肖莎莎 費凡 董佳偉 張丹 馬玉花

摘要：Ｎａ＋ / Ｈ＋逆向轉(zhuǎn)運蛋白（ＮＨＸ）廣泛存在于多種生物中，可調(diào)節(jié)植物響應鹽脅迫。 本研究對中國沙棘ＨｒＮＨＸ６ 進行結構預測和分析，并采用ｑＲＴ－ＰＣＲ 技術分析不同濃度ＮａＣｌ 脅迫下ＨｒＮＨＸ６ 基因的表達情況。結果如下：①ＨｒＮＨＸ６ 基因總長為１ ３４７ ｂｐ，與月季花等植物ＮＨＸ６ 基因具有較高的同源性。 ②ＨｒＮＨＸ６ 為穩(wěn)定的疏水性蛋白，定位于高爾基體膜中，不具有信號肽，含７ 個跨膜螺旋結構，且α－螺旋和無規(guī)則卷曲為其二級結構的主要構成元件，具有多個修飾位點。 ③鹽脅迫下中國沙棘根、莖、葉中的ＨｒＮＨＸ６ 基因表達上調(diào)，說明ＨｒＮＨＸ６ 基因在中國沙棘響應鹽脅迫的過程中可能發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。 本研究結果可為闡明中國沙棘應對鹽脅迫的機制奠定基礎。

關鍵詞：中國沙棘；鹽脅迫；ＨｒＮＨＸ６ 基因；熒光定量ＰＣＲ；基因表達

中圖分類號：Ｓ７９３.６；Ｑ７８６文獻標識號：Ａ文章編號：１００１－４９４２（２０２４）０１－００１７－０７

土壤鹽堿化是影響農(nóng)業(yè)發(fā)展的全球性問題，由于工業(yè)污染、化肥過量使用和灌溉不合理等因素的影響，土壤鹽堿化的程度不斷上升[１] ，已成為影響植物生長的重要問題之一。 鹽脅迫不僅會抑制植物種子的萌發(fā)，還會加速植物根系的木栓化[２] ，影響根系對水分和營養(yǎng)物質(zhì)的攝入，從而抑制植物生長發(fā)育。

植物耐鹽性可表現(xiàn)為Ｎａ＋ 被Ｎａ＋ / Ｈ＋ 逆向轉(zhuǎn)運蛋白（ＮＨＸ）外排或區(qū)隔化以維持細胞內(nèi)的低Ｎａ＋水平[３] 。 研究表明，在鹽脅迫下，植物利用ＮＨＸｓ 將Ｎａ＋分離到液泡，可以促使細胞從外界應激環(huán)境中吸收水分以維持滲透平衡，調(diào)節(jié)細胞質(zhì)中的Ｎａ＋濃度和ｐＨ，保護細胞器[４－５] 。 ＮＨＸ 基因已在許多植物中被鑒定出來，但不同植物其成員數(shù)量不同，例如，擬南芥中有８ 個ＮＨＸ 基因[６] ，葡萄中有６ 個ＮＨＸ 基因[７] ，棉花中有２５ 個ＮＨＸ 基因[８] 。 擬南芥的８ 個ＮＨＸ 蛋白中，ＡｔＮＨＸ１—Ａｔ￣ＮＨＸ４ 定位于液泡膜上，ＡｔＮＨＸ５ 和ＡｔＮＨＸ６ 定位于胞體內(nèi)膜，ＡｔＮＨＸ７（ＡｔＳＯＳ１） 和ＡｔＮＨＸ８ 定位于質(zhì)膜上；根據(jù)亞細胞定位，又可將它們分為液泡ＮＨＸｓ（ ｖａｃｕｏｌａｒ ＮＨＸｓ）、內(nèi)膜ＮＨＸｓ （ ｅｎｄｏｓｏｍａｌＮＨＸｓ）、質(zhì)膜ＮＨＸｓ（ｐｌａｓｍａ ｍｅｍｂｒａｎｅ ＮＨＸｓ）[６] 。ＡｔＮＨＸ１—ＡｔＮＨＸ４ 通過形成的跨膜質(zhì)子梯度提供能量，介導Ｎａ＋區(qū)隔化，以減少過量鹽離子對細胞的傷害，穩(wěn)定細胞滲透壓，使植物適應鹽旱環(huán)境；ＡｔＮＨＸ５ 和ＡｔＮＨＸ６ 具體定位于跨高爾基體網(wǎng)絡，可參與囊泡運輸和細胞擴增活性，特別是在液泡運輸中具有重要作用，并調(diào)節(jié)ｐＨ 和Ｋ＋；Ａｔ￣ＮＨＸ７ 通過鹽超敏感（ｓａｌｔ ｏｖｅｒｌｙ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ， ＳＯＳ）信號傳導途徑賦予植物耐鹽性，ＳＯＳ 途徑包括ＳＯＳ１（質(zhì)膜Ｎａ＋ / Ｈ＋ 反向運輸?shù)鞍祝?、ＳＯＳ２（絲氨酸/ 蘇氨酸蛋白激酶）和ＳＯＳ３（鈣結合蛋白），其中ＳＯＳ２ 與ＳＯＳ３ 的復合物可調(diào)節(jié)ＳＯＳ１ 以去除細胞內(nèi)的Ｎａ＋ [９－１０] ；ＡｔＮＨＸ８ 可以參與Ｌｉ＋ / Ｈ＋ 反向轉(zhuǎn)運[１１－１２] 。 但目前有關ＮＨＸｓ 在中國沙棘應對鹽脅迫時的作用機制研究報道相對較少。

