李 朕 張洪亮 嚴(yán)勝利 陳月嬋 鄔 超 蔡 鋼

(1 新疆醫(yī)科大學(xué)第四臨床醫(yī)學(xué)院,烏魯木齊,830000; 2 石河子大學(xué)第一附屬醫(yī)院,石河子,832000; 3 新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院腫瘤二科,烏魯木齊,830000; 4 新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院呼吸與危重醫(yī)學(xué)科,烏魯木齊,830000)

肺癌是全球范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤之一,最新的流行病學(xué)數(shù)據(jù)顯示,2020年全球范圍內(nèi)新發(fā)肺癌221萬例,因肺癌死亡180萬例[1-2]。肺癌的發(fā)病率和死亡率呈現(xiàn)持續(xù)上升趨勢(shì),而血管生成在腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移過程中起重要作用。抑制腫瘤血管生成可限制腫瘤細(xì)胞獲取氧氣和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),并阻斷其侵襲和轉(zhuǎn)移所需的通路,成為治療肺癌的重要策略之一[2]。紫龍金是一種傳統(tǒng)中藥,由黃芪、當(dāng)歸、白英、龍葵、丹參、半枝蓮、蛇莓、郁金組成,其活性成分具有抗腫瘤和抗血管生成的特性[3]。此外,既往研究還發(fā)現(xiàn)紫龍金片對(duì)肝癌、肺癌小鼠模型有抗癌作用,其主要通過激活人體淋巴細(xì)胞,促進(jìn)T淋巴細(xì)胞增殖,提高巨噬細(xì)胞的吞噬能力,從而有效增強(qiáng)機(jī)體免疫能力[3]。?？颂婺崾且环N靶向治療藥物,主要針對(duì)表皮生長(zhǎng)因子受體(Epidermal Growth Factor Receptor,EGFR),可用于肺癌的治療,被廣泛應(yīng)用于臨床,并取得了良好療效[4]。然而,紫龍金和?？颂婺嵩诜伟┭苌珊兔庖吖δ芊矫娴南嗷プ饔蒙形疵鞔_。本研究探究紫龍金和?？颂婺釋?duì)Lewis肺癌荷瘤小鼠模型中腫瘤血管生長(zhǎng)的抑制作用,并評(píng)估其對(duì)細(xì)胞免疫功能的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物、細(xì)胞 無特定病原體(Specific Pathogen Free,SPF)級(jí)C57BL/6雄性小鼠50只,4～6周齡,體質(zhì)量18～22 g,購于上海西普爾必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司,生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK(滬)2020-0016。將所有小鼠飼養(yǎng)在無菌的鼠房中,恒溫25 ℃,每12 h進(jìn)行1次晝夜交替,給予充足的糧食和水。小鼠Lewis肺癌細(xì)胞株(上海冠導(dǎo)生物工程有限公司,批號(hào):GD-C9819889),采用高糖的含10%胎牛血清的改良Eagle培養(yǎng)基(Dulbeccos Modification of Eagles Medium,DMEM)培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng),培養(yǎng)環(huán)境為37 ℃,5%CO2培養(yǎng)箱。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)經(jīng)我院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物動(dòng)心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(倫理審批號(hào):A2023-069-01)。

1.1.2 藥品 紫龍金片(天津中新藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司隆順榕制藥廠,包裝規(guī)格:0.65 g,國(guó)藥準(zhǔn)字Z20010064);埃克替尼(貝達(dá)藥業(yè)股份有限公司,125 mg/片,國(guó)藥準(zhǔn)字H20110061)。

