宋丹丹 桂飛 汪海燕 胡金池 黃瑾 楊磊

摘要：目的 利用不同的耳毒性藥物建立長(zhǎng)爪沙鼠感音神經(jīng)性耳聾模型，并對(duì)3種模型進(jìn)行比較分析，為感音神經(jīng)性耳聾的研究提供精準(zhǔn)的動(dòng)物模型。方法 選擇長(zhǎng)爪沙鼠，建立硫酸卡那霉素和呋塞米聯(lián)用（KM+Fur）、新霉素（Neo）及哇巴因（Oua）3種耳毒性藥物的感音神經(jīng)性耳聾模型，通過(guò)聽(tīng)性腦干反應(yīng)（ABR）和耳蝸組織形態(tài)學(xué)檢測(cè)，比較分析不同耳毒性藥物的損傷特點(diǎn)。結(jié)果 KM+Fur造模后，與對(duì)照組（14.00±1.80）相比，該組（71.00±5.26）長(zhǎng)爪沙鼠的聽(tīng)力閾值顯著上升，耳蝸HCs大量損傷，而SGNs無(wú)明顯損傷；Neo造模后，與對(duì)照組相比，40 mmol·L-1 Neo僅影響沙鼠高頻32 kHz時(shí)聽(tīng)力閾值（60.00±8.66），無(wú)明顯的組織學(xué)改變；而100 mmol·L-1 Neo組的沙鼠各頻率聽(tīng)力閾值均顯著上升，且耳蝸HCs及SGNs均嚴(yán)重受損；Oua造模后，1 mmol·L-1 Oua 和10 mmol·L-1 Oua均可引起沙鼠各頻率聽(tīng)力閾值顯著上升，但損傷范圍不同，10 mmol·L-1 Oua使HCs和SGNs均嚴(yán)重受損，而1 mmol·L-1 Oua僅造成耳蝸SGNs損傷。結(jié)論 利用KM+Fur可建立長(zhǎng)爪沙鼠HCs特異性受損的感音神經(jīng)性耳聾模型；40 mmol·L-1 Neo可建立高頻區(qū)聽(tīng)功能損傷的感音神經(jīng)性耳聾模型；利用100 mmol·L-1 Neo和10 mmol·L-1 Oua可以建立長(zhǎng)爪沙鼠HCs和SGNs均受損的感音神經(jīng)性耳聾模型；利用1 mmol·L-1? Oua可以建立長(zhǎng)爪沙鼠耳蝸SGNs特異性受損的耳聾模型。

關(guān)鍵詞：感音神經(jīng)性耳聾；長(zhǎng)爪沙鼠；動(dòng)物模型；耳毒性藥物

中圖分類號(hào)：R764中圖分類號(hào)文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼

Establishment and comparison of sensorineural deafness models in Mongolian gerbils

SONG? Dandan1， 2，GUI? Fei2，WANG? Haiyan1，HU? Jinchi2，HUANG? Jin2，YANG? Lei1， 2*

（1 School of Public Health， Hangzhou Normal University，Hangzhou，Zhejiang 311121， China;

