質(zhì)的降解過程，而且不依賴于 p97，作為干擾素通路的下游靶基因。UBXN1 在病毒感染后期被強(qiáng)烈誘導(dǎo)表達(dá)，并通過競爭TRAF3/6 與線粒體外膜蛋白MAVS 結(jié)合及MAVS 寡聚化，最終滅活RNA 病毒感染激活的干擾素信號(hào)通路和NF-κB 信號(hào)通路，避免過度炎癥的發(fā)生；敲降UBXN1，能夠誘導(dǎo)IFN-β 和促炎細(xì)胞因子表達(dá)，并抑制西尼羅河病毒和登革熱病毒的復(fù)制[6]。Wang 等[7]進(jìn)一步證實(shí)了UBXN1 負(fù)向調(diào)控NF-κB 信號(hào)通路，UBXN1 能夠與泛素連接酶cIAP1/2 結(jié)合，通過競爭cIAPs 與TRAF2 的結(jié)合，顯著降低TNFα 誘導(dǎo)的TNFR1 復(fù)合物的組裝和RIPK1 的泛素化。此外，Hu 等[8]研究發(fā)現(xiàn)UBXN1能夠阻斷NF-κB 經(jīng)典信號(hào)通路，并通過與Cul1 的相互作用抑制逆轉(zhuǎn)錄病毒和慢病毒復(fù)制。Yi 等[9]也表明PTRF 通過抑制UBXN1 表達(dá)激活NF-κB 活性。

大黃魚(Larimichthys crocea)是我國養(yǎng)殖產(chǎn)量最大的海水經(jīng)濟(jì)魚類，網(wǎng)箱養(yǎng)殖是其主要的養(yǎng)殖模式。高密度的養(yǎng)殖模式造成大黃魚病害頻發(fā)，盾纖毛蟲病是魚苗期主要病害，死亡率高達(dá)30%，尤其以網(wǎng)箱暫養(yǎng)階段更為嚴(yán)重[10-11]。前期工作中，實(shí)驗(yàn)在大黃魚抗盾纖毛蟲全基因組關(guān)聯(lián)分析(GWAS)中發(fā)現(xiàn)UBXN1 可能與該病的抗性相關(guān)[10]。在此基礎(chǔ)上，本研究對大黃魚UBXN1 基因序列和結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析，采用熒光定量PCR (qRT-PCR)檢測UBXN1 組織表達(dá)譜和誘導(dǎo)表達(dá)變化，并進(jìn)行了亞細(xì)胞定位研究，及過表達(dá)后的轉(zhuǎn)錄組分析。研究結(jié)果為詮釋UBXN1 基因的免疫功能和信號(hào)通路提供了新的參考資料。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

實(shí)驗(yàn)用大黃魚來源于福建省寧德市官井洋大黃魚養(yǎng)殖有限公司，體重約為4 g，實(shí)驗(yàn)前檢測無寄生蟲感染。本研究實(shí)驗(yàn)過程中操作人員嚴(yán)格遵守集美大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理和使用倫理規(guī)范，并按照集美大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理和使用倫理委員會(huì)制定的規(guī)章制度執(zhí)行。

1.2 大黃魚UBXN1 的序列確認(rèn)和生物信息學(xué)分析

取大黃魚肝臟和脾臟，混合后用于提取RNA，提取方法按照TransZol Up Plus RNA 試劑盒說明書操作。cDNA 合成根據(jù)Promega 的GoScript 反轉(zhuǎn)錄試劑盒操作說明進(jìn)行，合成的第一鏈cDNA于-20 °C 保存?zhèn)溆?。在本?shí)驗(yàn)室大黃魚基因組數(shù)據(jù)庫中搜索UBXN1 cDNA 序列全長，設(shè)計(jì)引物(表1)，PCR 擴(kuò)增，測序確認(rèn)UBXN1 序列。使用SMART 軟件 (http: //smart.embl-heidelberg.de/smart/set_mode) 分析蛋白的功能結(jié)構(gòu)域，ClustalX 進(jìn)行序列比對，EXPASY 在線分析蛋白分子質(zhì)量和理論等電點(diǎn)。

