高 童，張曉丹，馮庭輝，尹 峰，方嘉豪，張朝軍，蔡烈濤，金 燕，梁宗鎖, *，黃文麗*

基于多模式識別結合UPLC指紋圖譜及多指標成分定量測定的薏苡仁質量評價研究

高 童1，張曉丹2，馮庭輝2，尹 峰2，方嘉豪2，張朝軍3，蔡烈濤3，金 燕4，梁宗鎖1, 2*，黃文麗1*

1. 陜西中醫(yī)藥大學藥學院，陜西 咸陽 712046 2. 浙江理工大學生命科學與醫(yī)藥學院，浙江 杭州 310018 3. 浙江康萊特藥業(yè)有限公司，浙江 杭州 310018 4. 道地藥材國家重點實驗室，北京 100700

建立薏苡仁UPLC指紋圖譜及多指標成分定量測定方法，并將薏苡仁UPLC指紋圖譜、化學模式識別和多指標成分定量測定相結合，進而對不同產(chǎn)地薏苡仁藥材進行綜合質量評價。采用Waters C8色譜柱，以甲醇-純水等度洗脫；體積流量0.2 mL/min；檢測波長205 nm；柱溫25 ℃；進樣量0.3 μL，建立15個不同產(chǎn)地薏苡仁藥材指紋圖譜，并進行相似度評價和化學模式識別；同時對不同產(chǎn)地薏苡仁藥材進行一般性檢查、浸出物測定及多個指標性成分含量測定。15個不同產(chǎn)地薏苡仁藥材UPLC指紋圖譜共標定14個共有峰，通過對照品指認了其中7個成分，包括三亞油酸甘油酯、1,2-二亞油酸-3-棕櫚酸甘油酯、1,2-二亞油酸-3-油酸甘油酯、1-棕櫚酸-2-油酸-3-亞油酸甘油酯、1,2-二油酸-3-亞油酸甘油酯、1,2-二油酸-3-棕櫚酸甘油酯和三油酸甘油酯，上述7個成分重復性、穩(wěn)定性及加樣回收率結果均較好。此外，UPLC指紋圖譜相似度范圍為0.972～1.000；15個產(chǎn)地薏苡仁藥材聚為3類，云南、福建樣品聚為一類，貴州興仁藥材聚為一類，貴州興義、安龍藥材聚為一類；主成分綜合得分表明云南、福建產(chǎn)地樣品較優(yōu)，通過篩選得出色譜峰2、5（三亞油酸甘油酯）、8和11（1,2-二油酸-3-棕櫚酸甘油酯）是引起不同產(chǎn)地薏苡仁質量差異的主要成分；不同產(chǎn)地薏苡仁藥材均符合《中國藥典》2020年版水分、灰分和浸出物的標準；同時，多成分定量測定結果表明，7個指標性成分之間存在顯著差異。建立了15個不同產(chǎn)地薏苡仁藥材UPLC指紋圖譜及含量測定方法，并結合UPLC指紋圖譜、化學模式識別和多指標成分含量測定進行進一步研究，可為薏苡仁藥材質量的綜合評價提供參考。

薏苡仁；UPLC指紋圖譜；化學模式識別；三亞油酸甘油酯；1,2-二亞油酸-3-棕櫚酸甘油酯；1,2-二亞油酸-3-油酸甘油酯；1-棕櫚酸-2-油酸-3-亞油酸甘油酯；1,2-二油酸-3-亞油酸甘油酯；1,2-二油酸-3-棕櫚酸甘油酯；三油酸甘油酯；質量評價

