岳 超，張文婷，鄭 成，梁晶晶，宋劍鋒，陳碧蓮，郭增喜，趙維良

基于HPLC指紋圖譜研究衢枳殼與不同栽培變種枳殼質(zhì)量差異

岳 超1，張文婷1，鄭 成1，梁晶晶1，宋劍鋒3，陳碧蓮1，郭增喜1，趙維良2*

1. 浙江省食品藥品檢驗研究院，國家市場監(jiān)管重點實驗室（功能食品質(zhì)量與安全領(lǐng)域），浙江省市場局重點實驗室（保健品質(zhì)量安全重點實驗室），國家藥品監(jiān)督管理局中成藥質(zhì)量評價重點實驗室，浙江 杭州 310052 2. 杭州師范大學(xué)，浙江 杭州 311121 3. 衢州市食品藥品檢驗研究院，浙江 衢州 324002

基于HPLC指紋圖譜技術(shù)和統(tǒng)計學(xué)分析方法，比較和評價常山柚橙‘Changshan-huyou’未成熟的干燥果實（衢枳殼）與不同栽培變種酸橙間質(zhì)量的一致性與差異性。使用Extend XDB C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），檢測波長330 nm，以乙腈-0.1%甲酸水溶液為流動相進(jìn)行梯度洗脫，體積流量1.0 mL/min，柱溫為30 ℃。通過聚類分析（cluster analysis，CA）和主成分分析（principal component analysis，PCA）對35批樣品的指紋圖譜進(jìn)行評價。建立的酸橙枳殼的指紋圖譜共有模式獲得24個共有峰，并指認(rèn)出12個目標(biāo)化合物。13批衢枳殼樣品的相似度結(jié)果范圍0.920～0.947，質(zhì)量一致性好，不同基原枳殼相似度結(jié)果為0.127～0.990，質(zhì)量差異大。CA將衢枳殼均與酸橙枳殼聚為一類，朱欒和部分黃皮酸橙單獨聚為一類，結(jié)合PCA獲得區(qū)分不同基原枳殼的差異性標(biāo)志物，其中9個已知化合物分別為葡萄內(nèi)酯水合物、川陳皮素、柚皮苷、桔皮素、木犀草素、新橙皮苷、蕓香柚皮苷、橙皮苷、柚皮素。研究表明衢枳殼的化學(xué)成分與酸橙枳殼相似度高，且藥材質(zhì)量一致性好，藥材質(zhì)量優(yōu)于朱欒和塘橙，推薦作為《中國藥典》的枳殼植物基原之一。同時應(yīng)增加區(qū)分不同基原枳殼的關(guān)鍵化合物作為指標(biāo)成分，以全面準(zhǔn)確的評價和控制枳殼藥材質(zhì)量。

衢枳殼；常山柚橙；指紋圖譜；化學(xué)模式分析；圣草次苷；蕓香柚皮苷；柚皮苷；柚皮素；橙皮苷；新橙皮苷；橘皮內(nèi)酯水合物；木犀草素；橘皮內(nèi)酯；川陳皮素；桔皮素；葡萄內(nèi)酯

枳殼為蕓香科柑橘屬植物酸橙L.及其栽培變種的干燥未成熟果實，《中國藥典》2020版（簡稱“藥典”）中規(guī)定4個栽培變種為黃皮酸橙‘Huangpi’、代代花‘Daidai’、朱欒‘Chuluan’及塘橙‘Tangcheng’[1]。但在歷史上塘橙一直未見較大量的栽培，至目前已無栽培，僅見浙江蘭溪和龍游接壤的山區(qū)有極少量的分布，塘橙枳殼更是未見商品。而常山柚橙（常山胡柚）‘Changshan-huyou’的使用量很大[2]。

