錢(qián)雪松 黃人杰 周俊成 彭三喜 郜軍藝 熊晶 高煥曄

摘要：探究威寧黑石地區(qū)移栽期對(duì)云煙87大田期碳代謝產(chǎn)物含量、碳代謝酶活性及其關(guān)鍵基因表達(dá)量的影響，為明確威寧黑石地區(qū)最適宜的移栽時(shí)期，提高煙葉品質(zhì)提供理論依據(jù)。以云煙87為試驗(yàn)材料，采用隨機(jī)區(qū)組試驗(yàn)設(shè)計(jì)，移栽期設(shè)4個(gè)水平：T1（4月10日）、T2（4月20日）、T3（4月30日）、T4（5月10日），2022年于畢節(jié)市威寧地區(qū)開(kāi)展田間試驗(yàn)，在大田不同生育時(shí)期測(cè)定云煙87碳代謝產(chǎn)物及關(guān)鍵酶基因?qū)σ圃云诘捻憫?yīng)。結(jié)果表明，云煙87旺長(zhǎng)期、現(xiàn)蕾期煙葉中還原糖含量呈先升后降的趨勢(shì)，且隨生育進(jìn)程推進(jìn)，各移栽期處理的還原糖含量也呈先升后降的趨勢(shì)，T2處理煙葉還原糖含量在多數(shù)生育期處于較高水平；各移栽期處理的總糖含量的變化規(guī)律在各生育期都不盡相同，T2處理煙葉總糖含量在多數(shù)生育期處于較高水平；淀粉含量則隨移栽期推遲，在生育前期呈先降后升的趨勢(shì)，在生育后期呈先降后升再下降的趨勢(shì)。碳代謝酶活性方面，移栽后30～70 d，α-淀粉酶（α-Amylase）活性最低的處理均為T(mén)3或T4處理，T2處理活性均為最高或第二高；在同一生育時(shí)期內(nèi)，蔗糖合成酶（SS）、蔗糖轉(zhuǎn)化酶（INV）、蔗糖磷酸合成酶（SPS）活性最高的多數(shù)為T(mén)3、T4處理。碳代謝關(guān)鍵酶基因表達(dá)量方面，α-淀粉酶基因（Ntα-Amylase）、蔗糖酶合成酶基因（NtSS）表達(dá)量總體以較早移栽處理（4月10日、4月20日）較高。相關(guān)性結(jié)果分析表明，碳代謝產(chǎn)物含量、碳代謝酶活性及其關(guān)鍵酶基因表達(dá)量之間在不同生育時(shí)期均有不同程度的聯(lián)系。綜上，威寧黑石地區(qū)4月20日移栽，有利于碳代謝活動(dòng)的進(jìn)行。

關(guān)鍵詞：煙草；移栽期；碳代謝產(chǎn)物；關(guān)鍵酶；基因；表達(dá)量

中圖分類(lèi)號(hào)：S572.01；S572.04? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1002-1302（2024）06-0117-08

收稿日期：2023-07-22

基金項(xiàng)目：貴州省煙草公司畢節(jié)市公司項(xiàng)目（編號(hào)：2022520500240190）。

作者簡(jiǎn)介：錢(qián)雪松（1997—），男，貴州遵義人，碩士研究生，主要從事煙草栽培生理生化研究。E-mail：2503844123@qq.com。

