郭司群 魯海濤 遲曉雪 郭剛 魏紅

【摘?要】?目的：建立亞瑪熏藥散中木香烴內(nèi)酯的含量測定方法。方法：采用高效液相色譜法，色譜柱為ZORBOX SB-C₁₈5 μm4.6 mm×250 mm；流動相為乙腈∶水（50∶50）洗脫；流速：0.8 mL/min；柱溫：35 ℃；檢測波長：225 nm。結(jié)果：木香烴內(nèi)酯在8.59 ～85.91 μg/mL的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.9999，回收率為97.4%。結(jié)論：該方法經(jīng)方法學(xué)驗證準確可行，可用于亞瑪熏藥散的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】?高效液相色譜法；亞瑪熏藥散；木香烴內(nèi)酯

【中圖分類號】R284.1???【文獻標志碼】 A????【文章編號】1007-8517（2024）03-0033-04

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.03.zgmzmjyyzz202403008

Study on Deter mination of Costunolide in Yama Fumigation Powder

GUO Siqun1?LU Haitao2?CHI Xiaoxue2*?GUO Gang3?WEI Hong2

1.Hulunbeier Institute for Food and Drug Control，Hulunbeier 021008，China;

2.Hulunbuir Institute of Forestry and Grassland Science， Hulunbeier 021008，China;

3.Hulunbeier Center for Disease Control and Prevention Inner Mongolia， Hulunbeier 021008，China

Abstract：Objective Aim to establish a method for the deter mination of Costunolide in Yama fumigation powder.Methods High performance liquid chromatography was used.?The column was ZORBOX SB-C₁₈5 μm 4.6 mm×250 mm， the mobile phase was acetonitrile∶water （50∶50）， the flow rate was 0.8 mL/min， the column temperature was 35 ℃， and the detection wavelength was 225 nm.?Results the linear relationship of Costunolide was good in the range of 8.59-85.91 μg/mL，r=0.9999， the recovery rate was 97.4%.Conclusion ?The method is proved to be accurate and feasible by methodology， and can be used for the quality control of Yama fumigation powder.

Keywords：HPLC；Yama Fumigation Powder；Costunolide

蒙藥制劑亞瑪熏藥散由紅大戟、石菖蒲、木香、草阿魏、姜黃、沒藥、商路、生草烏和人工麝香九味藥組成。具有清熱、解毒、消“粘”、行“赫依”開竅和止痛的功效，用于治療頭刺痛、白內(nèi)障、黑亞瑪病^［1］、腦瘤等。木香，性溫、味辛苦，具有行氣止痛、調(diào)中導(dǎo)滯的功效^［2］，木香烴內(nèi)酯作為木香主要化學(xué)成分具有抗炎鎮(zhèn)痛、抑制微生物活性、抑制多巴胺所致的神經(jīng)細胞毒性、保護神經(jīng)元^［3］和抗腫瘤等作用^［4］，這些藥理作用均與亞馬熏藥散治療頭刺痛，粘蟲微生物引起的黑亞瑪病和腦瘤等相關(guān)，因此本實驗選取木香烴內(nèi)酯作為質(zhì)量控制成分，通過建立高效液相色譜法，對處方中木香烴內(nèi)酯的含量進行測定，最終初步確定亞瑪熏藥散中木香烴內(nèi)酯的含量限度。

1?儀器與試劑

島津LC-20AT型高效液相色譜儀（二極管陣列檢測器）；KQ2200DB型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；賽多利斯BSA224S型、BP211D型電子天平（德國賽多利斯科技有限公司） ；亞瑪熏藥散樣品由內(nèi)蒙古國際蒙醫(yī)醫(yī)院提供（批號：20191114、20190522、20200810）；木香烴內(nèi)酯（來源：中國食品藥品檢定研究院 ；批號：111524-201911 純度99.9%）；乙腈、甲醇（色譜純 Fisher Chemical）；自制純化水。

2?方法與結(jié)果

2.1?色譜條件?色譜柱：ZORBOX SB- C₁₈5 μm4.6 mm×250 mm； 流動相為乙腈∶水（50∶50）；流速：0.8 mL/min；柱溫：35 ℃；檢測波長：225 nm；進樣量：10 μL。

2.2?溶液的制備

2.2.1?對照品儲備溶液的制備?精密稱取木香烴內(nèi)酯對照品4.30 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇適量使溶解，并加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成每1 mL含木香烴內(nèi)酯85.91 μg的對照品儲備溶液。

2.2.2?供試品溶液的制備?取本品約1.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定重量，超聲（功率350 W，頻率40 kHz）30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.3?陰性對照溶液制備?取按處方比例并以相同工藝制備的缺木香的陰性供試品，按供試品溶液制備法制得陰性對照溶液。

2.3?干擾試驗?分別取2.2.1、2.2.2、2.2.3項下對照品儲備溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10 μL，按2.1項下色譜條件進行測定，結(jié)果表明：其他組分對木香烴內(nèi)酯的測定無干擾，結(jié)果如圖1、圖2和圖3所示。