表1 實(shí)驗(yàn)中用到的引物Tab. 1 Primers in the experiments

1.3 大黃魚UBXN1 的組織分布和誘導(dǎo)表達(dá)分析

用于組織分布檢測的組織包括頭腎、腎臟、脾臟、鰓、肝臟、腸道、皮膚、胃、心臟、腦和肌肉。以β-actin為內(nèi)參進(jìn)行qRT-PCR (表1)，每組樣品生物重復(fù)3 尾魚，技術(shù)重復(fù)4 次。 qRT-PCR反應(yīng)條件為95 °C 30 s；95 °C 10 s，60 °C 30 s，40個(gè)循環(huán)。2-ΔΔCT法計(jì)算基因的相對表達(dá)量，SPSS軟件20.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P＜0.05 為差異顯著。

寄生蟲感染實(shí)驗(yàn)中，盾纖毛蟲(Scuticociliatia)分離于染病的大黃魚魚苗，在海水中16 °C 培育擴(kuò)增，每日投喂混合性菌群。大黃魚魚苗分為實(shí)驗(yàn)組和對照組，每組50 尾。盾纖毛蟲的感染劑量為4.3×105個(gè)/L，感染前先將水池水位下降至1/3，盾纖毛蟲感染大黃魚48 h 后，隨機(jī)抽檢魚苗，發(fā)現(xiàn)均被盾纖毛蟲感染后，注滿清潔海水，每日檢測魚苗病變及感染蟲體數(shù)量。對照組除不感染寄生蟲外，所有處理與實(shí)驗(yàn)組相同。寄生蟲感染后，實(shí)驗(yàn)組和對照組在感染后0 h、12 h、1 d、2 d、3 d、5 d 和7 d 共7 個(gè)時(shí)間點(diǎn)，分別采集大黃魚脾臟、腦、肝臟和腎臟，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)每組取5尾魚。qRT-PCR 分析大黃魚在盾纖毛蟲感染下，UBXN1 基因的表達(dá)變化。

1.4 亞細(xì)胞定位和過表達(dá)轉(zhuǎn)化物的構(gòu)建

設(shè)計(jì)構(gòu)建亞細(xì)胞定位和過表達(dá)轉(zhuǎn)化物的引物pEGFP-UBXN1F/R 和pcDNA-UBXN1F/R (表1)，并以肝臟cDNA 為模板，PCR 擴(kuò)增獲得插入片段。用SacI 和SmaI 酶切pEGFP-N1 載體質(zhì)粒，XhoI和Hind Ⅲ酶切pcDNA3.1(+)Myc-HisB 載體質(zhì)粒，37 °C 酶切30 min，按照ClonExpress?Ⅱ一步克隆說明書將膠回收產(chǎn)物和酶切后的質(zhì)粒進(jìn)行連接。連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化至DH5α 細(xì)胞，挑取單克隆，條帶大小驗(yàn)證正確后，送廈門瑞辰鉑生物科技有限公司測序。

1.5 大黃魚UBXN1 的亞細(xì)胞定位和過表達(dá)

對于亞細(xì)胞定位分析，使用電轉(zhuǎn)法將重組質(zhì)粒pEGFP-UBXN1 轉(zhuǎn)染至大黃魚頭腎細(xì)胞(福建農(nóng)林大學(xué)陳新華教授贈(zèng)送)，28 °C，培養(yǎng)基為Leibovitzs L-15。細(xì)胞轉(zhuǎn)染24 h 后，去除培養(yǎng)基，磷酸鹽緩沖溶液(PBS)清洗細(xì)胞2 次，4%多聚甲醛固定細(xì)胞10 min。去除多聚甲醛，緩沖液重復(fù)清 洗3 次，0.2% Triton X-100s 透 化 細(xì) 胞。用DAPI 避光核染15 min，PBS 清洗細(xì)胞2 次，激光共聚焦顯微鏡拍片觀察。

