徐成高 羅麗君

糖尿病周圍神經(jīng)病變作常見的糖尿病慢性并發(fā)癥，約50%的2型糖尿病患者最終合并周圍神經(jīng)病變，常表現(xiàn)為感覺異常、肢體遠端麻木刺痛等，早期及時診治預后較好，晚期導致難逆的神經(jīng)損傷，對身心健康及生活質(zhì)量有較大影響。因而，早期診斷治療對糖尿病周圍神經(jīng)病變預后具有重要意義。微小RNA（miRNA）是一類內(nèi)源性非編碼RNA分子。miR-223已被證實參與多種病理過程括癌癥、心力衰竭、癡呆和肝病等［1-2］。有研究［3］發(fā)現(xiàn)糖尿病視網(wǎng)膜患者的血清及房水中miR-223-3p表達較非糖尿病患者增加，且隨著視網(wǎng)膜病變的進展，其水平逐步升高。本研究探討血清miR-223與2型糖尿病周圍神經(jīng)病變的相關(guān)性，為糖尿病周圍神經(jīng)病變診治提供參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2020年12月至2022年5月嘉興市第一醫(yī)院2型糖尿病患者138例。2型糖尿病診斷參照1999年WHO發(fā)布的標準。糖尿病周圍神經(jīng)病變的診斷依據(jù)：①糖尿病病史診斷明確；②神經(jīng)病變在糖尿病同時或之后出現(xiàn)；③具有神經(jīng)病變的癥狀（麻痛、感覺異常等），5項檢查（振動覺、踝反射、壓力覺、溫度覺、針刺痛覺）有1項異常，若無癥狀，5項檢查有2項異常也可診斷；④除外其他神經(jīng)病變。納入標準：①年齡18～70歲；②確診為2型糖尿病。排除合并心肺、血液、腫瘤慢性炎癥性疾病。根據(jù)有無周圍神經(jīng)病變將患者分為2組：2型糖尿病組77例；2型糖尿病伴周圍神經(jīng)病變組61例；本研究經(jīng)本院倫理委員會批準。

1.2 方法 （1）收集基線資料：包括年齡、性別、病程、收縮壓、體質(zhì)量、身高等。體質(zhì)量指數(shù)（BMI）=體質(zhì)量（kg）/身高（m）2。（2）相關(guān)實驗室指標測定：所有患者均空腹抽取靜脈血，全自動生化儀電化學發(fā)光法測定總膽固醇（TC）、肌酐、尿酸。化學發(fā)光法測定空腹胰島素、維生素D，高壓液相色譜法檢測糖化血紅蛋白（HbA1c）。留取晨尿通過免疫投射比濁法檢測尿微量白蛋白/肌酐（UACR）。胰島素抵抗指數(shù)（HOMAIR）=胰島素（mIU/L）×葡萄糖（mmol/L）/22.5。所有患者行肌電圖檢查。（3）miR-223及血清腫瘤壞死因子α（TNF-α）的測定：收集患者血液標本，離心10 min（3,000 r/min）分離取上清液，于-80℃冰箱保存。采用trizol 提取miRNA，采用Platinum? Taq DNA Polymerase-PCR Kit檢測血清miR-223水平。反應(yīng)體系20μL，反應(yīng)條件：95℃ 5 s；60℃ 40 s；共40個循環(huán)。每份樣品設(shè)3個重復，取平均值。采用2-△△CT法分析miR-223的相對表達量。收集患者血液標本，離心10 min（3,000 r/min）分離取上清，于-80℃冰箱保存。采用酶聯(lián)免疫吸附方法（ELISA）檢測血清TNF-α（深圳欣博盛生物科技有限公司）的表達水平。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS統(tǒng)計軟件。符合正態(tài)分布計量資料以（±s）表示，用t檢驗；偏態(tài)分布計量資料用M（Q1，Q3）表示，用秩和檢驗；計數(shù)資料用χ2檢驗。Logistic回歸分析各指標與糖尿病周圍神經(jīng)病變的相關(guān)性，應(yīng)用受試者操作特征曲線（ROC）分析miR-223對2型糖尿病伴周圍神經(jīng)病變的預測價值。以P＜0.05 有統(tǒng)計學差異。