中國沙棘（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ ｓｕｂｓｐ. ｓｉｎｅｎ￣ｓｉｓ）是一種胡頹子科（Ｅｌａｅａｇｎａｃｅａｅ）沙棘屬（Ｈｉｐｐ￣ｏｐｈａｅ）植物，具有耐旱、抗寒、抗風沙等特性，在我國西北被廣泛用于水土保持。 研究表明，在鹽脅迫條件下，沙棘滲透壓降低，體內(nèi)脯氨酸、可溶性糖等滲透介質(zhì)的含量增加，滲透調(diào)節(jié)能力增強，以使植株適應外界環(huán)境[１３] ；另一方面，沙棘體內(nèi)抗氧化酶（ＰＯＤ、ＣＡＴ、ＳＯＤ 等）活性增強，可減輕活性氧對植株的傷害[１４] ，從而提高沙棘的耐鹽性。本研究以中國沙棘的抗鹽分子調(diào)節(jié)機制為切入點，對耐鹽相關基因ＨｒＮＨＸ６ 及其編碼蛋白進行結構分析和亞細胞定位預測，同時分析其在不同濃度ＮａＣｌ 脅迫下的表達模式，旨在為中國沙棘應對鹽脅迫的機制闡明奠定基礎，同時為高效耐鹽基因的發(fā)掘提供依據(jù)。

１ 材料與方法

１.１ 試驗材料

供試植物材料為長勢一致的中國沙棘兩年生扦插苗，由青海省西寧市大通縣城關苗圃（３７°１４′４５″ Ｎ，１０１°３０′１５″ Ｅ，海拔２ ９２０ ｍ）提供。 ２０１９ 年７ 月２８ 日開始鹽脅迫試驗，將１８ 盆中國沙棘扦插苗隨機分為６ 組，分別用５００ ｍＬ 濃度為０、２００、４００、６００、８００、１ ０００ ｍｍｏｌ/ Ｌ 的ＮａＣｌ 溶液澆灌， ３天后再澆灌一次。 每組處理的３ 盆作為３ 個重復，試驗時在花盆底放置一個托盤，及時將漏出的溶液倒回花盆中，以防止水分和鹽分的流失。 ８月２ 日采集根、莖、葉，用超純水沖洗后用濾紙吸干水分，裝入凍存管，置于液氮中速凍，隨后放入－８０ ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

１.２ 試驗方法

將中國沙棘根、莖和葉在液氮中研磨成細粉，依照植物ＲＮＡ 試劑盒說明書快速提取總ＲＮＡ，使用ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ Ⅱ １ｓｔ Ｓｔｒａｎｄ ｃＤＮＡ ＳｙｎｔｈｅｓｉｓＫｉｔ 反轉(zhuǎn)錄質(zhì)量檢測合格的優(yōu)質(zhì)ＲＮＡ，并通過熒光定量ＰＣＲ 法分析表達模式，引物（ＨｒＮＨＸ６－Ｆ：ＣＡＡＴＧＧＡＴＡＴＧＴＴＧＣＴＣＣＴＴＣＧＴ， ＨｒＮＨＸ６ － Ｒ：ＣＴＡＡＴＧＣＴＧＴＡＡＡＴＧＡＴＧＣＴＧＴＧＣＴ）由寶生物工程（大連）有限公司合成。 使用２－ΔΔＣｔ法對基因的相對表達量進行分析，使用Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌ ２０１０和ＳＰＳＳ ２２ 軟件進行數(shù)據(jù)整理與統(tǒng)計分析。