2 School of Medicine， Shihezi University，Shihezi， Xinjiang 832000， China）

Abstract：? Objective Different ototoxic drugs were used to establish the model of sensorineural deafness in Mongolian gerbils， and the three models were compared to provide accurate animal models for the study of sensorineural deafness. Methods Mongolian gerbils model of sensorineural deafness was established by kanamycin sulfate and furosemide （KM+Fur）， neomycin （Neo） and Ouabain （Oua）， ABR auditory function and cochlear tissue morphological test were examined to compare and analyze the damage characteristics of different ototoxic drugs. Results After KM+Fur modeling， compared with the control group （14.00±1.80）， the hearing threshold of Mongolian gerbils in this group （71.00±5.26） was significantly increased， and the cochlear HCs， while SGNs were not significantly damaged. After Neo modeling， 40 mmol·L-1 Neo only affected the hearing threshold （60.00±8.66） at high frequency 32 kHz， and had no obvious histological changes. n the 100 mmol·L-1 Neo group， the hearing thresholds of all frequencies were significantly increased， and the cochlear HCs and SGNs were severely damaged. After the modeling of Oua， 1 mmol·L-1 Oua and 10 mmol·L-1 Oua could significantly increase the hearing thresholds of all frequencies in gerbils， but the damage ranges were different. 10 mmol·L-1 Oua severely damaged HCs and SGNs， while 1 mmol·L-1 Oua only damaged cochlear SGNs. Conclusion KM+Fur can be used to establish sensorineural deafness model with specific damage of HCs in gerbils. 40 mmol·L-1 Neo can establish sensorineural deafness model with high frequency hearing impairment. Using 100 mmol·L-1 Neo and 10 mmol·L-1 Oua， the sensorineural hearing loss model of gerbils with impaired hair cells and spiral ganglion neurons was established. Deafness model with cochlear spiral ganglion neurons specific impairment of gerbils cochlea with 1 mmol·L-1 Oua was established

Key words： sensorineural deafness;Mongolian gerbil;animal model;ototoxic drugs

0 引言

耳聾是臨床上最常見(jiàn)的致殘性疾病之一，其中感音神經(jīng)性聽(tīng)力損失占耳聾的絕大多數(shù)［1］。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物疾病模型是開(kāi)展其各項(xiàng)基礎(chǔ)和臨床應(yīng)用研究必不可少的實(shí)驗(yàn)工具，而選擇并建立精準(zhǔn)的耳聾實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蛯?duì)感音神經(jīng)性耳聾的研究至關(guān)重要。

在各種感音神經(jīng)性耳聾動(dòng)物模型中，耳毒性藥物所致的動(dòng)物模型較噪聲暴露、基因突變等造模更常用，且藥物劑量可控，建立的模型更穩(wěn)定［2］。藥物誘導(dǎo)耳聾的方法有許多，例如新霉素（neomycin，Neo）或哇巴因（ouabain，Oua）的圓窗局部給藥［3-4］，以及硫酸卡那霉素（kanamycin sulfates， KM）、呋塞米（furosemide， Fur）的聯(lián)用全身給藥［5-6］等。不同藥物的造模原理、給藥方式及濃度等，所造成的損傷程度、損傷范圍有較大差異。

關(guān)于長(zhǎng)爪沙鼠在耳聾模型中的應(yīng)用鮮見(jiàn)報(bào)道，本研究選擇長(zhǎng)爪沙鼠采用3種常用的耳毒性藥物造模，包括一種全身給藥方式（硫酸卡那霉素和呋塞米聯(lián)用）的和兩種局部給藥方式（新霉素和哇巴因分別經(jīng)圓窗給藥），建立不同的急性感音神經(jīng)性耳聾模型；通過(guò)觀察長(zhǎng)爪沙鼠的聽(tīng)功能，以及檢測(cè)耳蝸毛細(xì)胞（hair cells， HCs）和螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞（spiral ganglion neurons， SGNs）的組織形態(tài)學(xué)變化，比較分析不同耳毒性藥物的損傷特點(diǎn)，為研究感音神經(jīng)性耳聾提供精準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)

本實(shí)驗(yàn)選取70只2～3月齡健康的長(zhǎng)爪沙鼠，雌雄各半。所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均符合實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利倫理，飼養(yǎng)在杭州師范大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心屏障系統(tǒng)隔離器中，環(huán)境溫度20～26℃，相對(duì)濕度40%～70%，光照條件12/12h明暗交替，動(dòng)物自由采食、飲水。使用許可證：SYXK（浙）2020-0026。

1.2 模型的建立

實(shí)驗(yàn)前ABR聽(tīng)功能檢測(cè)顯示其聽(tīng)力均正常，耳廓反應(yīng)靈敏，外耳道通暢。剪腳趾標(biāo)記，隨機(jī)分為對(duì)照組、硫酸卡那霉素和呋塞米聯(lián)用組（KM+Fur）、新霉素（Neo）40mmol·L-1和100mmol·L-1兩組、哇巴因（Oua）1mmol·L-1和10mmol·L-1兩組，每組10只。

