田 佳 王 敏 劉英超

1.山東省聊城市第二人民醫(yī)院病理科，山東聊城 252600；2.山東省聊城市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東聊城 252600

肺癌是全球最常見的惡性腫瘤之一，2022 年我國新發(fā)肺癌病例及新增肺癌死亡病例均處于較高水平[1]。非小細(xì)胞肺癌是最常見的肺癌病理類型，占比可達(dá)85%[2]。非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）如不能早期診斷、早期治療，一般預(yù)后較差。研究發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)錄共激活因子（transcriptional co-activator，TAZ）是Hippo 通路的下游效應(yīng)分子，是Hippo 通路的主要成員，其在多個腫瘤組織中高表達(dá)，在促進(jìn)癌細(xì)胞增殖、浸潤中發(fā)揮了重要作用[3-4]。近年來，陳鵬等[5]研究發(fā)現(xiàn)NSCLC 組織中TAZ 蛋白呈高表達(dá)，參與了肺癌的發(fā)生、發(fā)展過程。其他研究者也認(rèn)為TAZ高表達(dá)與肺癌發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，但TAZ 表達(dá)對患者預(yù)后的影響，目前報道較少[6]。本研究旨在通過觀察肺癌組織與癌旁組織TAZ 表達(dá)情況，探討其與患者預(yù)后的關(guān)系，進(jìn)一步探究肺癌發(fā)生、發(fā)展機(jī)制，為促進(jìn)患者早期診斷及改善預(yù)后提供新的理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集山東省聊城市第二人民醫(yī)院2019 年1 月至12 月收治的118 例NSCLC 患者的癌組織及其配對癌旁組織標(biāo)本。NSCLC 患者年齡32～77歲，平均（59.73±9.19）歲；男60 例，女58 例；腺癌77 例，鱗癌41 例；吸煙62 例，不吸煙56 例；中低分化90 例，高分化28 例；TNM 分期Ⅰ～Ⅱ期73 例，Ⅲ期45 例；術(shù)后接受化療患者58 例。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①行肺葉切除，術(shù)后病理明確為NSCLC；②手術(shù)切除組織標(biāo)本保存完好；③臨床資料完整；④知情同意并接受隨訪。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他腫瘤或繼發(fā)性肺癌；②嚴(yán)重肝、腎功能損害或合并嚴(yán)重基礎(chǔ)??；③術(shù)前進(jìn)行放化療及免疫治療。本研究通過山東省聊城市第二人民醫(yī)院倫理委員會審核批準(zhǔn)[【2018】醫(yī)倫審第（28）號]。

1.2 免疫組織化學(xué)染色

手術(shù)切除肺組織經(jīng)福爾馬林固定24 h，石蠟包埋進(jìn)行切片，厚度4～6 μm。對組織切片常規(guī)進(jìn)行脫蠟、水化處理，滴加H2O2浸泡10 min，枸櫞酸緩沖液浸泡高壓修復(fù)15 min，PBS 緩沖液沖洗3 次，然后滴加兔抗人TAZ 一抗（美國Abcam 公司，1∶100 稀釋），放入4 ℃冰箱孵育過夜。次日PBS 緩沖液沖洗后，滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記二抗（美國羅氏公司，1∶1 000 稀釋）室溫下孵育60 min，DAB 染色5 min，最后用蘇木精進(jìn)行復(fù)染后封片。

1.3 免疫組織化學(xué)結(jié)果判讀

由2 名經(jīng)驗(yàn)豐富的病理醫(yī)師雙盲閱片，以高倍鏡下（400 倍）下出現(xiàn)棕黃、棕褐色顯色判定為陽性細(xì)胞。根據(jù)染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞占比的乘積判斷TAZ表達(dá)情況：0～3 分為陰性，≥4 分陽性[7]。其中染色強(qiáng)度記分：無著色0 分、淺黃色1 分、棕黃2 分、棕褐色3 分；陽性細(xì)胞占比計(jì)分：0～10%記0 分；＞10%～25%記1 分、＞25%～50%記2 分；＞50%～75%記3分；＞75%～100%記4 分[8]。

