王源元

（大連市普蘭店區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，遼寧 大連 116200）

1 病原特點(diǎn)

牛病毒性腹瀉是由牛病毒性腹瀉粘膜病毒感染所致，該病毒是黃病毒科瘟病毒屬的單股RNA病毒，與羊邊界病毒以及豬瘟病毒的關(guān)系非常密切。該病毒粒子呈圓形，可在牛的鼻甲骨等細(xì)胞中生長(zhǎng)和繁殖。按照臨床表現(xiàn)將其劃分為2 種生物型，即致細(xì)胞病變型和非致細(xì)胞病變型；如果由于單鏈按照基因型可劃分基因玉型和基因域型，而且每種基因型所有的突變率很高，每種基因型都有多種不同的毒株，并且不同毒株間表現(xiàn)出的致病性也具有明顯差異。實(shí)驗(yàn)室中將其置于電鏡之下能觀察到圓形的病毒粒子。該病毒對(duì)胰酶、氯仿以及乙醚的敏感性極強(qiáng)，對(duì)低溫環(huán)境具有相應(yīng)的抵抗力，如果將其置于超過56 ℃的環(huán)境中則會(huì)在短時(shí)間內(nèi)被滅活。

2 流行特點(diǎn)

該病毒具有廣泛的宿主范圍，牛、羊、豬、鹿等動(dòng)物都易感，其中以牛的易感性最高。犢牛和老齡?；疾÷瘦^高。該病毒存在于病牛的多種體液中，可對(duì)外界環(huán)境造成污染。一旦健康牛群接觸到已經(jīng)被污染的生產(chǎn)環(huán)境，病毒通常會(huì)經(jīng)呼吸道和消化道入侵。此外，該病毒也能經(jīng)過胎盤垂直傳播。

在飼養(yǎng)生產(chǎn)中，如果日常給肉牛供應(yīng)的飼料中營(yíng)養(yǎng)配比失衡、牛群飼養(yǎng)密度過大、或飼養(yǎng)環(huán)境的衛(wèi)生條件惡劣等，都會(huì)導(dǎo)致牛群感染病毒性腹瀉。臨床以4～24 月齡為發(fā)病的集中階段，但以6～8 月齡的牛群是患病較為嚴(yán)重的群體，但此年齡段的牛群感染后死亡率不高，其中隱性感染的病例占比大于50%。

對(duì)此，建議相關(guān)部門加強(qiáng)對(duì)肉牛飼養(yǎng)管理，提高飼料營(yíng)養(yǎng)水平，合理控制飼養(yǎng)密度，并加強(qiáng)對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)的衛(wèi)生監(jiān)管。同時(shí)，要加強(qiáng)病毒監(jiān)測(cè)與防控工作，及時(shí)發(fā)現(xiàn)并處理疫情，以保障畜牧業(yè)健康發(fā)展。

3 臨床癥狀

3.1 急性型 （1）成年牛感染后多以急性發(fā)病為主，牛群多突然發(fā)病，病牛體溫超過40 ℃?；寂Ｊ秤档蜕踔翉U絕，精神狀態(tài)極差，伴隨有干咳以及呼吸困難等癥狀而且嚴(yán)重。病牛感染后2～7 d 內(nèi)，可見有腹瀉癥狀，其排泄物大多為水樣并在其中混雜一些黏液和血液，有惡臭氣味。此外，病?？谇火つび胁煌潭鹊拿訝€與壞死變化，患牛有流涎的癥狀。妊娠母牛感染后，會(huì)增加其流產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)，或會(huì)在母牛妊娠中期生產(chǎn)出腦部發(fā)育不全的犢牛。母牛感染后泌乳量會(huì)嚴(yán)重降低。除此之外，病牛發(fā)生急性感染時(shí)，其體內(nèi)的白細(xì)胞數(shù)量顯著減少，直接損害機(jī)體的淋巴組織，同時(shí)血液中血小板的數(shù)量也會(huì)降低，臨床可見流鼻血。其排泄物中夾雜有血液，嚴(yán)重感染的病牛在注射后或被蚊蟲叮咬后都有出血癥狀。該病毒感染后在病牛的鼻竇、口腔、腸黏膜等部位大量繁殖，極易造成病毒血癥。通常病牛在出現(xiàn)感染的15～30 d 內(nèi)就會(huì)死亡。但是也有一些病?？稍谳^短時(shí)間內(nèi)康復(fù)，而且黏膜損傷也會(huì)在10～14 d內(nèi)愈合。因此，對(duì)該病應(yīng)采取嚴(yán)格的監(jiān)控和治療措施，以降低疫情的擴(kuò)散風(fēng)險(xiǎn)，提高治愈率。