薏米L. var.(Roman.) Stapf為禾本科（Gramineae）薏苡屬L.一年生草本植物，其干燥成熟種仁-薏苡仁是中醫(yī)藥史上常用中藥材[1]。到目前為止，薏苡仁中已有70多種化學成分被發(fā)現(xiàn)并分離鑒定，主要包括脂肪酸及其脂類、糖類、多酚類等[2]?，F(xiàn)代藥理學研究表明，薏苡仁油脂是薏苡仁抗癌活性成分，可通過誘導癌細胞凋亡、抑制癌細胞轉移和增殖，對非小細胞肺癌[3-5]、結腸癌[6]、胰腺癌[7]、喉癌[8]、胃癌[9]等發(fā)揮治療作用。甘油三酯類成分是薏苡仁油的主要成分，占總油脂的86%～95%。目前，薏苡仁油脂部分共有22種三酰甘油類成分得到鑒定，含量較高的有三油酸甘油酯（triolein，OOO）、1,2-二亞油酸-3-油酸甘油酯（1,2-dilinoleoyl-3-oleoyl-glycerol，LLO）、1,2-二油酸-3-亞油酸甘油酯（1,2-dioleoyl-3-linoleoyl-glycerol，OOL）、三亞油酸甘油酯（trilinolein，LLL）、1-棕櫚酸-2-油酸-3-亞油酸甘油酯（1-palmitoyl-2-oleoyl-3-linoleoyl-glycerol，POL）、1,2-二油酸-3-棕櫚酸甘油酯（1,2-dioleoyl-3-palmitoyl-glycerol，OOP）、1,2-二亞油酸-3-棕櫚酸甘油酯（1,2-dilinoleoyl-3-palmitoyl-glycerol，LLP）[10-11]。

文獻調(diào)研發(fā)現(xiàn)，薏苡仁液相色譜指紋圖譜和成分檢測方法中，常以C18柱為固定相，乙腈-二氯甲烷為流動相進行洗脫[10, 12-15]。二氯甲烷是一種中等極性溶劑，常作為正相色譜流動相[16]。在反相色譜體系中使用二氯甲烷作為流動相時，需利用異丙醇在使用前后對溶劑體系進行過渡，以防止溶劑間產(chǎn)生不混溶現(xiàn)象而造成管路堵塞[16]。因此，為避免潛在實驗風險，降低實驗操作復雜性，尋找簡單、高效且低風險的薏苡仁反相色譜檢測方法，對薏苡仁的深入研究具有非常大的助力。

過去幾十年，由于薏苡仁產(chǎn)量較低和大宗農(nóng)作物的不斷擠壓，各省份薏苡仁種植逐漸減少。近些年，在中醫(yī)藥思想的不斷影響下，薏苡仁開始被廣泛重視。目前，市場上流通的薏苡仁藥材主要分布在云南、貴州和福建等主要產(chǎn)區(qū)[17]。然而，因薏苡屬品種較多，加之薏苡仁市場需求量不斷增大，價格上漲，使得偽品、劣質品不斷增多，嚴重影響薏苡仁產(chǎn)業(yè)的進一步發(fā)展[18]?！吨袊幍洹?020年版[19]規(guī)定了薏苡仁甘油三油酸酯含量測定標準，指標較為單一，同時，結合薏苡仁指紋圖譜、多種化學模式識別以及多指標含量測定的綜合評價研究較為少見。因此，本研究建立了薏苡仁UPLC-TUV檢測方法，并結合15個不同產(chǎn)地薏苡仁藥材UPLC指紋圖譜、多種化學模式識別和多指標成分含量測定，對薏苡仁藥材質量進行綜合評價。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Waters Acquity UPLC H-Class超高效液相色譜儀（Waters公司）；高速中藥粉碎機（瑞安市百信制藥機械有限公司）；BT25S型十萬分之一分析天平（德國Sartorius公司）；TP-213型萬分之一分析天平（美國Denver Instrument公司）；KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；AP-9925型真空泵（天津奧特賽恩斯儀器有限公司）；HH-4PD型數(shù)顯恒溫水浴鍋（金壇區(qū)西城新瑞儀器廠）；XY-GZH-500遠紅外快速干燥箱（上海昕儀儀器儀表有限公司）；SX2-2.5-12TP箱式電阻爐（濟南精密科學儀器儀表有限公司）；CR-Easy 15系列超純水機（力康生物醫(yī)療科技控股有限公司）。

1.2 藥物與試劑

三油酸甘油酯（批號111692-202208，質量分數(shù)≥98.7%，購自中國食品藥品檢定研究院）；薏苡仁油標準品（薏苡仁油提取物中7種主要的甘油三酯類成分標定所得）（批號ZJ0003-202208，其中LLL：4.73%；LLO：17.85%；LLP：6.26%；OOL：19.32%；POL：12.76%；OOO：16.00%；OOP：9.16%，由浙江省食品藥品檢驗研究院標定）；色譜級甲醇（德國Merk公司）；色譜級甲酸（上海麥克林生化科技有限公司）；分析純甲醇和乙醇（杭州高晶精細化工有限公司）。

