梁 謀 龐逸輝 劉 歡 王 霞 宣 澤 江志杰

北京市藥品檢驗研究院 國家藥品監(jiān)督管理局中成藥質(zhì)量評價重點實驗室中藥成分分析與生物評價北京市重點實驗室,北京 102206

培養(yǎng)基是微生物試驗的基礎(chǔ)，其質(zhì)量優(yōu)劣直接影響微生物試驗結(jié)果的準確性和可靠性[1]。《中華人民共和國藥典》2020 版四部中，《藥品微生物實驗室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則》明確要求對商品化培養(yǎng)基建立接收標準并進行符合性驗收，驗收內(nèi)容包括產(chǎn)品名稱、批號、數(shù)量、生產(chǎn)單位、外觀性狀等[2]?！端幤飞a(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（2010 年修訂）》第二百二十六條，要求對培養(yǎng)基進行質(zhì)量控制與保證[3]?！妒称钒踩珖覙藴适称肺⑸飳W(xué)檢驗培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求》（GB 4789.28-2013）[4]明確了培養(yǎng)基性能測試的方法和判定標準。培養(yǎng)基的質(zhì)量管理和控制是相關(guān)行業(yè)和法規(guī)重點關(guān)注的內(nèi)容。

1 材料與方法

1.1 儀器和耗材

LRH-250 生化培養(yǎng)箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）；Ⅱ級A2 型生物安全柜（賽默飛世爾蘇州儀器有限公司）；一次性接種環(huán)1 μl（JET，批號：20190905）；一次性L 型涂布棒（Fisher brand，批號：180301230）。

1.2 培養(yǎng)基

培養(yǎng)基比對研究使用的胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（以下簡稱培養(yǎng)基）分別為5 家國內(nèi)培養(yǎng)基生產(chǎn)商，分別用A（批號Ⅰ：20 201105；批號Ⅱ：20 210111；批號Ⅲ：20210215），B（批號Ⅰ：20 201130；批號Ⅱ：20 210106；批號Ⅲ：20210107），C（批號Ⅰ：20 201109；批號Ⅱ：20 201202；批號Ⅲ：20201107），D（批號Ⅰ：K2173Y；批號Ⅱ：L0072Y；批號Ⅲ：L0118Y），E（批號Ⅰ：210110-4；批號Ⅱ：201216-5；批號Ⅲ：201118-1）代表。

1.3 試驗菌株

金黃色葡萄球菌CMCC（B）26003、銅綠假單胞菌CMCC（B）10104、枯草芽孢桿菌CMCC（B）63501、黑曲霉CMCC（F）98003、白色念珠菌CMCC（F）98001、大腸埃希氏菌ATCC29212 和糞腸球菌ATCC25922。

1.4 試驗方法

對5 個品牌培養(yǎng)基的內(nèi)外包裝和產(chǎn)品標識信息進行比對分析，并根據(jù)《中華人民共和國藥典》2020版四部通則1105 培養(yǎng)基適用性檢查方法[2]和《食品安全國家標準食品微生物學(xué)檢驗培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求》（GB 4789.28-2013）[4]商品化培養(yǎng)基質(zhì)量控制測試方法對每個品牌各3 個批號的培養(yǎng)基進行分析。

2 結(jié)果

2.1 培養(yǎng)基包裝標識差異

5 個品牌培養(yǎng)基內(nèi)外包裝標識信息存在以下差異：培養(yǎng)基產(chǎn)品規(guī)格標示的單位不同；5 個品牌標示的警示信息和備注信息的內(nèi)容側(cè)重點不同；3 個品牌有效期對應(yīng)生產(chǎn)日期縮減1 d，2 個品牌有效期對應(yīng)生產(chǎn)日期沒有縮減天數(shù)。見表1。

表1 培養(yǎng)基產(chǎn)品包裝標識比對結(jié)果

2.2 培養(yǎng)基廠檢報告差異

5 個品牌培養(yǎng)基自檢報告使用的檢驗依據(jù)和具體檢測項目以及適用性判定標準都不相同。見表2。

表2 培養(yǎng)基產(chǎn)品自檢項目比對結(jié)果

2.3 培養(yǎng)基適用性檢查

根據(jù)《中華人民共和國藥典》2020 版四部通則1105，對5 個品牌培養(yǎng)基進行比對測試，培養(yǎng)基適用性檢查結(jié)果，均符合要求，菌落平均數(shù)的比值在0.6 ～1.4。見表3。