ＨｒＮＨＸ６ 基因的全長序列通過轉(zhuǎn)錄組測序獲得。 用ＤＮＡＳＴＡＲ 進行核苷酸序列分析和同源比對；用ＭＥＭＥ 進行保守基序分析；用ＥｘＰＡＳｙ Ｐｒｏｔ￣Ｐａｒａｍ 進行蛋白理化性質(zhì)分析；用ＰｒｅｄｉｃｔＰｒｏｔｅｉｎ進行亞細胞定位；用ＮｅｔＯＧｌｙｃ ４.０ Ｓｅｒｖｅｒ 進行信號肽和跨膜螺旋區(qū)分析；Ｉ－ＴＡＳＳＥＲ 用于預測蛋白二級結構，ＳＷＩＳＳ－ＭＯＤＥＬ 用于預測三級結構；ＰｒｅｄｉｃｔＰｒｏｔｅｉｎ 用于蛋白功能位點的預測。

２ 結果與分析

２.１ ＨｒＮＨＸ６ 基因序列分析

２.１.１ ＨｒＮＨＸ６ 基因的核苷酸序列分析 ＨｒＮ￣ＨＸ６ 基因序列長度為１ ３４７ ｂｐ，含３４３ 個Ａ、２８８個Ｇ、４７０ 個Ｔ、２４６ 個Ｃ，Ａ＋Ｔ 的含量（６０.３６％）高于Ｇ＋Ｃ 的含量（３９.６４％）。

２.１.２ ＨｒＮＨＸ６ 蛋白的氨基酸序列分析 ＨｒＮ￣ＨＸ６ 基因編碼４４８ 個氨基酸，其中，酸性氨基酸（Ｄ、Ｅ）３６ 個，堿性氨基酸（Ｋ、Ｒ）２２ 個，極性氨基酸（Ｎ、Ｃ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｙ）１１９ 個，疏水性氨基酸（Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｆ、Ｗ、Ｖ）１９０ 個，分別占氨基酸總量的８.０％、５.０％、２６.６％、４２.４％。 在該蛋白中Ｌｅｕ （Ｌ）和Ｓｅｒ（Ｓ）含量較高，所占比例分別為１２.３％和９.８％。

２.１.３ ＨｒＮＨＸ６ 基因的核苷酸和氨基酸序列同源性分析 將ＨｒＮＨＸ６ 與１０ 種植物ＮＨＸ６ 基因的核苷酸和氨基酸序列進行同源比對分析，結果（圖１、圖２）表明，ＨｒＮＨＸ６ 與其他植物ＮＨＸ６ 基因核苷酸序列的同源性為８２.９％～８５.７％，氨基酸序列的同源性則達到８４.９％～８９.７％，其中中國沙棘與月季花的序列同源性最高。

２.１.４ ＨｒＮＨＸ６ 基因保守基序分析 通過ＭＥＭＥ軟件對ＨｒＮＨＸ６ 的保守基序進行分析，共得到１５個保守結構域，每個結構域的長度為５０ 個保守氨基酸，具有１１ 個位點，且Ｅ 值都顯著。 ＨｒＮＨＸ６保守基序與橡膠樹、山谷白櫟、歐洲野蘋果等植物ＮＨＸ６ 基因保守基序完全一致（圖３）。