本研究造模使用的3種耳毒性藥物（KM+Fur、Neo和Oua）購(gòu)自Sigma公司，分別采用全身給藥和局部給藥的方式，具體操作如下。

對(duì)于KM+Fur的全身給藥，首先皮下注射KM（1000 mg·kg-1），30 min后腹腔注射Fur（500 mg·kg-1）。給藥后觀察動(dòng)物狀態(tài)，并放回籠內(nèi)正常飼養(yǎng)。

對(duì)于Neo或Oua的經(jīng)圓窗局部給藥，先使用戊巴比妥鈉（上海上藥新亞藥業(yè)有限公司），按動(dòng)物體重進(jìn)行麻醉，然后在耳背部剔除毛發(fā)并擦拭酒精。皮膚打開(kāi)一個(gè)開(kāi)口，鈍性分離肌肉和脂肪組織，暴露聽(tīng)泡。接著，在聽(tīng)泡上打一個(gè)小孔并順著開(kāi)孔方向找到圓窗的位置。將藥物緩慢滴注于圓窗膜上，每耳20μL，分4次給藥，15 min·次-1，給藥完成后，用明膠海綿填塞創(chuàng)口后縫合肌肉和皮膚，手術(shù)過(guò)程中置于37 ℃加熱臺(tái)上（蘇金壇醫(yī)療器械廠）孵育，待蘇醒后放回籠內(nèi)飼養(yǎng)。

1.3 聽(tīng)功能檢測(cè)

本實(shí)驗(yàn)使用聽(tīng)覺(jué)電生理工作站（美國(guó)TDT公司RZ6）來(lái)檢測(cè)動(dòng)物的聽(tīng)力功能。首先給動(dòng)物注射戊巴比妥鈉進(jìn)行麻醉，并將其放置在保持體溫的加熱墊上。隨后將記錄電極固定在動(dòng)物顱頂處，接地電極固定在對(duì)側(cè)耳部乳突處下。外置耳聲發(fā)射器置于待測(cè)耳一側(cè)，距離外耳道約10 cm的位置。在檢測(cè)電阻抗后，使用TDT RZ6系統(tǒng)軟件進(jìn)行聽(tīng)力閾值檢測(cè)試驗(yàn)。通過(guò)click/tone burst 刺激，采用20次·秒-1的頻率，掃描時(shí)間為10ms，濾波范圍為100～3 000 Hz，疊加次數(shù)為1 024次，測(cè)量的頻率依次為2 kHz、4 kHz、8 kHz、16 kHz和32 kHz。刺激聲強(qiáng)從90 dBSPL開(kāi)始逐漸遞減，直到特征性的腦電波消失，記錄該波對(duì)應(yīng)的聲音強(qiáng)度作為該動(dòng)物的聽(tīng)力閾值（長(zhǎng)爪沙鼠為Ⅱ波）。KM+Fur組動(dòng)物使用click刺激檢測(cè)聽(tīng)力閾值，Neo和Oua組動(dòng)物使用tone burst刺激檢測(cè)聽(tīng)力閾值。聽(tīng)力閾值檢測(cè)在標(biāo)準(zhǔn)隔音室內(nèi)完成以保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1.4 耳蝸樣本的制備

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，安樂(lè)死各組長(zhǎng)爪沙鼠，然后快速取出耳蝸。在解剖顯微鏡（德國(guó)卡爾蔡司公司）下，去除殘留的肌肉和血液組織，并在蝸尖處鉆孔，注入1～2 mL的4% pH 7.4多聚甲醛。將耳蝸組織樣品放在4℃下固定過(guò)夜，隨后使用0.5 mol·L-1 PH 7.0的EDTA-Na2常溫脫鈣3～4 d后，沖洗潔凈的耳蝸組織，再經(jīng)過(guò)15%、30%蔗糖中梯度脫水。將處理后的樣品用OTC膠進(jìn)行包埋，使用冰凍切片機(jī)（美國(guó) Thermo 公司）將組織切成片厚12 μm的樣本，再使用載玻片取片，置于-80℃冰箱進(jìn)行保存，待檢測(cè)。此外，取部分耳蝸組織，脫鈣后，取出基底膜進(jìn)行鋪片。此樣品用于免疫熒光檢測(cè)。