根據(jù)最新研究，常山柚橙（常山胡柚）為酸橙的栽培變種[3]，從清朝起就作為枳殼藥用[4]，規(guī)范的拉丁學(xué)名為‘Changshan- huyou’[5]。2015版《浙江省中藥炮制規(guī)范》將常山柚橙（常山胡柚）‘Changshan- huyou’未成熟的干燥果實收載為“衢枳殼”，并被評為“新浙八味”之一。臨床上常用治胸脅氣滯、脹滿疼痛、食積不化、痰飲內(nèi)停、臟器下垂[6-11]。在研究中發(fā)現(xiàn)衢枳殼與酸橙枳殼化學(xué)成分組成一致性較高[12-17]，不同栽培變種枳殼藥材的質(zhì)量差異明顯[18-24]。但衢枳殼與酸橙栽培變種間的質(zhì)量差異的比較未見報道。因此，選取藥理作用明確、含量穩(wěn)定且豐富的黃酮類和香豆素類物質(zhì)為目標(biāo)物，通過HPLC指紋圖譜技術(shù)對衢枳殼和《中國藥典》2020年版中收載的栽培變種枳殼進(jìn)行比較研究，進(jìn)而探討枳殼藥材間的質(zhì)量差異，為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升和質(zhì)量控制優(yōu)化提供數(shù)據(jù)參考和科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Agilent-1260高效液相色譜儀（配G1314F型號DAD檢測器，G316A型柱溫箱，G376E型自動進(jìn)樣器，G312B型二元泵）。XPE 205型萬分之一分析天平（梅特勒公司），KH5200DE型超聲清洗器（昆山禾創(chuàng)公司）。

1.2 試藥

乙腈（色譜純級，Merck公司），甲酸、甲醇均為分析純（國藥集團(tuán)），水為超純水；對照品圣草次苷（上海源葉圣物有限公司，批號B21159，質(zhì)量分?jǐn)?shù)＞98%）；蕓香柚皮苷（維克奇生物科技有限公司，批號131208，質(zhì)量分?jǐn)?shù)＞98%），柚皮苷（中國食品藥品檢定研究院，批號110722-201312，質(zhì)量分?jǐn)?shù)＞98%）、柚皮素（上海源葉圣物有限公司，批號B21596，質(zhì)量分?jǐn)?shù)＞98%）；橙皮苷（中國食品藥品檢定研究院，批號110721-201316，質(zhì)量分?jǐn)?shù)95.3%），新橙皮苷（中國食品藥品檢定研究院，批號111857-201102，質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.6%），橘皮內(nèi)酯水合物（西力生物有限公司，批號BBP00486，質(zhì)量分?jǐn)?shù)98%），橘皮內(nèi)酯（西力生物有限公司，批號BBP00392，質(zhì)量分?jǐn)?shù)98%），木犀草素（中國食品藥品檢定研究院，批號111520-201006），桔皮素（維克奇生物有限公司，批號130708，質(zhì)量分?jǐn)?shù)＞98%），川陳皮素（維克奇生物科技有限公司，批號130108，質(zhì)量分?jǐn)?shù)＞98%），葡萄內(nèi)酯（江西中醫(yī)學(xué)院現(xiàn)代中藥制劑教育部重點實驗室楊武亮教授提供，質(zhì)量分?jǐn)?shù)＞98%）。

1.3 樣品

試驗樣品中3批為市購樣品，其余為產(chǎn)地采集樣品，均為7月初采摘的未成熟果實。衢州市食品藥品檢驗研究院宋劍鋒主任中藥師鑒定樣品S7～S19為常山柚橙‘Changshan-huyou’，浙江省食品藥品檢驗研究院郭增喜主任中藥師鑒定S20～S22為酸橙L.、S26～S28為黃皮酸橙‘Huangpi’、 S29～S31為代代花‘Daidai’、 S32～S34為朱欒‘Chuluan’、S35為塘橙‘Tangcheng’。樣品信息詳見表1，6批酸橙枳殼對照藥材（中國食品藥品檢定研究院），樣品信息見表1。

2 方法

2.1 色譜條件[12-13]

Extend XDB C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱，檢測波長330 nm，柱溫30 ℃，體積流量為1.0 mL/min，進(jìn)樣量10 μL。流動相為乙腈（A）-0.1%甲酸水（B）溶液，梯度洗脫：0～2 min，10% A；2～5 min，10%～18% A；5～10 min，18%A；10～25 min，18%～20% A；25～45 min，20%～50% A；45～70 min，50%～100% A。

