陳佳麗 陳欣欣 馬月光

1.杭州市第一人民醫(yī)院中藥房，浙江杭州 310006；2.浙江中醫(yī)藥大學藥學院，浙江杭州 311403

靜脈炎是靜脈輸液治療中出現的靜脈血管急性無菌性炎癥，表現為沿靜脈走向的條索狀硬結，伴局部紅、腫、熱、痛，增加患者的痛苦，影響療效；急性乳腺炎是乳房的急性化膿性感染伴急性疼痛，影響產后哺乳，甚者可并發(fā)全身化膿性感染，危及生命[1-3]。近年來，玄明粉、冰片外敷用于靜脈炎、急性乳腺炎的治療取得了較好的效果[4-6]。但現行臨床用藥形式是將兩者粉末混合置于紗布袋內外敷，因其難以貼合患病部位，透皮效果欠佳，影響藥效。目前還未有該兩味藥聯(lián)合應用的其他劑型，探索新制劑開發(fā)具有一定的意義。涂膜劑具有無首關效應、生物半衰期長、藥物毒副作用小等優(yōu)點，可提高患者依從性[7-8]。故根據臨床需要，開發(fā)冰玄涂膜劑，以期為臨床應用與新藥研發(fā)提供參考。

1 材料

1.1 儀器

TGL-16B 高速離心機（上海安亭科學儀器廠）；CP225D 十萬分之一電子分析天平（德國Sartorius 公司）；DF-101S 集熱式恒溫磁力攪拌器（鄭州生化儀器有限公司）；TT-8D 型藥物透皮吸收儀（天津市正通科技有限公司）；SX3-1.5-10 馬弗爐（杭州卓馳儀器有限公司）。

1.2 藥品與試劑

玄明粉（220701）購于浙江中醫(yī)藥大學中藥飲片有限公司；冰片（Z51022577）購于四川青神康華制藥有限公司；聚乙烯醇（PVA-124，O18HS197971）、羧甲基纖維素鈉（CMC-Na，S03HS193486）、聚乙烯醇縮丁醛（PVB，S26HS196170）、聚乙烯吡咯烷酮（PVP-K30，M26HS179475）、殼聚糖（CS，25HS185658）、甘 油（S30HS196634）均購于上海源葉生物科技有限公司。

1.3 動物

4 周齡SPF 級雄性SD 大鼠15 只（200±20 g），合格證編號：20220004008850，由上海斯萊克實驗動物有限責任公司提供，許可證號：SCXK（滬）2022-0004。12 h 明暗循環(huán)，（25±2）℃環(huán)境下飼養(yǎng)，相對濕度為（50±15）%，自由飲水。所有實驗方案已獲浙江中醫(yī)藥大學醫(yī)學倫理委員會批準。

2 方法與結果

2.1 評價指標建立

精密量取涂膜液1 ml，均勻涂抹于3 cm×3 cm的玻璃板上，以滿分10 分評價成膜時間（a）、成膜性（b）、涂展性（c）、柔韌性（d）、色澤（e）、質地（f），再進行多指標綜合加權評分，成膜時間權重為40%，其余性能的總權重為60%，計算綜合得分Y=0.4a+0.6（b+c+d+e+f）[9-12]。

2.2 單因素實驗

2.2.1 成膜材料篩選 據文獻報道，分別選擇PVA-124、CMC-Na、PVB、PVP-K30、CS 以不同濃度溶脹溶解后與藥液混合，觀察兩者的互溶性及成膜性[12-13]。結果顯示，以不同濃度的PVA-124 為成膜材料評分最高，故以PVA-124 為成膜劑。見表1。

表1 成膜材料篩選結果

2.2.2 增塑劑篩選 根據“2.2.1”項下結果及涂膜劑的制作成本和經濟效益，選擇60 g/L 的PVA-124 為成膜材料。以“2.1”項下評分標準來量化評價，通過單因素實驗篩選常用增塑劑：甘油、鄰苯二甲酸二丁酯、1，3-丙二醇[14-15]。結果顯示，各增塑劑得分分別為12.2、20.8、14.0 分。故以鄰苯二甲酸二丁酯為最優(yōu)增塑劑，其成膜柔韌性最佳，且質地均勻。

