祝華萍，蘇家齊，張子軍，朱長(zhǎng)波*，張 博，李 婷，陳素文

(1.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部南海漁業(yè)資源開(kāi)發(fā)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東省漁業(yè)生態(tài)環(huán)境重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510300；2.上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院，上海 201306；3.鄂爾多斯市水產(chǎn)技術(shù)站，內(nèi)蒙古自治區(qū) 鄂爾多斯 017010)

凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeus vannamei)屬甲殼綱(Crustacea)十足目(Decapoda)對(duì)蝦科(Penaeidae)，具有生長(zhǎng)快、抗病能力強(qiáng)和出肉率高等優(yōu)點(diǎn)，是當(dāng)今世界養(yǎng)殖蝦類(lèi)產(chǎn)量最高的三大品種之一[1-2]。作為廣鹽性經(jīng)濟(jì)物種，凡納濱對(duì)蝦在海洋、微咸、低鹽度和淡水中均可生長(zhǎng)[3]，在我國(guó)27 個(gè)省、市、自治區(qū)均有養(yǎng)殖生產(chǎn)，2019 年淡水養(yǎng)殖產(chǎn)量為6.71×105t，占其養(yǎng)殖總產(chǎn)量的36.97%[4]。同時(shí)，凡納濱對(duì)蝦也因其廣泛的鹽度適應(yīng)性成為內(nèi)陸地區(qū)鹽堿水養(yǎng)殖主要的馴養(yǎng)對(duì)象之一[5]。

在凡納濱對(duì)蝦的內(nèi)陸?zhàn)B殖過(guò)程中，人們往往采用地下咸水調(diào)節(jié)鹽度或直接利用鹽堿水資源開(kāi)展養(yǎng)殖。與海水相比，內(nèi)陸含鹽地下水和鹽堿水在化學(xué)特性上存在明顯差別，其中K+含量較低是其常見(jiàn)的特性之一，影響對(duì)蝦的生長(zhǎng)和存活[6-8]。近年來(lái)，學(xué)者們以Na+/K+為衡量標(biāo)準(zhǔn)，先后在不同鹽度下研究K+對(duì)凡納濱對(duì)蝦的生長(zhǎng)存活、生理代謝的影響，結(jié)果表明凡納濱對(duì)蝦在不同鹽度下對(duì)養(yǎng)殖環(huán)境中K+濃度的適應(yīng)范圍有所差異[9-12]。Zhu 等[13]研究了水體Na+/K+和鹽度的交互作用對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)、飼料轉(zhuǎn)化及養(yǎng)分保存的影響，認(rèn)為低鹽可以提高凡納濱對(duì)蝦對(duì)鉀缺乏的耐受性。目前，關(guān)于K+缺乏對(duì)凡納濱對(duì)蝦影響的研究主要在較高鹽度下進(jìn)行，在低鹽環(huán)境下的研究?jī)H見(jiàn)于Liu 等[12]利用鹽度為4 的地下水，在Na+/K+為14～60 (mg/mg)對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)及生理特性的研究報(bào)道。本研究參照正常海水離子組成，在Na+/K+為27～107、鹽度為2 的人工咸淡水條件下，開(kāi)展為期60 d 的凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)，并對(duì)對(duì)蝦的生長(zhǎng)、體成分以及肝胰腺和鰓組織結(jié)構(gòu)變化進(jìn)行分析，以期為低鹽環(huán)境下凡納濱對(duì)蝦對(duì)K+缺乏的抗逆適應(yīng)性以及內(nèi)陸鹽堿水養(yǎng)殖供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與水體調(diào)配

實(shí)驗(yàn)在中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所珠海試驗(yàn)基地進(jìn)行，在充分曝氣的自來(lái)水中加入不含鉀的人工海水素(江西海鼎科技有限公司)調(diào)配水體鹽度到2，再分別加入不同質(zhì)量的KCl 調(diào)節(jié)水中K+的含量，配制不同Na+/K+比的鹽度為2的實(shí)驗(yàn)用水，實(shí)驗(yàn)設(shè)置5 個(gè)Na+/K+水平：27(A 組，對(duì)照組)、47(B 組)、67(C 組)、87(D 組)、107(E 組)。

1.2 幼蝦暫養(yǎng)

