李思雨 賴恭梯 賀麗媛 許 恒 林俊璇 郭奧琳 陳桂信 賴呈純，

（1福建農林大學園藝學院，福建 福州 350002；2福建省農業(yè)科學院農產(chǎn)品加工研究所/農業(yè)農村部亞熱帶特色果蔬菌加工重點實驗室，福建 福州 350003）

果膠是一類復雜的細胞壁多糖，在植物生長發(fā)育的諸多方面具有重要功能［1］。果膠生物合成和修飾酶的不同組合，在不同細胞類型和不同環(huán)境條件下細胞壁重塑的可塑性和特異性等方面起著關鍵作用［2］，可調節(jié)細胞生長［3］，從而影響組織器官生長發(fā)育。有研究表明，果膠含量和形態(tài)能影響芍藥莖的直立或彎曲［4］，亞麻莖干果膠含量降低時纖維強度增加［5］，果膠含量豐富的植物葉片吸收水分速度較快［6］，在植物的幼嫩葉片中果膠含量明顯高于衰老葉片［7］，這表明果膠在植物莖、葉生長過程中有重要的調控作用。半乳糖醛酸轉移酶（galacturonosyltransferase，GAUT）是果膠生物合成的關鍵酶，將半乳糖醛酸轉移到果膠多糖上，合成聚半乳糖醛酸（homogalacturonan）。聚半乳糖醛酸屬于糖基轉移酶家族8（glycosyltransferases 8，GT8），是一種α-1，4-半乳糖醛酸轉移酶（α-1，4-galacturonosyltransferase，GalAT），GAUT表達變化能夠影響植物果膠積累，從而調節(jié)植株生長發(fā)育［8］。在擬南芥中過表達GhGATL2、GhGATL9、GhGATL12和GhGATL15，發(fā)現(xiàn)其果膠含量增加；而在棉花中沉默GhGATL15發(fā)現(xiàn)果膠含量減少，并引起表型差異［9］。Fan 等［10］發(fā)現(xiàn)GAUTs可能影響棉纖維的伸長和增厚，Orfila 等［11］發(fā)現(xiàn)擬南芥qua1-1突變體花序莖中半乳糖醛酸轉移酶的活性下降。由此可見，GAUTs影響果膠生物合成，在植物莖和葉等組織器官生長發(fā)育中起著重要作用。

葡萄（Vitisvinifera）屬于木質藤本果樹，是我國五大水果之一，在我國廣泛栽培。葡萄莖和葉片對植株生長和物質運輸有重要作用，在自然狀態(tài)下，葡萄主梢和副梢無差別生長，會導致營養(yǎng)生長與生殖生長不平衡。摘心處理是葡萄控產(chǎn)提質的重要栽培措施，可控制葡萄新梢徒長及促進分枝形成，并改變營養(yǎng)運輸方向，使葡萄樹體的營養(yǎng)更多地由頂端運輸?shù)狡渌L點器官［12］。福建省農業(yè)科學院農產(chǎn)品加工研究所營養(yǎng)科學與工程研究室前期發(fā)現(xiàn)，摘心處理能抑制莖增粗和葉片生長［12］，結合前人研究發(fā)現(xiàn)果膠作為細胞壁的重要結構組分，參與植物組織和器官生長發(fā)育，推測摘心可能通過調控果膠合成相關基因表達，改變果膠生物合成從而影響莖和葉片的生長。為探究摘心處理下莖和葉片中果膠生物合成的分子機制，本試驗以巨峰葡萄為材料，進行半乳糖醛酸轉移酶GAUTs基因的克隆，對基因序列特征及功能進行預測分析，并分析摘心處理下巨峰葡萄莖和葉片中VvGAUTs基因的表達量變化，以期為深入探究摘心抑制莖增粗與葉片生長的分子機制提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

以種植于福建省福安市溪柄鎮(zhèn)葡萄示范基地的10 年生巨峰葡萄為試驗材料，樹形為自然傘形，株行距1.5 m×2.6 m，每公頃種植約2 550 株。分別進行花序上留2 葉摘心和留6 葉摘心的處理，以不摘心為對照，選取摘心處理后的0、10、20、60 和120 d 的莖和葉片儲存于干冰保溫盒，轉運至實驗室立即浸沒于液氮中速凍后于-80 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩Ｈ~片及莖段的選取參照文獻［12］，葉片取基部向上第3 葉的葉片，莖段取基部向上第2 至第3 葉節(jié)間莖段，每次隨機取10 個葉片和10條莖段，設3次重復。

