劉 寧， 關(guān)素華， 王衛(wèi)民， 劉 寒

(華中農(nóng)業(yè)大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部淡水生物繁殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北 武漢 430070)

嗅覺是魚類最重要的化學(xué)感官之一，可廣泛感知各類氣味信息，在魚類攝食選擇、洄游及躲避敵害中起重要作用。魚類嗅覺器官由外鼻孔、內(nèi)鼻腔、嗅囊、嗅球、嗅束及嗅神經(jīng)組成[1-2]。嗅囊包含嗅基板、嗅軸及嗅囊膜[3]。不同魚類嗅囊的位置和形態(tài)與嗅基板的數(shù)量存在差異，這被廣泛應(yīng)用于魚類分類學(xué)中[4]。目前研究發(fā)現(xiàn)，多數(shù)真骨魚類嗅覺器官發(fā)生發(fā)育機(jī)制相同，均在胚胎時(shí)期頭部前段外胚層開始發(fā)生，左右對(duì)稱發(fā)育嗅板，嗅板不斷加厚，中間內(nèi)凹形成嗅孔。嗅孔逐漸在底部沿著嗅軸方向形成褶皺，并在嗅軸兩側(cè)長出嗅基板，之后嗅基板開始細(xì)胞分化多類嗅覺神經(jīng)元，最終發(fā)育為成熟的嗅覺器官[5-11]。

嗅覺機(jī)能在不同魚類及不同時(shí)期中差異較大，這與嗅基板數(shù)量、嗅囊表面積、嗅覺神經(jīng)元分布及嗅覺受體基因(olfactory receptor genes，ORs)的表達(dá)水平等密切相關(guān)。多數(shù)魚類在嗅覺發(fā)育過程中，嗅基板數(shù)目和單個(gè)嗅基板隆起高度會(huì)隨體長增長而增加。例如烏鱧(Channaargus)嗅囊中缺乏次級(jí)嗅基板，嗅覺機(jī)能提高主要依靠增加初級(jí)嗅基板數(shù)量和嗅基板隆起高度來增大嗅囊表面積，提高內(nèi)腔使用效率[12]。研究人員對(duì)79 種鯉科(Cyprinidae)魚類嗅囊發(fā)育過程對(duì)比發(fā)現(xiàn)，嗅基板數(shù)目在同種類不同體長個(gè)體間存在差異[3]，如中華須鰻(Cirrhimuraenachinensis)嗅基板數(shù)目會(huì)隨體長增長而增加，并在一定體長范圍內(nèi)保持一致[13]。

哺乳動(dòng)物嗅覺信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路目前研究比較透徹，氣味分子首先與分布在嗅囊上的嗅覺受體結(jié)合引起細(xì)胞化學(xué)信號(hào)，進(jìn)一步化學(xué)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)成電信號(hào)，經(jīng)過神經(jīng)沖動(dòng)傳遞至嗅覺初級(jí)中樞嗅球，最終傳遞給大腦，形成嗅覺感知。可見嗅覺受體(olfactory receptors，ORs)參與嗅覺識(shí)別[14-15]，是魚類嗅覺產(chǎn)生的基礎(chǔ)。ORs 在嗅覺神經(jīng)元中表達(dá)，由體內(nèi)最大的ORs基因家族編碼。隨著基因組計(jì)劃的開展，科學(xué)家們陸續(xù)在多個(gè)物種中鑒定并發(fā)現(xiàn)ORs，探索基因進(jìn)化與嗅覺功能的關(guān)系。2009 年，Niimura[16]基于比較基因組學(xué)的方法對(duì)23 種脊椎動(dòng)物的ORs家族系統(tǒng)進(jìn)行進(jìn)化分析，將所有的嗅覺受體基因劃分為a、β、γ、δ、ε、ζ、η、θ1、θ2、κ和λ共11 個(gè)亞型。其中，a和γ亞型主要在陸生動(dòng)物中存在，識(shí)別空氣中揮發(fā)性氣味(airborne odorants)；δ、ε、ζ和η亞型主要分布在魚類，在陸生動(dòng)物中缺失，識(shí)別水環(huán)境中的水溶性氣味(water-soluble odorants)；β亞型在陸生動(dòng)物及水生動(dòng)物中均存在，具有雙重氣味識(shí)別功能?？梢姡琌Rs基因與動(dòng)物機(jī)體辨別氣味的能力密切相關(guān)。

