呂建敏，袁海娜，肖功年，劉士旺

（1.浙江中醫(yī)藥大學(xué) 中醫(yī)藥科學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中心，浙江 杭州 310053；2.浙江科技大學(xué) 生物與化學(xué)工程學(xué)院/輕工學(xué)院，浙江 杭州 310023）

食用菌在我國(guó)歷史悠久[1]。隨著人們對(duì)食用菌營(yíng)養(yǎng)和生理功效研究的不斷深入，食用菌的食用價(jià)值受到關(guān)注。食用菌中富含多糖、多酚、氨基酸、煙酸、鉀、核黃素、硒、維生素和膳食纖維等重要營(yíng)養(yǎng)成分，不僅具有多種生理作用，還具有益生元功效[2-3]。研究發(fā)現(xiàn)，日糧中添加雙孢菇粉可增加仔雞糞便中雙歧桿菌和乳桿菌的數(shù)量[4]；灌服富硒猴頭菇凍干粉可使小鼠腸道中雙歧桿菌和乳桿菌等益生菌數(shù)量顯著增加，有害菌大腸埃希氏菌數(shù)量明顯減少[5]；灌服香菇酶解物可明顯增加小鼠腸道中細(xì)菌總數(shù)和乳酸菌數(shù)量，促進(jìn)腸道中有益菌的生長(zhǎng)，增強(qiáng)腸道免疫功能[6]。因此，食用菌及其提取物可作為天然益生元，對(duì)維持腸道微生態(tài)平衡、保證機(jī)體健康起到關(guān)鍵作用。但食用菌種類(lèi)繁多，不同食用菌對(duì)腸道菌群作用效果不同[7]，且目前有關(guān)此功效研究?jī)H集中在少數(shù)品種上，大多數(shù)食用菌仍亟待開(kāi)發(fā)。

秀珍菇（Pleurotusgeesteranus）隸屬擔(dān)子菌亞門(mén)，層菌綱，傘菌目，側(cè)耳科，側(cè)耳屬，最早發(fā)現(xiàn)于印度，現(xiàn)已在全國(guó)廣為栽培[8]。秀珍菇營(yíng)養(yǎng)豐富，富含蛋白質(zhì)和多糖，且氨基酸種類(lèi)齊全[9]。研究發(fā)現(xiàn)秀珍菇多糖具有抗氧化、抗腫瘤、抗炎、抗衰老、降血糖、增強(qiáng)免疫、保護(hù)肝、肺組織等藥理功效[10-14]，除多糖外，秀珍菇中還含有蛋白質(zhì)、氨基酸、黃酮、多酚、維生素等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)[8-9]，能與多糖協(xié)同充分發(fā)揮其抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、抗氧化等功效。本課題組前期利用H22 荷瘤小鼠證實(shí)，秀珍菇粉具有較好的抑瘤作用[15]。近年來(lái)，有關(guān)秀珍菇蛋白結(jié)構(gòu)功能及其水解物的抗氧化功效研究備受關(guān)注[16-17]。但目前秀珍菇在腸道菌群調(diào)控和免疫調(diào)節(jié)方面研究報(bào)道鮮見(jiàn)。因此，本研究以小鼠為研究對(duì)象，重點(diǎn)探討秀珍菇粉對(duì)腸道菌群調(diào)節(jié)作用，并輔以生化、抗氧化和免疫功能指標(biāo)的測(cè)定，旨在為秀珍菇功能食品的深層次研發(fā)提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

無(wú)特定病原體（specific pathogen free，SPF）級(jí)C57BL/6 小鼠40 只：上海西普爾—必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，雌性，年齡為6 周齡，體質(zhì)量為17～20 g，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)為20130016009288。

新鮮秀珍菇：縉云縣珍稀食用菌專(zhuān)業(yè)合作社，經(jīng)浙江科技大學(xué)劉士旺教授鑒定。

谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alanine aminotransferase，ALT）檢測(cè)試劑盒、尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）檢測(cè)試劑盒、肌酐（creatinine，Crea）檢測(cè)試劑盒、總膽固醇（total cholesterol，CHOL）檢測(cè)試劑盒、甘油三酯（triglyceride，TC）檢測(cè)試劑盒、葡萄糖（glucose，GLU）檢測(cè)試劑盒：德賽診斷系統(tǒng)（上海）有限公司；超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）測(cè)定試劑盒、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）測(cè)定試劑盒、過(guò)氧化氫酶（catalase，CAT）測(cè)定試劑盒、丙二醛（malondialdehyde，MDA）測(cè)定試劑盒：南京建成生物工程研究所。Hanks 平衡鹽溶液（Hank balanced salt solution，HBSS）：美國(guó)Atlanta 生物科技公司；刀豆素（canavalin，ConA）、脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）、噻唑藍(lán)（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）、RPMI1640（Roswell Park Memorial Institute 1640 medium，RPMI1640）完全培養(yǎng)液、二甲基亞砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）：美國(guó)Sigma 公司。