表1 樣品信息

2.2 混合對照品溶液的制備

準(zhǔn)確稱取12個對照品置于不同量瓶中，加入50%甲醇溶液溶解并定容，得到12個對照品的儲備溶液。分別精密移取12個對照品儲備液適量置于同一量瓶中，加入50%甲醇溶液稀釋到刻度線，搖勻，最終得到圣草次苷52.64 μg/mL、蕓香柚皮苷46.59 μg/mL、柚皮苷360.80 μg/mL、柚皮素30.47 μg/mL、橙皮苷34.45 μg/mL、新橙皮苷312.35 μg/mL、橘皮內(nèi)酯水合物1.82 μg/mL、木犀草素6.26 μg/mL、橘皮內(nèi)酯4.47 μg/mL、川陳皮素3.02 μg/mL、桔皮素1.01 μg/mL、葡萄內(nèi)酯0.89 μg/mL的混合對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備[14]

產(chǎn)地采集樣品中間剖開，60 ℃烘干，粉碎，過三號篩。市購樣品粉碎，過三號篩。精密稱取樣品粉末0.5 g，置于100 mL具塞錐形瓶中，加50%甲醇50 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲30 min，放至室溫，再次稱定質(zhì)量，加50%甲醇補足失去質(zhì)量，搖勻，取上清液，過0.45 μm微孔有機(jī)濾膜，即得供試品溶液。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 精密度試驗 取樣品（S4），按照“2.3”項下方法制備供試品溶液，依照“2.1”項色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，計算共有峰的相對保留時間和相對峰面積的RSD。以5號峰為參照峰，計算得到共有峰的相對保留時間RSD結(jié)果均小于0.1%，峰面積RSD結(jié)果均小于1.7%，表明儀器精密度良好。

2.4.2 重復(fù)性試驗 取樣品（S4），按照“2.3”項下方法制備供試品溶液6份，依照“2.1”項色譜條件測定，記錄色譜圖。以5號峰為參照峰，計算得到共有峰的相對保留時間RSD結(jié)果均小于0.06%，峰面積RSD結(jié)果均小于2.0%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.4.3 穩(wěn)定性試驗 取“2.3”項供試品溶液，依照“2.1”項色譜條件分別在0、4、8、12、16、20、24 h進(jìn)樣，記錄色譜圖，以5號峰為參照峰，計算得到共有峰的相對保留時間RSD結(jié)果均小于0.08%，峰面積RSD結(jié)果均小于1.7%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.5 枳殼的指紋圖譜的建立及共有峰的指認(rèn)[16-19]

按照“2.3”項下方法制備35批樣品的供試品溶液，依照“2.1”項色譜條件進(jìn)行測定，將得到的色譜圖導(dǎo)入到“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)”軟件，得到35批樣品的指紋圖譜疊加圖譜（圖1）。選擇枳殼對照藥材和酸橙共計12批樣品的指紋圖譜，設(shè)定S1為參照圖譜，采用中位數(shù)法生成枳殼的共有模式圖（圖2），識別出24個共有峰，其中5號峰和19號峰峰形好、分離度高，位于色譜圖前后的中間位置，設(shè)定5號峰為參照峰（S）。依照上述方法，通過與12個目標(biāo)物的混合對照品HPLC圖譜（圖3）和光譜圖比對，對共有模式圖的共有峰進(jìn)行指認(rèn)。指認(rèn)出12個色譜峰，即峰3為圣草次苷，峰4為蕓香柚皮苷，峰5為柚皮苷，峰6為柚皮素，峰7為橙皮苷，峰8為新橙皮苷，峰9為橘皮內(nèi)酯水合物，峰10為木犀草素，峰14為橘皮內(nèi)酯，峰19為川陳皮素，峰22為桔皮素，峰24為葡萄內(nèi)酯。