團(tuán)頭魴(Megalobramaamblycephala)又稱武昌魚，隸屬于鯉形目(Cypriniformes)鯉科(Cyprinidae)鲌亞科(Culerinae)魴屬(Megalobrama)，主產(chǎn)于長江中下游，因其味道鮮香、肉質(zhì)滑嫩、適應(yīng)性強(qiáng)而成為我國重要的淡水經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖魚類之一。近年來，對(duì)魚類嗅覺器官發(fā)育的研究不斷展開，但主要集中在海水魚類，淡水魚類嗅覺器官研究顯得十分匱乏，對(duì)ORs時(shí)空表達(dá)模式變化研究也鮮有報(bào)道。因此，本研究旨在對(duì)淡水魚類團(tuán)頭魴不同時(shí)期的嗅覺器官發(fā)育進(jìn)行組織學(xué)及形態(tài)學(xué)研究，并對(duì)代表性O(shè)Rs的時(shí)空表達(dá)模式進(jìn)行比較，共同探討嗅覺在團(tuán)頭魴的發(fā)育進(jìn)程與規(guī)律，為闡明魚類的嗅覺識(shí)別機(jī)理及配合飼料的研制和人工養(yǎng)殖積累理論基礎(chǔ)。

1 研究方法

1.1 樣品采集

團(tuán)頭魴受精卵、仔稚魚及成魚均采自于湖北省華中農(nóng)業(yè)大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院養(yǎng)殖基地。在水溫(26±2) °C 下養(yǎng)殖，24 h 曝氣，每天早晚各投喂1 次，保證魚體吃食活躍，健康無病。所有實(shí)驗(yàn)魚均經(jīng)華中農(nóng)業(yè)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理委員會(huì)及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

之后采集不同時(shí)期團(tuán)頭魴嗅覺組織固定樣本以及RNA 樣品，包括胚胎發(fā)育時(shí)期：2 細(xì)胞期、8 細(xì)胞期、32 細(xì)胞期、囊胚期、胚孔閉合期、體節(jié)形成期、嗅板期、晶體出現(xiàn)期、心跳期和出膜期。胚胎時(shí)期的樣本經(jīng)連續(xù)觀察及采樣獲得，每個(gè)時(shí)期采3 管，每管包含20 個(gè)胚胎(表1)。仔稚魚期：受精后的3、5、10、15、30、45 和60 d(days post fertilization，dpf)；仔稚魚期3～15 dpf 采集全魚，每個(gè)樣本采3 管，每管包含20 尾；30 dpf 后分別采集頭部和尾部樣本，每個(gè)樣本各采3 管，每管包含10 尾；幼魚至成魚發(fā)育時(shí)期：3月齡、6 月齡、1 齡(12 月齡)、18 月齡、2 齡(24月齡)。此發(fā)育時(shí)期(3、6、12、24 月齡)分別采集嗅囊(OE)、嗅球(OB)、腦及肌肉4 種組織，每個(gè)時(shí)期及組織各采3 管，3 及6 月齡每管包含3 尾，12 及24 月齡魚每管包含1 尾(表2)。各個(gè)發(fā)育時(shí)期的團(tuán)頭魴采樣前均用MS-222 麻醉10 min，測量記錄其形態(tài)學(xué)數(shù)據(jù)和特征，采集完成的組織迅速置于液氮中凍存，然后轉(zhuǎn)入-80 °C 冰箱長期保存。