1.1.3 試劑與儀器 DMEM培養(yǎng)基(CHI Scientific公司,美國(guó),批號(hào):3-2010);胰酶(北京伊塔生物科技有限公司,批號(hào):YT00044);無菌生理鹽水(上海撫生實(shí)業(yè)有限公司,批號(hào):FS-P0178);FITC anti-mouse CD3 Antibody(BioLegend公司,美國(guó),批號(hào):100203);APC anti-mouse CD4 Antibody(BioLegend公司,美國(guó),批號(hào):100515);PerCP/Cyanine5.5 anti-mouse CD8b.2 Antibody(BioLegend公司,美國(guó),批號(hào):140417);PerCP/Cyanine5.5 anti-mouse/human CD45R/B220 Antibody(BioLegend公司,美國(guó),批號(hào):103235);放射性免疫沉淀分析(Radioimmunoprecipitation Assay,RIPA)裂解液(上海羽朵生物科技有限公司,批號(hào):LG-PS0013);10%體積的10 mmol/L PMSF(MyBioSource公司,美國(guó),批號(hào):MBS355475-E);白細(xì)胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)試劑盒(EK-Bioscience公司,批號(hào):EK-M25951);腫瘤壞死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)ELISA試劑盒(EK-Bioscience公司,批號(hào):EK-M29261);γ干擾素(Interferon Gamma,IFN-γ)ELISA試劑盒(EK-Bioscience公司,批號(hào):EK-M25913);血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子ELISA試劑盒(EK-Bioscience公司,批號(hào):EK-M29117);二氧化碳(Carbon Dioxide,CO2)培養(yǎng)箱(Eppendorf公司,美國(guó),批號(hào):S41I230014);酶標(biāo)儀(BioTek公司,美國(guó),型號(hào):BioTek Synergy H1);流式細(xì)胞儀(BD Biosciences公司,美國(guó),型號(hào):Accuri C6);離心機(jī)(青島澳柯瑪生物醫(yī)療有限公司,型號(hào):ALX-18R);4 ℃冰箱(海爾公司,型號(hào):HXC-149)。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備 參考既往文獻(xiàn)[5-6]構(gòu)建Lewis肺癌荷瘤小鼠模型。從液氮中取出Lewis肺癌細(xì)胞株于37 ℃恒溫水浴中使其完全解凍,將恢復(fù)活力的Lewis肺癌細(xì)胞株懸浮于DMEM培養(yǎng)基,并在37 ℃的CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng),待細(xì)胞進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,使用胰酶消化細(xì)胞,并制備5×106個(gè)/mL的細(xì)胞懸液備用。取10只小鼠,在無菌條件下將細(xì)胞懸液(0.2 mL/只)注射到小鼠的右前肢腋窩皮下,建立Lewis肺癌荷瘤小鼠模型。在無菌條件下飼養(yǎng)14 d后脫頸椎處死小鼠,將瘤體組織剝離、剪碎、勻漿,制備成1×107個(gè)/mL的Lewis瘤細(xì)胞懸液。取40只小鼠,于右前肢腋窩皮下分別接種0.2 mL的Lewis瘤細(xì)胞懸液。模型制備成功標(biāo)準(zhǔn):7 d后,在接種部位觸摸到約黃豆大小的結(jié)節(jié)狀腫塊[6]。將造模成功的40只小鼠隨機(jī)分為模型組、紫龍金組、?？颂婺峤M、聯(lián)合觀察組,每組10只。

1.2.2 給藥方法 參照相關(guān)文獻(xiàn)[7],紫龍金組將紫龍金片碾碎后溶于無菌生理鹽水備用,每只小鼠采用灌胃的方式給予紫龍金水溶劑,給藥劑量為20 g/kg;埃克替尼組灌胃給予?？颂婺?給藥劑量5 mg/kg[8];聯(lián)合觀察組給予紫龍金與埃克替尼聯(lián)合治療,給藥方法同紫龍金組、?？颂婺峤M。模型組給予同紫龍金組相同劑量的生理鹽水灌胃。4組均每日給藥2次,間隔12 h,持續(xù)14 d,末次給藥后小鼠禁食24 h,取眼眶靜脈血。隨后處死小鼠,收集小鼠的腫瘤組織保存?zhèn)錅y(cè)。