表3 培養(yǎng)基適用性檢查結(jié)果

根據(jù)《食品安全國家標準食品微生物學(xué)檢驗培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求》（GB 4789.28-2013）對5 個品牌培養(yǎng)基性能進行比對測試。5 個品牌培養(yǎng)基均符合標準要求，G 值結(jié)果在7.1 ～14.5。見表4。

表4 培養(yǎng)基適用性檢查結(jié)果

3 討論

3.1 培養(yǎng)基質(zhì)量管理規(guī)范化的必要性

目前，我國培養(yǎng)基質(zhì)量控制標準多為行業(yè)標準，缺乏系統(tǒng)全面的國家標準。藥品檢驗和食品生產(chǎn)檢測培養(yǎng)基使用驗收有相應(yīng)標準。此外，還有衛(wèi)生行業(yè)標準和進出口行業(yè)標準等[5-7]?，F(xiàn)行培養(yǎng)基質(zhì)量控制標準存在培養(yǎng)基應(yīng)用領(lǐng)域不明確，適用性待提高，質(zhì)量控制依據(jù)不完備等問題。

3.2 培養(yǎng)基比對研究發(fā)現(xiàn)的主要差異

首先，培養(yǎng)基包裝及其信息標識存在差異。關(guān)于有效期標識，有效期對應(yīng)生產(chǎn)日期應(yīng)該縮減天數(shù)。包裝警示信息方面，除了標示一般警示信息外，不同用途培養(yǎng)基應(yīng)當(dāng)有針對性的警示內(nèi)容。再次質(zhì)量控制標準差異較大。有1 個品牌沒有注明出廠檢驗依據(jù)，給培養(yǎng)基的使用帶來一定困惑。pH 值是微生物生長繁殖重要的環(huán)境指標之一，一般來說，細菌適合pH 值在7.0 ～7.5[8]，在比對中發(fā)現(xiàn)，有2 個品牌沒有進行pH 值檢測。適用性測試方面，品牌B 的出廠檢驗報告，沒有寫明菌落回收率的具體測試數(shù)值，只寫明結(jié)果范圍，其余4 個品牌菌落回收率都有明確數(shù)值。通過研究發(fā)現(xiàn)，5個品牌培養(yǎng)基適用性測試，都符合相關(guān)標準要求，但相同品牌不同批號之間均一性存在差異。

3.3 培養(yǎng)基質(zhì)量管理的意見和建議

培養(yǎng)基使用前的驗收很有必要，使用者應(yīng)該認真執(zhí)行培養(yǎng)基驗收制度，建立適合自身應(yīng)用領(lǐng)域培養(yǎng)基驗收工作文件[9-12]，特別是在更換培養(yǎng)基供應(yīng)商時，應(yīng)最大限度保證培養(yǎng)基質(zhì)量的一致性[13]。應(yīng)當(dāng)建立培養(yǎng)基通用質(zhì)量標準，適用于不同微生物檢測領(lǐng)域的培養(yǎng)基質(zhì)量基本要求[14-16]，培養(yǎng)基生產(chǎn)商應(yīng)該加強培養(yǎng)基質(zhì)量管理和控制，對質(zhì)量控制標準予以明確和完善，從而更加符合現(xiàn)行行業(yè)標準。

綜上所述，目前市場上使用的培養(yǎng)基的包裝標識和質(zhì)控標準存在較大差異，不利于培養(yǎng)基后期的管理和使用，應(yīng)當(dāng)進行改進和完善。因條件限制只對市場上5 家培養(yǎng)基廠商進行比較，此外，因?qū)嶋H檢驗?zāi)芰Φ脑蛭磳? 種品牌培養(yǎng)基的pH 值、硬度、水分流失、厚度等參數(shù)做定量分析，因此研究結(jié)果存在一定局限性，有待后續(xù)研究進行深入分析與研討。