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        β-微管蛋白在不同部位結(jié)腸癌組織中表達(dá)差異及與患者預(yù)后相關(guān)性

        2024-04-01 03:30:36姚寧華王雅麗
        臨床軍醫(yī)雜志 2024年3期
        關(guān)鍵詞:結(jié)腸癌研究

        張 婷, 姚寧華, 王 馨, 張 召, 王雅麗, 巫 丹

        1.鎮(zhèn)江市第一人民醫(yī)院 腫瘤科,江蘇 鎮(zhèn)江 212000;2.南通大學(xué)附屬醫(yī)院 腫瘤放療科,江蘇 南通 226006

        結(jié)腸癌為常見(jiàn)的消化道腫瘤,是由飲食、環(huán)境、遺傳等因素引起的大腸組織黏膜上皮病變[1]。有研究報(bào)道,結(jié)腸癌存在多條致癌途徑,包括染色體不穩(wěn)定性(累及左半結(jié)腸)、微衛(wèi)星不穩(wěn)定性及鋸齒途徑(累及右半結(jié)腸)等[2]。隨著診療技術(shù)的發(fā)展,我國(guó)結(jié)腸癌早期診斷率提高,但部分中晚期患者預(yù)后不佳,因此,尋找一種可評(píng)估結(jié)腸癌預(yù)后的生物學(xué)標(biāo)記物至關(guān)重要。微管是細(xì)胞骨架的主要組成部分,β-Ⅲ微管蛋白(β-TubulinⅢ)屬于微管蛋白家族中一種亞型,其為紫杉類藥物耐藥的常用生物標(biāo)志物[3-4]。有研究報(bào)道,β-TubulinⅢ陽(yáng)性表達(dá)與乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織學(xué)分級(jí)及分子分型具有相關(guān)性[5]。本研究旨在探討β-微管蛋白(β-Tubulin)在不同部位結(jié)腸癌組織中的表達(dá)差異及與患者預(yù)后的相關(guān)性?,F(xiàn)報(bào)道如下。

        1 對(duì)象與方法

        1.1 研究對(duì)象 選取鎮(zhèn)江市第一人民醫(yī)院自2018年1月至2020年1月收治的104例結(jié)腸癌患者為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn):經(jīng)病理活檢確診結(jié)腸癌[6];臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn):心肝肺腎等組織器官功能異常者;術(shù)前行放化療者;認(rèn)知、精神異常者;惡性腫瘤者。其中,男性48例,女性56例;年齡35~75歲,平均年齡(58.73±5.21)歲。收集所有患者的癌組織標(biāo)本(設(shè)為結(jié)腸癌組)及對(duì)應(yīng)的癌旁組織標(biāo)本(設(shè)為癌旁組)。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。所有患者均簽署知情同意書(shū)。

        1.2 研究方法 采用免疫組化法檢測(cè)β-Tubulin在結(jié)腸癌組織及癌旁組織中的表達(dá)情況。主要試劑與儀器:鼠抗人β-tubulin單克隆抗體(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)、羊抗兔二抗IgG(艾美捷科技有限公司)、免疫組化試劑盒、二氨基聯(lián)苯胺(diaminobenzidine,DAB)顯色盒(福州邁新生物技術(shù)有限公司)、顯微鏡(江蘇世泰實(shí)驗(yàn)器材有限公司)。檢測(cè)方法:采用4%多聚甲醛常規(guī)固定結(jié)腸癌組織、癌旁組織標(biāo)本,60℃熔點(diǎn)石蠟包埋切至4 μm,再進(jìn)行二甲苯脫蠟、不同梯度乙醇脫水處理,檸檬酸鈉溶液在高壓高溫下行抗原修復(fù),冷卻后加入磷酸鹽緩沖液(phosphate buffer solution,PBS),沖洗3次,5 min/次。隨后加入5%山羊血清抗體進(jìn)行封閉,4℃冰箱內(nèi)孵育過(guò)夜,加入PBS沖洗3次,加入鼠抗人β-tubulin單克隆抗體(稀釋比1∶1 000),37℃下孵育30 min,PBS沖洗3次。取DAB染色試劑盒顯色,蘇木精復(fù)染、乙醇脫水、樹(shù)脂膠封片,高倍顯微鏡下觀察β-Tubulin蛋白表達(dá)水平情況。由兩位副高職稱的病理醫(yī)師進(jìn)行結(jié)果判定,顯微鏡示細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞[8]。陽(yáng)性細(xì)胞百分比:占比<5%為0分、5%~25%為1分、25%~50%為2分、50%~75%為3分、占比>75%為4分。陽(yáng)性細(xì)胞染色強(qiáng)度:無(wú)著色為0分、淺黃或黃色為1分、棕黃色為2分、棕褐色為3分。陽(yáng)性表達(dá):染色指數(shù)(staining index,SI)>3分,陰性表達(dá):SI≤3分。通過(guò)電話、門(mén)診復(fù)查等方式對(duì)出院結(jié)腸癌患者行隨訪,連續(xù)3年,記錄患者生存狀況,隨訪截止時(shí)間為2023年1月。