1.2.3 檢測(cè)指標(biāo)與方法

1.2.3.1 腫瘤生長(zhǎng)抑制率檢測(cè) 處死小鼠后,取小鼠接種部位腫瘤稱重,計(jì)算腫瘤生長(zhǎng)抑制率。腫瘤生長(zhǎng)抑制率=(模型組平均腫瘤重量-觀察組平均腫瘤重量)/模型組平均腫瘤重量×100%[6,9]。

1.2.3.2 血管生長(zhǎng)指標(biāo)檢測(cè) 1)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的檢測(cè):參照先前文獻(xiàn)[10-11]的方法進(jìn)行評(píng)估分析,對(duì)小鼠進(jìn)行靜脈取血后,將收集的血液進(jìn)行離心3 min,離心半徑7 cm,離心轉(zhuǎn)速為12 000 r/min,之后收集上清液,按照說明,用ELISA試劑盒檢測(cè)小鼠血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平。2)微血管密度(Microvessel Density,MVD)檢測(cè):參照先前文獻(xiàn)[12]里的方法來評(píng)估腫瘤MVD。具體而言,將腫瘤血管組織進(jìn)行石蠟包埋并切成4 μm厚的切片,把切片放入二甲苯中2次脫蠟,10 min/次。然后把切片放入無水乙醇中10 min洗去二甲苯。之后,把切片依次放入95%、90%、80%和70%乙醇中各1次,2 min/次。進(jìn)行切片抗原修復(fù),即將切片放入盛有枸橡酸鹽緩沖液(工作液)的容器中,置微波爐內(nèi)加熱使溫度保持在92～98 ℃之間并持續(xù)10～15 min。取出容器,室溫冷卻10～20 min。之后,用PBS沖洗,5 min×3次。使用1%BSA封閉液封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn),滴加CD34一抗進(jìn)行4 ℃孵育過夜,次日將切片與對(duì)應(yīng)的二抗繼續(xù)進(jìn)行孵育,并使用DAB進(jìn)行核復(fù)染,最后在顯微鏡下觀察。將染成棕黃色的單個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞簇視為1個(gè)計(jì)數(shù)單位,而不計(jì)數(shù)血管腔大于8個(gè)紅細(xì)胞大小且具有較厚肌層的血管。首先在低倍視野下選取5個(gè)MVD較高的區(qū)域,通過觀察CD34陽性細(xì)胞(染成棕色的內(nèi)皮細(xì)胞)來確定最高的血管密度區(qū)域。高倍鏡下(×200)將孤立的內(nèi)皮細(xì)胞或細(xì)胞簇視為1個(gè)計(jì)數(shù)單位,記錄5個(gè)視野內(nèi)的微血管數(shù)量,取平均值。計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn):單個(gè)染色陽性的血管內(nèi)皮細(xì)胞;1個(gè)染色陽性的血管內(nèi)皮細(xì)胞簇;血管干上的分支結(jié)構(gòu)。

1.2.3.3 脾臟免疫細(xì)胞檢測(cè) 處死小鼠后,在無菌條件下分離小鼠脾臟,制備脾細(xì)胞懸液。加入紅細(xì)胞裂解液裂解紅細(xì)胞,在冰浴中孵育30 min后離心去除上清液,并用磷酸緩沖鹽溶液(Phosphate Buffer Saline,PBS)進(jìn)行洗滌,將細(xì)胞調(diào)整至107個(gè)/mL。取100 μL細(xì)胞懸液,加入2 μL的異硫氰酸熒光素(Fluorescein Isothiocyanate,FITC)anti-mouse CD3 Antibody、1 μL的anti-mouse CD4 Antibody、1 μL的PerCP/Cyanine5.5 anti-mouse CD8b.2 Antibody、1 μL的PerCP/Cyanine5.5 anti-mouse/human CD45R/B220 Antibody。4 ℃避光條件下孵育40 min,用PBS進(jìn)行洗滌,并去除上清液,用流式細(xì)胞儀檢測(cè)小鼠脾臟細(xì)胞內(nèi)CD4+T淋巴細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞的比例。