2.2.3 載藥量考察 綜合“2.2.1”“2.2.2”項下結果，以臨床應用劑量為參考，制備不同載藥量的冰玄涂膜劑（50、100、200 mg/ml）。當載藥量為200 mg/ml 時，靜置2 h 后有玄明粉析出；當載藥量為100 mg/ml 時，冰玄涂膜劑成膜完整連續(xù)，易于涂布，無藥物析出。故以涂膜劑最優(yōu)載藥量為100 mg/ml。見圖1。

圖1 不同濃度冰玄涂膜劑的載藥量

2.3 響應面法優(yōu)化處方條件

2.3.1 響應面法設計 由于冰玄涂膜劑中冰片溶于乙醇，乙醇揮發(fā)造成不同程度的結晶和縮孔現象，影響成膜，為確保制劑的穩(wěn)定，結合單因素試驗及其他互作條件的影響程度，故選取成膜材料用量（A）、增塑劑用量（B）、溶劑含醇量（C）作為影響因素，以涂膜劑成型綜合評分為響應值，進行響應面實試驗[16]。因素與水平見表2。

表2 因素與水平表

2.3.2 響應面法結果分析 利用Design Expert 8.0.6 軟件進行響應面法的擬合與分析，對相關實驗結果進行二次多元擬合，以綜合評分為評價指標，對各因素水平進行二項回歸分析[17]。結果顯示，擬合方程為Y=5.400+0.625AB-0.375C-0.500AB+1.750AC-0.500BC+1.170A2+0.425B2+0.675C2；模型預測結果顯示，P=0.045 1，具有顯著性；復相關系數=0.809，模型擬合度良好；增塑劑用量對處方工藝影響最大；A、B 兩個因素對涂膜劑的性狀具有交互作用，而C 獨立發(fā)揮作用。見表3～4。

表3 實驗設計與結果

表4 方差分析結果

根據回歸方程繪制響應面法立體分析圖及等高線，考察所擬合的響應曲線形狀結果[18]。采用擬合方程進行工藝參數優(yōu)化，最終得到優(yōu)化處方為PVA-124用量為10%，鄰苯二甲酸二丁酯用量為3%，含醇量為60%。見圖2。

圖2 響應面法優(yōu)化處方結果

2.4 工藝驗證

取10%PVA-124 用60%乙醇過夜溶脹，在90℃下加熱2 h，溶解后加入3%鄰苯二甲酸二丁酯混勻。將乙醇和水分別溶解的冰片、玄明粉加入成膜材料中混勻，即得冰玄涂膜劑，重復制備3 批[19]。3 批涂膜劑的綜合評分分別為24.4、24.6 和24.4 分，平均值（24.5 分）與預測值（24.4 分）接近（RSD=0.47%），表明該方法穩(wěn)定可靠。

2.5 質量評價

對上述3 批涂膜劑進行質量評價。每批樣品均分為3 份，分別考察穩(wěn)定性（于5 000 r/min 離心30 min，有效離心半徑為15 cm）、耐熱性（于恒溫水浴箱中以55℃水浴24 h）、耐寒性（于-20℃的冰箱中72 h）[20]。3批涂膜劑均能完整成膜，質感細膩，易涂布，易揭膜，柔韌性佳，無明顯分層現象，色澤均勻。見圖3。

圖3 質量評價結果

2.6 體外透皮實驗研究

2.6.1 分析方法建立 按《中華人民共和國藥典》[21]的方法測定冰玄涂膜劑中玄明粉的含量。取樣品于105 ℃干燥，加鹽酸適量，加熱至微沸，不斷攪拌，并緩緩加入熱氯化鋇溶液，至無沉淀產生后持續(xù)加熱30 min。冷卻至室溫，濾過，沉淀用水洗至無氯化物的反應后灼燒至恒重，精密稱定后乘以沉淀重量法換算因數得供試品中玄明粉含量。實驗結果以平行測定3 次結果的平均值為準，在重復性條件下獲得的2 次獨立測定結果的絕對差值均＜0.3%。