２.２ ＨｒＮＨＸ６ 蛋白結構預測

２.２.１ ＨｒＮＨＸ６ 蛋白理化性質(zhì)及亞細胞定位 ＨｒＮＨＸ６ 蛋白分子式為Ｃ２２６０ Ｈ３４３６ Ｎ５５２ Ｏ６３６ Ｓ２０，分子量為４９ １５６.８４ Ｄａ，理論等電點為５.４７５，脂肪系２.２.２ 信號肽預測 ＮｅｔＯＧｌｙｃ ４.０ Ｓｅｒｖｅｒ 分析表明，切割位點Ｃ 的最大值為０.２４３，位于第３３ 位氨基酸；信號肽分數(shù)Ｓ 的最大值為０.１７９，位于第４４位氨基酸；合并切割位點Ｙ 的最大值為０.１６４，位于第３３ 位氨基酸（圖５）。 Ｓ 的平均值為０.１１７，預測剪切點在１～２８ 位氨基酸。 Ｓ 的平均值遠低于０.５，表明ＨｒＮＨＸ６ 蛋白是一種沒有潛在信號肽位點的非分泌蛋白。

２.２.３ ＨｒＮＨＸ６ 蛋白結構及功能位點預測 ＨｒＮ￣ＨＸ６ 蛋白二級結構中α－螺旋、無規(guī)則卷曲、延伸鏈、β － 折疊分別占４９. ３３％、３３. ２６％、１３. ６２％、３.７９％，α－螺旋和無規(guī)則卷曲是其主要構成成分（圖６）。 蛋白三維構象如圖７ 所示。 跨膜區(qū)預測結果（圖８）顯示，ＨｒＮＨＸ６ 含７ 個跨膜螺旋結構，屬于跨膜蛋白。

ＨｒＮＨＸ６ 蛋白功能位點的預測結果顯示該蛋白包含多個修飾位點：２ 個Ｎ－糖基化位點，即始于２１５ 位氨基酸的ＮＬＳＥ 和始于３７５ 位的ＮＥＳＦ；２ 個蛋白激酶Ｃ 磷酸化位點，分別為始于２２ 位的ＳＰＫ 和始于２２０ 位的ＳＱＲ；５ 個酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位點，分別為始于７７ 位的ＳＡＴＤ，始于２３３ 位的ＳＬＡＥ，始于３１７ 位的ＳＩＨＤ，始于３５０ 位的ＴＭ￣ＬＥ，始于４１４ 位的ＴＡＬＤ；９ 個Ｎ－豆寇?；稽c，分別為始于３１ 位的ＧＡＩＶＴＦ，始于４０ 位的ＧＴＦＩＡＳ，始于７３ 位的ＧＳＬＩＳＡ，始于９２ 位的ＧＳＤ￣ＶＮＬ，始于１４５ 位的ＧＳＬＳＡＧ，始于１５２ 位的ＧＶＧ￣ＦＴＳ，始于１９２ 位的ＧＬＧＬＳＧ，始于３０４ 位的ＧＬＲ￣ＧＡＭ，始于３４５ 位的ＧＧＳＴＧＴ。

２.３ 不同濃度ＮａＣｌ 脅迫下ＨｒＮＨＸ６ 基因的表達模式分析

ＮａＣｌ 脅迫下，中國沙棘根、莖、葉中的ＨｒＮＨＸ６基因均上調(diào)表達（圖９）。 在中國沙棘葉中，其表達量隨著ＮａＣｌ 濃度的增加逐漸升高，當ＮａＣｌ 濃度超過６００ ｍｍｏ/ Ｌ 后，表達量顯著升高；在莖中，其表達量呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢，在４００ ｍｍｏｌ/ Ｌ ＮａＣｌ 處理下最高，ＮａＣｌ 濃度繼續(xù)升高，其表達量略有下降且變化趨于平緩，但均顯著高于０～２００ ｍｍｏｌ/ Ｌ ＮａＣｌ處理；在根中，其表達量則表現(xiàn)為波動上升趨勢，在１ ０００ ｍｍｏｌ/ Ｌ ＮａＣｌ 處理下達到最高，除與６００ｍｍｏｌ/ Ｌ ＮａＣｌ 處理差異不顯著外，顯著高于其他處理。