表1 不同胚胎時(shí)期發(fā)育時(shí)間Tab. 1 Development time at different embryonic stages

表2 仔稚魚至成魚期的不同發(fā)育時(shí)期的全長Tab. 2 Full length at developmental stages from juvenile to adult

1.2 解剖學(xué)觀察

將實(shí)驗(yàn)魚置于MS-222 麻醉10 min，之后觀察鼻孔形狀、位置和數(shù)量，用直尺測量其全長、體長、眼徑、嗅囊長徑(mm)，然后剝?nèi)ケ强字車糠制つw，暴露嗅囊，觀察嗅囊形狀并用直尺測量長徑，在解剖鏡下對(duì)嗅基板進(jìn)行觀察計(jì)數(shù)，最后采集嗅囊用于組織學(xué)切片觀察。

1.3 嗅囊組織學(xué)切片及染色觀察

團(tuán)頭魴仔稚魚及幼魚經(jīng)多聚甲醛固定液固定24 h 后，將魚頭剪下脫鈣，每隔3 d 更換1 次脫鈣液，最終以尖銳鑷子可刺穿骨頭為界停止脫鈣。之后將固定后的組織通過一系列梯度的乙醇溶液脫水，在二甲苯溶液中透明；接著將頭部浸入60°C 的石蠟中按照橫縱切面進(jìn)行包埋。蠟塊冷卻后在切片機(jī)上制備切片，切片厚度5 μm。對(duì)于團(tuán)頭魴成魚，先取下頭部并去掉下頜，將多聚甲醛固定液從鼻孔滴注到嗅囊腔內(nèi)暫時(shí)固定0.5 h，之后剪下帶骨頭支撐的完整嗅囊組織塊投入固定液中固定24 h 以上，使用EDTA 脫鈣液慢脫約1 個(gè)月，以尖銳鑷子可刺穿骨頭為界，之后對(duì)組織進(jìn)行脫水、透明、包埋處理，然后進(jìn)行橫向切片，切片厚度 6 μm。最后將符合要求的組織切片經(jīng)過脫蠟、脫水、蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin staining，H.E)染色、封片后，置于光學(xué)顯微鏡下觀察。

1.4 不同時(shí)期代表性O(shè)Rs 在嗅覺組織的表達(dá)模式研究

為探討不同時(shí)期團(tuán)頭魴ORs表達(dá)模式與團(tuán)頭魴嗅覺器官發(fā)育之間的關(guān)系，將本實(shí)驗(yàn)室前期已在全基因組中鑒定出的團(tuán)頭魴223 個(gè)ORs與已明確嗅覺受體亞型物種的ORs構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹進(jìn)行亞型分類鑒定[17]，之后在水溶性氣味識(shí)別受體β、ε亞型中各選取4 個(gè)表達(dá)量高的代表性O(shè)Rs，即Beta-2、Beta-9、Beta-10、Beta-11；Epsilon-6、Epsilon-7、Epsilon-10 和Epsilon-13 (表3)。不同時(shí)期組織RNA 檢測合格后，按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書進(jìn)行cDNA 合成，應(yīng)用qRT-PCR 對(duì)不同時(shí)期團(tuán)頭魴代表性O(shè)Rs表達(dá)水平進(jìn)行分析。使用Microsoft Excel 2010 和SPSS 19.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理統(tǒng)計(jì)，用 2-ΔΔct的方法[18]分析定量數(shù)據(jù)。所有數(shù)據(jù)最終以3 個(gè)獨(dú)立重復(fù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SE)呈現(xiàn)。使用SPSS 19.0 軟件對(duì)歸一后的數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析(One-Way ANOVA)，事后多重檢驗(yàn)使用Scheffe 法，P＜0.05 和P＜0.01 分別為統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異和極顯著差異。