從基地養(yǎng)殖池塘(鹽度4)挑選同一批次、體質(zhì)健康的凡納濱對(duì)蝦幼蝦作為實(shí)驗(yàn)用蝦，分別在5 個(gè)350 L 塑料圓桶中各放置100 尾幼蝦暫養(yǎng)6 d，暫養(yǎng)水溫為(25±1) °C，在暫養(yǎng)期的第2、3 天，分別降低1 的鹽度，在鹽度2 水平上再次暫養(yǎng)3 d。暫養(yǎng)期間第1～5 天每天按體重的6%投餌2 次。暫養(yǎng)結(jié)束后，用濾紙吸去幼蝦體表水分，用電子天平稱(chēng)量幼蝦體重，最終選取平均濕重為(1.04±0.22) g 的對(duì)蝦180 尾作為實(shí)驗(yàn)用蝦。本研究經(jīng)過(guò)中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所倫理委員會(huì)審核，符合實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理和實(shí)施要求。

1.3 生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)管理 對(duì)蝦生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)采用5×6 析因設(shè)計(jì)，每個(gè)水族箱(容積60 L，養(yǎng)殖水體40 L)放養(yǎng)實(shí)驗(yàn)蝦6 尾，每個(gè)處理組設(shè)6 個(gè)重復(fù)，采用完全隨機(jī)分組排列，共計(jì)30 個(gè)水族箱。為防止對(duì)蝦跳出逃逸，所有水族箱均用遮網(wǎng)蓋住。實(shí)驗(yàn)采用靜水連續(xù)充氣的方式，養(yǎng)殖水體中DO>6.0 mg/L，pH 為7.7～8.2，光周期為14 L∶10 D，水溫(26.0±1.0) °C，每2 天換水1/2，4 d 全量換水。實(shí)驗(yàn)期間日投喂商品對(duì)蝦飼料(海明威，廣東珠海) 2 次(6:00，18:00)，各組飼料在投喂前準(zhǔn)確稱(chēng)量，殘餌在投餌2 h 后用虹吸法收集，在65 °C 烘干至恒重后保存在-20 °C。每天記錄對(duì)蝦攝食和死亡情況，每間隔10 d 測(cè)量1 次體重和體長(zhǎng)。實(shí)驗(yàn)期滿后，分別將各水族箱的蝦停食24 h 后稱(chēng)量濕重，用烘箱在105 °C 烘干至恒重，保存在-20 °C 環(huán)境下用于體成分測(cè)定。

生長(zhǎng)指標(biāo)計(jì)算 實(shí)驗(yàn)期間，凡納濱對(duì)蝦的成活率、相對(duì)增重率、特定生長(zhǎng)率及飼料系數(shù)：

式中，W0為凡納濱對(duì)蝦初始濕重，Wt為凡納濱對(duì)蝦終末濕重，N0為凡納濱對(duì)蝦初始尾數(shù)、Nt為凡納濱對(duì)蝦實(shí)驗(yàn)t天時(shí)存活蝦尾數(shù)，T為實(shí)驗(yàn)持續(xù)時(shí)間(d)。

全蝦體成分的測(cè)定 對(duì)蝦的水分含量以烘干前后重量的減少量為準(zhǔn)，采用105 °C 烘干至恒重測(cè)定(GB 5 006.3—2016)。粗蛋白含量采用凱氏定氮法測(cè)定(氮乘以6.25) (GB 5009.5—2016)?；曳趾客ㄟ^(guò)在馬弗爐中灼燒(550±25) °C，8 h 后測(cè)定(GB 5009.4—2016)。全蝦體鉀的測(cè)定：測(cè)定干樣于550 °C 灰化，用1%鹽酸溶解定容后采用日立-Z5000 火焰原子吸收光譜儀測(cè)定K+含量。

1.4 肝胰腺、鰓組織結(jié)構(gòu)

生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，取對(duì)蝦少許肝胰腺以及鰓組織放入Bouin 氏液中固定24 h 后，用乙醇逐級(jí)脫水，石蠟包埋后切片，H.E 染色，光學(xué)顯微鏡觀察并拍照。

1.5 數(shù)據(jù)分析

實(shí)驗(yàn)結(jié)果均采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，用GraphPad Prism.8 和SPSS 25 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，利用單因素方差分析(One-Way ANOVA)和Duncan 氏方法進(jìn)行比較檢驗(yàn)。為了減小方差齊性，對(duì)蝦存活率均轉(zhuǎn)化為反正弦函數(shù)Asin，在數(shù)據(jù)不滿足方差齊性的條件下則采用Dunnett 氏T3 方法進(jìn)行比較檢驗(yàn)。P<0.05 為差異顯著，P<0.01 為差異極顯著。