1.4 隨訪

對患者進(jìn)行隨訪，記錄患者生存情況?；颊呖偵嫫冢╫verall survival，OS）為患者診斷明確到死亡或終止隨訪日期之間的時間間隔，單位為月；隨訪期間患者死亡或截至2023 年6 月30 日隨訪終止。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 27.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。計(jì)數(shù)資料采用例數(shù)和百分比表示，比較采用χ2檢驗(yàn)；Kaplan-Meier 生存曲線和log-rank 檢驗(yàn)分析NSCLC 患者預(yù)后情況；Cox 回歸分析影響NSCLC 患者預(yù)后不良的危險因素。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肺癌組織與癌旁組織TAZ 免疫組織化學(xué)表達(dá)情況

TAZ 主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，見圖1。118 例癌組織中70 例TAZ 陽性表達(dá)，占比59.32%；癌旁組織中41 例TAZ陽性表達(dá)，占比34.75%，癌組織中TAZ 陽性表達(dá)率高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=14.304，P＜0.05）。

圖1 肺癌組織TAZ 表達(dá)情況（免疫組化染色，400×）

2.2 TAZ 表達(dá)與肺癌患者預(yù)后的關(guān)系

隨訪期間患者死亡72 例，總死亡率為61.0%；其中70 例癌組織TAZ 陽性表達(dá)患者死亡51 例，48 例TAZ 陰性表達(dá)患者死亡21 例，TAZ 陽性表達(dá)患者死亡率高于陰性表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=10.142，P＜0.05）。Kaplan-Meier 生存曲線和log-rank 檢驗(yàn)分析結(jié)果顯示，TAZ 表達(dá)陽性患者總生存率低于表達(dá)陰性（χ2=10.393，P=0.001）。見圖2。

圖2 Kaplan-Meier 生存曲線分析TAZ 表達(dá)情況與NSCLC 患者預(yù)后的關(guān)系

2.3 臨床病理特征與肺癌患者累計(jì)生存率的比較

腫瘤直徑≥3 cm、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、術(shù)后復(fù)發(fā)、TNM Ⅲ期及TAZ陽性表達(dá)的患者累計(jì)生存率低于腫瘤直徑＜3cm、淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移、術(shù)后無復(fù)發(fā)、TNM Ⅰ+Ⅱ期及TAZ 陰性表達(dá)的患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 臨床病理特征與肺癌患者累計(jì)生存率比較

2.4 Cox 回歸分析影響NSCLC 患者預(yù)后的獨(dú)立危險因素

以NSCLC 患者預(yù)后情況為因變量，以患者腫瘤直徑（≥3 cm=1，＜3 cm=0）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（有轉(zhuǎn)移=1，無轉(zhuǎn)移=0）、TNM 分期（Ⅲ期=1，Ⅰ+Ⅱ期=0）、TAZ 表達(dá)（陽性=1，陰性=0）為自變量，建立Cox 回歸分析模型，得出模型系數(shù)的Omnibus 檢驗(yàn)表（-2 對數(shù)似然比=582.16，χ2=48.07，P＜0.01），表示模型成立。統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示：TAZ 陽性表達(dá)、腫瘤直徑≥3 cm、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM Ⅲ期是影響患者預(yù)后的獨(dú)立危險因素。見表2。

表2 Cox 回歸分析影響患者預(yù)后的危險因素

3 討論

目前放療、化療及手術(shù)治療等多種手段已應(yīng)用于肺癌，但肺癌如不能早期診斷，預(yù)后較差，5 年生存率也比較低[9-10]。研究表明，腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移、浸潤與多種細(xì)胞因子及信號傳導(dǎo)通路有關(guān)[11-12]。因此，尋找與肺癌預(yù)后相關(guān)的新的生物學(xué)標(biāo)志物，進(jìn)而對改善患者預(yù)后提供理論支持和幫助，具有重要的意義。