通信作者：高煥曄，博士，副教授，碩士研究生導(dǎo)師，主要從事煙草栽培生理生化研究。E-mail：294248298@qq.com。

煙草（Nicotiana tabacum L.）是茄科煙草屬一年生草本植物，作為我國(guó)重要的經(jīng)濟(jì)作物，對(duì)促進(jìn)我國(guó)經(jīng)濟(jì)發(fā)展具有重要意義。煙葉的品質(zhì)和產(chǎn)量直接影響煙草行業(yè)發(fā)展和煙草種植戶(hù)收益，煙葉品質(zhì)是多因素（遺傳因素、生態(tài)環(huán)境和栽培技術(shù)）協(xié)同作用的結(jié)果，其中栽培技術(shù)是影響煙葉優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)的關(guān)鍵因素之一^[1-3]。栽培技術(shù)能保證且調(diào)控烤煙碳代謝過(guò)程，從而影響烤煙碳代謝產(chǎn)物的積累及風(fēng)味的形成^[4]。移栽期是通過(guò)調(diào)整煙株的大田生長(zhǎng)期所處的氣候條件，進(jìn)而影響烤煙生長(zhǎng)發(fā)育、產(chǎn)量和品質(zhì)^[5-8]。因此，選擇適宜的移栽期，可充分利用氣候資源，最大限度地促進(jìn)優(yōu)質(zhì)煙葉形成，對(duì)烤煙品質(zhì)改良具有重要意義^[9]。

陳義強(qiáng)等的研究表明，移栽期過(guò)于提前，煙株在大田前期將遭遇低溫，易導(dǎo)致提早開(kāi)花，碳代謝活動(dòng)受到抑制，最終導(dǎo)致產(chǎn)量和品質(zhì)降低^[10]。若移栽期過(guò)于推遲，煙株苗期環(huán)境溫度較高，煙苗生長(zhǎng)加快，不利于碳代謝產(chǎn)物積累，煙葉不能正常成熟，烤煙品質(zhì)顯著降低^[11]。相關(guān)研究表明，烤煙碳氮代謝強(qiáng)度、協(xié)調(diào)性及其動(dòng)態(tài)變化均影響著煙葉化學(xué)成分含量和協(xié)調(diào)性、香吃味（感官評(píng)價(jià)中的香氣特性、口感特性）等^[12]。碳代謝過(guò)程中，各種酶活性的變化對(duì)碳代謝產(chǎn)物含量起重要調(diào)節(jié)作用^[13]。潘飛龍等研究發(fā)現(xiàn)，蔗糖合成酶、蔗糖轉(zhuǎn)化酶、蔗糖磷酸合成酶活性對(duì)蔗糖積累均有不同程度的影響，相關(guān)酶活性及基因表達(dá)量的差異可能是造成碳代謝產(chǎn)物差異的重要原因^[14-15]。隨著移栽期的后移，煙株的大田生育期相對(duì)推遲，整個(gè)生育期相應(yīng)縮短，碳代謝強(qiáng)度受到影響，從而對(duì)烤煙總糖、還原糖、淀粉等碳代謝產(chǎn)物有不同程度的影響^[16-23]。目前，相關(guān)研究對(duì)象大多是以低海拔為生態(tài)背景的煙區(qū)，對(duì)威寧黑石這種地處烏蒙山脈中部，屬亞熱帶季風(fēng)濕潤(rùn)氣候的高海拔煙區(qū)研究較少，同時(shí)還缺乏大田期碳代謝產(chǎn)物與碳代謝關(guān)鍵酶活性及其基因表達(dá)量的相關(guān)性研究。

本研究以云煙87為材料，通過(guò)測(cè)定威寧黑石地區(qū)不同移栽期處理下云煙87大田碳代謝產(chǎn)物含量、關(guān)鍵酶活性及關(guān)鍵基因表達(dá)量，明確該地區(qū)最適宜的移栽時(shí)期，為威寧黑石優(yōu)質(zhì)煙葉生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

1? 材料與方法

1.1? 試驗(yàn)地概況

試驗(yàn)于2022年在貴州省威寧縣黑石頭鎮(zhèn)河壩村煙草科技園（26.754 725°N，103.995 142°E）進(jìn)行，海拔2 218 m，年均氣溫10.9 ℃，年總積溫 3 996 ℃，年降水量981 mm，年無(wú)霜期182 d；試驗(yàn)地塊地勢(shì)平坦，肥力均勻，排水優(yōu)良，上一個(gè)種煙季節(jié)未發(fā)生青枯病、黑脛病等病害，距離公路300 m以上。試驗(yàn)地土壤為黃壤土，土壤pH值為5.88，耕層土壤有機(jī)質(zhì)含量11.32 g/kg，堿解氮、速效磷、速效鉀的含量分別為89.43、11.08、241.37 mg/kg。以綠肥為前作。