16S rDNA 測(cè)序試劑：熱啟動(dòng)Flex DNA 聚合酶預(yù)混液（Pusion Hot start flex 2X Master Mix）：上海儀濤生物儀器有限公司；2 000 bp 范圍的雙鏈線(xiàn)狀DNA 分子量大小參照（DL2000 DNA Maker）：日本Takara 公司；核酸染料（Gene colour）：北京金博益生物技術(shù)有限公司；雙鏈DNA 熒光定量檢測(cè)試劑盒（Qubit dsDNA HS Assay Kit），500 次：美國(guó)Thermo Fisher 公司；G-10 瓊脂糖（Agarose G-10）：西班牙Biowest 公司；50×TAE 緩沖液[由三羥甲基氨基甲烷（tris（hydroxymethyl）aminomethane，tris base）、乙酸（acetic acid）和乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid，EDTA）組成]：生工生物工程（上海）股份有限公司；聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）片段純化試劑盒（PCR Cleanup Kit）：美國(guó)Axygen 公司。

1.2 儀器與設(shè)備

RHP-600 型高速多功能粉碎機(jī)：浙江榮浩工貿(mào)有限公司；GM-SY-B 型納米沖擊磨：秦皇島市太極環(huán)納米制品有限公司；DK-450B 型電熱恒溫水槽：上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；X-15R 離心機(jī)：美國(guó)Beckman Coutler 公司；7020 型全自動(dòng)生化分析儀：日本日立公司；iMark 酶標(biāo)儀：美國(guó)伯樂(lè)公司；Forma3111 型CO2培養(yǎng)箱：美國(guó)Thermo 公司；Centrifuge 5424 常溫離心機(jī)：德國(guó)Eppendorf 公司；Microfuge R 22R Centrifuge 冷凍離心機(jī)：美國(guó)Beckman Coutler 公司；WH-861 Vortex Shaker 旋渦振蕩儀：太倉(cāng)市華利達(dá)實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；DK-8D 三溫三控恒溫水浴鍋：上海博迅實(shí)業(yè)有限公司；A200 型聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）儀：杭州朗基科學(xué)儀器有限公司；R EPS300 電泳儀、2500 型凝膠成像儀：上海天能公司；miseq 高通量測(cè)序儀：美國(guó)illumina 公司；DW-HL388 超低溫冷凍儲(chǔ)存箱：中科美菱低溫科技股份有限公司。

1.3 方法

1.3.1 秀珍菇粉（Pleurotusgeesteranuspowder，GP）制備

將新鮮秀珍菇于50～70 ℃下烘干8 h，使用高速多功能粉碎機(jī)粉碎成粉末，過(guò)40 目篩。為增加秀珍菇粉與溶劑接觸表面積，提高生物利用率[18]，將上述粉末用納米沖擊磨研磨，研磨時(shí)冷凝溫度為25 ℃，連續(xù)運(yùn)行3 h 后，將所得粉末過(guò)6 000 目篩，即得實(shí)驗(yàn)用秀珍菇粉。

1.3.2 小鼠分組及處理

將40 只6 周齡雌性C57BL/6 小鼠適應(yīng)飼養(yǎng)1 周后，隨機(jī)分為4 組，每組10 只，分別為正常對(duì)照（normal control，NC）組，秀珍菇粉低（GPL）、中（GPM）、高（GPH）劑量組。正常對(duì)照組小鼠灌服0.5% 羧甲基纖維素鈉溶液（carboxymethylcellulose sodium solution，CMCNa），秀珍菇粉低、中、高劑量組小鼠分別灌服劑量為500、1 000、2 000 mg/kg BW 的秀珍菇粉CMCNa混懸液，各組小鼠灌胃容量均為0.2 mL/10 g BW。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)周期為40 d。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)在浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中心進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)為SYXK（浙）2018-0012。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方案獲得實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)管理使用委員會(huì)審查批準(zhǔn)（審批號(hào)：IACUC 2018091705）。