1.3 藥材

薏苡仁藥材為課題組在2022年10月—2022年12月于貴州、云南、福建調(diào)研后收集得到，藥材信息見表1。所有藥材均經(jīng)浙江理工大學梁宗鎖教授鑒定為禾本科植物薏米L.var.(Roman.) Stapf的干燥成熟種仁。

表1 薏苡仁藥材樣品信息

2 方法與結果

2.1 不同產(chǎn)地薏苡仁藥材UPLC指紋圖譜研究

2.1.1 色譜條件 Waters Acquity UPLC H-Class超高效液相色譜儀；Waters C8色譜柱（100 mm×3 mm，2.7 μm）；流動相為甲醇-水98.5∶1.5，等度洗脫；柱溫25 ℃，體積流量0.2 mL/min，檢測波長205 nm，進樣量0.3 μL。

2.1.2 對照品溶液的制備 精密稱取甘油三油酸酯對照品20 mg，加入甲醇溶解制成0.2 mg/mL對照品溶液Ⅰ，用于確定薏苡仁油對照品中7種指標性成分的相對保留時間；再取薏苡仁油對照品30 mg，加入甲醇溶解并制成1.2 mg/mL混合對照品溶液Ⅱ，用于進樣后得到混合對照品色譜圖及外標法定量。

2.1.3 供試品溶液制備 取薏苡仁藥材粉末（過65目篩）500 mg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定質量，超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）30 min，放冷，再稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。

2.1.4 精密度試驗 精密稱取適量薏苡仁樣品（S6），在“2.1.3”項方法下制備供試品溶液，按“2.1.1”項色譜條件連續(xù)進樣6次，計算得到各共有峰保留時間的RSD均小1.0%，峰面積的RSD均小于2.0%。

2.1.5 穩(wěn)定性試驗 精密稱取同一薏苡仁樣品（S6），按“2.1.3”項下方法制備供試品溶液，在“2.1.1”項色譜條件下，分別于0、2、4、8、12、24 h各進樣1次，測得各共有峰保留時間的RSD均小1.0%，峰面積的RSD均小于3.0%。

2.1.6 重復性試驗 精密稱取薏苡仁樣品（S6）6份，各0.5 g，在“2.1.3”項方法下制備供試品溶液，在“2.1.1”項色譜條件下分別進樣，計算得到各共有峰保留時間的RSD均小于1.5%。

2.1.7 UPLC指紋圖譜的研究及相似度評價 分別取不同產(chǎn)地薏苡仁樣品，在“2.1.3”項方法下制備供試品溶液，于“2.1.1”項色譜條件下進行分析，得到不同產(chǎn)地薏苡仁藥材UPLC色譜圖，將色譜數(shù)據(jù)導入“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)2012版”，設置S1樣品為參照圖譜，采用中位數(shù)法，時間窗寬度設為0.1 min，通過多點校正、Mark峰匹配生成對照指紋圖譜（R），其對照指紋圖譜和疊加圖譜見圖1（S1～S15），共標定14個共有峰。通過與混合對照品（圖2）比對，指認出7個成分，分別為LLL、LLP、LLO、POL、OOL、OOP、OOO。相似度評價結果見表2，15個產(chǎn)地樣品與對照指紋圖譜的相似度范圍為0.972～1.000，表明不同產(chǎn)地薏苡仁藥材化學成分相似。

2.2 化學模式識別

2.2.1 聚類分析（cluster analysis，CA）：將15個不同產(chǎn)地薏苡仁14個共有峰峰面積作為變量，導入SPSS 26.0軟件，以組間聯(lián)接法和平方歐式距離法進行系統(tǒng)聚類分析，結果見圖3。當歐式距離10時，不同產(chǎn)地薏苡仁藥材聚為3類，第1類為貴州盤州市（S3）、貴州安龍縣（S6）、貴州興義市（S10）、貴州興義市（S13）、貴州普安縣（S11）；第2類為貴州興仁市樣品（S2）、（S4）、（S7）、（S9）、（S14）、（S15）；第3類為云南曲靖市（S1）、福建三明市（S5）、云南蒙自市（S8）、福建南平市（S12）。結果表明，不同產(chǎn)地薏苡仁樣品內(nèi)在化學組成存在一定的相似性，同時發(fā)現(xiàn)產(chǎn)地接近的薏苡仁樣品亦存較大的差異性。

圖1 15個產(chǎn)地薏苡仁藥材UPLC疊加指紋(S1～S15)及對照圖譜 (R)