1.2 ?試驗(yàn)材料

供試品種為云煙87。

1.3? 方法

1.3.1? 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

不同移栽期處理設(shè)置4個(gè)水平：T1（4月10日移栽）、T2（4月20日移栽）、T3（4月30日移栽）、T4（5月10日移栽）。田間試驗(yàn)采取隨機(jī)區(qū)組試驗(yàn)設(shè)計(jì)，3次重復(fù)，每個(gè)小區(qū)種植4行（行距1.1 m，株距0.5 m），每行25株，試驗(yàn)地四周設(shè)置保護(hù)行。煙苗采用分期播種，以保證不同移栽期所用煙苗苗齡一致。其他栽培管理技術(shù)按所在基地單元生產(chǎn)技術(shù)方案執(zhí)行（基肥45 kg/hm₂，N∶P∶K=9∶13∶24；提苗肥3 kg/hm²，N∶P∶K=15∶8∶7；追肥23 kg/hm²，N∶P∶K=13∶0∶26）。

1.3.2? 測(cè)定項(xiàng)目

1.3.2.1? 鮮煙葉碳代謝主要產(chǎn)物大田期鮮煙葉碳代謝主要產(chǎn)物測(cè)定：各處理于團(tuán)棵期、旺長(zhǎng)期、現(xiàn)蕾期、成熟采烤期選擇代表性煙株3株，取樣后洗凈擦干，分上部葉、中部葉、下部葉（相對(duì)部位），置于烘箱中105 ℃殺青30 min，再在65 ℃下烘干至恒重。采用3，5-二硝基水楊酸（DNS）比色法測(cè)定煙葉總糖、還原糖、淀粉的含量。

1.3.2.2? 碳代謝關(guān)鍵酶活性各處理在煙株分別移栽后30、40、50、60、70 d進(jìn)行取樣，每個(gè)處理選擇長(zhǎng)勢(shì)一致的煙株，采集煙株中部葉片（相對(duì)位置為煙株中部），相同葉位每株僅取1次，選取9個(gè)單株為一次樣品采集，每3株混合為1個(gè)樣本，3次生物學(xué)重復(fù)，將上述煙葉分別沿主脈分為2份，迅速置于干冰中凍存，一份用于碳代謝相關(guān)酶活性的測(cè)定。采用ELISA檢測(cè)試劑盒測(cè)定碳代謝相關(guān)酶[α-淀粉酶（α-amylase）、蔗糖合成酶（SS）、蔗糖轉(zhuǎn)化酶（INV）、蔗糖磷酸合成酶（SPS）]的活性。

1.3.2.3? 碳代謝關(guān)鍵酶基因表達(dá)量另一份煙葉用于碳代謝關(guān)鍵基因酶表達(dá)的測(cè)定。利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT PCR）技術(shù)檢測(cè)碳代謝關(guān)鍵基因[α-淀粉酶基因（Ntα-amylase）、蔗糖合成酶基因（NtSS）]的相對(duì)表達(dá)量。引物如表1所示，PCR反應(yīng)體系和程序按照ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix（Vazyme，Q711）試劑盒進(jìn)行。

1.4? 氣象條件檢測(cè)

2022年4—9月試驗(yàn)地點(diǎn)氣象數(shù)據(jù)結(jié)果（圖1）表明，旬均氣溫在7.1～19.6 ℃之間，呈波浪線形變化；4月下旬、5月中下旬、6月上旬及7月上旬降水量比較充沛； 4月下旬日照時(shí)數(shù)最長(zhǎng)。地下5 cm及地下15 cm土壤溫度均在22.1 ℃左右波動(dòng)。不同土壤層濕度變化趨勢(shì)總體一致。7月上旬至9月中旬，地下5、15 cm土壤層濕均呈凹峰變化，且各土壤層間濕度差異不大。

1.5? 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

數(shù)據(jù)采用Excel 2016進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理和制表，Origin 2021進(jìn)行制圖，利用SPSS 26數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析、相關(guān)性分析；處理間差異顯著性比較采用鄧肯氏法（α＝0.05、α＝0.01），處理間相關(guān)性分析采用Pearson法，顯著性水平為α=0.05，極顯著性水平為α=0.01。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 移栽期對(duì)云煙87大田期碳代謝產(chǎn)物的影響