表3 嗅覺受體基因(ORs)引物信息Tab. 3 The sequences of the ORs primers

2 結(jié)果

2.1 團(tuán)頭魴嗅覺感受系統(tǒng)

團(tuán)頭魴成魚側(cè)扁，背高，嗅覺器官位于后背部和兩側(cè)眼睛前方，鼻瓣將其分為前鼻孔和后鼻孔，前鼻孔靠近嘴巴，后鼻孔靠近眼睛(圖1-a～d)。嗅囊呈橢圓形，緊貼于嗅腔底部，嗅球連接于嗅囊后方，嗅基板沿著頭尾方向平行排列，通過前后鼻孔與外界相通(圖1-e～f)。

圖1 團(tuán)頭魴外部嗅覺器官及嗅囊外部形態(tài)Fig. 1 External olfactory organs and olfactory epithelium of M. amblycephala

2.2 團(tuán)頭魴眼球徑與嗅囊長徑的變化

團(tuán)頭魴在全長19 mm 時(shí)，嗅囊長徑與眼球徑的比值為0.20，在全長61 mm 時(shí)增長至0.33，全長102 mm 時(shí)未變化，全長128 mm 時(shí)略微降低為0.31，在全長為289 mm 的成魚中為0.60，平均值為0.40，表明團(tuán)頭魴嗅囊長徑與眼球徑的比值隨體長增長而增大(表4)。

表4 團(tuán)頭魴眼球徑與嗅囊長徑的變化Tab. 4 Changes of eyeball diameter and olfactory epithelium diameter of M. amblycephala

2.3 團(tuán)頭魴的嗅囊發(fā)育組織切片染色觀察

團(tuán)頭魴剛孵化時(shí)，在眼前方出現(xiàn)嗅覺外圍凹進(jìn)的痕跡，凹進(jìn)處很快長出嗅窩。在嗅窩頂端和底部形成向內(nèi)的突起，兩個(gè)突起逐漸向中心延伸至末端。在全長6.9 mm 時(shí)未出現(xiàn)嗅基板(圖版-1)，在全長9.7 mm 左右時(shí)出現(xiàn)1 個(gè)嗅基板(圖版-2)；在11.2 mm 時(shí)出現(xiàn)2 個(gè)嗅基板(圖版-3)；全長17.2～33.5 mm 出現(xiàn)3～5 個(gè)嗅基板(圖版-4，5)；全長37.1 mm 時(shí)兩突起長合成隔膜(圖版-6)即鼻瓣，鼻瓣把嗅窩分隔為前鼻孔和后鼻孔；全長45.2～52.0 mm 時(shí)已有11～13 個(gè)嗅基板(圖版-7～9)；全長85.0～87.0 mm 時(shí)約有17 個(gè)嗅基板(圖版-10，11)，此時(shí)的鼻瓣已完全愈合，形狀變寬大，可以覆蓋分隔開的前后鼻孔，并前后擺動(dòng)；全長104.5 mm 有18 個(gè)嗅基板(圖版-12)；全長127.5 mm 有20 個(gè)嗅基板(圖版-13)；全長235.2 mm 有32 個(gè)嗅基板(圖版-15)；全長272.6 mm 有38 個(gè)嗅基板(圖版-16)。整體來說，團(tuán)頭魴單個(gè)嗅囊初級(jí)嗅基板隨著魚體的生長發(fā)育，排列由疏松逐漸緊密，數(shù)量逐漸增加，在成魚趨于穩(wěn)定。

圖版 不同發(fā)育時(shí)期團(tuán)頭魴嗅囊切片觀察Plate Observation on OE slices at different developmental stages of M. amblycephala