圖2 混合對照品溶液UPLC色譜圖

表2 15個產(chǎn)地薏苡仁藥材UPLC指紋圖譜相似度評價結果

2.2.2 主成分分析（principal component analysis，PCA） 將15個不同產(chǎn)地薏苡仁樣品14個共有峰峰面積作為變量，導入SPSS 26.0軟件，得到相關系數(shù)特征值和方差貢獻率，見表3。選取特征值＞1為標準，得到3個主成分，可用于反映薏苡仁指紋圖譜85.307%的信息。通過SPSS 26.0軟件計算得到主成分載荷矩陣，見表4，主成分1主要反映了色譜峰3、4、5（LLL）、6（LLP）、7（LLO）、8、9（POL）、10（OOL）、11（OOP）、12（OOO）的信息，主成分2主要反映了色譜峰1、13、14的信息，主成分3主要反映了色譜峰2的信息。

將14個共有峰數(shù)據(jù)標準化，結合主成分得分系數(shù)，以3個主成分對應的方差貢獻率為權重系數(shù)，通過公式1＝0.5701－0.4442＋0.6453＋0.8054＋0.9225＋0.9496＋0.9737＋0.8788＋0.9879＋0.98610＋0.92411＋0.97312＋0.43413－0.22414；2＝0.6561－0.0892－0.2963＋0.2214－0.2705－0.2216－0.0647－0.0898－0.0639＋0.03510＋0.06211＋0.13712＋0.52113－0.08914；3＝?0.0311＋0.8482－0.2683－0.0294－0.1265＋0.1206＋0.0047＋0.3558＋0.1289＋0.03910＋0.20011＋0.07212＋0.15413＋0.17514；＝(64.561%×1＋12.356%×2＋8.391%×3)/85.307%，分別計算3個主成分得分1、2、3和綜合得分（），結果見表5。15個不同產(chǎn)地薏苡仁藥材綜合得分為?9.61～11.04，表明不同產(chǎn)地薏苡仁藥材整體質量差異較大，云南曲靖市（S1）綜合得分最高，表明該地薏苡仁藥材質量較好，其次為福建三明市（S5）、云南蒙自市（S8）、福建南平市（S12）；貴州興仁市薏苡仁藥材綜合得分排名在5～10，質量處于中等；貴州興義市（S10）、貴州普安縣（S11）、貴州安龍縣（S6）、貴州盤州市（S3）、貴州興義市（S13）綜合得分排名分別為11～15，表明貴州省的興義市、盤州市、普安縣及安龍縣薏苡仁藥材質量均低于其他產(chǎn)地。

表3 薏苡仁藥材樣品主成分分析相關系數(shù)特征值和累積方差貢獻率

表4 薏苡仁藥材樣品主成分分析因子載荷矩陣

表5 薏苡仁藥材樣品主成分得分與綜合得分排序

2.2.3 正交偏最小二乘判別分析（orthogonal partial least squares discriminant analysis，OPLS-DA） 以15個不同產(chǎn)地薏苡仁共有峰峰面積為變量，導入SIMCA 14.1軟件歸一化處理后，進行PCA，通過自動擬合得到2個主成分，2為0.914，2為0.764（＞0.5），表明模型擬合較好，同時具有良好的預測能力，結果見圖4-A。15個產(chǎn)地薏苡仁樣品分為3類，云南、福建樣品為一類，貴州興仁市樣品為一類，貴州其他縣市樣品為一類，與CA結果一致。

根據(jù)PCA和CA結果，將15個產(chǎn)地薏苡仁分成3組，云南、福建產(chǎn)地為一組，貴州產(chǎn)地分為2組，進行（圖4-B），模型參數(shù)2為0.967，2為0.791。結合VIP＞1，篩選出4個可以區(qū)分3個組別的差異指標，如圖5所示，分別為色譜峰2、色譜峰5（LLL）、色譜峰8和色譜峰11（OOP）。

圖5 15個不同產(chǎn)地薏苡仁藥材樣品VIP值圖

2.3 一般性檢查及浸出物測定

按照《中國藥典》2020年版：烘干法（通則0832第二法），灰分測定方法（通則2302）及醇溶性浸出物測定法（通則2201）項下的熱浸法[14]，對15個不同產(chǎn)地薏苡仁藥材進行測定，結果見表6。15種樣品均符合藥典標準，水分在8.91%～11.67%，灰分在1.77%～2.69%，醇溶性浸出物含量在10.80%～14.92%。