1.2 試驗方法

1.2.1 總RNA的提取與cDNA的合成 按照RNAprep Pure 多糖多酚植物總RNA 提取試劑盒（北京天根生化科技有限公司）的操作步驟對巨峰葡萄新芽進行總RNA提取?；蚩寺〉腸DNA模板制備采用EasyScript?One-Step gDNA Removal and cDNA Synthesis SuperMixs試劑盒（北京全式金生物技術股份有限公司）。實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qRT-PCR）的cDNA 模板制備采用Prime ScriptTMRT reagent Kit with gDNA Eraser （Perfect Real Time）試劑盒（大連寶生物工程有限公司）。

1.2.2VvGAUTs基因克隆與序列分析 在NCBI（https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/）數(shù)據(jù)庫中檢索獲得1個釀酒葡萄GAUT基因和3 個河岸葡萄GAUT基因，其登錄號分別為XM_002269146.3、XM_034818285.1、XM_002281622.4 和XM_002271260.3，以上述4 個GAUT基因序列為模板設計克隆引物，引物信息見表1。以巨峰葡萄的cDNA 為模板進行PCR 擴增。PCR 反應體系共50 μL：HS 2× Master Mix 25 μL，上下游引物各1 μL，cDNA 1 μL，ddH2O 補充至50 μL。PCR 擴增程序：95 ℃預變性5 min，95 ℃變性30 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，共35 個循環(huán)；72 ℃終延伸5 min，4 ℃保存。PCR 產(chǎn)物經(jīng)過1%瓊脂糖凝膠電泳得到目的條帶，回收目的條帶，連接pLB Vector 載體，轉化大腸桿菌DH5α 感受態(tài)細胞。經(jīng)抗性篩選、PCR 鑒定得到陽性克隆菌液，送至北京擎科生物科技股份有限公司測序，獲得目的條帶序列。利用DNAMAN 6.0軟件對基因序列進行分析，使用Ensembl網(wǎng)站（http：//plants.ensembl.org/index.html）下載VvGAUTs基因注釋文件，用TBtools v1.116軟件進行基因結構繪制。

表1 引物信息Table 1 Primer information

1.2.3 VvGAUTs 蛋白理化特性分析 使用Expasy（http：//web.expasy.org/）預測蛋白序列的分子質量、親疏水性和等電點等理化性質。利用Plant-mPLoc 網(wǎng)站（http：//www.csbio.sjtu.edu.cn/bioinf/plant-multi/）進行蛋白質亞細胞定位預測。利用HMMER 網(wǎng)站（https：//plants.ensembl.org/hmmer/index.html）進行蛋白序列的信號肽預測。使用MEME 在線軟件（http：//memesuite.org/tools/meme）分析基因編碼蛋白的保守基序。

1.2.4 啟動子順式作用元件預測 通過NCBI在線網(wǎng)址提取VvGAUTs基因的啟動子區(qū)域序列，利用PlanCARE在線網(wǎng)址（http：//bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/plantcare/html/）檢索VvGAUTs基因的順式作用元件，并對其進行比較分析。

1.2.5 染色體定位和多物種共線性分析 從Ensembl網(wǎng)站下載葡萄（Vitisvinifera）、擬南芥（Arabidopsis thaliana）、毛果楊（Populustrichocarpa）和水稻（Oryza sativa）的相關基因組數(shù)據(jù)文件，通過TBtools v1.116 軟件繪制VvGAUTs基因的染色體定位圖以及構建其與多物種間的共線性關系圖譜。

1.2.6 物種間系統(tǒng)發(fā)育分析 用巨峰葡萄VvGAUTs蛋白序列于NCBI在線網(wǎng)站上進行比對，獲得VvGAUTs與其他物種同源性大于70%的蛋白序列，使用MEGA 11.0軟件鄰接法（Neighbor-Joining，NJ）構建系統(tǒng)發(fā)育進化樹，bootstrap值設為1 000，其他參數(shù)為默認值。

1.2.7 蛋白互作網(wǎng)絡預測 利用String 在線軟件（https：//cn.string-db.org/）構建VvGAUTs 的蛋白互作網(wǎng)絡模型，設置置信度為0.4，預測蛋白個數(shù)少于10個，探究VvGAUTs 與植物細胞中其他基因的編碼蛋白的互作關系。