1.5 免疫熒光染色

取出耳蝸切片樣本，首先使用1×PBS清洗3次、15 min·次-1，然后使用10% 馬血清+0.03% 皂苷進(jìn)行封閉1h。隨后加入購(gòu)自Abcam公司的Myo7a和Tuj1/NF200一抗4℃ 冰箱放置過(guò)夜。次日，使用0.1% PBST清洗4次、 2 h·次-1。加入購(gòu)自Invitrogen公司的山羊抗兔 Alex Fluro 488和山羊抗鼠 Alex Fluro 568二抗常溫孵育2h，隨后使用1×PBS清洗3次、15 min·次-1。最后用封片劑封片固定。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

數(shù)據(jù)運(yùn)用SPSS statistics 22及Graphpad prism軟件分析處理，采用配對(duì)樣本t檢測(cè)，分析各組數(shù)據(jù)之間的差異，P<0.05為具有顯著性差異，P<0.01為具有極顯著性差異。

2 結(jié)果

2.1 硫酸卡那霉素和呋塞米聯(lián)用（KM+Fur）對(duì)長(zhǎng)爪沙鼠聽(tīng)功能的影響

選用聽(tīng)功能正常的長(zhǎng)爪沙鼠，利用KM+Fur造模2周后，ABR聽(tīng)功能檢測(cè)結(jié)果顯示，KM+Fur組聽(tīng)力閾值為71.00±5.26 dB SPL，較對(duì)照組（14.00±1.80 dB SPL）顯著升高（P<0.01）（表1，圖1）。

2.2 硫酸卡那霉素和呋塞米聯(lián)用（KM+Fur）對(duì)長(zhǎng)爪沙鼠組織形態(tài)學(xué)的影響

KM+Fur造模及其對(duì)照組的沙鼠聽(tīng)功能檢測(cè)后，耳蝸組織免疫熒光結(jié)果顯示：對(duì)照組HCs形態(tài)完整，包括一層內(nèi)毛細(xì)胞（inner hair cells， IHC）和三層外毛細(xì)胞（outer hair cells， OHC）；損傷組的長(zhǎng)爪沙鼠耳蝸IHC和OHC均出現(xiàn)嚴(yán)重丟失，如圖2綠色方框內(nèi)所示，然而SGNs則幾乎沒(méi)有受損，如圖2紅色方框內(nèi)所示。說(shuō)明，KM+Fur可造成長(zhǎng)爪沙鼠耳蝸HCs嚴(yán)重受損，從而導(dǎo)致聽(tīng)力閾值上升。

組織形態(tài)學(xué)檢測(cè)結(jié)果，各組紅色方框的局部放大圖內(nèi)為SGNs（Tuj1），各組綠色方框的局部放大圖內(nèi)為HCs（Myo7a）所在位置，包括一層IHC和三層OHC；白色箭頭為損傷后殘存的HCs，bar=50 μm；柱狀圖為對(duì)照組和KM+Fur組SGNs數(shù)量統(tǒng)計(jì)結(jié)果。圖2 硫酸卡那霉素和呋塞米聯(lián)用對(duì)長(zhǎng)爪沙鼠組織形態(tài)學(xué)的影響

2.3 新霉素（Neo）對(duì)長(zhǎng)爪沙鼠聽(tīng)功能的影響

選取聽(tīng)功能正常的長(zhǎng)爪沙鼠，使用Neo造模2周，ABR聽(tīng)功能檢測(cè)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，40mmol·L-1 Neo組僅在32 kHz時(shí)聽(tīng)力閾值顯著上升，為 60.00±8.66 dB SPL（P<0.05）；100mmol·L-1 Neo組聽(tīng)力閾值在2 kHz、4 kHz、8 kHz、16 kHz、32 kHz時(shí)均顯著升高，依次為57.50±21.88、45.00±23.30、55.00±22.04、62.50±13.89、80.00±10.69（P<0.01）（圖3，表2）。