對于過表達(dá)分析，293T 細(xì)胞在5% CO2培養(yǎng)箱中37 °C 培養(yǎng)24 h，細(xì)胞鋪滿底部70%～80%時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)染。按照 LipofectamineTM3000 Reagent 試劑盒[賽默飛世爾科技(中國)有限公司] 說明書進(jìn)行轉(zhuǎn)染，設(shè)置 pEGFP-N1 作為空載對照，pEGFPUBXN1 作為實(shí)驗(yàn)組。細(xì)胞轉(zhuǎn)染24 h 后，收集細(xì)胞，免疫印跡(Western Blot)檢測UBXN1 表達(dá)水平。

1.6 Western Blot 檢測

轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞用預(yù)冷的PBS 清洗2 次，RIPA lysis 裂解細(xì)胞15 min，4 °C 條件下12 000×g，離心沉淀蛋白10 min；聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDSPAGE)后，在半干轉(zhuǎn)膜儀( Bio-Rad，美國) 上將蛋白轉(zhuǎn)印至 PVDF 膜上，TBS-T 洗滌3 次，5% BSA的TBS-T 室溫封閉1 h。加入 1∶1 000 的 His-tag抗體(兔多抗)，4 °C 孵育過夜；TBS-T 洗滌3 次，二抗(山羊抗兔)繼續(xù)孵育1 h，清洗3 次，加入顯色液，拍照觀察。

1.7 UBXN1 過表達(dá)后的轉(zhuǎn)錄組分析

確認(rèn)蛋白過表達(dá)后，收集細(xì)胞提取RNA (3個(gè)生物學(xué)重復(fù))，將質(zhì)量合格的RNA 樣品進(jìn)行文庫構(gòu)建，采用Illumina NovaSeq 6 000 平臺(tái)進(jìn)行高通量測序。轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)用FastQc 軟件過濾得到凈數(shù)據(jù)(clean reads)，STAR 軟件將clean reads 比對到人類參考基因組(GenBank: GRCH38)。StringTie軟件對每個(gè)樣本進(jìn)行轉(zhuǎn)錄本組裝，并利用StringTie軟件merge 功能將所有組裝的轉(zhuǎn)錄本進(jìn)行合并，組成一個(gè)所有個(gè)體的綜合轉(zhuǎn)錄本。使用Feature-Counts 工具對對基因表達(dá)量進(jìn)行計(jì)數(shù)(count 計(jì)數(shù))?；趯虮磉_(dá)量的計(jì)數(shù)，利用DESeq2 軟件對實(shí)驗(yàn)組和對照組樣本進(jìn)行差異表達(dá)基因篩選，|log2(Fold Change)|≥0.9，Padj＜0.01 作為篩選標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 UBXN1 序列和結(jié)構(gòu)分析

大黃魚UBXN1 的ORF 全長為915 bp，編碼304 個(gè)氨基酸(aa)，包含9 個(gè)外顯子、8 個(gè)內(nèi)含子。蛋白質(zhì)的分子質(zhì)量約為34.35 ku，理論等電點(diǎn)為4.75。SMART 結(jié)構(gòu)域預(yù)測UBXN1 有2 個(gè)功能結(jié)構(gòu)域，UBA 和UBX (圖1)。同源序列比對，大黃魚與棘頭梅童魚(Collichthys lucidus) UBXN1 氨基酸一致性高達(dá)98.03%，與模式生物青鳉(Oryzias latipes) UBXN1 氨基酸一致性為82.74%，與人類UBXN1 同源性為32.01%。

圖1 大黃魚UBXN1 氨基酸序列的多重比對灰色箭頭代表UBA 和UBX 結(jié)構(gòu)域；黑色陰影代表完全相同的氨基酸，灰色陰影代表相似的氨基酸。Fig. 1 The multiple sequence alignment of LcUBXN1 from different species Gray arrows denote UBA and UBX domains; the same amino acids were represented by black shadow, and highly similar amino acids were represented by gray shadow.