2.4 團(tuán)頭魴嗅囊平均厚度及初級(jí)嗅基板的數(shù)量和總高度的變化

研究結(jié)果顯示，團(tuán)頭魴嗅囊平均厚度，仔魚期隨著初級(jí)嗅基板數(shù)量增多而減小，幼魚期隨著初級(jí)嗅基板數(shù)量增多而增大，成魚期隨著初級(jí)嗅基板數(shù)量的穩(wěn)定又開始減?。粓F(tuán)頭魴初級(jí)嗅基板隆起高度隨生長發(fā)育和初級(jí)嗅基板數(shù)量增加而顯著增大，特別是較大嗅基板隆起高度成倍增加，可見團(tuán)頭魴嗅囊表面積隨發(fā)育而顯著增大(表5)。

表5 不同全長團(tuán)頭魴單側(cè)嗅囊厚度、嗅基板數(shù)量及總高度的變化Tab. 5 Changes of thickness of olfactory epithelium, number and total height of primary olfactory lamellae of M. amblycephala

2.5 代表性O(shè)Rs 在團(tuán)頭魴不同時(shí)期的表達(dá)模式

團(tuán)頭魴不同時(shí)期的ORs表達(dá)模式隨著生長發(fā)育而變化。在團(tuán)頭魴胚胎發(fā)育期，代表性O(shè)RBeta基因在囊胚期、胚孔閉合期及嗅板期高表達(dá)(P＜0.01)，在其他時(shí)期有微弱表達(dá)；此外Beta-2在晶體出現(xiàn)期高表達(dá)(P＜0.01)，Beta-9 在心跳期高表達(dá)(P＜0.01)；ORs-Epsilon基因僅Epsilon-6 在嗅板期、晶體期高表達(dá)(P＜0.01)，Epsilon-10 在32 細(xì)胞期高表達(dá)(P＜0.01)，Epsilon-13 在胚孔閉合期高表達(dá)(P＜0.01)，其他ORs在胚胎發(fā)育其他時(shí)期低表達(dá)(P＜0.01) (圖2，圖3)。

圖2 團(tuán)頭魴4 個(gè)OR Beta 基因在不同階段及不同組織中的表達(dá)模式胚胎時(shí)期：1. 2 細(xì)胞期；2. 8 細(xì)胞期；3. 32 細(xì)胞期；4.囊胚期；5.胚孔閉合期；6.體節(jié)形成期；7.嗅板期；8.晶體出現(xiàn)期；9.心跳期；10.出膜期，2 細(xì)胞期為參考對(duì)照；仔稚魚時(shí)期：11. 3 dpf；12. 5 dpf；13. 15 dpf；14. 20 dpf；15. 30 dpf；16. 45 dpf；17. 60 dpf，3 dpf 時(shí)期為參考對(duì)照；幼魚至成魚期：18. 3 月齡；19. 6 月齡；20. 1 齡；21. 2 齡，4 個(gè)時(shí)期的肌肉組織為參考對(duì)照；*代表差異顯著(P＜0.05)；**代表差異極顯著(P＜0.01)，下同。Fig. 2 Expression patterns of four OR Beta genes in different stages and tissues of M. amblycephala Embryonic period: 1. 2-cell stage; 2. 8-cell stage; 3. 32-cell stage; 4. blastocyst stage; 5. blastopore closure; 6. the formation of body segments; 7. olfactory lamellae stage; 8. crystal emergence stage; 9. heartbeat period; 10. membrane emergence stage, 2-cell stage as reference control; juvenile period: 11.3 dpf; 12. 5 dpf; 13. 15 dpf; 14. 20 dpf; 15. 30 dpf; 16. 45 dpf; 17, 60 dpf, 3 dpf period as the reference control; juvenile to adult period: 18. 3 months old;19. 6 months old; 20. 1 year old; 21. 2 years old, muscle tissue at the four stages as the reference control;* means significant difference (P＜0.05); **means extremely significant difference (P＜0.01), the same below.