2.4 新霉素（Neo）對(duì)長(zhǎng)爪沙鼠組織形態(tài)學(xué)的影響

Neo造模組及對(duì)照組的沙鼠聽(tīng)功能檢測(cè)結(jié)束，耳蝸組織形態(tài)學(xué)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，40mmol·L-1 Neo組耳蝸HCs、SGNs均未見(jiàn)明顯損傷，僅高頻區(qū)聽(tīng)力閾值顯著升高。100mmol·L-1 Neo組耳蝸組織免疫熒光結(jié)果顯示，IHC和OHC均出現(xiàn)一定程度的損傷，圖4綠色方框所示；盡管SGNs數(shù)量沒(méi)有明顯變化，但出現(xiàn)明顯的固縮變性，圖4紅色方框所示。

2.5 哇巴因（Oua）對(duì)長(zhǎng)爪沙鼠的聽(tīng)功能的影響

選取聽(tīng)功能正常的長(zhǎng)爪沙鼠，利用Oua造模2周后，ABR聽(tīng)功能檢測(cè)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，1mmol·L-1 Oua 組在2、4、8、16、32 kHz各個(gè)頻率下聽(tīng)力閾值均顯著上升，依次為37.78±8.33、27.78±9.72、44.44±8.82、58.89±18.33、84.44±7.26；10mmol·L-1 Oua 組同樣在2、4、8、16、32 kHz各個(gè)頻率下聽(tīng)力閾值均顯著上升，依次為33.33±10.33、26.67±5.16、50.00±0.00、70.00±8.94、90.00±0.00，（P<0.01）；且高頻區(qū)聽(tīng)力的損傷較1mmol·L-1 Oua組更為嚴(yán)重（表3，圖5）。

組織形態(tài)學(xué)檢測(cè)結(jié)果，各組紅色方框的局部放大圖內(nèi)為SGNs（NF200），各組綠色方框的局部放大圖內(nèi)為HCs（Myo7a）所在位置，包括一層IHC和三層OHC，bar=50 μm；柱狀圖為對(duì)照組和Neo組SGNs數(shù)量統(tǒng)計(jì)結(jié)果。圖4 不同濃度Neo造模對(duì)長(zhǎng)爪沙鼠組織形態(tài)學(xué)的影響

2.6 哇巴因（Oua）對(duì)長(zhǎng)爪沙鼠的組織形態(tài)學(xué)的影響

Oua造模組的聽(tīng)功能檢測(cè)結(jié)束后，耳蝸組織免疫熒光結(jié)果顯示，1mmol·L-1 Oua組耳蝸SGNs嚴(yán)重受損，而HCs幾乎未見(jiàn)損傷，見(jiàn)圖6。

為進(jìn)一步確證HCs是否無(wú)明顯損傷，取對(duì)照組和1mmol·L-1 Oua組基底膜進(jìn)行免疫熒光檢測(cè)，結(jié)果顯示IHC和OHC均未見(jiàn)損傷，與耳蝸冰凍切片檢測(cè)結(jié)果一致（圖7）。

然而，10mmol·L-1 Oua組除SGNs出現(xiàn)嚴(yán)重?fù)p傷，圖6白色箭頭所指，IHC和OHC均出現(xiàn)一定程度的缺失，其中OHC損傷更為嚴(yán)重，如圖6中綠色方框所示。

組織形態(tài)學(xué)檢測(cè)結(jié)果，各組紅色方框的局部放大圖內(nèi)為SGNs（NF200），各組綠色方框的局部放大圖內(nèi)為HCs（Myo7a）所在位置，包括一層IHC和三層OHC；白色箭頭為殘存的SGNs，bar=50 μm；柱狀圖為對(duì)照組和Oua組SGNs數(shù)量統(tǒng)計(jì)結(jié)果。