2.2 大黃魚UBXN1 的組織分布和亞細(xì)胞定位分析

采用熒光定量PCR 技術(shù)檢測UBXN1 在健康大黃魚各組織的表達(dá)水平。結(jié)果顯示，UBXN1 在所有檢測的組織中均有表達(dá)，腦中表達(dá)量最高，其次是肝臟、心臟和腎臟，在肌肉中表達(dá)量最低(圖2-a)。亞細(xì)胞定位分析表明大黃魚UBXN1 在細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中均有表達(dá)(圖2-b)。

圖2 UBXN1 在大黃魚不同組織中的表達(dá)(a)和頭腎細(xì)胞中的亞細(xì)胞定位(b)不同小寫字母表示不同組織表達(dá)量差異顯著(P＜0.05)；1. 腦，2. 肝 臟，3. 心 臟，4. 腎 臟，5. 鰓，6. 脾 臟，7. 皮 膚，8. 頭 腎，9. 腸道，10. 胃，11. 肌肉；GFP. 綠色熒光蛋白，DAPI. 細(xì)胞核被染色，Merge. GFP 和DAPI 圖合并。Fig. 2 Tissues distribution (a) and subcellular localization of LcUBXN1 (b)Different lowercase letters indicate that there are significant differences between different tissues(P＜0.05); 1. brain, 2. liver, 3. heart, 4. kidney,5. gill, 6. spleen, 7. skin, 8. head kidney, 9. intestine, 10. stomach,11. muscle；GFP. green fluorescent protein, DAPI. cytoplasm dyed,Merge. GFP and DAPI pictures merged.

2.3 盾纖毛蟲感染大黃魚后UBXN1 的誘導(dǎo)表達(dá)分析

為了進(jìn)一步了解UBXN1 如何參與大黃魚抗盾纖毛蟲的免疫反應(yīng)，使用盾纖毛蟲人工感染大黃魚，檢測UBXN1 在脾臟、腦、肝臟、腎臟中表達(dá)變化(圖3)。結(jié)果顯示，在脾臟中，UBXN1 在感染后第3 天表達(dá)量顯著增加，而后恢復(fù)至正常水平。在腦中，UBXN1 在第12 小時(shí)瞬時(shí)表達(dá)量顯著上調(diào)，然后逐步恢復(fù)至正常水平。在肝臟，UBXN1表達(dá)量逐漸上升，在第1 天達(dá)到峰值，然后逐漸降至正常水平。在腎臟，UBXN1 也表現(xiàn)出同樣的表達(dá)趨勢，先上升后下降，在第3 天表達(dá)量最高。

圖3 盾纖毛蟲感染下大黃魚UBXN1 在不同組織中的表達(dá)變化(a)脾臟，(b)腦，(c)肝臟，(d)腎臟；0. 0 h，1. 12 h，2. 1 d，3. 2 d，4. 3 d，5. 5 d，6.7 d；不同小寫字母表示不同時(shí)間點(diǎn)表達(dá)量差異顯著(P＜0.05)。Fig. 3 The expression level of LcUBXN1 upon scuticociliate in different tissues(a) spleen, (b) brain, (c) liver, (d) kidney; 0. 0 h, 1. 12 h, 2. 1 d, 3. 2 d, 4. 3 d, 5. 5 d, 6.7 d; different lowercase letters indicate that there are significant differences between different time intervals (P＜0.05).