3 結(jié)果與分析

3.1 相似度結(jié)果評價

以枳殼對照藥材共有模式色譜為對照，通過多點校正及Mark峰匹配模式計算35批樣品的相似度結(jié)果，相似度計算結(jié)果見表2。13批衢枳殼的相似度為0.920～0.947，一致性好。酸橙栽培變種中，黃皮酸橙相似度最高，代代花次之，但上述2類樣品間相似度結(jié)果差異大，塘橙的相似度結(jié)果＜0.5，朱欒相似度結(jié)果均＜0.2。

圖1 35批樣品HPLC指紋圖譜疊加圖

圖2 枳殼HPLC共有模式圖譜

3.2 化學(xué)模式分析

3.2.1 聚類分析 試驗以指紋圖譜獲取35批樣品共有峰峰面積為變量，應(yīng)用SPSS 24.0軟件，采用組內(nèi)聯(lián)結(jié)法，以平方Euclidean距離為度量標(biāo)準(zhǔn)，對35批樣品進(jìn)行聚類分析，聚類結(jié)果樹狀圖見圖4。

3-圣草次苷；4-蕓香柚皮苷；5-柚皮苷；6-柚皮素；7-橙皮苷；8-新橙皮苷；9-橘皮內(nèi)酯水合物；10-木犀草素；14-橘皮內(nèi)酯；19-川陳皮素；22-桔皮素；24-葡萄內(nèi)酯。

聚類結(jié)果顯示，截距小于2時，S14～S17號衢枳殼樣品與對照藥材聚為一類，其余衢枳殼樣品與S23號商品枳殼聚為一類，3批朱欒樣品具為一類。截距為≤5時，S30、S31代代花樣品和塘橙可以與對照藥材聚為一類，S26、S28號黃皮酸橙樣品聚為一類，且與其他樣品完全區(qū)分開，S27號黃皮酸橙樣品單獨聚為一類。結(jié)果顯示，聚類結(jié)果圖顯示各個樣品間的親疏關(guān)系與相似度結(jié)果一致。

表2 35批樣品相似度評價結(jié)果

圖4 35批樣品的聚類分析結(jié)果樹狀圖

3.2.2 主成分提取分析 試驗選擇35批樣品指紋圖譜中相對峰面積RSD小于10%的色譜峰峰面積為變量，應(yīng)用SPSS 24.0軟件，計算特征值和方差貢獻(xiàn)率，進(jìn)行主成分分析，將特征值＞1的成分提取出來特征的累積方差見表3，特征值載荷矩陣見表4。

結(jié)合特征值總方差可知，35批樣品中的主成分中前5個成分的特征值均＞1，方差的累積貢獻(xiàn)率累計為89.52%，表明可將衢枳殼、酸橙及栽培變種樣品中復(fù)雜的化學(xué)成分降維簡化為5個主成分進(jìn)行分析。體現(xiàn)載荷截距上可知，載荷的絕對值越大，對主成分的貢獻(xiàn)越大，對于區(qū)別不同枳殼藥材差異性的作用越大。從表4結(jié)果可知，各主成分中與原始變量差異性關(guān)系最為密切的色譜峰16個，本研究中已指認(rèn)的色譜峰9個。依據(jù)區(qū)別各樣品間差異的貢獻(xiàn)率作用由大到小排列，依次為峰9（葡萄內(nèi)酯水合物）、峰19（川陳皮素）、峰5（柚皮苷）、峰22（桔皮素）、峰10（木犀草素）、峰8（新橙皮苷）、峰4（蕓香柚皮苷）、峰7（橙皮苷）、峰6（柚皮素）。