3.2 慢性型 該型病牛主要的癥狀是間歇性的腹瀉、食欲明顯降低，其眼角流淚，口腔黏膜有潰瘍并伴有糜爛等變化，病牛的糞便中有血液和黏液混雜。其體重會(huì)持續(xù)下降，如果不能夠及時(shí)采取有效措施，病牛一般會(huì)在幾周或幾個(gè)月后死亡。臨床中這類病例數(shù)量不多，但病死率卻高達(dá)90%，會(huì)給養(yǎng)殖業(yè)造成極大的損失。

妊娠母牛，尤其是妊娠40～125 d 的母牛感染，會(huì)嚴(yán)重危害未出生的胎牛，導(dǎo)致死胎或流產(chǎn)發(fā)生。由于是隱性感染，很難被及時(shí)發(fā)現(xiàn)，進(jìn)一步增加了防治的難度。因此，必須加強(qiáng)對(duì)牛群的日常觀察和檢疫工作，及早發(fā)現(xiàn)疫情并采取果斷措施，以防止疫情擴(kuò)散和危害加重。同時(shí)，要積極推進(jìn)養(yǎng)殖業(yè)的科學(xué)管理和技術(shù)升級(jí)，提高養(yǎng)殖戶的防疫意識(shí)和防治能力，從源頭上減少該病的發(fā)生和傳播。

3.3 剖檢變化 （1）病牛的外觀癥狀：明顯營(yíng)養(yǎng)不良，關(guān)節(jié)普遍腫脹，眼結(jié)膜呈黃色，在其舌下有潰瘍狀的斑點(diǎn)。（2）剖檢變化：剖檢病死?？梢娖淦は轮旧n白；胃大網(wǎng)膜有枝狀充血變化；腎臟腫大并呈紅褐色，其包膜比較容易剝離且質(zhì)脆，同時(shí)可見到灰白色的壞死病灶；其肝臟腫脹，其邊緣為鈍圓形，切面外翻；其膽囊可見有出血斑點(diǎn)，膽汁呈油狀；肺臟充血和淤血，并伴有壞死性結(jié)節(jié)；心臟腫大，心包中的液體主要為淡黃色，發(fā)現(xiàn)其冠狀溝水腫且為膠凍樣；小腸內(nèi)容物為灰色，并散發(fā)出惡臭氣味。這些癥狀和病變可作為診斷和治療的參考依據(jù)。

4 診斷方法

4.1 病毒分離鑒定 無(wú)菌采集病牛的血液樣本，經(jīng)過反復(fù)凍融和抗生素添加，等處理后接種于牛腎系帶細(xì)胞或犢牛的睪丸細(xì)胞中。經(jīng)過多代的盲傳培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞會(huì)有些病變特征。將病變細(xì)胞與標(biāo)準(zhǔn)毒株產(chǎn)生的細(xì)胞病變比對(duì)。呈現(xiàn)完全一致性，則可判定為病毒性腹瀉病毒感染病例。此外，病毒分離鑒定的最低檢測(cè)數(shù)量需達(dá)到10 個(gè)/mL，這種方法耗時(shí)且需要較高的技術(shù)要求，不適于大規(guī)模流行病學(xué)調(diào)查。

4.2 瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn) 采集病牛糜爛以及潰瘍部位周圍的黏膜樣本，直接與牛病毒性腹瀉黏膜病毒陽(yáng)性血清進(jìn)行瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果就能夠準(zhǔn)確判定待檢牛的感染情況。但需注意，瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)雖然操作便捷、成本低廉，但比血清中和試驗(yàn)的敏感度低，僅能粗略檢測(cè)血清中的抗體?？捎糜诩膊〉某鹾Y，確診還需需結(jié)合其他檢測(cè)方法以提高準(zhǔn)確性。

4.3 血清中和試驗(yàn) 在無(wú)菌條件下將病毒接種至牛睪丸細(xì)胞或犢牛腎細(xì)胞中培養(yǎng)。隨后觀察發(fā)現(xiàn)此病毒與待檢血清出現(xiàn)反應(yīng)。再次將其接種至相應(yīng)的細(xì)胞，仔細(xì)觀察細(xì)胞的病變。間隔4 周對(duì)待檢血清進(jìn)行2 倍的稀釋處理，若滴度明顯升高4 倍或以上，即可判定為陽(yáng)性。血清中和試驗(yàn)?zāi)軌蚪o實(shí)驗(yàn)室的定性分析提供確切依據(jù)，同時(shí)也能實(shí)現(xiàn)精確的定量分析。該法有較高的檢出率和良好的重復(fù)性，是目前實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)牛病毒性腹瀉比較常用的方法。由于一部分病牛為隱性感染，會(huì)產(chǎn)生免疫耐受，其體內(nèi)可能不產(chǎn)生抗體。因此，單純的血液抗體檢測(cè)并不能全面反映感染的真實(shí)狀況。