1.2.3.4 腫瘤組織炎癥介質(zhì)檢測(cè) 采集小鼠腫瘤組織后,取適量腫瘤組織制備勻漿,用90%體積RIPA裂解液和10%體積的10 mmol/L PMSF進(jìn)行組織勻漿(10%),置于冰上裂解30 min,于12 000 r/min離心30 min,離心半徑為7 cm,取上清液,置于4 ℃冰箱保存?zhèn)錅y(cè)。分別用對(duì)應(yīng)的ELISA試劑盒檢測(cè)腫瘤組織IL-2、TNF-α、IFN-γ。

2 結(jié)果

2.1 紫龍金及?？颂婺釋?duì)小鼠腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用 與模型組比較,紫龍金組、?？颂婺峤M、聯(lián)合觀察組小鼠腫瘤重量低(均P<0.05);與紫龍金組及?？颂婺峤M比較,聯(lián)合觀察組小鼠腫瘤重量低(均P<0.05),腫瘤生長(zhǎng)抑制率高(P<0.05)。紫龍金組與?？颂婺峤M小鼠腫瘤重量、腫瘤生長(zhǎng)抑制率比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。見表1。

表1 各組小鼠腫瘤重量及腫瘤生長(zhǎng)抑制率比較

2.2 各組小鼠血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平比較 模型組、紫龍金組、?？颂婺峤M、聯(lián)合觀察組小鼠血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平分別為(129.10±21.87)、(85.70±6.36)、(81.10±9.15)、(69.70±5.29)pg/mL。與模型組比較,紫龍金組、?？颂婺峤M、聯(lián)合觀察組小鼠血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平低(均P<0.05);與紫龍金組及?？颂婺峤M比較,聯(lián)合觀察組小鼠血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平低(均P<0.05);紫龍金組與?？颂婺峤M小鼠血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。

2.3 各組小鼠MVD比較 免疫組化染色結(jié)果揭示各組小鼠MVD的組織表達(dá)情況。見圖1。模型組、紫龍金組、?？颂婺峤M、聯(lián)合觀察組小鼠MVD分別為(1.39±0.21)%、(0.63±0.05)%、(0.65±0.05)%、(0.42±0.08)%。與模型組比較,紫龍金組、埃克替尼組、聯(lián)合觀察組小鼠MVD低(均P<0.05)。與紫龍金組及?？颂婺峤M比較,聯(lián)合觀察組小鼠MVD低(均P<0.05);紫龍金組與?？颂婺峤M小鼠MVD比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。

圖1 免疫組化染色檢測(cè)各組小鼠MVD組織表達(dá)水平

2.4 各組小鼠血清免疫細(xì)胞比例比較 與模型組比較,紫龍金組、?？颂婺峤M、聯(lián)合觀察組小鼠血清CD4+T淋巴細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞的百分比例均高于模型組(均P<0.05);與紫龍金組及?？颂婺峤M比較,聯(lián)合觀察組小鼠血清CD4+T淋巴細(xì)胞比例、CD8+T淋巴細(xì)胞比例、B淋巴細(xì)胞比例較高(均P<0.05);紫龍金組與埃克替尼組小鼠血清的CD4+T淋巴細(xì)胞比例、CD8+T淋巴細(xì)胞比例、B淋巴細(xì)胞比例差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 各組小鼠血清免疫細(xì)胞比例比較

2.5 各組小鼠腫瘤組織炎癥介質(zhì)水平比較 與模型組比較,紫龍金組、埃克替尼組、聯(lián)合觀察組小鼠腫瘤組織IL-2、TNF-α、IFN-γ水平低(均P<0.05);與紫龍金組及?？颂婺峤M比較,聯(lián)合觀察組小鼠腫瘤組織IL-2、TNF-α、IFN-γ水平低(均P<0.05);紫龍金組與?？颂婺峤M小鼠腫瘤組織IL-2、TNF-α、IFN-γ水平比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。見表3。