2.4 樣品含量測定

2.4.1 線性關系考察 精密稱取薏苡仁油對照品30 mg，加入甲醇溶解并制成1.2 mg/mL混合對照品溶液，取混合對照品溶液1.5 mL，3/4倍稀釋5次，分別制得5個不同質量濃度點的工作曲線溶液。在“2.1.1”項色譜條件下進樣測定，以對照品溶液質量為橫坐標（），峰面積為縱坐標（），進行線性回歸，結果見表7。

表6 15個不同產(chǎn)地薏苡仁藥材質量評價結果

2.4.2 精密度試驗 取薏苡仁供試品溶液，在“2.1.1”項色譜條件下連續(xù)進樣6次，計算得到LLL、LLP、LLO、POL、OOL、OOP、OOO峰面積的RSD分別為0.60%、0.86%、0.26%、0.75%、0.47%、1.26%、0.95%。

2.4.3 穩(wěn)定性試驗 取同一薏苡仁供試品溶液，在“2.1.1”項色譜條件下，分別于0、2、4、8、12、24 h進樣測定，測得LLL、LLP、LLO、POL、OOL、OOP、OOO峰面積的RSD分別為0.97%、1.03%、0.77%、1.58%、1.02%、2.69%、0.88%。

2.4.4 重復性試驗 分別稱取同一薏苡仁樣品（S6）6份，按“2.1.3”項方法制備供試品溶液，在“2.1.1”項色譜條件下進樣測定，計算得到LLL、LLP、LLO、POL、OOL、OOP、OOO含量的RSD分別為1.02%、0.63%、1.08%、1.37%、1.50%、2.35%、2.15%。

2.4.5 加樣回收率試驗 精密稱定6份已知成分含量的薏苡仁樣品（S6）粉末各0.2 g，分別加入適量對照品，在“2.1.3”項方法下制備供試品溶液，按照“2.1.1”項色譜條件進樣，計算得到LLL、LLP、LLO、POL、OOL、OOP、OOO的平均加樣回收率分別為96.49%、98.08%、98.28%、95.73%、95.81%、96.99%、93.03%，RSD分別為0.51%、1.66%、1.45%、1.06%、1.12%、0.83%。

表7 薏苡仁藥材中7個成分線性關系考察結果

2.4.6 含量測定 分別取15個不同產(chǎn)地薏苡仁藥材樣品粉末，在“2.1.3”項方法下制備供試品溶液，同時在“2.1.1”色譜條件進行測定，計算樣品中LLL、LLP、LLO、POL、OOL、OOP、OOO及7種甘油三酯類成分總含量，結果見表8。15個不同產(chǎn)地薏苡仁藥材樣品中上述成分質量分數(shù)范圍分別為2.734～4.831、3.670～5.158、9.522～13.374、7.175～9.796、11.296～15.468、5.381～7.322、8.863～12.965、49.041～68.094 mg/g。結果表明，不同產(chǎn)地薏苡仁藥材甘油三酯類成分具有顯著的差異性。15個不同產(chǎn)地薏苡仁藥材中，OOL含量最高，其次為LLO、OOO、POL、OOP和LLP，而LLL含量最低。

表8 15個不同產(chǎn)地薏苡仁藥材7種成分含量測定結果

3 討論

實驗前期，在大量文獻調(diào)研下發(fā)現(xiàn)，有關薏苡仁甘油三酯類成分的檢測多涉及二氯甲烷的使用[10, 12-15]，而多數(shù)實驗室的液相色譜為反相色譜，對于正相溶劑的使用需非常謹慎。因此，通過篩選大量薏苡仁油脂檢測方法，本研究最終確定以《美國藥典》薏苡仁粉測定方法為基礎[20]，該方法以Waters C8色譜柱為固定相，甲醇為流動相，利用HPLC-ELSD進行檢測，在很大程度上避免了使用二氯甲烷帶來的潛在風險。實驗前期，在相同固定相（Waters C8色譜柱）下，對比了HPLC-ELSD和UPLC-TUV 2種檢測方法，結果發(fā)現(xiàn)，HPLC-ELSD檢測方法得到的色譜峰分離度較差，整體出峰時間較長，同時指紋圖譜共有峰數(shù)量較少；而UPLC-TUV檢測方法下各峰分離度顯著較好，耗時更短，共有峰數(shù)量較多，同時各色譜峰具有良好的信噪比。眾所周知，UPLC具有更快的速度、更好的靈敏度和分離度等，同時還能大大降低流動相的浪費[21]；此外，相比蒸發(fā)光檢測器，紫外檢測器具有更好的普適性，這也進一步使得該方法更容易被復現(xiàn)。因實驗條件限制，本研究未進一步對UPLC-ELSD檢測方法進行驗證，后續(xù)深入研究將對此進行驗證。