表3 特征值和積累方差貢獻(xiàn)率

表4 主成分載荷矩陣

4 討論

本研究中35批樣品涵蓋《中國藥典》2020版中4個栽培變種及5個產(chǎn)地的酸橙。研究結(jié)果可知，黃皮酸橙藥材質(zhì)量優(yōu)于代代花、塘橙和朱欒，但2批湖南產(chǎn)黃皮酸橙與浙江產(chǎn)黃皮酸橙差異大。朱欒中的指標(biāo)成分柚皮苷和新橙皮苷與對照藥材樣品差異大，組分峰面積比均低于對照藥材。塘橙樣品僅為一批，且市場上未見商品，其代表性差，不做評價。產(chǎn)地采集枳殼樣品中，四川枳殼相似度明顯低于重慶枳殼。市售枳殼樣品中江西產(chǎn)枳殼與對照藥材植物基原更為親密?？梢娤嗤煌a(chǎn)地和相同產(chǎn)地不同基原的枳殼間的藥材質(zhì)量也存在差異，且直接影響藥材質(zhì)量的穩(wěn)定性。13批衢枳殼樣品間化學(xué)組成一致性好，相似度結(jié)果RSD為0.81%。在本研究篩選出的9個影響樣品間差異性的化合物中，衢枳殼中的川陳皮素、柚皮苷、蕓香柚皮苷、橙皮苷、柚皮素與酸橙對照藥材中的相似度高，從化學(xué)成分組成和組分比例角度評價，衢枳殼質(zhì)量明顯優(yōu)于朱欒和塘橙，且衢枳殼產(chǎn)地來源明確[25]，藥材質(zhì)量穩(wěn)定性優(yōu)于黃皮酸橙和代代花。認(rèn)為可推薦作為藥典中枳殼的栽培變種之一。

枳殼為的常用中藥材，藥典中的藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)一直在不斷地提升和完善。自《中國藥典》1985版明確注明基原植物及其栽培變種以來，至今已近40年。限于當(dāng)時的信息和科技條件，確定的栽培變種不盡合理，目前。隨著對枳殼藥材的基原的本草考證和科學(xué)研究的不斷深入[2, 26-29]，枳殼基原栽培變種的內(nèi)容也應(yīng)作相應(yīng)的修訂。

此外，枳殼和衢枳殼法定標(biāo)準(zhǔn)中的質(zhì)控指標(biāo)均為柚皮苷和新橙皮苷。枳殼藥材產(chǎn)地復(fù)雜，來源多樣，單一類別物質(zhì)無法準(zhǔn)確判斷藥材質(zhì)量，多類別、多物質(zhì)聯(lián)合評價枳殼藥材質(zhì)量更為全面準(zhǔn)確。本研究獲得的9個區(qū)分枳殼藥材的差異標(biāo)志物中，橘皮內(nèi)酯水合物（香豆素）、川陳皮素和桔皮素（多甲氧基黃酮）、木犀草素（黃酮苷）等作用貢獻(xiàn)大，物質(zhì)類別豐富。建議枳殼的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)增加以上述物質(zhì)為代表的多類別物質(zhì)和多功效成分的組分群評價模式，進(jìn)而保證枳殼使用時的藥材質(zhì)量和臨床療效。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

[1] 中國藥典 [S]. 一部. 2020: 257.

[2] 趙維良, 郭增喜, 張文婷，等. 藥材枳殼基原植物種類及地理分布研究 [J]. 中國中藥雜志, 2018, 43(21): 4361-4364.

[3] 毛桑隱, 汪麗霞, 宋劍鋒, 等. 基于全基因組信息的常山胡柚遺傳鑒定 [J]. 果樹學(xué)報, 2023, 40(1): 25-34.

[4] 衢州市志編纂委員會. 衢州市志 [M]. 杭州: 浙江人民出版社, 1994: 143.

[5] 陳征海. 浙江植物志.第6卷[M]. 杭州: 浙江科學(xué)技術(shù)出版社, 2021: 305-307.

[6] Chhikara N, Kour R, Jaglan S,.: Nutritional, phytochemical composition and health benefits - a review [J]., 2018, 9(4): 1978-1992.

[7] 劉小娟, 方月娟, 夏道宗, 等. 衢枳殼總黃酮提取工藝的優(yōu)化及其抗氧化活性 [J]. 中成藥, 2020, 42(7): 1687-1691.

[8] 葉愛琴, 蔣劍平, 李潤, 等. 衢枳殼黃酮對高脂血癥金黃地鼠降血脂作用及其機(jī)制研究 [J]. 中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué), 2020, 37(16): 1938-1946.