1.3.3 平均日增重和臟器指數(shù)測(cè)定

分別在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始（m1，g）和實(shí)驗(yàn)結(jié)束（m2，g）稱(chēng)量小鼠空腹體質(zhì)量，小鼠平均日增重（A，g/d）的計(jì)算公式如下。

A=（m2-m1）/D

式中：D為實(shí)驗(yàn)時(shí)間，40 d。

實(shí)驗(yàn)結(jié)束取小鼠脾臟、胸腺、肝臟和腎臟并稱(chēng)重，臟器指數(shù)（X，%）的計(jì)算公式如下。

X=M/m2×100

式中：M為臟器質(zhì)量，g；m2為實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)小鼠空腹體質(zhì)量，g。

1.3.4 小鼠血清生化指標(biāo)和抗氧化指標(biāo)測(cè)定

實(shí)驗(yàn)結(jié)束，取血，分離血清，參照試劑盒說(shuō)明書(shū)，利用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定小鼠血清中ALT 活性、GLU、BUN、Crea、CHOL、TC 含量；利用酶標(biāo)儀測(cè)定小鼠血清中SOD 和GSH-Px 的活性及MDA 含量。

1.3.5 小鼠肝、腎抗氧化指標(biāo)測(cè)定

實(shí)驗(yàn)結(jié)束取小鼠肝、腎，分別制備肝、腎組織勻漿，參照試劑盒說(shuō)明書(shū)，利用酶標(biāo)儀測(cè)定小鼠肝、腎組織勻漿中SOD、GSH-Px 和CAT 活性及MDA 含量。

1.3.6 小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)

參照文獻(xiàn)[19]方法進(jìn)行，無(wú)菌取脾，置無(wú)菌培養(yǎng)皿中將其磨碎，利用尼龍綢布過(guò)濾至10 mL 離心管中，用Hanks 平衡鹽溶液洗滌，合并洗滌液，4 ℃、1 500 r/min 離心5 min，棄上清液，加Hanks 平衡鹽溶液至7 mL，將細(xì)胞混勻，再4 ℃、1 500 r/min 離心5 min，重復(fù)2 次。所獲每個(gè)脾臟的淋巴細(xì)胞用2 mL RPMI 1640 完全培養(yǎng)液混懸。取上述脾淋巴細(xì)胞混懸液0.1 mL 加3.9 mL臺(tái)盼藍(lán)溶液，混勻，于顯微鏡下計(jì)數(shù)，再用RPMI 1640完全培養(yǎng)液將原液稀釋至1×107個(gè)細(xì)胞/mL。取96 孔板，每個(gè)樣品分別設(shè)4 孔重復(fù)和4 個(gè)陰性對(duì)照孔。先在每孔中加入1×107個(gè)細(xì)胞/mL 脾淋巴細(xì)胞混懸液100 μL，隨后在各樣品孔中加入100 μL 2.5 μg/mL 的ConA（或5.0 μg/mL 的LPS），在各陰性對(duì)照孔中加入RPMI1640 完全培養(yǎng)液100 μL。將加樣后96 孔板置于37 ℃的5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72 h，每孔加入MTT 10 μL，繼續(xù)培養(yǎng)4 h，4 ℃、1 500 r/min 離心5 min，棄上清液，加入DMSO 150 μL，充分振蕩，用酶標(biāo)儀于570 nm 處分別測(cè)樣品孔（B1）、陰性對(duì)照孔（B2）的吸光度。T 淋巴細(xì)胞或B 淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)（R）的計(jì)算公式如下。

R=B1/B2

1.3.7 小鼠腸道微生物16S rDNA 測(cè)序

實(shí)驗(yàn)結(jié)束，用CO2吸入法處死小鼠，取小鼠結(jié)腸內(nèi)容物，經(jīng)DNA 提取及檢測(cè)、PCR 擴(kuò)增、產(chǎn)物純化、文庫(kù)制備與庫(kù)檢、miseq 高通量測(cè)序儀上機(jī)測(cè)序等步驟，進(jìn)行小鼠腸道微生物16S rDNA 測(cè)序。

1.4 數(shù)據(jù)處理

采用SAS 8.1 統(tǒng)計(jì)軟件的ANOVA 分析進(jìn)行單因素方差分析，并進(jìn)行Duncan 多重比較，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 秀珍菇粉對(duì)小鼠生長(zhǎng)性能的影響