2.1.1? 移栽期對(duì)下部葉碳代謝產(chǎn)物的影響

為明晰移栽期對(duì)煙苗下部葉碳代謝產(chǎn)物的影響，在團(tuán)棵期、旺長(zhǎng)期、現(xiàn)蕾期和成熟期進(jìn)行下部葉取樣，測(cè)定煙葉還原糖、總糖和淀粉的含量（圖2）。隨著移栽期推遲，煙苗團(tuán)棵期、現(xiàn)蕾期下部葉中還原糖含量下降，T1和T2處理的還原糖含量顯著高于T3和T4處理（P<0.05）；成熟期煙苗下部葉還原糖含量以T2處理最佳，顯著高于其他移栽期，含量達(dá)到（10.11±1.01）%；煙苗生育進(jìn)程（現(xiàn)蕾期除外）中下部葉還原糖含量各移栽期均表現(xiàn)為先增加后減少。煙苗旺長(zhǎng)期T1處理和團(tuán)棵期T2處理下部葉總糖含量顯著高于其他3個(gè)處理。T4處理煙苗生育前期（團(tuán)棵期、旺長(zhǎng)期）下部葉淀粉含量顯著高于其他移栽期處理；盡管T1和T2處理煙苗發(fā)育前期（團(tuán)棵期、旺長(zhǎng)期、現(xiàn)蕾期）下部葉淀粉含量較低，但在成熟期時(shí)，T1和T2處理顯著高于T3和T4處理。

2.1.2? 移栽期對(duì)中部葉碳代謝產(chǎn)物的影響

為明晰移栽期對(duì)煙苗中部葉碳代謝產(chǎn)物的影響，在團(tuán)棵期、旺長(zhǎng)期、現(xiàn)蕾期和成熟期進(jìn)行中部葉取樣，測(cè)定煙葉還原糖、總糖和淀粉的含量（圖3）。不同移栽期處理對(duì)煙苗生育前期（團(tuán)棵期、旺長(zhǎng)期）中部葉還原糖含量影響不大，對(duì)煙苗生育后期存在顯著影響?，F(xiàn)蕾期時(shí)，T1處理煙苗中部葉還原糖含量達(dá)到（9.27±0.43）%，T2處理達(dá)到（9.76±1.22）%，T3處理達(dá)到（10.15±1.01）%，均顯著高于T4處理（6.25±1.23）%，而成熟期T3、T4處理顯著高于T1、T2處理；不同移栽期處理煙苗中部葉還原糖含量存在共性，即旺長(zhǎng)期和現(xiàn)蕾期快速積累，成熟期時(shí)含量降低。只有T1處理煙苗旺長(zhǎng)期中部葉總糖含量顯著高于其他3個(gè)處理，與上部葉的T1處理結(jié)果（圖4）相似。不同移栽期煙苗中部葉淀粉主要在成熟期積累，其中T2處理的淀粉含量最高，為（27.12±0.90）%，顯著高于其他處理，T3處理最低，為（15.10±0.91）%。

2.1.3? 移栽期對(duì)上部葉碳代謝產(chǎn)物的影響

為明晰移栽期對(duì)煙苗上部葉碳代謝產(chǎn)物的影響，在團(tuán)棵期、旺長(zhǎng)期、現(xiàn)蕾期和成熟期進(jìn)行上部葉取樣，測(cè)定煙葉還原糖、總糖和淀粉的含量（圖4）。煙草生育前期（團(tuán)棵期、旺長(zhǎng)期）上部葉還原糖含量以T2處理最高，后期各移栽期處理間無(wú)顯著差異。不同移栽期處理煙苗上部葉總糖含量在團(tuán)棵期表現(xiàn)出較大差異，T2處理最高，為（34.62±1.62）%，T3處理次之，為（21.54±1.93）%，T1、T4處理的含量較低，分別為（17.80±0.54）%、（15.78±0.14）%；T1處理煙苗旺長(zhǎng)期總糖含量高于其他處理。淀粉含量在不同生育時(shí)期無(wú)明顯變化規(guī)律。