[9] 劉小娟, 姜小琴, 方月娟, 等. 衢枳殼總黃酮通過NF-κB信號通路對RSV感染哮喘小鼠肺損傷的保護(hù)作用 [J]. 中華醫(yī)院感染學(xué)雜志, 2021, 31(22): 3376-3380.

[10] 汪雯, 藍(lán)天, 鄭芳, 等. 衢枳殼提取物改善2型糖尿病小鼠胰島素抵抗的作用研究 [J]. 浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報, 2022, 46(9): 936-944.

[11] Tan W X, Li Y, Wang Y,. Anti-coagulative and gastrointestinal motility regulative activities ofand its effective fractions [J]., 2017, 90: 244-252.

[12] 馮敬騫, 李姜言, 宋劍鋒, 等. 不同產(chǎn)地衢枳殼藥材質(zhì)量的熵權(quán)TOPSIS法綜合評價 [J]. 中國藥房, 2021, 32(11): 1312-1318.

[13] 嚴(yán)曉麗, 閆倩倩, 劉曉政, 等. 高效液相色譜法測定衢枳殼中新橙皮苷及柚皮苷 [J]. 食品研究與開發(fā), 2018, 39(21): 161-166.

[14] 馮敬騫, 胡衛(wèi)南, 徐禮萍, 等. HPLC法同時測定不同采集地衢枳殼中12種黃酮類成分的含量 [J]. 中國藥房, 2020, 31(5): 571-575.

[15] 黃文康, 岳超, 宋劍鋒, 等. HPLC同時測定衢枳殼中7種指標(biāo)成分的含量 [J]. 中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué), 2018, 35(3): 404-407.

[16] 岳超, 馬臨科, 宋劍鋒, 等. 衢枳殼HPLC指紋圖譜的建立及特征成分分析 [J]. 中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué), 2018, 35(8): 1217-1220.

[17] Lin Z T, Wang H, Xu Y,. Identification of antioxidants inand its quality evaluation using a new on-line combination of analytical techniques [J]., 2012, 134(2): 1181-1191.

[18] 岳超, 趙維良, 郭增喜, 等. 高效液相色譜法同時測定不同來源柑橘幼果中10種類黃酮化合物和香豆素類化合物 [J]. 理化檢驗: 化學(xué)分冊, 2021, 57(1): 52-56.

[19] 岳超, 張文婷, 趙維良, 等. 化學(xué)模式分析聯(lián)合指紋圖譜評價不同基原枳殼藥材的質(zhì)量 [J]. 中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué), 2021, 38(23): 3002-3008.

[20] 郭增喜, 李文庭, 李兆奎. 不同產(chǎn)地枳殼中柚皮苷和新橙皮苷的測定 [J]. 中草藥, 2012, 43(7): 1347-1348.

[21] 馬永力, 王鑫昱, 方新華, 等. 四大主產(chǎn)區(qū)枳殼的指紋圖譜分析 [J]. 中國藥師, 2022, 25(6): 972-975.

[22] 李麗蓉, 顏干明, 胡越, 等. 不同產(chǎn)區(qū)枳殼指紋圖譜采集方法研究 [J]. 生物化工, 2020, 6(4): 73-75.

[23] 羅曦, 包永睿, 李天嬌, 等. 基于“質(zhì)-量”雙標(biāo)的枳殼質(zhì)量分析方法研究[J]. 中草藥, 2023, 54(22): 7293-7299.

[24] He Y J, Zhu M, Zhou Y,. Comparative investigation of phytochemicals among ten citrus herbs by ultra high performance liquid chromatography coupled with electrospray ionization quadrupole time-of-flight mass spectrometry and evaluation of their antioxidant properties [J]., 2020, 43(16): 3349-3358.

[25] 趙維良, 黃琴偉, 張文婷, 等. [J]. 中藥材衢枳殼的基源植物研究[J]. 中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué), 2019, 36(13): 1652.