一般狀態(tài)觀察顯示，實(shí)驗(yàn)組和正常對(duì)照組小鼠狀況良好，被毛光滑，采食、飲水正常，無(wú)死亡情況發(fā)生。體質(zhì)量、臟器指數(shù)是評(píng)估藥物和食品毒副作用的重要指標(biāo)，體質(zhì)量和臟器指數(shù)異常變化一般先于器官組織的病理改變[20]。秀珍菇粉對(duì)小鼠平均日增重和肝、腎指數(shù)的影響見(jiàn)表1。

表1 秀珍菇粉對(duì)小鼠平均日增重和肝、腎指數(shù)的影響Table 1 Effects of Pleurotus geesteranus powder on average daily weight gain and liver and kidney indices in mice

由表1 可知，灌服秀珍菇粉CMCNa 混懸液40 d后，各實(shí)驗(yàn)組小鼠均存活，實(shí)驗(yàn)結(jié)束各組小鼠體質(zhì)量均有增加，各實(shí)驗(yàn)組小鼠平均日增重和肝、腎指數(shù)與正常對(duì)照組相比均無(wú)顯著差異（P>0.05），結(jié)果表明秀珍菇粉對(duì)小鼠無(wú)毒副作用，具有食用安全性。

2.2 秀珍菇粉對(duì)小鼠血清生化指標(biāo)的影響

血清ALT、BUN、Crea、CHOL、TC、GLU 是進(jìn)一步評(píng)估動(dòng)物健康狀況的重要生化指標(biāo)，指標(biāo)異常升高可預(yù)示機(jī)體某些器官和功能的病變。如血清ALT 活性、BUN、Crea 含量異常升高是肝、腎功能受損的重要標(biāo)志。秀珍菇粉對(duì)小鼠血清生化指標(biāo)的影響見(jiàn)表2。

表2 秀珍菇粉對(duì)小鼠血清生化指標(biāo)的影響Table 2 Effects of Pleurotus geesteranus powder on serum levels of biochemical indices in mice

由表2 可知，各實(shí)驗(yàn)組GLU、CHOL、TC 含量與NC組相比均無(wú)顯著差異（P>0.05）。GPM 和GPH 組的ALT 活性極顯著低于NC 組（P<0.01）。灌服秀珍菇粉明顯降低小鼠血清中BUN 和Crea 含量，其中GPM、GPH 組的BUN 含量均與NC 組差異極顯著（P<0.01）；GPM 和GPH 組的Crea 含量與NC 組相比顯著降低（P<0.05）。結(jié)果表明，小鼠灌服秀珍菇粉后，秀珍菇對(duì)肝、腎的功能具有一定保護(hù)作用。

2.3 秀珍菇粉對(duì)小鼠抗氧化能力影響

SOD、GSH-Px、CAT 活性和MDA 含量是反映機(jī)體抗氧化能力的重要指標(biāo)，其中SOD、GSH-Px 和CAT 是機(jī)體重要的抗氧化酶，具有清除超氧化或過(guò)氧化因子自由基、保護(hù)生物膜和生物大分子免受損傷的作用[21]；MDA 是一種脂質(zhì)過(guò)氧化物，其含量越高表明機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊程度越嚴(yán)重[22]。秀珍菇粉對(duì)小鼠血清、肝、腎組織抗氧化能力的影響見(jiàn)表3。

表3 秀珍菇粉對(duì)小鼠血清、肝、腎組織抗氧化指標(biāo)的影響Table 3 Effects of Pleurotus geesteranus powder on the antioxidant activity in the serum，liver，and kidney of mice

由表3 可知，GPM、GPH 組小鼠血清中MDA 含量均極顯著低于NC 組（P<0.01）。與NC 組相比，GPM、GPH 組小鼠血清SOD 活性顯著升高（P<0.05）；GPL 組小鼠血清GSH-Px 活性也顯著高于NC 組（P<0.05）。灌服秀珍菇粉后，GPM 和GPH 組小鼠肝CAT 活性顯著升高（P<0.05），各實(shí)驗(yàn)組小鼠腎臟MDA 含量顯著低于NC 組（P<0.05，P<0.01），且GPM 和GPH 組小鼠腎GSH-Px 活性也顯著高于NC 組（P<0.05）。結(jié)果表明，秀珍菇粉能明顯提高小鼠血清SOD 活性、血清和腎GSH-Px 活性以及肝CAT 活性，并明顯降低血清和腎MDA 含量，體現(xiàn)出較好的抗氧化活性。此結(jié)果與前人對(duì)秀珍菇菌絲體和秀珍菇多糖及秀珍菇蛋白水解物抗氧化功效的研究報(bào)道一致[10，17，23]，說(shuō)明秀珍菇粉的抗氧化活性與其所含的多糖和蛋白成分密切相關(guān)。但也不排除秀珍菇粉中其他的一些活性物質(zhì)（如酚類(lèi)化合物、維生素、番茄紅素、氨基酸等）與多糖共同參與機(jī)體抗氧化過(guò)程[24]，起到協(xié)同增效作用。綜上，秀珍菇作為多種活性成分的復(fù)合體，較其單一多糖提取物具有更好的營(yíng)養(yǎng)功能。