圖3 團(tuán)頭魴4 個(gè)OR Epsilon 基因在不同階段及不同組織中的表達(dá)模式Fig. 3 Expression patterns of four OR Epsilon genes in different stages and tissues of M. amblycephala

代表性O(shè)Rs在團(tuán)頭魴仔稚魚期，包括3、5、15、20、30、45 和60 dpf 的表達(dá)模式相似。Beta-2、9、10、11 和Epsilon-7 在3、5 和15 dpf 發(fā)育時(shí)期有微弱表達(dá)，在30、45 和60 dpf 顯著高表達(dá)(P＜0.01)；Epsilon-6 在3、5、15 及20 dpf 有微弱表達(dá)，在30 和45 dpf 發(fā)育時(shí)期高表達(dá)(P＜0.01)；Epsilon-10 在15 dpf 發(fā)育時(shí)期有較高表達(dá)(P＜0.05)，在45 和60 dpf 發(fā)育時(shí)期高表達(dá)(P＜0.01)；Epsilon-13 在15 和30 dpf 發(fā)育時(shí)期高表達(dá)(P＜0.01) (圖2，圖3)。

代表性O(shè)Rs在團(tuán)頭魴幼魚期至成魚期(3、6、12 和24 月齡)的不同組織中表現(xiàn)出各異的表達(dá)模式變化。8 個(gè)代表性O(shè)Rs，其中Beta-2、Beta-10、Beta-11、Epsilon-10 及Epsilon-13 在4 個(gè)階段嗅囊中高表達(dá)(P＜0.05)，Beta-9 在3 月齡嗅囊中高表達(dá)(P＜0.01)，Epsilon-6 及Epsilon-7 在12 及24 月齡嗅囊中高表達(dá)(P＜0.05)；Epsilon-6 在4 個(gè)階段嗅球中不表達(dá)，Beta-2、9、10、11，Epsilon-7、10、13 在3 月齡嗅球中高表達(dá)(P＜0.01)；Beta-2、Beta-11 在4 個(gè)階段腦中低表達(dá)(P＜0.05)；Beta-9、Epsilon-6 在24 月 齡 腦 中 有 較 高 表達(dá)(P＜0.05)，Beta-10 在12 月齡魚腦中高表達(dá)(P＜0.01)，Epsilon-7、10 在6 至24 月 齡 腦 中 高 表達(dá)(P＜0.01)，而Epsilon-13 僅在3 月齡腦中高表達(dá)(P＜0.01) (圖2，圖3)。

3 討論

不同魚類嗅覺器官外部結(jié)構(gòu)與內(nèi)部構(gòu)造存在差異，這與魚類本身遺傳特性、生長習(xí)性及生長環(huán)境密切相關(guān)。陳星玉[3]對(duì)79 種鯉科魚類嗅覺發(fā)育比較研究及Pfeiffer[19]對(duì)墨西哥管鼻鯛(Hoplopagrusguentherii)嗅囊發(fā)育研究發(fā)現(xiàn)，同種魚類嗅基板數(shù)目在不同體長中存在差異，即嗅基板數(shù)會(huì)隨體長增長而增加。例如，鯽(Carassiusauratus)單側(cè)嗅囊嗅基板數(shù)在體長55 mm 時(shí)為16 個(gè)，74 mm時(shí)為18 個(gè)，112 mm 時(shí)為22 個(gè)。在本研究中，團(tuán)頭魴單側(cè)嗅囊嗅基板數(shù)量也隨體長增長而增加，在幼魚期維持在20 個(gè)左右，在成魚期維持在40個(gè)左右，與以上魚類嗅覺器官發(fā)育規(guī)律一致。此外團(tuán)頭魴嗅基板數(shù)量雖在不同體長中存在差異，但嗅囊嗅軸形態(tài)一直保持直線型，并以嗅中軸呈對(duì)稱分布，在發(fā)育過程中不隨生長發(fā)育而有顯著變化。