2.7 3種耳毒性藥物建模的結(jié)果比較

從聽(tīng)功能的角度觀察，3種耳毒性藥物均可以造成各頻率聽(tīng)力閾值顯著升高，僅40mmol·L-1 Neo影響高頻區(qū)的聽(tīng)功能。從組織形態(tài)學(xué)的角度觀察，KM+Fur 特異性損傷HCs，而SGNs無(wú)明顯損傷；1mmol·L-1 Oua特異性損傷SGNs，而HCs無(wú)明顯損傷（表4）。

3 討論

本研究選擇長(zhǎng)爪沙鼠，建立了KM+Fur、Neo和Oua 3種作用機(jī)制各異，給藥方式不同的藥物感音神經(jīng)性耳聾模型，通過(guò)聽(tīng)功能檢測(cè)、耳蝸毛細(xì)胞和螺旋神經(jīng)節(jié)的觀察，比較分析了各種模型各自的損傷特點(diǎn)，為感音神經(jīng)性耳聾的研究提供了比較精準(zhǔn)的感音神經(jīng)性耳聾模型。

動(dòng)物的選擇在動(dòng)物模型的建立中至關(guān)重要，針對(duì)感音神經(jīng)性耳聾的研究，國(guó)內(nèi)外實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型主要集中大鼠、小鼠、豚鼠等嚙齒類動(dòng)物［2，5-6］，而關(guān)于長(zhǎng)爪沙鼠在耳聾模型中的研究鮮見(jiàn)報(bào)道。小鼠作為最常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，由于個(gè)體較小，在耳蝸局部給藥時(shí)，操作難度較大；豚鼠藥物造模死亡率高；長(zhǎng)爪沙鼠對(duì)于聲音敏感度高，且聽(tīng)泡較大，便于局部給藥，是耳聾研究的理想模式動(dòng)物［7］。因此本研究選擇長(zhǎng)爪沙鼠建立感音神經(jīng)性耳聾模型。

用于建立耳聾模型的耳毒性藥物有很多，包括氨基糖苷類抗生素［8］、強(qiáng)心苷類藥物［9］、卡鉑［10］、順鉑［11］等。本研究根據(jù)作用機(jī)制和給藥方式，選擇3種常用的耳毒性藥物（KM+Fur、Neo以及Oua）造模。

硫酸卡那霉素和新霉素是氨基糖苷類抗生素，由于其永久性聽(tīng)力損失的不良反應(yīng)是，被廣泛應(yīng)用于建立感音神經(jīng)性耳聾模型。研究表明硫酸卡那霉素的耳毒性主要針對(duì)耳蝸HCs，與呋塞米聯(lián)用可以增強(qiáng)耳毒性［12-13］，因此本研究選擇KM+Fur，通過(guò)全身給藥的方式建立感音神經(jīng)性耳聾模型。

而全身給藥的新霉素會(huì)產(chǎn)生很強(qiáng)的毒性作用［10］。故本研究是選擇新霉素通過(guò)耳蝸圓窗給藥進(jìn)行造模。為更系統(tǒng)的比較分析不同濃度的Neo對(duì)聽(tīng)功能和組織形態(tài)學(xué)的影響，本研究分別選取40mmol·L-1 Neo和100mmol·L-1 Neo 2個(gè)濃度組。

哇巴因作為一種強(qiáng)心苷，被廣泛用于建立耳蝸SGNs特異性損傷的動(dòng)物模型［14］。為全面比較Oua對(duì)耳蝸受損程度的影響，實(shí)驗(yàn)中設(shè)置2個(gè)濃度組，分別為1mmol·L-1 Oua組和10mmol·L-1 Oua組，通過(guò)耳蝸圓窗給藥進(jìn)行造模。