1.2.8 qRT-PCR 分析 以經(jīng)過篩選優(yōu)化的clathrinadaptor complex subunit mu（AP-2）作為巨峰葡萄莖的內參基因，SAND family protein（SAND）作為巨峰葡萄葉片的內參基因，PCR 擴增采用前期研究優(yōu)化后的運行參數(shù)［13］，在LightCycler?480Ⅱ 實時熒光定量PCR 儀（Roche，瑞士）上進行，設3 次重復試驗。擴增結束后，利用LightCycler?480 Software Version 1.5 進行Cp 值（crossing point）和熔解曲線分析，采用2-ΔΔCt法進行目的基因表達水平的計算。測定相關基因在不同摘心處理下巨峰葡萄莖和葉片中的相對表達量，目的基因和內參基因引物信息見表1。

1.3 數(shù)據(jù)分析

使用Microsoft?Excel 2019 和SPSS 26.0 軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，用GraphPad Prism 9軟件作圖。

2 結果與分析

2.1 VvGAUTs基因的克隆與序列分析

以巨峰葡萄cDNA 為模板進行PCR 擴增，克隆得到4 條VvGAUTs基因序列，與預估目的片段長度一致（圖1-A），測序結果與NCBI葡萄基因組數(shù)據(jù)庫相應基因片段相似性均達到98%以上，分別命名為VvGAUT1a（登錄號OQ718918.1）、VvGAUT1b（登錄號OQ718919.1）、VvGAUT3（登錄號OQ718920.1）、VvGAUT4a（登錄號OQ718921.1），開放閱讀框（open reading frame，ORF）序列長度分別為1 056、1 167、1 038 和1 071 bp，分別編碼351、388、345 和356 個氨基酸。與葡萄基因組數(shù)據(jù)庫中相應基因的DNA序列對比發(fā)現(xiàn)，VvGAUT1a包含5 個外顯子和4 個內含子，VvGAUT1b只有2 個外顯子和1 個內含子，VvGAUT3和VvGAUT4a均有3 個外顯子和2個內含子（圖1-B）。

圖1 VvGAUTs的PCR擴增電泳圖（A）和基因結構（B）Fig.1 PCR amplification electrophoretic diagram（A） and gene structure（B） of VvGAUTs

2.2 VvGAUTs基因編碼蛋白理化特性分析

蛋白質理化特性預測信息見表2，VvGAUT1a、VvGAUT1b、VvGAUT3 和VvGAUT4a 的分子量分別為39.281 9、43.272 3、39.252 3 和40.427 4 kDa，等電點分別為6.16、5.39、9.10和9.05。蛋白質的穩(wěn)定性預測顯示，VvGAUT1a為穩(wěn)定蛋白，VvGAUT1b、VvGAUT3和VvGAUT4a 屬于不穩(wěn)定蛋白。信號肽預測結果顯示，VvGAUT1b 無明顯信號肽，而VvGAUT1a、VvGAUT3 和VvGAUT4a 均含信號肽。從亞細胞定位預測結果得知，VvGAUT1a 定位在葉綠體上，VvGAUT1b 定位于細胞膜、線粒體和細胞核，VvGAUT3 和VvGAUT4a 均定位于葉綠體與細胞核。保守基序預測顯示，VvGAUTs包含相同數(shù)量和類型的Motifs，4 個VvGAUTs 都有8 個保守基序（圖2）。

圖2 VvGAUTs蛋白的基序（A）和基序序列（B）Fig.2 The protein motifs（A） and motif sequences（B） of VvGAUTs

表2 VvGAUTs的蛋白質理化特性Table 2 Protein physicochemical properties of VvGAUTs

2.3 VvGAUTs蛋白互作網(wǎng)絡分析

為了探究VvGAUTs 與其他蛋白在植物體中的聯(lián)合作用機制，對克隆到的4 個VvGAUTs的編碼蛋白的互作蛋白進行了預測（圖3）。結果顯示，VvGAUT1a與纖維素合成酶、漆酶和糖基轉移酶等蛋白存在相互作用關系，這些互作蛋白主要參與細胞壁中纖維素合成、木質素降解以及調節(jié)代謝的速率、方向等生命活動。與VvGAUT1b 存在相互作用的蛋白主要為β-葡萄糖苷酶、UDP-糖基轉移酶、組蛋白賴氨酸甲基轉移酶、組氨酸激酶和果膠酯酶等蛋白，這些蛋白主要參與糖代謝、植物細胞分化、葉片衰老調控和果膠代謝。VvGAUT3、VvGAUT4a 的互作蛋白大多與細胞信號傳導、細胞分裂和染色質修飾等生物過程有關。