2.2? 現(xiàn)蕾期與成熟采烤期碳代謝產(chǎn)物相關(guān)性分析

現(xiàn)蕾期碳代謝產(chǎn)物與成熟采烤期碳代謝產(chǎn)物相關(guān)性分析結(jié)果見(jiàn)表2，烤煙現(xiàn)蕾期總糖含量與成熟采烤期淀粉含量呈極顯著正相關(guān)關(guān)系（P<0.01），現(xiàn)蕾期淀粉含量與成熟采烤期淀粉含量呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系（r=-0.359）。結(jié)果表明，烤煙現(xiàn)蕾期總糖含量、淀粉含量的變化對(duì)成熟期煙葉淀粉積累影響較為明顯。

2.3? 移栽期對(duì)碳代謝關(guān)鍵酶活性的影響

為明晰移栽期對(duì)煙苗碳代謝酶活性的影響，在煙苗移栽后30、40、50、60、70 d取樣，測(cè)定α-淀粉酶、蔗糖合成酶、蔗糖轉(zhuǎn)化酶、蔗糖磷酸合成酶的活性，結(jié)果見(jiàn)圖5。α-amylase活性以T1處理的煙株活性較高，移栽后30、60、70 d煙株的α-amylase活性顯著高于其他移栽期處理，T2處理煙株在移栽 40 d 后α-amylase活性最高。T3處理煙株在移栽后30、40、50 d的SS活性最高，分別為1052.32、818.05、1 036.12 U/g；T4處理煙株則在移栽60 d后SS活性達(dá)到888.22 U/g，移栽70 d后達(dá)到1 093.34 U/g。隨著移栽期的推遲，煙株的INV活性總體呈增加趨勢(shì)，而在移栽后40 d其活性則呈降低趨勢(shì)；在移栽后50、60、70 d，INV活性總體較高的是T4處理煙株，分別為327.24、321.84、297.68 U/g，T3處理的INV活性在移栽后50、60 d最高；且各移栽期處理中INV活性總體均在移栽后40～60 d達(dá)到最高，INV活性在進(jìn)入旺長(zhǎng)期（移栽后30 d）后總體以較晚移栽的T4處理煙株較高。SPS活性在移栽后40 d以較晚移栽煙株表現(xiàn)較好，在移栽后30 d是T3處理煙株表現(xiàn)最好，為 88.12 U/g，移栽后40 d是T4處理煙株表現(xiàn)最好，為86.91 U/g；移栽后50～60 d SPS活性表現(xiàn)最好的是T1處理煙株，分別為94.26、71.29 U/g，移栽后30～70 d總體表現(xiàn)較差的是T2處理煙株。

2.4? 移栽期對(duì)碳代謝關(guān)鍵酶基因表達(dá)量的影響

Ntα-amylase和NtSS這2個(gè)基因是煙草碳代謝途徑中的關(guān)鍵基因，其表達(dá)量可以在一定程度上反映植株碳代謝強(qiáng)度。通過(guò)檢測(cè)不同移栽期烤煙生長(zhǎng)至30、40、50、60、70 d的碳代謝關(guān)鍵酶基因表達(dá)，進(jìn)一步明晰移栽期對(duì)云煙87煙葉碳代謝的影響。qRT PCR結(jié)果如表3所示，T1處理煙苗Ntα-amylase和NtSS基因表達(dá)量均處于較高水平，T2處理移栽后30 d表達(dá)量顯著高于其他處理。

2.5? 大田期碳代謝產(chǎn)物與碳代謝關(guān)鍵酶活性的相關(guān)性分析

對(duì)大田期碳代謝產(chǎn)物與碳代謝關(guān)鍵酶活性進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果見(jiàn)表4。在團(tuán)棵期，α-amylase活性與總糖含量、INV活性與淀粉含量均呈極顯著正相關(guān)關(guān)系（P<0.01），相關(guān)性系數(shù)均在0.700以上；SS活性與還原糖含量顯著負(fù)相關(guān)，與淀粉含量呈極顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系。在旺長(zhǎng)期，SPS活性與總糖含量呈極顯著正相關(guān)關(guān)系，r=0.850；SPS活性與淀粉含量呈顯著正相關(guān)關(guān)系，r=0.641；INV活性與總糖含量呈極顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r=-0.773。現(xiàn)蕾后，α-amylase活性與淀粉含量、SS活性與還原糖含量、SPS活性與還原糖和總糖含量、INV活性與總糖含量均為顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系。