綜合以上結果，本實驗選擇UPLC-TUV檢測方法進行后續(xù)研究。基于該檢測方法，對色譜條件進行進一步優(yōu)化，首先，對不同流動相比例：甲醇（100%）；甲醇∶乙腈＝95∶5；甲醇∶乙腈＝98∶2；甲醇∶水＝95∶5；甲醇∶水＝98∶2；甲醇∶純水＝98.5∶1.5；甲醇∶水＝99∶1進行了比較，結果表明，流動相為甲醇:水＝98.5∶1.5時薏苡仁指紋圖譜色譜峰具有較好的分離情況；進一步對不同體積流量（0.20、0.25、0.30 mL/min）、柱溫（25、30 ℃）、進樣量（0.2、0.3、0.5 μL）條件下指紋圖譜色譜峰分離情況進行比較，結果顯示，體積流量0.20 mL/min、柱溫為25 ℃、進樣量0.3 μL時色譜峰分離效果較佳。由于薏苡仁油存在飽和甘油三酯類成分紫外吸收較弱特性，綜合不同甘油三酯類成分最大響應值和最低噪音[22]分別對203、205、210 nm指紋圖譜進行比較，結果表明，在205 nm下，薏苡仁中各組分響應較好。

指紋圖譜研究結果表明，云南、貴州和福建3個省份15個薏苡仁藥材指紋圖譜相似度均大于0.970，說明3個省份薏苡仁藥材化學組成較為相似，推測可能與相近的氣候條件有關。進一步結合化學模式識別進行薏苡仁綜合質量評價，其中，CA和PCA結果表明，薏苡仁藥材質量與產(chǎn)地位置有著較為顯著的相關性，云南省、福建省薏苡仁藥材質量較好；OPLS-DA分析中，通過VIP值篩出色譜峰2、5（LLL）、色譜峰8和11（OOP）是導致不同產(chǎn)地薏苡仁藥材質量差異的重要化合物，后續(xù)研究可進一步對未知色譜峰2和色譜峰8進行分析和鑒定，從而確保薏苡仁質量評價的全面性和準確性。

一般性指標和浸出物測定結果表明，15個產(chǎn)地薏苡仁水分、灰分及浸出物均符合《中國藥典》2020年版[19]要求，表明3產(chǎn)區(qū)薏苡仁種植質量良好。同時，多含量測定結果表明，7個指標性成分中，OOL含量最高，其次為OOO（均符合《中國藥典》2020年版規(guī)定），而LLL含量最低，結合OPLS-DA的VIP篩選結果可以發(fā)現(xiàn)，藥典指標甘油三油酸酯含量在不同產(chǎn)地藥材中呈現(xiàn)較小差異，由此可以看出單一指標性成分對評估藥材質量優(yōu)劣具有一定的局限性。此外，云南和福建產(chǎn)地藥材總油脂和7種指標性成分含量雖具有一定的相似性，但云南樣品中OOO含量顯著較高；而福建樣品中LLL、OOL、LLP含量較高，結合兩地氣候特征，初步推測是云南顯著的立體氣候特點所致。在所有貴州藥材中，發(fā)現(xiàn)7個指標性成分含量比例較為一致，但從總油脂含量來看，貴州興仁市薏苡仁藥材質量整體優(yōu)于貴州其他縣市，由此可以看出，近些年來，在國家政策、當?shù)卣拖嚓P研究所的推動和帶領下，貴州興仁市薏苡仁種植較為規(guī)范，藥材質量較為穩(wěn)定，而貴州其他縣市薏苡仁目前可能仍存在種植不規(guī)范，質量參差不齊的現(xiàn)象。