2.4?方法學(xué)考察

2.4.1?線性關(guān)系試驗?分別精密量取2.2.1項下對照品儲備溶液1.0 mL、2.5 mL、5.0 mL、7.5 mL和10 mL分別置于10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成木香烴內(nèi)酯的8.59 μg/mL、21.48 μg/mL、42.96 μg/mL、64.43 μg/mL和85.91 μg/mL系列濃度溶液。按2.1項下色譜條件，以濃度X（μg/mL）為橫坐標，峰面積Y為縱坐標，繪制標準曲線。結(jié)果見表1 。

2.4.2?精密度試驗?取2.2.1項下對照品儲備溶液，按2.1色譜條件連續(xù)進樣5針，記錄色譜峰峰面積，羥基紅花黃色素 A 峰面積的 RSD為0.21%，表明儀器精密度良好。

2.4.3?穩(wěn)定性試驗?取同一供試品溶液，分別于0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h進行測定。結(jié)果見表2。表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.4?重復(fù)性試驗?取樣品（批號：20191114）供試品6份，各約1.5 g，精密稱定，按2.2.2項下方法制備，按2.1項下色譜條件測定。結(jié)果見表3。表明該方法的重復(fù)性良好。

2.4.5?回收率試驗?取已知含量的樣品（批號：20191114，含量為1.33 mg/g）9份，各約0.75 g，精密稱定，分別置9個具塞錐形瓶中，精密加入用甲醇配制的0.3063 mg/mL木香烴內(nèi)酯對照品溶液2.4 ?mL、3.0 ?mL和3.6 ?mL，按2.2.2項下方法制備，按2.1項下色譜條件測定，計算回收率。結(jié)果見表4 。表明該方法的準確度良好。

2.5?樣品含量測定?取三批樣品按2.2.2項下方法制備，按2.1項下色譜條件測定。結(jié)果見表5。

2.6?木香藥材含量測定?取三批樣品生產(chǎn)的木香藥材按2.2.2項下方法制備，按2.1項下色譜條件測定。結(jié)果見表6。

3?討論

3.1?色譜條件的選擇?參考《中國藥典》2020年版一部“木香”^［5］含量測定項下流動相組成，分別考察甲醇-水、乙腈-水不同流動相比例時木香烴內(nèi)酯的保留時間和分離情況，結(jié)果表明乙腈∶水（50∶50）時，木香烴內(nèi)酯能與其他成分達到較好分離。采用紫外-可見分光光度計對2.2.1項下木香烴內(nèi)酯對照品儲備溶液在190～800 nm波長范圍掃描，結(jié)果在波長225 nm處有最大吸收，因此選擇225 nm作為檢測波長。

3.2?供試品溶液制備?分別使用甲醇和乙腈作為提取溶劑進行考察，結(jié)果表明甲醇提取量明顯高于乙腈。對加熱回流、超聲提取和浸泡過夜超聲提取3種提取方法進行比較，結(jié)果表明3種提取方法含量差異并不明顯，考慮操作的簡便性，最終選用超聲作為提取方法。同時又對超聲20 min、30 min和40 min進行比較，結(jié)果表明超聲30 min和40 min時，木香烴內(nèi)酯的提取量明顯高于超聲20 min，且超聲30 min和40 min差異不大，所以本次實驗選擇超聲時間為30 min。

3.3?結(jié)果分析?通過對三批樣品中木香烴內(nèi)酯含量結(jié)果分析，平均含量為1.35 mg/g，同法對生產(chǎn)所用木香藥材中木香烴內(nèi)酯含量進行測定，結(jié)果為10.16 mg/g，按理論值折算，成品應(yīng)含木香烴內(nèi)酯為10.16 mg/g×1000/7251= 1.40 mg/g，轉(zhuǎn)移率=1.35/1.40×100%=96.4%，表明制劑制備工藝有利于木香烴內(nèi)酯的溶出。由于《中國藥典》2020年版一部中，未單獨規(guī)定木香中木香烴內(nèi)酯含量限度，考慮到藥材質(zhì)量差異，因此選擇樣品的實測值下浮20%確定限度，初步確定本品每1 g含木香以木香烴內(nèi)酯（C₁₅H₂₀O₂）計，不得少于1.0 mg。

實驗結(jié)果表明建立的高效液相色譜法簡便可行、結(jié)果準確，可用于亞瑪熏藥散的質(zhì)量控制。

參考文獻

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［4］潘陽，王小靜，潘娟，等.木香烴內(nèi)酯的藥理作用及構(gòu)效關(guān)系研究進展［J］.中南藥學(xué)， 2013（2）：108-112.

［5］國家藥典委員會.中國藥典（一部）［M］.中國醫(yī)藥科技出版社，2020：62-63.

（收稿日期：2023-05-05?編輯：陶希睿）

作者簡介：郭司群（1986—），男，漢族，碩士研究生，副主任中藥師，研究方向為藥物分析研究。E-mail：guosiqun33@163.com

通信作者：遲曉雪（1986—），女，漢族，碩士研究生，副研究員，研究方向為草原生態(tài)保護與建設(shè)研究。E-mail：chixiaoxue.333@163.com