TAZ 又稱含WW 域轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，是Hippo 通路的主要成員和重要效應(yīng)分子[13-14]。Hippo 通路在動物器官生長發(fā)育及再生過程中發(fā)揮著重要作用，并且在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著重要作用[15-16]。研究發(fā)現(xiàn)，TAZ 作為Hippo 通路重要組成及效應(yīng)分子，在多個腫瘤組織中高表達(dá)，并通過與多種調(diào)控因子相互作用，在促進(jìn)癌細(xì)胞增殖、浸潤發(fā)揮了重要作用[17]。近年來，TAZ 表達(dá)與肺癌的相關(guān)研究也越來越多。Malik 等[18]研究發(fā)現(xiàn)，肺癌組織中TAZ 蛋白表達(dá)顯著高于正常肺組織；Mui 等[19]認(rèn)為Hippo-TAZ 與其他通路協(xié)同作用，是引起NSCLC 的重要分子機(jī)制，并且與較差的患者預(yù)后有關(guān)；張久榮等[20]研究發(fā)現(xiàn)TAZ 在NSCLC 中異常高表達(dá)，與患者的TNM 分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有關(guān)，認(rèn)為TAZ 可能成為NSCLC 患者的診斷標(biāo)志物及治療靶點(diǎn)；周建宏等[21]通過免疫印跡法檢測癌組織TAZ 蛋白，發(fā)現(xiàn)顯著高于癌旁組織，認(rèn)為TAZ 參與了肺癌的發(fā)生、發(fā)展。綜上，多項(xiàng)研究結(jié)果表明，TAZ 在肺癌的發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮了重要作用，但針對TAZ 表達(dá)與NSCLC 患者預(yù)后關(guān)系的相關(guān)研究，報道較少[22-23]。

本研究通過收集NSCLC 患者的臨床及病理資料，進(jìn)行免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)觀察癌組織與癌旁組織TAZ 表達(dá)，結(jié)果顯示肺癌組織TAZ 陽性表達(dá)高于癌旁組織（P＜0.05）；TAZ 參與了肺癌的發(fā)生、發(fā)展，提示TAZ 高表達(dá)與腫瘤的生長、浸潤、轉(zhuǎn)移有關(guān)；通過分析TAZ 表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系，結(jié)果顯示，TAZ 陽性表達(dá)患者總生存率低于TAZ 陰性表達(dá)患者；Cox 回歸分析結(jié)果顯示，TAZ 表達(dá)陽性、腫瘤直徑≥3 cm、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM Ⅲ期是影響患者預(yù)后的獨(dú)立危險因素。本研究進(jìn)一步提示TAZ 參與了肺癌的發(fā)生、發(fā)展，是影響患者預(yù)后的獨(dú)立危險因素。

鑒于TAZ 對肺癌發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后的重要作用，針對TAZ 靶向治療肺癌的相關(guān)研究已有文獻(xiàn)報道。Cheng 等[24]研究證實(shí)NDFIP1 能夠通過外泌體分選限制細(xì)胞TAZ 表達(dá)，進(jìn)而抑制NSCLC 細(xì)胞增殖；徐萌博等[25]研究發(fā)現(xiàn)miR-185 能夠通過靶向調(diào)控TAZ 基因，進(jìn)而抑制非小細(xì)胞肺癌H1299 細(xì)胞增殖、遷移和侵襲；Papavassiliou 等[26]認(rèn)為靶向YAP/TAZ 免疫檢查點(diǎn)，抑制TAZ 活性，可以治療NSCLC。相信隨著研究的進(jìn)一步深入，針對TAZ 靶向治療肺癌的治療方案能應(yīng)用于臨床，為更多的患者提供幫助，改善預(yù)后。

利益沖突聲明：本文所有作者均聲明不存在利益沖突。