圖3 VvGAUTs的蛋白互作網(wǎng)絡Fig.3 Protein-protein interaction network of VvGAUTs

2.4 VvGAUTs系統(tǒng)發(fā)育分析

為探究VvGAUTs與其他物種間的親緣關系，以4個巨峰葡萄VvGAUTs 為查詢序列，利用NCBI 數(shù)據(jù)庫的Blast 工具進行比對分析并下載同源性高于70%的其他物種GAUT 蛋白序列。使用MEGA 軟件構建系統(tǒng)發(fā)育進化樹（圖4）。結果顯示，GAUT1蛋白聚為一大類，而GAUT3和GAUT4聚為另一大類，并且GAUT3和GAUT4又分別聚成2個亞類，表明GAUT3和GAUT4蛋白有較近的進化關系。進一步分析發(fā)現(xiàn)，巨峰葡萄VvGAUT1a、VvGAUT1b 均與河岸葡萄（Vitisriparia）的GAUT1 親緣關系最近。VvGAUT3 也與河岸葡萄VrGAUT3 最先聚類合并，表明兩者間親緣關系最近，其次是與大麻（Cannabissativa）的GAUT3屬于同一分支，親緣關系較近。VvGAUT4a 與河岸葡萄VrGAUT4 的親緣關系最近，其次是與罌粟（Papaversomniferum）的GAUT4 表現(xiàn)出較近的親緣關系。

圖4 VvGUATs和其他物種GUATs系統(tǒng)進化樹Fig.4 Phylogenetic tree for VvGUATs and GUATs from some other plant species

2.5 VvGAUTs染色體定位和多物種共線性分析

從Ensembl 在線軟件得到葡萄基因組序列及染色體位置信息，克隆得到的VvGAUTs基因序列均被定位到不同染色體上，分別為染色體4號、18號、1號和7 號（圖5-A）。以葡萄、水稻、擬南芥和毛果楊的基因組數(shù)據(jù)為參考，4個VvGAUTs基因與不同物種的共線分析發(fā)現(xiàn)，VvGAUT1a、VvGAUT1b和VvGAUT4a與其他物種的共線基因為13個，但VvGAUT4a顯示與水稻、擬南芥和毛果楊無共線基因，說明該基因具有物種特異性（圖5-B）。VvGAUT1a和毛果楊有4個共線基因，和擬南芥有1個共線基因。VvGAUT1b與毛果楊有4 個共線基因，與擬南芥有2 個共線基因。VvGAUT3在毛果楊染色體8 號和10號上各有1個共線基因。因此，巨峰葡萄GAUT基因與木本毛果楊的共線性高于草本的水稻和擬南芥。

圖5 VvGAUTs染色體定位（A）和多物種共線性（B）Fig.5 Chromosome localization（A） and multispecies collinearity analysis（B） of VvGAUTs

2.6 VvGAUTs基因的啟動子順式作用元件分析

順式作用元件分析結果表明，VvGAUTs具有光響應、厭氧感應、赤霉素響應、脫落酸響應和茉莉酸甲酯響應等多種與植物生長發(fā)育相關的順式作用元件（圖6）。4個VvGAUTs基因均含有光響應的順式作用元件，其中VvGAUT3的光響應作用元件個數(shù)最多，而VvGAUT1a和VvGAUT4a的數(shù)量基本相等。VvGAUT1a除了響應光的順式作用元件外，還含有較多的激素響應、防御和脅迫響應與分生組織表達等作用元件；VvGAUT1b響應的順式作用元件類型與VvGAUT1a相似，但VvGAUT1b還含有種子特異性調節(jié)的順式作用元件；VvGAUT3只響應了光、厭氧、赤霉素和脫落酸的順式作用元件；VvGAUT4a響應光、干旱、赤霉素、防御和脅迫、分生組織表達、水楊酸和厭氧感應的順式作用元件。