3種模型的檢測(cè)結(jié)果，綜合比較發(fā)現(xiàn)：1000 mg·kg-1 KM和500 mg·kg-1 Fur聯(lián)用特異性損傷HCs，且全身給藥方式簡(jiǎn)單無(wú)創(chuàng)，為開(kāi)展HCs損傷型感音神經(jīng)性耳聾研究的首選；40mmol·L-1 Neo僅造成高頻區(qū)的聽(tīng)功能異常，卻無(wú)明顯組織形態(tài)改變，故可用于高頻區(qū)的聽(tīng)功能異常的感音神經(jīng)性耳聾的研究；100mmol·L-1 Neo和10mmol·L-1 Oua可以造成HCs和SGNs均受損，可用于HCs和SGNs廣泛損傷的感音神經(jīng)性耳聾的研究；1mmol·L-1 Oua可以造成耳蝸SGNs特異性受損，為開(kāi)展SGNs損傷型感音神經(jīng)性耳聾研究的最佳選擇。

針對(duì)不同的研究可選擇合適的動(dòng)物模型，為感音神經(jīng)性耳聾的基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用提供精準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。

參考文獻(xiàn)（References）

［1］ SAGI V， STANKOVIC K M. Toward personalized diagnosis and therapy for hearing loss： insights from cochlear implants［J］. Otol Neurotol， 2022， 43（8）：E903-E909.

［2］ MA L， YI H J， YUAN F Q， et al. An efficient strategy for establishing a model of sensorineural deafness in rats［J］. Neural Regen Res， 2015， 10（10）：1683-1689.

［3］ SCHMIEDT R A， OKAMURA H O， LANG H， et al. Ouabain application to the round window of the gerbil cochlea： a model of auditory neuropathy and apoptosis［J］. J Assoc Res Otolaryngol， 2002， 3（3）：223-233.

［4］ ZHANG Q， WU Y， YU Y， et al. Tetrandrine prevents neomycin-induced ototoxicity by promoting steroid biosynthesis［J］. Front Bioeng Biotechnol， 2022， 10：876237.

［5］ HUANG J， SUN X， WANG H， et al. Conditional overexpression of neuritin in supporting cells （SCs） mitigates hair cell （HC） damage and induces HC regeneration in the adult mouse cochlea after drug-induced ototoxicity［J］. Hear Res， 2022， 420：108515.

［6］ CAMPBELL K C， MARTIN S M， MEECH R P， et al. D-methionine （D-met） significantly reduces kanamycin-induced ototoxicity in pigmented guinea pigs［J］. Int J Audiol 2016， 55（5）：273-278.

［7］ GLEICH O， SEMMLER P， STRUTZ J. Behavioral auditory thresholds and loss of ribbon synapses at inner hair cells in aged gerbils［J］. Exp Gerontol， 2016， 84：61-70.

［8］ MURILLO C S， CONTRERAS J， CEDIEL R， et al. Comparison of different aminoglycoside antibiotic treatments to refine ototoxicity studies in adult mice［J］. Lab Anim 2010， 44（2）：124-131.

［9］ KURIHARA S， FUJIOKA M， HIRABAYASHI M，et al. Otic organoids containing spiral ganglion neuron-like cells derived from human-induced pluripotent stem cells as a model of drug-induced neuropathy［J］. Stem Cells Transl Med， 2022， 11（3）：282-296.

［10］ RYBAK L P. Neurochemistry of the peripheral and central auditory system after ototoxic drug exposure： implications for tinnitus［J］. Int Tinnitus J， 2005， 11（1）：23-30.

［11］ HE J， YIN S， WANG J， et al. Effectiveness of different approaches for establishing cisplatin-induced cochlear lesions in mice［J］. Acta Otolaryngol， 2009， 129（12）：1359-1367.

［12］ YAMANE H， NAKAI Y， KONISHI K. Furosemide-induced alteration of drug pathway to cochlea［J］. Acta Otolaryngol Suppl， 1988， 447：28-35.

［13］ BRUMMETT R E， BROWN R T， HIMES D L. Quantitative relationships of the ototoxic interaction of kanamycin and ethacrynic acid［J］. Arch Otolaryngol， 1979， 105（5）：240-246.

［14］ FU Y， DING D， WEI L， et al. Ouabain-induced apoptosis in cochlear hair cells and spiral ganglion neurons in vitro［J］. Biomed Res Int， 2013，73：628064.（責(zé)任編輯：編輯唐慧）