4.4 免疫熒光技術(shù) 該方法通過免疫熒光染色技術(shù)結(jié)合顯微鏡觀察進(jìn)行相應(yīng)檢測(cè)，可以直接檢測(cè)病料的細(xì)胞培養(yǎng)物或病變組織冰凍切片內(nèi)的病毒粒子。如果細(xì)胞感染病毒，則其胞漿中會(huì)有熒光顆粒。該法的檢出率超過98%，對(duì)非致細(xì)胞病變毒株的檢測(cè)比較有效。

4.5 RT-PCR 法 根據(jù)牛病毒性腹瀉病毒基因序列設(shè)計(jì)的引物，通過實(shí)時(shí)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)，能夠精準(zhǔn)檢測(cè)待檢器官、組織、血液和排泄物中所存在的病毒，可以有效區(qū)分不同的毒株。即使病毒被滅活，該技術(shù)依然能確保對(duì)病毒檢測(cè)的準(zhǔn)確性。該法檢測(cè)速度快，特異性強(qiáng)，成本低。但檢測(cè)所需的試驗(yàn)儀器和試劑較昂貴，合成引物的難度也較大，不是臨床應(yīng)用的首選。

4.6 核酸雜交技術(shù) 通過堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，兩條單鏈核酸退火后可形成穩(wěn)定的雙鏈結(jié)構(gòu)。該技術(shù)具有高度的特異性以及敏感性，用于直接檢測(cè)目標(biāo)器官、組織、細(xì)胞而且是無(wú)創(chuàng)的，對(duì)病毒還可進(jìn)行精確的分型。核酸雜交技術(shù)不僅安全可靠，操作簡(jiǎn)便，而且檢測(cè)速度快，可在技術(shù)成熟后作為有效的技術(shù)手段進(jìn)行推廣應(yīng)用。通過該技術(shù)，可在同一張檢測(cè)膜上一次性完成多個(gè)樣品的檢測(cè)分析，為實(shí)現(xiàn)高通量檢測(cè)提供有力支持。

5 防治方法

5.1 治 療 目前，該病呈現(xiàn)大范圍流行態(tài)勢(shì)，還沒有特效藥物治療，多采用幾對(duì)癥治療。（1）病牛出現(xiàn)血小板減少的癥狀，及時(shí)進(jìn)行輸血救治。（2）出現(xiàn)發(fā)熱以及腹瀉的患牛，要盡量避免其受到應(yīng)激刺激，改善飼養(yǎng)生產(chǎn)環(huán)境。配合使用抗生素預(yù)防繼發(fā)性的感染，但皮質(zhì)類和固醇類的藥物盡量不用，否則會(huì)有加重消化系統(tǒng)潰瘍和糜爛癥狀。用40 g磺胺脒與30 g 次碳酸鉍，2 次/d，首次用藥量加倍。與此同時(shí)，用5%的葡萄糖生理鹽水3 L 與300 萬(wàn)U 的丁胺卡那霉素混合，靜脈注射。感染嚴(yán)重的病?？杉∪庾⑸渚S生素C 和安鈉咖注射液，或?qū)⑵渑c復(fù)方磺胺甲唑粉、恩諾沙星聯(lián)配合使用，可肌肉或靜脈注射。

5.2 預(yù) 防 疫苗免疫是預(yù)防牛病毒性腹瀉的首選方式，接種牛病毒性腹瀉弱毒疫苗或豬瘟弱毒疫苗。為有效控制該病，需要逐步對(duì)牛群凈化。要定期的監(jiān)測(cè)牛群的血清抗體水平，對(duì)陽(yáng)性反應(yīng)牛立即進(jìn)行淘汰或撲殺后采取無(wú)害化處理。對(duì)病牛接觸過的環(huán)境以及生產(chǎn)設(shè)備都要進(jìn)行嚴(yán)格消毒。飼養(yǎng)場(chǎng)應(yīng)該始終堅(jiān)持自繁自養(yǎng)的原則，必須引種時(shí)應(yīng)對(duì)引進(jìn)的肉牛采取隔離檢疫措施，結(jié)果為陰性且健康狀況良好的可混群飼養(yǎng)。為避免細(xì)菌和病毒產(chǎn)生耐藥性，飼養(yǎng)場(chǎng)在消毒時(shí)建議使用兩種或兩種以上的消毒藥物進(jìn)行輪替。

6 結(jié)語(yǔ)

牛病毒性腹瀉病作為一種具有高傳染性和傳播途徑復(fù)雜多樣的動(dòng)物疫病，目前還沒有特效藥物治療，因此，必須高度重視對(duì)該病的預(yù)防工作，采取綜合性的措施降低其發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)，從而保障養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展和公共衛(wèi)生安全。