圖6 VvGAUTs的啟動子順式作用元件Fig.6 Identified cis-acting elements in promoters of VvGAUTs

2.7 不同摘心處理下巨峰葡萄GAUTs基因的表達分析

2.7.1VvGAUTs基因在巨峰葡萄莖中的表達模式分析 分析VvGAUTs在巨峰葡萄不同摘心處理下莖中的表達模式，不同生長發(fā)育階段下4 個VvGAUTs基因成員的表達模式見圖7，2 葉摘心處理下，VvGAUTs基因在莖中的相對表達量總體低于其他兩種摘心處理。VvGAUT1a在不同處理下的表達量均呈先升后降的模式，在10 d時均達到表達高峰，并且在生長后期處于較低水平，其中摘心處理的表達模式總體低于不摘心處理。VvGAUT1b和VvGAUT3在不摘心和6 葉摘心下呈先升后降的表達模式，并在生長后期處于低表達水平，2 個基因的表達水平分別于10 和20 d 達到表達峰值；而2 葉摘心處理下，VvGAUT1b和VvGAUT3均處于低表達水平，且低于不摘心和6 葉摘心。VvGAUT4a在2 葉摘心處理和不摘心處理下的表達模式基本一致，均呈現(xiàn)較低的水平；而在6 葉摘心處理下，其表達模式在生長前期呈“降-升-降”的趨勢，而在60 d 后呈現(xiàn)出急劇上升的狀態(tài)?？傮w上，與對照相比，2 葉摘心處理抑制了VvGAUTs基因在莖中的表達。此外，從葉片生長過程看，VvGAUT1a、VvGAUT1b和VvGAUT3在葉片生長前期表達水平較高，后期表達水平較低，而VvGAUT4a呈現(xiàn)相反的趨勢。

圖7 VvGAUTs基因在不同發(fā)育階段時不同摘心處理下莖中的表達量Fig.7 The expression of VvGAUTs in stems at different developmental stages after pinching

2.7.2VvGAUTs基因在巨峰葡萄葉片中的表達模式分析 對不同摘心處理后巨峰葡萄葉片中VvGAUTs的表達量進行分析，不同生長發(fā)育階段下4個VvGAUTs基因在葉片中的表達量差異見圖8。VvGAUT1a在2 葉摘心處理下的表達呈現(xiàn)下降趨勢，6葉摘心處理和不摘心處理下生長前期的表達呈現(xiàn)相反的趨勢，6葉摘心處理下10 d時具有表達高峰，而不摘心處理下10 d時的表達量最低。VvGAUT1b在2葉摘心處理下的表達總體高于其他兩種處理，6葉摘心處理和不摘心處理下的表達均為先升后降的模式，其后趨于平緩。VvGAUT3在不摘心處理和6葉摘心處理下的表達均呈現(xiàn)下降的趨勢，而2葉摘心處理下呈現(xiàn)“降-升-降”的表達模式，且比其他兩種處理具有更高的表達水平。VvGAUT4a在2葉摘心處理下的表達量總體高于其他兩種處理，不摘心處理和6葉摘心處理下的表達總體表現(xiàn)出相似的模式，但不摘心處理下葉片生長時期為20 d時表達量最高，而此時6葉摘心處理下葉片中該基因的表達量最低，2葉摘心處理下的表達呈現(xiàn)“升-降-升”的趨勢，且表達量高于其他兩種處理。總體上，在巨峰葡萄葉片生長前期，2葉摘心處理促進4個VvGAUTs基因表達，而在葉片生長后期抑制其表達，雖然不同基因間存在時間上的差異，但整體趨勢相同。此外，從葉片生長過程看，VvGAUT1a、VvGAUT1b和VvGAUT3在葉片生長前期表達水平較高，后期表達水平較低，而VvGAUT4a表達水平變化較平緩。

圖8 VvGAUTs基因在不同發(fā)育階段時不同摘心處理下葉片中的表達量Fig.8 The expression of VvGAUTs in leaves at different developmental stages after pinching

3 討論

基因結構的多樣性是深入了解研究物種的進化過程的重要途徑，對了解植物物種之間多樣化的結構或功能關系具有重要意義［14-15］。通過對克隆到的4 個VvGAUTs進行基因結構分析發(fā)現(xiàn)，VvGAUT1a基因有5個外顯子，VvGAUT1b基因的外顯子有2 個，而VvGAUT3和VvGAUT4a基因均有3 個外顯子。系統(tǒng)進化樹分析發(fā)現(xiàn)，VvGAUTs和VrGAUTs的親緣關系最近，其中VvGAUT1a和VvGAUT1b也具有較近的親緣關系。根據(jù)系統(tǒng)發(fā)育保守假說，親緣關系越近的物種在進化史上的分歧時間越短［16-17］，因此推測同一組群的VvGAUTs基因具有相同或者相似的生物學特性，其對植物的生長發(fā)育調節(jié)可能具有相同或相似的作用特征。摘心處理不僅會改變葡萄植株體內激素水平，也會形成機械損傷脅迫，4 個VvGAUTs啟動子順式作用元件分析發(fā)現(xiàn)VvGAUT1a、VvGAUT4a具有防御與脅迫響應元件，VvGAUT1a、VvGAUT1b和VvGAUT3具有脫落酸響應元件，4 個基因更是都含有赤霉素響應元件，推測摘心處理通過這些響應元件調控VvGAUTs基因的表達。