2.6? 大田期碳代謝產(chǎn)物與碳代謝關(guān)鍵酶基因表達(dá)量的相關(guān)性分析

對(duì)大田期碳代謝產(chǎn)物與碳代謝關(guān)酶基因表達(dá)量進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果見(jiàn)表5。在團(tuán)棵期，僅有Ntα-amylase表達(dá)量與總糖含量的相關(guān)性達(dá)到顯著水平，相關(guān)系數(shù)r=0.590，而其他指標(biāo)的相關(guān)性總體為低度相關(guān)。

NtSS表達(dá)量在旺長(zhǎng)期對(duì)淀粉含量變化有較大影響，其相關(guān)性分析結(jié)果達(dá)到極顯著水平，相關(guān)系數(shù)r=0.900；在現(xiàn)蕾期，Ntα-amylase表達(dá)量與總糖含量呈顯著正相關(guān)。

2.7? 大田期碳代謝關(guān)鍵酶活性及其關(guān)鍵酶基因表達(dá)量的相關(guān)性分析

對(duì)大田期烤煙碳代謝關(guān)鍵酶基因表達(dá)量和碳代謝關(guān)鍵酶活性進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果見(jiàn)表6。烤煙移栽后30 d，Ntα-amylase表達(dá)量與α-amylase活性呈顯著正相關(guān)關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r=0.861。移栽后50 d，Ntα-amylase表達(dá)量與SPS活性呈顯著正相關(guān)關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r=0.936。移栽后60 d，Ntα-amylase、 NtSS表達(dá)量與α-amylase活性之間的正相關(guān)性系數(shù)均達(dá)到0.9以上，達(dá)極顯著水平，而Ntα-amylase、NtSS表達(dá)量與INV活性的負(fù)相關(guān)系數(shù)均在0.8以上，達(dá)顯著水平。

3? 討論

蔣代兵等研究發(fā)現(xiàn)，龍巖煙區(qū)煙株2017年1月15日移栽較常規(guī)的2017年1月25日移栽更有利于碳代謝產(chǎn)物積累^[24]。曾文龍等的研究表明，龍巖煙區(qū)煙株隨移栽期推遲，碳代謝產(chǎn)物含量逐漸下降^[25]。余永旭等的研究表明，重慶奉節(jié)煙區(qū)煙株隨移栽期推遲，碳代謝活動(dòng)逐漸減弱^[26]。這與本研究結(jié)果不一致，這是因?yàn)楦＝垘r煙區(qū)屬亞熱帶海洋性季風(fēng)氣候，海拔較低，降雨充沛，日照時(shí)數(shù)較少，煙株后期碳代謝衰弱，致碳代謝產(chǎn)物減少；重慶奉節(jié)煙區(qū)屬亞熱帶濕潤(rùn)季風(fēng)氣候，降雨充沛，海拔受地形變化影響。說(shuō)明煙株碳代謝活動(dòng)受降雨條件影響較大，降雨過(guò)多可能會(huì)受抑制。

白應(yīng)香研究發(fā)現(xiàn)，黔西南煙區(qū)云87隨移栽期推遲，總糖含量增加，還原糖含量降低^[27]。這與本研究有所差異，可能其所設(shè)置移栽處理間隔較小所致。盧鵬宇等研究發(fā)現(xiàn)，清鎮(zhèn)煙區(qū)煙株隨移栽期推遲，還原糖含量、總糖含量均呈上升趨勢(shì)^[28]。高真真等的研究表明，河南煙區(qū)煙株上6葉總糖含量、還原糖含量隨移栽期推遲呈上升趨勢(shì)^[29]。這與本研究結(jié)果一致。