        2 結(jié)果

        2.1 兩組不同部位結(jié)腸癌組織中β-Tubulin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較 結(jié)腸癌組在左、右半結(jié)腸癌組織β-Tubulin蛋白陽(yáng)性率均高于癌旁組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

        表1 兩組不同部位結(jié)腸癌組織中β-Tubulin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較/例(百分率/%)

        2.2 結(jié)腸癌患者的預(yù)后生存情況及單因素分析 104例結(jié)腸癌患者連續(xù)隨訪3年后,累積存活率為60.58%(63/104)。見(jiàn)圖1。結(jié)腸癌患者預(yù)后與性別、年齡、病理類型、腫瘤直徑無(wú)關(guān)(P>0.05),與不同部位、分化程度、臨床病理(tumor node metastasis classification,TNM)分期、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、β-Tubulin蛋白表達(dá)水平相關(guān)(P<0.05)。見(jiàn)表2。

        圖1 結(jié)腸癌患者的預(yù)后生存曲線圖

        表2 結(jié)腸癌患者預(yù)后的單因素分析/例(百分率/%)

        2.3 結(jié)腸癌患者預(yù)后的多因素Cox回歸分析 多因素Cox回歸分析結(jié)果顯示,右半結(jié)腸癌、低分化、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、β-Tubulin蛋白陽(yáng)性表達(dá)均為結(jié)腸癌患者預(yù)后的危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見(jiàn)表3。

        表3 結(jié)腸癌患者預(yù)后的多因素Cox回歸分析

        3 討論

        結(jié)腸癌為全球較常見(jiàn)的癌癥,早期無(wú)明顯癥狀,中晚期表現(xiàn)為腹脹、消化不良、排便習(xí)慣改變等[7]。結(jié)腸癌為受多基因、多步驟、多途徑參與的生物過(guò)程,包括癌基因的激活、抑癌基因的失活、錯(cuò)配修復(fù)基因的缺失[8]。臨床以篩查預(yù)防為主,現(xiàn)階段常通過(guò)基因篩查或行預(yù)后評(píng)估為治療提供指導(dǎo)。有研究報(bào)道,左、右結(jié)腸癌組織中存在不同基因,其在表達(dá)方式、致癌機(jī)制上存在差異[9]。

        本研究結(jié)果顯示,結(jié)腸癌組在左、右半結(jié)腸癌組織β-Tubulin蛋白陽(yáng)性率均高于癌旁組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。這提示,β-Tubulin蛋白的異常高表達(dá)參與左/右半結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。微管由微管蛋白二聚體及多種微管結(jié)合蛋白組成[10]。β-Tubulin顯露的一端為正端,可與三磷酸尿苷-異二聚體結(jié)合裝配,延長(zhǎng)微管,在癌細(xì)胞遷移/侵襲、細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)中起重要作用[11]。紫杉醇類化療藥物抗腫瘤的作用機(jī)制為影響腫瘤細(xì)胞微管聚合、解聚,β-Tubulin Ⅲ和紫杉醇類化療藥物的耐受相關(guān),其高表達(dá)表明對(duì)紫杉醇耐藥[12]。本研究結(jié)果顯示,104例結(jié)腸癌患者連續(xù)隨訪3年后,累積存活率為60.58%。結(jié)腸癌患者預(yù)后與腫瘤所在部位、分化程度、TNM分期、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、β-Tubulin蛋白表達(dá)水平有關(guān)(P<0.05)。這提示,結(jié)腸癌患者預(yù)后受多種因素的影響,β-Tubulin蛋白表達(dá)水平為其中的相關(guān)因素,臨床評(píng)估結(jié)腸癌患者預(yù)后時(shí)可綜合患者病理特征信息及β-Tubulin蛋白表達(dá)水平得出結(jié)論。本研究中多因素Cox回歸分析顯示,右半結(jié)腸癌、低分化、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、β-Tubulin蛋白陽(yáng)性表達(dá)均為結(jié)腸癌患者預(yù)后的危險(xiǎn)因素(P<0.05)。這提示,明確結(jié)腸癌所在部位、分化程度、分期及檢測(cè)β-Tubulin水平可預(yù)測(cè)結(jié)腸癌患者預(yù)后情況。左半結(jié)腸癌患者的生存狀況優(yōu)于右半結(jié)腸癌患者,其中原因可能是右半結(jié)腸癌癥患者發(fā)現(xiàn)得較晚,對(duì)此類患者預(yù)后造成相對(duì)嚴(yán)重的不良影響。β-tubulinⅢ可促進(jìn)胰腺癌增生、存活,抑制其表達(dá)可延長(zhǎng)患者生存期。有研究報(bào)道,β-tubulinⅢ蛋白沉默表達(dá)可抑制腫瘤細(xì)胞形成,促進(jìn)瘤細(xì)胞凋亡[13-14]。

        綜上所述,結(jié)腸癌患者中β-Tubulin蛋白均可作為結(jié)腸癌化療藥物選擇及預(yù)后評(píng)估的重要生物學(xué)指標(biāo)。

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