2.4 大黃魚UBXN1 在293T 細(xì)胞過表達(dá)后轉(zhuǎn)錄組分析

Western Blot 檢測外源蛋白UBXN1 在293T細(xì)胞中的表達(dá)變化。與空載體對照組相比，大黃魚UBXN1 在293T 細(xì)胞成功過表達(dá)(圖4-b)。轉(zhuǎn)錄組差異表達(dá)基因篩選表明，與對照組相比，12 個(gè)基因上調(diào)表達(dá)，4 個(gè)基因下調(diào)表達(dá)(圖4-a，表2)，RPL41/RPL39/XIST/RNA45SN4 表達(dá) 量 顯著增加，而ATP8/ND4L 表達(dá)量顯著減少。KEGG富集分析顯示(圖5)，差異表達(dá)基因富集到10 個(gè)信號(hào)通路中，涉及多種疾病的發(fā)生。

圖4 大黃魚UBXN1 差異表達(dá)基因及其蛋白在293T 細(xì)胞系中的表達(dá)情況(a) 大黃魚UBXN1 差異表達(dá)基因火山圖；(b)外源大黃魚UBXN1 蛋白在293T 細(xì)胞系成功過表達(dá)；1. 空載體組，2. 過表達(dá)組。Fig. 4 The volcano plot of differentially expressed genes and the exogenous expression in 293T cells of LcUBXN1(a) the volcano plot of differentially expressed genes; (b) the exogenous expression of LcUBXN1 protein in 293T cells confirmed by western blot using anti-His antibody. 1. empty vector group, 2. overexpression group.

圖5 大黃魚UBXN1 過表達(dá)后差異基因在KEGG 數(shù)據(jù)庫中的注釋Fig. 5 Distribution of genes after UBXN1 overexpression in L. crocea in KEGG pathways

表2 差異表達(dá)的基因Tab. 2 Differentially expression genes

3 討論

盾纖毛蟲是一種兼性寄生蟲，在大黃魚體內(nèi)外均可寄生，可通過血液到達(dá)機(jī)體各個(gè)組織器官，以腦組織居多，最終魚體出血、衰竭死亡。盾纖毛蟲除感染大黃魚外，還可感染多種海水魚、蝦、蟹、海參、沙蠶等，目前盾纖毛蟲病尚無有效防治措施。實(shí)驗(yàn)前期從海區(qū)采集大黃魚感染盾纖毛蟲易感和抗性個(gè)體，進(jìn)行低深度重測序，GWAS分析發(fā)現(xiàn)一個(gè)極顯著的SNP 位于UBXN1 外顯子上。多項(xiàng)研究表明UBXN1 負(fù)向調(diào)控NF-κB 信號(hào)通路[6-9]，Valle 等[12]通過盾纖毛蟲和大菱鲆(Scophthalmus maximus)互作轉(zhuǎn)錄組分析發(fā)現(xiàn)NF-κB 信號(hào)通路參與寄生蟲感染過程，因此，推測UBXN1可能參與大黃魚抗盾纖毛蟲過程。

目前，哺乳動(dòng)物UBX 家族成員僅有小部分生理功能被發(fā)現(xiàn)，大部分成員仍未被研究，魚類中未見有關(guān)UBX 家族成員的報(bào)道。大黃魚UBXN1包含UBA 和UBX 結(jié)構(gòu)域，UBA 結(jié)構(gòu)域能夠結(jié)合泛素鏈[13]，而UBX 結(jié)構(gòu)域包含大約80 個(gè)氨基酸殘基，與泛素具有弱同源性，三維結(jié)構(gòu)和泛素的十分相似，能夠與AAA-ATP 酶的分子伴侶-蛋白即 含 纈 酪 肽 蛋 白(valosin-containing protein, VCP/p97)的氨基末端相結(jié)合[14]。通過蛋白質(zhì)間相互作用研究表明，VCP 蛋白的氨基末端結(jié)構(gòu)域的兩個(gè)亞結(jié)構(gòu)域之間的疏水口袋是其與UBX 結(jié)構(gòu)域的結(jié)合位點(diǎn)，VCP 與UBX 結(jié)構(gòu)域的結(jié)合具有比與泛素蛋白結(jié)合更高的親和力[15-17]。VCP 蛋白在細(xì)胞膜融合、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、細(xì)胞周期調(diào)控、紡錘體組裝和蛋白質(zhì)折疊過程中扮演著重要的角色[18-21]，這提示UBXN1 可能在細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)過程中扮演著重要的角色。此外，VCP 的突變在哺乳動(dòng)物多個(gè)組織中產(chǎn)生疾病表型[22-23]，提示UBXN1 可能與疾病發(fā)生相關(guān)，或者調(diào)控免疫信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。