蛋白質在動植物的營養(yǎng)運輸和生殖生長等生命活動中具有重要的調節(jié)作用，對細胞的形態(tài)發(fā)生和功能至關重要［18-19］。植物在進行各類生命活動時往往需要多種蛋白質聯(lián)合進行功能的行使及應用。從蛋白互作預測結果可以發(fā)現(xiàn)，VvGAUTs基因的編碼蛋白和纖維素、木質素和糖代謝等蛋白互作，這與前人研究結論相似，果膠能與其他細胞壁組成成分聯(lián)合以保證細胞壁的伸縮靈活性，從而維持植株的正常生命活動［20-22］。前人研究發(fā)現(xiàn)，楸樹中GAUTs基因和纖維素合成通路上的植物多肽信號基因（CLAVATA3/Embryo surrounding region-related，CLE）、葡糖苷酶基因（β-glucosidase，BGLU）共同調節(jié)樹木的拉伸應力［23］；果膠合成關鍵基因的缺失會導致纖維素合成酶基因（cellulose synthase，CesA）的表達受到抑制［24］；半乳糖醛酸轉移酶基因通過調節(jié)細胞壁重塑，從而調控葉片的大?。?5］。因此，推測VvGAUTs基因通過對葡萄莖和葉片細胞壁的調控，進而影響莖和葉片的生長發(fā)育。

果膠是維持植物細胞壁結構和功能完整的不可缺少的一類聚合物，存在于細胞壁中的果膠在保護細胞對膨脹壓力的反應中起著至關重要的作用，從而影響著植物的形態(tài)與功能［26］。摘心處理對果樹和農作物均具有積極的作用，平衡營養(yǎng)生長與生殖生長，促進營養(yǎng)物質向花果等營養(yǎng)器官輸送［27-28］。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，2 葉摘心處理顯著提高單果質量、果穗質量和株產(chǎn)量，顯著提高果實產(chǎn)量；進一步研究發(fā)現(xiàn)摘心處理下的巨峰葡萄莖的粗度比不摘心莖的粗度小，且摘心處理下葡萄莖的木質化程度更深，摘心處理下的巨峰葡萄葉片比不摘心處理的葉片更?。?2］。2葉摘心處理下巨峰葡萄的莖木質化，可能與VvGAUTs基因的相對表達量低，果膠合成受到一定抑制有關，這與Westermark等［29］通過測定云杉木質化樣品中果膠組成成分半乳糖醛酸和鼠李糖含量，發(fā)現(xiàn)其復合胞間層中果膠殘留較少的結論相似。2 葉摘心處理下巨峰葡萄葉片相對較小，4 個VvGAUTs基因在葉片生長前期的相對表達量明顯增強，這與Biswal等［30］在楊樹中發(fā)現(xiàn)，GAUT12.1基因的表達水平與株系葉面積呈負相關的結果相近。以上均證明了葡萄摘心處理可以通過調控VvGAUTs的表達影響果膠合成，但不同的VvGAUT基因在巨峰葡萄生長的不同時期，表達量變化存在明顯的差異，其對巨峰葡萄果膠生物合成和含量的影響程度，還有待進一步的深入研究。

4 結論

本研究成功從巨峰葡萄中克隆出4 個半乳糖醛酸轉移酶基因，分別為VvGAUT1a、VvGAUT1b、VvGAUT3、VvGAUT4a，編碼351、388、345和356個氨基酸。VvGAUTs與河岸葡萄VrGAUTs 的親緣關系最近。VvGAUTs 與纖維素、木質素和糖代謝等基因的編碼蛋白密切互作?？傮w上，在巨峰葡萄2 葉摘心處理下的莖中VvGAUTs基因表達受到抑制，而VvGAUTs基因在葉片中的表達呈現(xiàn)生長前期表達量增強，在生長后期表達量受到抑制的趨勢，表明VvGAUTs基因可以響應葡萄摘心處理。