３ 討論與結論

本研究結果表明，中國沙棘ＨｒＮＨＸ６ 基因序列全長為１ ３４７ ｂｐ，有１５ 個保守結構域；ＨｒＮＨＸ６為穩(wěn)定蛋白，定位于高爾基體膜中，這與擬南芥中ＡｔＮＨＸ６ 定位于胞體如高爾基體內(nèi)膜[１５] 的結論一致。 高爾基體網(wǎng)絡被認為是細胞成分運輸?shù)闹行?，連接到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、液泡和質(zhì)膜[１６] 。 在鹽脅迫下，植物產(chǎn)生大量的次生代謝物并分離破壞細胞結構的鹽離子，這都取決于高爾基體網(wǎng)絡的作用。 因此推測ＨｒＮＨＸ６ 的耐鹽作用機制可能依賴于高爾基體網(wǎng)絡的功能。 ＨｒＮＨＸ６ 蛋白的疏水性較強，具有多個疏水區(qū)，且含有７ 個跨膜結構域。 此外，ＨｒＮＨＸ６ 蛋白為非分泌蛋白，沒有潛在的信號肽位點，這與楊平等[１７] 的研究結果一致，符合植物ＮＨＸ 的基本特征。

ＨｒＮＨＸ６ 蛋白二級結構的主要構成元件為α－螺旋與無規(guī)則卷曲，分別占４９.３３％和３３.２６％。α－螺旋靠鏈內(nèi)氫鍵維持，兩側分別由疏水性和親水性氨基酸組成。 疏水側通過疏水鍵與磷脂雙分子層相互作用將蛋白固定在膜上使得ＨｒＮＨＸ６ 蛋白具有穩(wěn)定跨膜結構域，親水側則形成空桶狀結構使得ＨｒＮＨＸ６ 蛋白可進行水分跨膜運輸。 這些結構特征賦予了ＨｒＮＨＸ６ 蛋白高效轉(zhuǎn)運水分的功能，與該蛋白具有７ 個跨膜螺旋結構的分析結果一致。 此外，功能位點預測表明，中國沙棘ＨｒＮ￣ＨＸ６ 具有２ 個Ｎ－糖基化位點、２ 個蛋白激酶Ｃ 磷酸化位點、５ 個酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位點、９ 個Ｎ－豆寇?；稽c，說明ＨｒＮＨＸ６ 蛋白可通過糖基化、磷酸化、豆蔻酰化等修飾調(diào)節(jié)該蛋白的功能和構造進而完成Ｎａ＋的轉(zhuǎn)運。

植物ＮＨＸ 在耐鹽、調(diào)節(jié)ｐＨ、保持Ｋ＋ 穩(wěn)態(tài)以及細胞擴張、細胞囊泡的轉(zhuǎn)運等方面發(fā)揮著關鍵作用，可增強石榴[１８] 、玉米[１９] 、桃[２０] 等的耐鹽性。鹽脅迫下，苜蓿ＭｔＮＨＸ６ 基因在不同組織中的表達水平不同，且在葉片和根部的表達量較高[２１] ；玉米ＺｍＮＨＸ６ 基因在根中顯著表達[１９] ；而在擬南芥幼苗中幾乎檢測不到ＡｔＮＨＸ６ 基因的表達[２２] 。 這些結果表明不同植物的ＮＨＸ６ 基因在鹽脅迫下行使功能的主要組織部位不同。 本研究結果表明，ＮａＣｌ 脅迫下ＨｒＮＨＸ６ 基因在中國沙棘根、莖、葉中均上調(diào)表達，這與在石榴[１８] 和擬南芥[２３] 等植物中的研究結果一致；但不同ＮａＣｌ 濃度下其表達量差異較大，且同一脅迫濃度下其在不同組織中的表達也不同。 此外，中國沙棘ＨｒＮ￣ＨＸ６ 基因受鹽脅迫顯著誘導，表明中國沙棘ＨｒＮ￣ＨＸ６ 基因在鹽脅迫中行使重要的生物學功能。Ｓａｎｄｈｕ 等[２１] 研究發(fā)現(xiàn)，鹽脅迫下ＭｔＮＨＸ６ 基因在苜蓿根部上調(diào)表達的幅度顯著高于其他組織。 本研究亦得到相似結果，這可能是由于根組織最先接觸到鹽脅迫的緣故。 另外，根中ＨｒＮＨＸ６ 基因表達顯著上升有助于根中細胞的Ｎａ＋ 外排或區(qū)隔化，以維持細胞內(nèi)低Ｎａ＋水平，從而減輕鹽脅迫對植物地上部分的傷害，同時通過滲透調(diào)節(jié)促進根系吸水。

本研究結果可為中國沙棘ＨｒＮＨＸ６ 基因功能研究提供一定的理論參考，并為中國沙棘耐鹽育種基因的挖掘奠定基礎。

參 考 文 獻：

[１] Ｚｈｕ Ｊ Ｋ. Ｐｌａｎｔ ｓａｌｔ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ[Ｊ]. Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００１， ６（２）： ６６－７１.