[26] 梅茜, 許金國, 蘇聯(lián)麟, 等. 基于Heracles NEO超快速氣相電子鼻對枳殼麩炒前后氣味差異標(biāo)志物的快速識別研究[J]. 中草藥, 2023, 54(16): 5165-5171.

[27] 胡蓉, 李忠貴, 肖草茂, 等. 枳實、枳殼藥材基原及道地產(chǎn)地的變遷 [J]. 中藥材, 2019, 42(3): 686-689.

[28] 王詩語, 鄭浩, 秦曄, 等. 枳殼的本草考證 [J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2022, 50(5): 156-160.

[29] He Y, Li Z, Wang W,. Chemical profiles and simultaneous quantification ofby use of HPLC-Q-TOF-MS combined with GC-MS and HPLC methods [J].,2018, 23(9): 2189.

Research on quality difference of Quand differentcultivars based on HPLC fingerprint

YUE Chao1, ZHANG Wenting1, ZHENG Cheng1, LIANG Jingjing1, SONG Jianfeng3, CHEN Bilian1, GUO Zengxi1, ZHAO Weiliang2

1. National Key Laboratory of Market Regulation (Functional Food Quality and Safety), Key Laboratory of Market Supervision Administration of Zhejiang Province (Key Laboratory of Quality and Safety of Health Products), NMPA Key Laboratory of Quality Evaluation of Chinese Patent Medicine, Zhejiang Institute for Food and Drug Control, Hangzhou 310052, China 2. HangZhou Normal University, Hangzhou 311121, China 3. Quzhou Institute for Food and Drug Control, Quzhou 324002, China

The fingerprint and statistical analysis were determined to compared and evaluate the qualityconsistency and difference between‘Changshan-huyou’ immature dry fruit (Qu)and differentcultivars.HPLC analysis was performed on Extend XDB C18column (250 mm × 4.6 mm, 5 μm), the detection wavelength was set at 330 nm, using acetonitrile-0.1% aqueous formic acid aqueous solution as mobile phase for gradient elution, the flow rate was 1 mL/min, the column temperature was maintained at 30 ℃. The fingerprints of 35 batches of samples were evaluated by cluster analysis (CA) principal component analysis (PCA).The established fingerprint common pattern ofsamplesobtained 24 common peaks and identified 12 target compounds. The similarity results of 13 batches of Quranged from 0.920 to 0.947 with good quality consistency, while the similarity results of different original plant species ofranged from 0.127 to 0.990 with great quality differences. Through CA, Quandwere clustered into one category,‘Chuluan’ and partial‘Huangpi’ were clustered into one category. The different markers ofwith different original plant specieswere obtained by PCA, among which nine known compounds were glucolactone hydrate, nobiletin, naringin,tangeretin, luteolin, neohesperidin, Yunxiang naringin, hesperidin,naringenin) that caused the quality differences between samples.Research showed that Quhad high similarity of chemical composition with, had good consistency in medicinal material quality, which was batter than‘Tangcheng’ and‘Chuluan’. Qucan be used as one of the original plans ofin. At the same time, adding the key compound s which distinguish different original plant species ofas the target ingredients to evaluate the quality ofcorrectly and thoroughly.

;‘Changshan-huyou’; fingerprint; chemical pattern analysis; eriocotrin; narirutin; naringin; naringenin; hesperidin; neohesperidin; meranzin hydrate; luteolin; meranzin; nobiletin; tangeretin; glucolactone

R286.2

A

0253 - 2670(2024)08 - 2764 - 07

10.7501/j.issn.0253-2670.2024.08.025

2023-10-06

浙江省科技廳分析測試項目（LGC22H280007）；浙江省藥品監(jiān)督管理局項目（2023020）；浙江省市場監(jiān)督管理局雛鷹計劃項目（ZC2021A028）

岳 超，女，碩士，主管中藥師。研究方向為中藥及藥食同源物質(zhì)的質(zhì)量安全的控制及研究。E-mail: 185803541@qq.com

通信作者：趙維良，男，碩士，主任中藥師。研究方向為中藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制及研究。E-mail: zwl@zjyj.org.cn

[責(zé)任編輯 時圣明]