綜上，本研究建立的UPLC-TUV檢測方法，能快速使薏苡仁甘油三酯類成分得到較好的分離，且儀器方法學考察良好，可用于薏苡仁藥材質量的科學評價。在此方法基礎上，本研究將薏苡仁UPLC指紋圖譜與化學模式識別和多種指標性成分含量相結合，對不同產(chǎn)地薏苡仁藥材進行綜合評價，結果表明，相比薏苡仁研究中常見的單一指紋圖譜和含量測定研究，該方法能更好地反映薏苡仁藥材的整體質量特征，為今后薏苡仁藥材的質量控制和栽培選育提供科學的依據(jù)。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Quality evaluation ofbased on multiple pattern recognition combined with UPLC fingerprint and determination of mult-index component content determination

GAO Tong1, ZHANG Xiaodan2, FENG Tinghui2, YIN Feng2, FANG Jiahao2, ZHANG Chaojun3, CAI Lietao3, JIN Yan4, LIANG Zongsuo1, 2, HUANG Wenli1

1. College of Pharmacy, Shaanxi University of Chinese Medicine, Xianyang 712046, China 2. College of Life Sciences and Medicine, Zhejiang Sci-Tech University, Hangzhou 310018, China 3. Zhejiang Kanglaite Pharmaceutical Co., Ltd., Hangzhou 310018, China 4. State Key Laboratory of Dao-di Herbs, Beijng 100700, China

To establish a method for the UPLC fingerprint and multi-indicator component content determination of Yiyiren(), and to combine the UPLC fingerprint of, chemical pattern recognition, and multi-indicator component content determination with the aim of evaluating the quality ofherbs from different origins.A Waters C8column was used with isocratic elution of methanol-pure water; the flow rate was 0.2 mL/min; the detection wavelength was 205 nm; the column temperature was 25 ℃; the injection volume was 0.3 μL; the fingerprints of 15herbs of different origins were established; the similarity evaluation and chemical pattern recognition were carried out; At the same time, the herbs of different origins ofwere subjected to general examination, determination of leachate and determination of the content of several index components.A total of 14 common peaks were identified in the UPLC fingerprints of 15 herbs of different origins of, and seven of them were identified by the control, including trilinolein (LLL), 1,2-dilinoleoyl-3-palmitoyl-glycerol (OOP), 1,2-dilinoleoyl-3-oleoyl-glycerol, 1-palmitoyl-2-oleoyl-3-linoleoyl-glycerol, 1,2-dioleoyl-3-linoleoyl-glycerol, 1,2-dioleoyl-3-palmitoyl-glycerol, and triolein, the results of reproducibility, stability and spiked recoveries of the above seven components were good. In addition, the similarity of UPLC fingerprints ranged from 0.972 to 1.000; the 15 originherbs were clustered into three categories, the samples from Yunnan and Fujian were clustered into one category, the herbs from Xingren of Guizhou were clustered into one category, and the herbs from Xingyi and Anlong of Guizhou were clustered into one category; the composite scores of the principal components indicated that the samples of Yunnan and Fujian origins were superior, and the chromatographic peaks 2, 5 (LLL), 8 and 11 (OOP) obtained by screening were the main components that caused the quality differences offrom different origins; the herbs offrom different origins complied with the standards of moisture, ash and leachate in the 2020 edition of the; meanwhile, the results of multi-component quantitative determination showed that there were significant differences between the seven index components.The study established the UPLC fingerprints of 15herbs from different origins and their content determination methods, and combined with UPLC fingerprints, chemical pattern recognition, and multi-indicator component content determination for further research, which can provide a reference for the comprehensive evaluation of the quality ofherbs.

; UPLC fingerprint; chemical pattern recognition; trilinolein; 1,2-dilinoleoyl-3-palmitoyl-glycerol; 1,2-dilinoleoyl-3-oleoyl-glycerol; 1-palmitoyl-2-oleoyl-3-linoleoyl-glycerol; 1,2-dioleoyl-3-linoleoyl-glycerol; 1,2-dioleoyl-3-palmitoyl-glycerol; triolein;quality evaluation

R286.2

A

0253 - 2670(2024)08 - 2755 - 09

10.7501/j.issn.0253-2670.2024.08.024

2023-11-05

中央本級重大增減支項目“名貴中藥資源可持續(xù)利用能力建設項目”（2060302）

高 童，女，碩士，研究方向為中藥資源與鑒定。E-mail: 1019490241@qq.com

通信作者：梁宗鎖，男，教授，博士生導師，主要從事藥用植物次生代謝研究。E-mail: liangzs@ms.iswc.ac.cn

黃文麗，女，副教授，主要從事中藥化學藥效物質基礎研究。E-mail: heng_long531@163.com

[責任編輯 時圣明]