有研究認(rèn)為，嗅囊長徑與眼徑的比值大小與魚類活動(dòng)依賴嗅覺或是視覺相關(guān)。陳星玉[3]對(duì)79種鯉科魚類的嗅覺器官研究發(fā)現(xiàn)，鯉科魚類嗅囊長徑一般小于眼徑，比值小于1，嗅覺總體不發(fā)達(dá)。本研究中發(fā)現(xiàn)團(tuán)頭魴成魚嗅囊長徑與眼徑比值為0.6，與相同食性草魚(Ctenopharyngodon idella)成魚一致，屬于視、嗅覺魚類，偏向視覺。視覺雖在團(tuán)頭魴與草魚生命活動(dòng)中占主導(dǎo)地位，但嗅覺對(duì)其在湖泊的中下層光線不強(qiáng)的水域?qū)ふ沂澄锘蛘咦R(shí)別信息過程中起著重要作用。鱖(Sinipercachuatsi)為底層肉食性魚類，其嗅囊長徑遠(yuǎn)小于眼徑長度，嗅覺不發(fā)達(dá)，捕食行為實(shí)驗(yàn)表明其主要靠視覺感受運(yùn)動(dòng)來攻擊獵物。圓口銅魚(Coreiusguichenoti)為底棲雜食性魚類，其嗅囊長徑是眼徑的1.4 倍，視覺不發(fā)達(dá)，嗅覺發(fā)達(dá)，這是為了適應(yīng)底棲生活，視覺逐漸退化的結(jié)果。由此說明，魚類嗅覺器官的發(fā)達(dá)程度與魚類自身的生活習(xí)性和生存環(huán)境密切相關(guān)。

嗅覺系統(tǒng)發(fā)育有多個(gè)階段，如嗅基板發(fā)育、嗅覺感覺細(xì)胞分化與成熟及各類嗅覺器官的發(fā)育等。值得注意的是，ORs并不是在嗅覺系統(tǒng)發(fā)展完全才能發(fā)揮作用[20]。事實(shí)上，魚類嗅囊由胚胎發(fā)育時(shí)期的嗅板發(fā)育而來，由各種細(xì)胞遷移和聚集形成[21]。團(tuán)頭魴代表性O(shè)Rs，包括Beta-2、9、10、11，主要在胚胎時(shí)期的嗅板期顯著高表達(dá)(P＜0.01)，推測ORs-Beta類基因可能參與嗅板發(fā)育的過程。Wang 等[22]對(duì)鯉胚胎進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組分析，發(fā)現(xiàn)大部分ORs在原腸后期表達(dá)，推測這種表達(dá)模式與嗅基板的形成發(fā)生相關(guān)。團(tuán)頭魴嗅基板上以中央對(duì)稱分布著纖毛神經(jīng)元、微絨毛神經(jīng)元、隱窩神經(jīng)元及其他非受體細(xì)胞[23]。仔稚魚及幼魚發(fā)展到成魚時(shí)期的過程中，神經(jīng)元數(shù)量會(huì)隨嗅基板數(shù)量的增加而增加，即仔稚魚及幼魚與成年的團(tuán)頭魴相比，神經(jīng)元數(shù)量遠(yuǎn)低于成魚的分布密度，這解釋了仔稚魚前期ORs僅有微弱表達(dá)，而在后時(shí)期高表達(dá)，說明ORs在團(tuán)頭魴的嗅覺神經(jīng)元分化與成熟進(jìn)程中發(fā)揮著重要作用。大部分代表性O(shè)Rs，包 括Beta-2、10、11 及Epsilon-10、13 在3～24 月齡魚的嗅囊中高表達(dá)(P＜0.05)，這與本實(shí)驗(yàn)室前期研究結(jié)果一致[17]，說明在不同發(fā)育時(shí)期，ORs主要表達(dá)的部位均在嗅囊中，這為進(jìn)一步探究ORs的功能提供理論支持，并為其他魚類ORs的研究奠定基礎(chǔ)。

（作者聲明本文無實(shí)際或潛在的利益沖突）