研究顯示，通過(guò)對(duì)相關(guān)酶活性的調(diào)控可以改變烤煙碳代謝活動(dòng)的強(qiáng)弱，進(jìn)而影響碳代謝產(chǎn)物含量^[30]。白應(yīng)香研究發(fā)現(xiàn)，在烤煙大田生長(zhǎng)期，不同移栽期處理煙株在移栽40～50 d后α-amylase活性達(dá)到峰值，之后下降，說(shuō)明煙株生長(zhǎng)前期對(duì)淀粉的積累量較少，隨著煙株生育進(jìn)程的推進(jìn)，淀粉積累量逐漸增加，進(jìn)入煙葉成熟期后煙葉淀粉含量又逐漸降低^[27]；本研究中，α-amylase活性總體以較早移栽的處理較高，這與較早移栽處理前期降雨和光照均充足有關(guān)。王寒等研究發(fā)現(xiàn)，提前移栽處理煙株淀粉酶活性峰值出現(xiàn)推遲，提前移栽處理煙株淀粉酶活性峰值出現(xiàn)的時(shí)間提前^[31]；本研究中SS、INV和SPS活性同樣總體以較晚移栽的處理較高，且SS的活性在團(tuán)棵期對(duì)還原糖含量有顯著影響，SPS、INV活性對(duì)烤煙主要碳代謝產(chǎn)物的合成和積累的影響主要集中在旺長(zhǎng)期至現(xiàn)蕾期。碳代謝相關(guān)基因?qū)熤晏即x產(chǎn)物的合成與積累具有重要的調(diào)控作用^[32]。潘飛龍研究發(fā)現(xiàn)，烤煙適熟至過(guò)熟階段，煙葉NtSS表達(dá)量對(duì)煙葉糖代謝活動(dòng)的調(diào)控作用較強(qiáng)^[33]。王紅麗等研究發(fā)現(xiàn)，隨著煙葉的成熟度增加，NtSS表達(dá)量升高^[34]。白應(yīng)香研究發(fā)現(xiàn)，在黔西南州亞熱帶季風(fēng)濕潤(rùn)氣候條件下，云煙87移栽后50～60 d，NtSS表達(dá)量呈下降趨勢(shì)^[27]，表達(dá)量總體變化趨勢(shì)與魯黎明等的研究結(jié)論^[35]一致。本研究中，Ntα-Amylase、NtSS基因表達(dá)量總體以較早移栽處理（T1、T2處理）較高。碳代謝關(guān)鍵酶基因?qū)μ即x產(chǎn)物合成和積累的影響主要在煙株進(jìn)入旺長(zhǎng)期以后，其中旺長(zhǎng)期NtSS表達(dá)量與淀粉含量變化極顯著正相關(guān)。

4? 結(jié)論

對(duì)于云煙87大田期煙葉的碳代謝產(chǎn)物方面，隨著生育進(jìn)程推進(jìn)，云煙87旺長(zhǎng)期、現(xiàn)蕾期煙葉中還原糖含量呈先升后降的趨勢(shì)，各移栽期處理的還原糖含量也呈先升后降的趨勢(shì)，T2處理煙葉還原糖含量在多數(shù)生育期處于較高水平；各移栽期處理的總糖含量的變化規(guī)律在各生育期都不盡相同，T2處理煙葉總糖含量在多數(shù)生育期處于較高水平；淀粉含量則隨移栽期推遲，在生育前期呈先降后升的趨勢(shì)，在生育后期呈先降后升再下降的趨勢(shì)。碳代謝酶活性方面，移栽后30～70 d，α-amylase活性最低的處理均為T(mén)3或T4處理，T2處理活性均為最高或第二高；在同一生育時(shí)期內(nèi)，SS、INV、SPS活性最高的多數(shù)為T(mén)3、T4處理。碳代謝關(guān)鍵酶基因表達(dá)量方面，Ntα-amylase、NtSS表達(dá)量總體以較早移栽處理（4月10日、4月20日）較高。相關(guān)性結(jié)果分析表明，碳代謝產(chǎn)物含量、碳代謝酶活性及其關(guān)鍵基因表達(dá)量之間在不同生育時(shí)期均有不同程度的聯(lián)系。綜上，威寧黑石地區(qū)4月20日移栽，有利于碳代謝活動(dòng)的進(jìn)行。

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