2 結(jié)果

2.1 低鹽水體中Na+/K+對(duì)凡納濱對(duì)蝦存活和生長(zhǎng)的影響

在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后第10～50 天，各實(shí)驗(yàn)組存活率無(wú)顯著差異(P>0.05)，其中對(duì)照組A 組在第30 天前無(wú)死亡，E 組第10、30、40、50 天的存活率低于其他各組(圖1)。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束的第60 天，E 組存活率最低，為44.64%±20.95%，顯著低于除C組外的其他3 組(P<0.05)。A 組最高，為70.83%±8.33%，但與除E 組外其他3 組無(wú)顯著差異(P>0.05)。

圖1 低鹽水體中Na+/K+對(duì)凡納濱對(duì)蝦幼蝦存活的影響同一時(shí)間段上標(biāo)小寫(xiě)字母不同表示存在顯著差異(P<0.05)，下同。Fig.1 Effects of Na+/K+ ratio in low salinity water on the survival of juvenile L.vannameiDifferent lowercase letters on the same time period indicate a significant difference (P<0.05),the same below.

在實(shí)驗(yàn)第10 天，E 組體重低于其他4 組并差異顯著(P<0.05)。第20 天，C 組體重最大并與A、E 兩組差異顯著(P<0.05)，E 組體重最低并與各組差異顯著(P<0.05)。第30 天時(shí)，C 組體重最大并與E 組差異顯著(P<0.05)，其他各組間體重?zé)o顯著差異。第40 天，C 組體重最大，并與除B 組外的其他各組差異顯著(P<0.05)，E 組體重低于各組并與B、C 組差異顯著(P<0.05)。第50 天，C 組體重最高并與除D 組外的其他各組差異顯著(P<0.05)，E 組體重顯著低于其他4 組(P<0.05)。第60 天，E 組體重低于其他4 組并差異顯著(P<0.05)，其他4 組之間無(wú)顯著差異(P>0.05) (圖2)。

圖2 低鹽水體中Na+/K+對(duì)凡納濱對(duì)蝦幼蝦體重的影響Fig.2 Effects of Na+/K+ ratio in low salinity water on the body weight of juvenile L.vannamei

低鹽水體中不同Na+/K+對(duì)凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)成濕重、增重率、特定生長(zhǎng)率和飼料系數(shù)影響顯著(P<0.05)，C 組養(yǎng)成濕重最高且顯著高于E 組(表1)。E 組增重率低于其他各組且差異顯著(P<0.05)，C組最高(518.2%)。C 組特定生長(zhǎng)率最高(3.04%)，且E 組與其他各組均存在顯著差異(P<0.05)。A組和D 組餌料系數(shù)與E 組存在顯著差異(P<0.05)，其中A 組最小(1.49)，E 組最大(1.85)。

表1 低鹽水體中Na+/K+對(duì)凡納濱對(duì)蝦60 d 生長(zhǎng)指標(biāo)的影響Tab.1 Effects of Na+/K+ ratio in low salinity water on the growth of L.vannamei in 60 days

2.2 低鹽水體Na+/K+對(duì)凡納濱對(duì)蝦體成分及體鉀的影響

隨著Na+/K+的增加，凡納濱對(duì)蝦水分含量呈先下降后升高的變化趨勢(shì)，B 組水分含量最低，并顯著低于D、E 組，E 組水分含量最高，并顯著高于A、B 組(P<0.05) (表2)。粗蛋白含量B 組最高，E 組最低，且B 組與E 組差異顯著(P<0.05)?；曳趾縿t為B 組最高，D 組最低，且二者差異顯著。各組間全蝦體鉀的含量無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表2 低鹽水體中Na+/K+對(duì)凡納濱對(duì)蝦體成分的影響Tab.2 Effect of Na+/K+ ratio in low salinity water on the conventional nutrient composition of L.vannamei %