2.4 秀珍菇粉對(duì)小鼠免疫功能的影響

秀珍菇粉對(duì)小鼠免疫功能的影響見(jiàn)表4。

表4 秀珍菇粉對(duì)小鼠免疫功能的影響Table 4 Effects of Pleurotus geesteranus powder on the immunity in mice

胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、T 淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)、B 淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)是反映機(jī)體免疫功能的重要指標(biāo)，其中胸腺指數(shù)和T 淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)代表細(xì)胞免疫功能，脾臟指數(shù)和B 淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)可反映體液免疫功能。由表4 可知，各實(shí)驗(yàn)組小鼠的胸腺指數(shù)均顯著高于NC 組（P<0.05，P<0.01）；GPH 組的T 淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)最高，與NC 組相比差異顯著（P<0.05）。秀珍菇可顯著提高小鼠的胸腺指數(shù)，且在2 000 mg/kg BW劑量下可顯著提高小鼠T 淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)，說(shuō)明秀珍菇具有一定的增強(qiáng)小鼠細(xì)胞免疫功能的作用。

2.5 秀珍菇粉對(duì)小鼠腸道菌群的影響

2.5.1 Alpha 多樣性分析

Alpha 多樣性是反映物種豐富度和均勻度的綜合指標(biāo)，包含chao1、observed_species、Shannon 和Simpson 4 個(gè)次級(jí)指數(shù)。其中指數(shù)chao1 和observed_species 主要反映樣品中物種種類(lèi)（operational taxonomic units，OTUs）的數(shù)目，Shannon 和Simpson 指數(shù)同時(shí)反映樣品中物種種類(lèi)的數(shù)目以及樣品中不同種類(lèi)的物種豐度的平均性或均勻性。

秀珍菇粉對(duì)小鼠結(jié)腸微生物Alpha 多樣性的影響見(jiàn)表5。

表5 秀珍菇粉對(duì)小鼠結(jié)腸微生物Alpha 多樣性影響Table 5 Effects of Pleurotus geesteranus powder on Alpha diversity indices of the colonic flora in mice

由表5 可知，與NC 組相比，各實(shí)驗(yàn)組的chao1、observed_species 和Shannon 指數(shù)均有所增加，GPL 組的chao1、observed_species 和Shannon 指數(shù)均顯著高于NC 組（P<0.05），GPM 和GPH 組的chao1、observed_species 和Shannon 指數(shù)與NC 組無(wú)顯著差異（P>0.05）。

維恩圖可直觀反映不同樣本之間共同的或特有的物種數(shù)（operational taxonomic units，OUTs）?；贠UTs 聚類(lèi)的維恩圖見(jiàn)圖1。

圖1 基于OUTs 聚類(lèi)的維恩圖Fig.1 Venn diagram of OTUs in different groups

由圖1 可知，GPL、GPM、GPH 組與NC 組的小鼠腸道共同物種數(shù)（OUTs）分別為2 216、2 318 和2 177，GPL、GPM、GPH 組小鼠腸道的特有物種數(shù)（OUTs）均較NC 組多，分別為NC 組1.9、2.0 倍和1.7 倍，此結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)灌服秀珍菇粉能提高小鼠腸道菌群的多樣性，增加腸道微生物菌群數(shù)量。

2.5.2 Beta 多樣性分析

通過(guò)主成分分析圖和聚類(lèi)分析樹(shù)分析Beta 多樣性，結(jié)果見(jiàn)圖2。

圖2 主成分分析圖和聚類(lèi)分析樹(shù)Fig.2 Principal component analysis and UPGMA-based hierarchical clustering analysis