2 結(jié)果

2.1 兩組基線資料、實驗室指標及血清生物標記物比較 2型糖尿病伴周圍神經(jīng)病變組年齡、病程、UACR、TNF-α及miR-223高于2型糖尿病組，HOMA-IR低于2型糖尿病組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1-3。

表1 兩組性別、吸煙、病程、年齡及BMI比較

表2 兩組收縮壓、肌酐、尿酸、維生素D及UACR比較

表3 兩組TC、HbA1C、HOMA-IR、TNF-α及miR-223比較

2.2 糖尿病伴周圍神經(jīng)病變的影響因素 糖尿病病程、性別、miR-223、TNF-α為周圍神經(jīng)病變的獨立相關(guān)因素（P＜0.05）。見表4。

表4 糖尿病周圍神經(jīng)病變影響因素的Logistic回歸分析

2.3 miR-223對2型糖尿病周圍神經(jīng)病變的預測價值分析 miR-223預測發(fā)生糖尿病周圍神經(jīng)病變的ROC曲線下面積為0.722±0.045，其預測糖尿病周圍神經(jīng)病變的敏感度67.2%，特異度76.7%（95%CI：0.634～0.809，P＜0.05），聯(lián)合糖尿病病程后ROC曲線下面積為0.819±0.035，預測糖尿病周圍神經(jīng)病變的敏感度73.8%，特異度77.9%（95%CI：0.750～0.889，P＜0.05）。見圖1。

圖1 miR-223對糖尿病患者發(fā)生周圍神經(jīng)病變的預測價值

3 討論

目前糖尿病周圍神經(jīng)病變發(fā)病機制尚未清楚，可能與高血糖、血脂代謝紊亂及異常的胰島素信號通路等引發(fā)系列的病理生理改變有關(guān)，這些病理變化包括糖酵解途徑異常、多元醇途徑異常、炎癥信號通路增加及炎癥因子水平升高等［4-5］。miRNA作為非編碼RNA其主要通過作用于mRNA，抑制基因表達發(fā)揮作用。近些年，較多研究表明，糖尿病及其并發(fā)癥發(fā)生發(fā)展中有miRNA參與?；A(chǔ)試驗中發(fā)現(xiàn)在高糖處理的心肌細胞中miR-223高表達，抑制miR-223可減輕糖尿病心肌病大鼠的心肌纖維化、NLRP3炎癥性小體的激活和心肌細胞凋亡［6］。LI等［7］發(fā)現(xiàn)在糖尿病患者、糖尿病小鼠的胰島中以及高糖處理的β細胞中miR-223表達上調(diào)，糖尿病條件下miR-223水平的升高可能保護2型糖尿病的代償機制，因miR-223可以增加功能β細胞質(zhì)量，以應(yīng)對肥胖、2型糖尿病條件下不斷增加的胰島素需求。HANEKLAUS等［8］報道在流感或乙型肝炎感染以及炎癥性腸病、2型糖尿病、白血病和淋巴瘤中，miR-223的表達控制被解除，雖然這也可能是疾病本身的結(jié)果，但較多研究表明，miR-223在控制炎癥防止感染期引起的附帶損傷和防止致癌髓系轉(zhuǎn)化方面發(fā)揮作用，NF-kb和NLRP3炎癥小體是重要的炎癥機制中的因子，其可被miR-223抑制，在WAN等［9］研究中發(fā)現(xiàn)miR-223靶向NLRP3下調(diào)caspase-1、IL-1β和IL-18等炎癥或凋亡過程。另有研究發(fā)現(xiàn)血清和齦溝液中miR-223和miR-200b的水平在糖尿病患者及合并牙周病患者較健康對照組升高，并與TNF-a正相關(guān)，IL-10負相關(guān)［10］。

本研究顯示，糖尿病神經(jīng)病變組miR-223水平高于2型糖尿病組。進一步通過多因素Logistic回歸相關(guān)分析，miR-223對糖尿病周圍神經(jīng)病變的影響?yīng)毩⒂诓〕?、年齡及性別之外。ROC曲線分析，應(yīng)用miR-223預測糖尿病周圍神經(jīng)病變，其敏感度、特異度較高，尤其聯(lián)合糖尿病病程時可作為診斷糖尿病周圍神經(jīng)病變的標志物。綜上所述，2型糖尿病周圍神經(jīng)病變患者血清miR-223升高，與TNF-α正相關(guān)，miR-223可能成為診斷早期糖尿病周圍神經(jīng)病變的血清標志物。