在哺乳動(dòng)物，UBXN1 的UBA 結(jié)構(gòu)域(1～86 aa)可以與線粒體外膜上的MAS (438～467 aa)相結(jié)合，因此UBXN1 應(yīng)該存在于哺乳動(dòng)物的細(xì)胞質(zhì)中，這與實(shí)驗(yàn)的亞細(xì)胞定位結(jié)果一致，說明魚類與哺乳動(dòng)物UBXN1 的免疫功能相似。但是，本研究發(fā)現(xiàn)UBXN1 也在細(xì)胞核中表達(dá)，暗示魚類UBXN1 還存在其他信號(hào)調(diào)控通路。盾纖毛蟲感染大黃魚早期，UBXN1 在脾臟、腦、肝臟和腎臟的表達(dá)量有所提高，在感染后期恢復(fù)至正常水平。Yuan 等[24]研究發(fā)現(xiàn)，豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)感染豬小腸上皮細(xì)胞IPEC-J2 晚期時(shí)，UBXN1 的蛋白和RNA 表達(dá)量顯著增加；進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，BXN1 可以與豬傳染性胃腸炎病毒的S1 結(jié)合，敲降UBXN1，TGEV 在IPEC-J2 中復(fù)制量顯著減少，且S1 蛋白下調(diào)表達(dá)；相反，過表達(dá)UBXN1，TGEV 復(fù)制量急劇增加。此外，UBXN1可以降解肌纖維蛋白質(zhì)，其啟動(dòng)子區(qū)域單核苷酸的多態(tài)性與豬肌肉系水力水平相關(guān)[25]。寄生蟲感染機(jī)理比較復(fù)雜，與病毒感染宿主機(jī)制不同，暗示UBXN1 在寄生蟲感染宿主過程中可能扮演不同角色。UBXN1 單核苷酸多態(tài)性與大黃魚抗盾纖毛蟲性狀相關(guān)性需進(jìn)一步深入研究。

轉(zhuǎn)錄組篩選差異表達(dá)基因，相比空載體對照組，RPL41/RPL39 表達(dá)量顯著增加，而ATP8/ND4L 表達(dá)量顯著減少，通路富集分析表明，差異表達(dá)基因多與疾病發(fā)生相關(guān)。張潔等[26]報(bào)道RPL41呈劑量依賴性抑制卵巢癌A2780 細(xì)胞的增殖，通過調(diào)控Bax和Bcl-2 基因表達(dá)，參與細(xì)胞程序化死亡過程，導(dǎo)致A2780 細(xì)胞凋亡。Surmiak 等[27]研究發(fā)現(xiàn)，嗜中性粒細(xì)胞在抗蛋白酶3 IgG F 刺激下RPL41 表達(dá)量顯著升高。Dave 等[28]研究表明，乳腺癌病例RPL39 A14V 突變率高達(dá)97.5%(39/40 腫瘤樣本)。Huang 等[29]發(fā)現(xiàn)，敲降RPL39增加了沙門氏菌(Salmonella)在豬中性粒細(xì)胞內(nèi)的增殖。下調(diào)基因ATP8 和ND4 是線粒體基因，調(diào)控線粒體能量代謝，并促進(jìn)ROS 生成，也與腫瘤的發(fā)生相關(guān)[30-31]。盡管目前還沒有報(bào)道這些差異表達(dá)基因在魚類中的作用，但似乎都與免疫相關(guān)。未來的工作應(yīng)主要集中在UBXN1 對這些基因的調(diào)控作用及深入研究它們的免疫功能。

（作者聲明本文無實(shí)際或潛在的利益沖突）