表3 各組小鼠腫瘤組織炎癥介質(zhì)水平比較

3 討論

肺癌是全球癌癥相關(guān)死亡的主要原因[2,13-14],肺癌的治療策略包括手術(shù)切除、放療、化療和靶向治療等[14]。手術(shù)切除是早期肺癌的主要治療方法,但對(duì)于晚期肺癌或存在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者來說,手術(shù)切除的效果有限[15]。放療和化療可以控制腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移,但常伴有嚴(yán)重的不良反應(yīng)[15]。近年來,靶向治療作為一種個(gè)體化的治療策略,在肺癌治療中取得了顯著療效[16-17]。針對(duì)EGFR突變的患者,埃克替尼等EGFR酪氨酸激酶抑制劑已經(jīng)成為標(biāo)準(zhǔn)的一線治療方案[17]。然而,由于腫瘤的異質(zhì)性和耐藥性的出現(xiàn),單一靶向治療的效果通常不持久。

既往研究表明,紫龍金作為傳統(tǒng)中藥,有多種生物活性成分(黃酮類、多糖類和三萜類化合物等),具有抗腫瘤、抗氧化和抗炎等多種作用[18]。本研究結(jié)果顯示,紫龍金與?？颂婺崧?lián)合治療后小鼠的腫瘤重量和小鼠腫瘤生長(zhǎng)抑制率高于二者單獨(dú)治療,這一發(fā)現(xiàn)說明紫龍金與埃克替尼聯(lián)合使用具有更強(qiáng)的抗腫瘤作用,能夠在一定程度上提高治療效果。

血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子是一種關(guān)鍵的血管生成因子,能夠促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和血管通透性增加,從而在腫瘤血管生成中發(fā)揮核心作用[19]。MVD則反映了腫瘤組織內(nèi)新生血管的數(shù)量和密度,是評(píng)估腫瘤血管生成程度的重要指標(biāo)。MVD的增加通常意味著腫瘤血管生成活躍,腫瘤細(xì)胞的供血和營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)充足,從而加速了腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移[20]。埃克替尼作為靶向治療藥物,可以抑制EGFR活性,進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和分裂[21-22]。紫龍金與埃克替尼聯(lián)合治療抑制Lewis肺癌小鼠血管生成的機(jī)制可能與二者共同抑制血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)有關(guān)。本研究結(jié)果顯示,紫龍金與埃克替尼聯(lián)合治療后小鼠血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平降低。本研究發(fā)現(xiàn),紫龍金與埃克替尼聯(lián)合治療后腫瘤內(nèi)MVD降低,說明二者降低了腫瘤的供血和營(yíng)養(yǎng),從而限制了腫瘤的生長(zhǎng)和擴(kuò)散。