[２] Ｔａｔｔｉｎｉ Ｍ， Ｇｕｃｃｉ Ｒ， Ｃｏｒａｄｅｓｃｈｉ Ｍ Ａ， ｅｔ ａｌ. Ｇｒｏｗｔｈ， ｇａｓ ｅｘ￣ｃｈａｎｇｅ ａｎｄ ｉｏｎ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ Ｏｌｅａ ｅｕｒｏｐａｅａ ｐｌａｎｔｓ ｄｕｒｉｎｇ ｓａｌｉｎｉｔｙｓｔｒｅｓｓ ａｎｄ ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔ ｒｅｌｉｅｆ[Ｊ]. Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉａ Ｐｌａｎｔａｒｕｍ， １９９５，９５（２）： ２０３－２１０.

[３] Ａｐｓｅ Ｍ Ｐ， Ｂｌｕｍｗａｌｄ Ｅ. Ｎａ＋ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ｉｎ ｐｌａｎｔｓ[Ｊ]. ＦＥＢＳＬｅｔｔｅｒｓ， ２００７， ５８１（１２）： ２２４７－２２５４.

[４] Ｙａｍａｇｕｃｈｉ Ｔ， Ｆｕｋａｄａ￣Ｔａｎａｋａ Ｓ， Ｉｎａｇａｋｉ Ｙ， ｅｔ ａｌ. Ｇｅｎｅｓ ｅｎ￣ｃｏｄｉｎｇ ｔｈｅ ｖａｃｕｏｌａｒ Ｎａ＋ / Ｈ＋ ｅｘｃｈａｎｇｅｒ ａｎｄ ｆｌｏｗｅｒ ｃｏｌｏｒａｔｉｏｎ[Ｊ]. Ｐｌａｎｔ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ， ２００１， ４２（５）： ４５１－４６１.

[５] Ａｐｓｅ Ｍ Ｐ， Ａｈａｒｏｎ Ｇ Ｓ， Ｓｎｅｄｄｅｎ Ｗ Ａ， ｅｔ ａｌ. Ｓａｌｔ ｔｏｌｅｒａｎｃｅｃｏｎｆｅｒｒｅｄ ｂｙ ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａ ｖａｃｕｏｌａｒ Ｎａ＋ / Ｈ＋ ａｎｔｉｐｏｒｔ ｉｎＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ[Ｊ]. Ｓｃｉｅｎｃｅ， １９９９， ２８５（５４３１）： １２５６－１２５８.

[６] Ｂｒｅｔｔ Ｃ Ｌ， Ｄｏｎｏｗｉｔｚ Ｍ， Ｒａｏ Ｒ. Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ ｏｒｉｇｉｎｓ ｏｆ ｅｕｋａｒｙ￣ｏｔｉｃ ｓｏｄｉｕｍ/ ｐｒｏｔｏｎ ｅｘｃｈａｎｇｅｒｓ[Ｊ]. Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈｙｓｉ￣ｏｌｏｇｙ：Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ， ２００５， ２８８（２）： Ｃ２２３－Ｃ２３９.

[７] Ａｙａｄｉ Ｍ， Ｍａｒｔｉｎｓ Ｖ， Ｂｅｎ Ａｙｅｄ Ｒ， ｅｔ ａｌ. Ｇｅｎｏｍｅ ｗｉｄｅ ｉｄｅｎｔｉ￣ｆｉｃａｔｉｏｎ，ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ，ａｎｄ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎａ￣ｌｙｓｅｓ ｏｆ ｇｒａｐｅｖｉｎｅ ＮＨＸ ａｎｔｉｐｏｒｔｅｒｓ ｓｕｇｇｅｓｔ ｔｈｅｉｒ ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｉｎｇｒｏｗｔｈ，ｒｉｐｅｎｉｎｇ，ｓｅｅｄ ｄｏｒｍａｎｃｙ，ａｎｄ ｓｔｒｅｓｓ ｒｅｓｐｏｎｓｅ[Ｊ]. Ｂｉ￣ｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２０２０，５８： １０２－１２８.