主成分分析圖中組與組之間的距離遠(yuǎn)近代表組間相似程度的高低。由圖2（a）可知，秀珍菇各劑量組（GPL、GPM 和GPH）與NC 組間均存在一定距離，GPL和GPH 組距NC 組較遠(yuǎn)，說(shuō)明GPL 和GPH 組與NC組的微生物菌群相似度較低，差異較大。聚類(lèi)分析樹(shù)也可反映樣本間的相似程度，兩個(gè)樣本間分支距離越短，相似度越高。由圖2（b）可知，3 個(gè)正常對(duì)照組樣本間分支距離較短，但正常對(duì)照組樣本與實(shí)驗(yàn)組各樣本間分支距離較長(zhǎng)，此結(jié)果與主成分分析結(jié)果較為一致，進(jìn)一步驗(yàn)證了灌服秀珍菇粉后，小鼠腸道的菌群結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變。

2.5.3 腸道菌群相對(duì)豐度分析

厚壁菌門(mén)和擬桿菌門(mén)為腸道優(yōu)勢(shì)菌門(mén)。厚壁菌門(mén)的許多成員都是有益菌，如乳酸桿菌可通過(guò)發(fā)酵產(chǎn)生乙酸鹽改善胃腸道功能、抑制腸道內(nèi)有害菌生長(zhǎng)、提高機(jī)體免疫力等[25]。研究表明，腸道菌群可對(duì)腸道中未消化的碳水化合物進(jìn)行酵解，產(chǎn)生的乙酸、丙酸、丁酸等短鏈脂肪酸（short-chain fatty acids，SCFAs）對(duì)腸屏障功能的維護(hù)有重要作用[26]。其中，厚壁菌門(mén)發(fā)酵代謝產(chǎn)生丁酸，擬桿菌門(mén)發(fā)酵產(chǎn)生丙酸，而丁酸的作用效果強(qiáng)于乙酸和丙酸，并且丁酸可以增加乳酸桿菌的數(shù)量、抑制大腸桿菌增殖[27-28]。厚壁菌門(mén)下的毛螺菌科、梭菌科、優(yōu)桿菌科等許多菌種均為產(chǎn)丁酸菌，被認(rèn)為是潛在的有益菌。而擬桿菌門(mén)下普雷沃氏菌科的菌種可作為條件致病菌，引起牙周和牙齒、腸道炎癥、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、細(xì)菌性陰道炎等問(wèn)題[29]。秀珍菇粉對(duì)小鼠腸道主要菌群相對(duì)豐度影響見(jiàn)表6。

表6 秀珍菇粉對(duì)小鼠腸道菌群相對(duì)豐度影響Table 6 Effects of Pleurotus geesteranus powder on the relative abundance of intestinal flora at phylum and family levels in mice

由表6 可知，在門(mén)水平下，GPM 和GPH 組小鼠的厚壁門(mén)菌群豐度顯著高于NC 組（P<0.05），而各實(shí)驗(yàn)組擬桿菌門(mén)菌群豐度顯著低于NC 組。在科水平下，厚壁菌門(mén)下的毛螺菌科、脫硫弧菌科、乳酸桿菌科、梭菌科和優(yōu)桿菌科的菌群豐度與NC 組相比，呈上升趨勢(shì)，而擬桿菌門(mén)下有的普雷沃氏菌科和未分類(lèi)桿菌科的菌群豐度呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。其中GPH 組的毛螺菌科、GPL 組的乳酸桿菌科、梭菌科以及GPM 和GPH 組的優(yōu)桿菌科的菌群豐度均顯著高于NC 組（P<0.05）；而GPL、GPM、GPH 組的普雷沃氏菌科和GPM、GPH 組的未分類(lèi)桿菌科的菌群豐度均顯著低于NC 組（P<0.01，P<0.05）。

以上結(jié)果表明，秀珍菇粉可增加小鼠腸道菌群物種數(shù)量和多樣性，顯著增加厚壁菌門(mén)下有益菌群豐度，抑制有害菌群產(chǎn)生，對(duì)腸道菌群具有正向調(diào)控作用。

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)從抗氧化、增強(qiáng)免疫和調(diào)控腸道菌群等方面探討秀珍菇營(yíng)養(yǎng)功效，旨在為秀珍菇保健產(chǎn)品開(kāi)發(fā)提供依據(jù)。結(jié)果表明，秀珍菇粉可提高小鼠血清、肝、腎抗氧化活性，增強(qiáng)小鼠細(xì)胞免疫功能，有效調(diào)節(jié)腸道菌群結(jié)構(gòu)，具有較高的食用價(jià)值。秀珍菇抗氧化和增強(qiáng)免疫的機(jī)制可能源于其對(duì)腸道微生態(tài)的調(diào)控作用。