2.6.2 體外透皮滲透實驗 將臨床劑型（紗布袋）與涂膜劑進行對比。采用Franz 擴散池法考察離體皮膚滲透特性[22]。選擇大鼠皮膚作為實驗動物皮膚，去除毛發(fā)、剝離皮膚，剪取合適大小皮膚固定于供給池和接受池之間，使角質層面向供給池（圖4A），以磷酸鹽緩沖液為接受液，接收池水浴溫度為32 ℃，池內磁力攪拌轉速為400 r/min，平衡后上樣，于0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0、24.0、36.0 h 取樣1 ml，并及時補加等體積的接收液[23]。

圖4 體外透皮實驗結果

2.6.3 皮膚藥物滯留研究 取下用于滲透實驗施藥36 h后的皮膚，用生理鹽水沖凈皮膚內外表面，并用濾紙將皮膚表面水分吸干，即得含藥皮膚樣品。將樣品皮膚均分為兩等分（長×寬為3 cm×3 cm），取其中任意一份，用3M 膠帶粘去角質層側皮膚，累積粘貼20次，即得去角質層皮膚，用于測定去角質層皮膚藥物滯留量；另一份皮膚不做處理，用于測定未去角質層的皮膚藥物滯留量，相關結果見圖4。將皮膚組織以1/5（w/v）加入適量磷酸鹽緩沖液勻漿后超聲提取并在12 000 r/min 下離心15 min，有效離心半徑為15 cm，取上清經處理后測定玄明粉含量。累計滲透量和藥物皮膚滯留計算公式如下：Qn=（VCn+CiVi）/V，Q=VC/A。A 為有效擴散面積，V 為接受液總體積，Cn 為第n 次取樣時接受液中藥物濃度，Ci 為第i 次取樣時接受液中藥物濃度，Vi 為第i 次取樣體積[14]。

經測定后計算藥物累積透過量（Qn），以時間為橫坐標，Qn 為縱坐標繪制滲透曲線。透皮實驗結果見圖4B。36 h 后涂膜劑累計透過量為1 536.62 μg/cm2；滲透率為256.47 μg/（cm2·h）是紗布袋的4.25 倍。

3 討論

成膜材料溶液是藥物載體，通過成膜減少皮膚水分蒸發(fā)，促進皮膚水合作用，使藥物更好地釋放和揮發(fā)藥效，因此成膜材料的篩選非常關鍵，PVA-124 可為理想的涂膜劑成膜材料。不同聚合度的PVA-124對藥物的釋放速率和透皮效果有不同的影響，根據實驗結果選用10%的PVA-124 效果最佳。

本研究在體外透皮實驗時，曾用氣相色譜法檢測冰片含量，但由于制劑本身含冰片量較少，制備涂膜劑時冰片溶于乙醇，乙醇揮發(fā)后形成膜，冰片隨之揮發(fā)去一部分，透皮后檢測液中冰片含量較低，低于氣相色譜的檢測下限，未測及具體含量?？紤]制劑中玄明粉與冰片的比例為9∶1，玄明粉為該涂膜劑的主藥，故測定玄明粉的含量來反映涂膜劑的體外透皮情況。但體外透皮實驗結果無法完全反映體內生物環(huán)境，需要進一步進行體內研究及臨床驗證。

響應面法對因素與響應值直接建立模型，通過數據擬合，得到預測性好的實驗分析結果[24-25]。在優(yōu)化處方的研究中，選擇合理的評價指標是重要前提。本研究以涂膜劑成膜時間、成膜性、涂展性、柔韌性、色澤、質地等多角度建立綜合評價指標，通過單因素考察不同成膜材料、增塑劑、溶劑含醇量，再結合響應面法優(yōu)化處方組成為10%的PVA-124，3%的鄰苯二甲酸二丁酯，溶劑含醇量為60%，經驗證該處方工藝穩(wěn)定可靠。該涂膜劑可以彌補外敷紗布袋裝置的不足且具有更優(yōu)的透皮能力，加快藥物吸收，增強疾病治療效果，可為臨床治療提供更多的選擇。

利益沖突聲明：本文所有作者均聲明不存在利益沖突。