[８] Ａｋｒａｍ Ｕ，Ｓｏｎｇ Ｙ，Ｌｉａｎｇ Ｃ，ｅｔ ａｌ. Ｇｅｎｏｍｅ￣ｗｉｄｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａ￣ｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＮＨＸ ｇｅｎｅ ｆａｍｉｌｙ ｕｎｄｅｒ ｓａｌｉｎｉｔｙｓｔｒｅｓｓ ｉｎ Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ ｂａｒｂａｄｅｎｓｅ ａｎｄ ｉｔｓ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｗｉｔｈ Ｇｏｓｓｙｐｉ￣ｕｍ ｈｉｒｓｕｔｕｍ[Ｊ]. Ｇｅｎｅｓ， ２０２０， １１（７）： ８０３.

[９] Ｑｉｕ Ｑ Ｓ， Ｇｕｏ Ｙ， Ｄｉｅｔｒｉｃｈ Ｍ Ａ， ｅｔ ａｌ. Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＳＯＳ１， ａｐｌａｓｍａ ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｎａ＋ / Ｈ＋ ｅｘｃｈａｎｇｅｒ ｉｎ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ，ｂｙ ＳＯＳ２ ａｎｄ ＳＯＳ３[Ｊ]. Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， ２００２， ９９（１２）： ８４３６－８４４１.

[１０] Ｑｕｉｎｔｅｒｏ Ｆ Ｊ， Ｏｈｔａ Ｍ， Ｓｈｉ Ｈ， ｅｔ ａｌ. Ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ ｉｎ ｙｅａｓｔ ｏｆｔｈｅ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ＳＯＳ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ｆｏｒ Ｎａ＋ ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ[Ｊ].Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， ２００２， ９９（１３）： ９０６１－９０６６.

[１１] Ｗａｎｇ Ｍ， Ｚｈｅｎｇ Ｑ Ｓ， Ｓｈｅｎ Ｑ Ｒ， ｅｔ ａｌ. Ｔｈｅ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｒｏｌｅ ｏｆ ｐｏ￣ｔａｓｓｉｕｍ ｉｎ ｐｌａｎｔ ｓｔｒｅｓｓ ｒｅｓｐｏｎｓｅ[Ｊ]. Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， ２０１３， １４（４）： ７３７０－７３９０.

[１２] Ｍｅｎｇ Ｋ， Ｗｕ Ｙ. Ｆｏｏｔｐｒｉｎｔｓ ｏｆ ｄｉｖｅｒｇｅｎｔ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｉｎ ｔｗｏ Ｎａ＋ /Ｈ＋ ｔｙｐｅ ａｎｔｉｐｏｒｔｅｒ ｇｅｎｅ ｆａｍｉｌｉｅｓ （ＮＨＸ ａｎｄ ＳＯＳ１） ｉｎ ｔｈｅ ｇｅ￣ｎｕｓ Ｐｏｐｕｌｕｓ[Ｊ]. Ｔｒｅｅ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ， ２０１８， ３８（６）： ８１３－８２４.

[１３] 阮成江，謝慶良. 鹽脅迫下沙棘的滲透調(diào)節(jié)效應[Ｊ]. 植物資源與環(huán)境學報，２００２，１１（２）：４５－４７.

[１４] 喬楓，耿貴工. 鹽堿脅迫對沙棘種子萌發(fā)及幼苗抗氧化酶活性的影響[Ｊ]. 東北林業(yè)大學學報，２０１２，４０（２）：１７－１９.

[１５] Ｂａｓｓｉｌ Ｅ， Ｏｈｔｏ Ｍ， Ｅｓｕｍｉ Ｔ， ｅｔ ａｌ. Ｔｈｅ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒＮａ＋ / Ｈ＋ ａｎｔｉｐｏｒｔｅｒｓ ＮＨＸ５ ａｎｄ ＮＨＸ６ ａｒｅ ｅｎｄｏｓｏｍｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄａｎｄ ｎｅｃｅｓｓａｒｙ ｆｏｒ ｐｌａｎｔ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ[Ｊ]. Ｔｈｅ ＰｌａｎｔＣｅｌｌ， ２０１１， ２３（１）： ２２４－２３９.