CD4+T淋巴細(xì)胞,又稱輔助性T細(xì)胞,在免疫應(yīng)答中起到調(diào)控和協(xié)調(diào)的作用。它們能夠激活其他免疫細(xì)胞,如CD8+T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞,從而發(fā)起針對(duì)腫瘤細(xì)胞的特異性免疫反應(yīng)。CD4+T淋巴細(xì)胞的增加通常意味著機(jī)體免疫功能的增強(qiáng),有助于更有效地抵抗腫瘤[23]。CD8+T淋巴細(xì)胞,即細(xì)胞毒性T細(xì)胞,是機(jī)體抗腫瘤免疫的主要效應(yīng)細(xì)胞。它們能夠直接識(shí)別并殺滅腫瘤細(xì)胞,是機(jī)體對(duì)抗腫瘤的重要細(xì)胞。CD8+T淋巴細(xì)胞數(shù)量的增加和活性的提高,有助于增強(qiáng)機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞的清除能力[23]。紫龍金作為傳統(tǒng)中藥,已知具有抗炎和抗氧化作用,能夠激活淋巴細(xì)胞,增強(qiáng)免疫反應(yīng)。已有研究表明,紫龍金能夠調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的功能和數(shù)量,從而增強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤能力。埃克替尼作為靶向治療藥物,雖然主要針對(duì)腫瘤細(xì)胞的特定分子靶點(diǎn),但其對(duì)免疫系統(tǒng)的影響也不容忽視。一些研究表明,靶向治療藥物可能通過調(diào)節(jié)免疫微環(huán)境,增強(qiáng)機(jī)體的免疫反應(yīng),從而提高治療效果[24-25]。本研究結(jié)果顯示,紫龍金與?？颂婺崧?lián)合治療后小鼠免疫細(xì)胞比例升高。紫龍金和?？颂婺釁f(xié)同作用增加淋巴細(xì)胞活性,激活免疫系統(tǒng),使其更有效地抵抗腫瘤細(xì)胞。

IL-2是一種重要的免疫調(diào)節(jié)因子,能夠促進(jìn)T淋巴細(xì)胞的增殖和分化,增強(qiáng)機(jī)體的細(xì)胞免疫應(yīng)答。在抗腫瘤免疫中,IL-2能夠激活和增強(qiáng)CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞的活性,從而增強(qiáng)機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞的識(shí)別和清除能力[26]。TNF-α則是一種具有廣泛生物活性的細(xì)胞因子,能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡,抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。同時(shí),TNF-α也能夠激活其他免疫細(xì)胞,如巨噬細(xì)胞,進(jìn)一步增強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)[26]。本研究結(jié)果顯示,紫龍金與?？颂婺崧?lián)合治療后腫瘤組織IL-2、TNF-α、IFN-γ水平下降。IFN-γ作為一種免疫調(diào)節(jié)因子,可抑制腫瘤細(xì)胞的增殖,誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡,下調(diào)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá),從而抑制腫瘤血管的形成。檢測(cè)IFN-γ的水平可以間接反映腫瘤的生長(zhǎng)狀況。此外,在口咽癌的研究中顯示,紫龍金通過干預(yù)受體和通路活性以及調(diào)控TNF-α等信號(hào)通路發(fā)揮抗癌作用[27];而?？颂婺岜蛔C明在非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生發(fā)展中具有良好的抗腫瘤作用,但具體作用靶點(diǎn)尚未揭示[28]。本研究的結(jié)果表明紫龍金與?？颂婺岬穆?lián)合使用在抑制腫瘤生長(zhǎng)的同時(shí),也影響了腫瘤組織內(nèi)的免疫微環(huán)境,減少了炎癥介質(zhì)的釋放。

綜上所述,本研究采用Lewis肺癌荷瘤小鼠構(gòu)建模型,發(fā)現(xiàn)紫龍金與埃克替尼聯(lián)合治療可抑制腫瘤生長(zhǎng)及血管生成,增強(qiáng)免疫功能,減輕炎癥反應(yīng)。本研究為肺癌治療策略制定提供重要的理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。然而,本研究仍存在一些不足之處,需要在后續(xù)研究中加以改進(jìn)和完善。首先,本研究?jī)H在小鼠模型上進(jìn)行了初步探索,雖然取得了一定的研究成果,但尚需進(jìn)一步在人體上進(jìn)行臨床試驗(yàn),以驗(yàn)證紫龍金與?？颂婺崧?lián)合治療的療效和安全性。其次,本研究對(duì)于紫龍金與?？颂婺崧?lián)合治療的具體機(jī)制仍需要深入研究,以便更好地優(yōu)化治療方案,提高治療效果。此外,本研究未涉及紫龍金與?？颂婺崧?lián)合治療的最佳用藥劑量和用藥時(shí)間等問題,這也是后續(xù)研究需要關(guān)注的重要方向。

利益沖突聲明:無。