[１６] Ｌａｒｋｉｎ Ｈ， Ｃｏｓｔａｎｔｉｎｏ Ｓ， Ｓｅａｍａｎ Ｍ Ｎ Ｊ， ｅｔ ａｌ. Ｃａｌｎｕｃ ｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎ ｅｎｄｏｓｏｍａｌ ｓｏｒｔｉｎｇ ｏｆ ｌｙｓｏｓｏｍａｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ[Ｊ]. Ｔｒａｆｆｉｃ， ２０１６，１７（４）： ４１６－４３２.

[１７] 楊平，蔡小寧，賁愛玲. 鹽芥ＴｈＮＨＸ１ 基因的克隆及序列分析[Ｊ]. 江蘇農(nóng)業(yè)學報，２００７，２３（６）：５５６－５６３.

[１８] Ｄｏｎｇ Ｊ Ｍ， Ｌｉｕ Ｃ Ｙ， Ｗａｎｇ Ｙ Ｙ， ｅｔ ａｌ. Ｇｅｎｏｍｅ￣ｗｉｄｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉ￣ｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＮＨＸ ｇｅｎｅ ｆａｍｉｌｙ ｉｎ Ｐｕｎｉｃａ ｇｒａｎａｔｕｍ Ｌ. ａｎｄ ｔｈｅｉｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｌ ｐａｔｔｅｒｎｓ ｕｎｄｅｒ ｓａｌｔ ｓｔｒｅｓｓ[Ｊ]. Ａｇｒｏｎｏｍｙ， ２０２１，１１（２）： ２６４.

[１９] Ｚ?ｒｂ Ｃ， Ｎｏｌｌ Ａ， Ｋａｒｌ Ｓ， ｅｔ ａｌ. Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆＮａ＋ / Ｈ＋ ａｎｔｉｐｏｒｔｅｒｓ （ＺｍＮＨＸ） ｏｆ ｍａｉｚｅ （Ｚｅａ ｍａｙｓ Ｌ.） ａｎｄｔｈｅｉｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｕｎｄｅｒ ｓａｌｔ ｓｔｒｅｓｓ[Ｊ]. Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌｏ￣ｇｙ， ２００５， １６２（１）： ５５－６６.

[２０] 李淼，李桂祥，劉偉. 桃ＮＨＸ 基因家族的全基因組鑒定與表達分析[Ｊ]. 山東農(nóng)業(yè)科學，２０２１，５３（１２）：８－１６.

[２１] Ｓａｎｄｈｕ Ｄ， Ｐｕｄｕｓｓｅｒｙ Ｍ Ｖ， Ｋａｕｎｄａｌ Ｒ， ｅｔ ａｌ. Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｈａｒ￣ａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａ＋ / Ｈ＋ ｅｘｃｈａｎｇｅｒｇｅｎｅ ｆａｍｉｌｙ ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｇｏ ｔｒｕｎｃａｔｕｌａ[Ｊ]. Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ＆ Ｉｎｔｅｇｒａ￣ｔｉｖｅ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ， ２０１８， １８： １４１－１５３.

[２２] Ｙｏｋｏｉ Ｓ， Ｑｕｉｎｔｅｒｏ Ｆ Ｊ， Ｃｕｂｅｒｏ Ｂ， ｅｔ ａｌ. Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ ＮＨＸ Ｎａ＋ / Ｈ＋ ａｎｔｉｐｏｒｔｅｒｓｉｎ ｔｈｅ ｓａｌｔ ｓｔｒｅｓｓ ｒｅｓｐｏｎｓｅ[Ｊ]. Ｔｈｅ Ｐｌａｎｔ Ｊｏｕｒｎａｌ， ２００２， ３０（５）： ５２９－５３９.

[２３] Ｗａｎｇ Ｌ Ｇ， Ｗｕ Ｘ Ｘ， Ｌｉｕ Ｙ Ｆ， ｅｔ ａｌ. ＡｔＮＨＸ５ ａｎｄ ＡｔＮＨＸ６ｃｏｎｔｒｏｌ ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｋ＋ ａｎｄ ｐＨ ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ ｉｎ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ： ｔｈｒｅｅｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ａｃｉｄｉｃ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ａｒｅ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ Ｋ＋ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ[ Ｊ].ＰＬｏＳ ＯＮＥ， ２０１５， １０（１２）： ｅ０１４４７１６.