2.3 低鹽水體Na+/K+對(duì)凡納濱對(duì)蝦鰓組織結(jié)構(gòu)的影響

對(duì)照組凡納濱對(duì)蝦鰓組織結(jié)構(gòu)完整，細(xì)胞排列整齊，細(xì)胞結(jié)構(gòu)以及角質(zhì)層形態(tài)結(jié)構(gòu)正常(圖3-a)。隨著Na+/K+升高，B、C 和D 組的凡納濱對(duì)蝦鰓組織角質(zhì)層增厚，鰓絲間隙變寬(圖3-b～d)。E組對(duì)蝦的鰓組織出現(xiàn)腔內(nèi)空泡增多、血細(xì)胞減少，鰓絲排列紊亂、變形或破損的現(xiàn)象(圖3-e)。

圖3 低鹽水體Na+/K+對(duì)凡納濱對(duì)蝦鰓絲顯微結(jié)構(gòu)的影響(a)低鹽水體中Na+/K+為27 (對(duì)照組)鰓絲，1.角質(zhì)層，2.血細(xì)胞，3.上皮細(xì)胞，4.組織間隙，5.入鰓血管，6.出鰓血管；(b)～(d).Na+/K+為47、67、87 鰓絲，示角質(zhì)層增厚，鰓絲間隙變寬；(e) Na+/K+為107 鰓絲，示腔內(nèi)空泡增多、血細(xì)胞減少，鰓絲排列紊亂、變形或破損。Fig.3 Effect of Na+/K+ on gill filament microstructure of L.vannamei in low salinity water(a) the gill of L.vannamei exposed to Na+/K+=27 (control)in low-salt water,1.cuticle,2.haematocytes,3.epithelial cells,4.tissue spaces,5.in-gill vessels,6.and out-gill vessels;(b)-(d).the gill exposed to Na+/K+=47,67,87,indicating thickening of the cuticle and widening of the gill filament gap.(e)the gill exposed to Na+/K+=107,showing increased vacuolation in the lumen,reduced haemocytes and disorganised,distorted or broken gill filaments.

2.4 低鹽水體Na+/K+對(duì)凡納濱對(duì)蝦肝胰腺組織結(jié)構(gòu)的影響

低鹽水體Na+/K+為27 時(shí)，凡納濱對(duì)蝦肝小管形態(tài)完整，管腔呈星型，肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常、分布均勻(圖4-a)。隨著Na+/K+升高，肝小管B 細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)泡數(shù)量增多、B 細(xì)胞體積增大(圖4-b～c)。D 組肝小管中少量B 細(xì)胞破裂(圖4-d)。E 組的肝胰腺中B 細(xì)胞數(shù)量增加，肝小管管腔明顯變形，少量B 細(xì)胞破裂(圖4-e)。各處理組F 細(xì)胞數(shù)量無(wú)明顯變化，R 細(xì)胞(甲殼動(dòng)物肝胰腺的貯藏細(xì)胞)數(shù)量無(wú)顯著變化。

圖4 低鹽水體Na+/K+對(duì)凡納濱對(duì)蝦肝胰腺顯微結(jié)構(gòu)的影響(a) Na+/K+為27 (對(duì)照組)肝胰腺小管，示凡納濱對(duì)蝦肝小管結(jié)構(gòu)完整，1.管腔呈星型，2～4.肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常，分泌細(xì)胞、纖維細(xì)胞和吸收細(xì)胞分布均勻；(b) Na+/K+為47 肝胰腺小管，5.轉(zhuǎn)運(yùn)泡數(shù)量增多；(c) Na+/K+為67 肝胰腺小管，示B 細(xì)胞體積增大；(d) Na+/K+為87 肝胰腺小管，示少量B 細(xì)胞破裂；(e) Na+/K+為107 肝胰腺小管，示肝小管管腔變形，B 細(xì)胞數(shù)量增多，少量B 細(xì)胞破裂。Fig.4 Effect of Na+/K+ on the microstructure of the hepatopancreas of L.vannamei in low salinity water(a) hepatopancreatics of L.vannamei exposed to Na+/K+ 27 (control) in low salinity water,1.intact hepatic tubule and star-shaped lumen,2-4.normal hepatocyte structure and uniform distribution of secretory,fibrous and absorptive cells.(b) hepatopancreatics of L.vannamei exposed to Na+/K+ 47,5.an increase of transit vesicles.(c) hepatopancreatics of L.vannamei exposed to Na+/K+ 67,showing the increase in the volume of some B cells.(d) hepatopancreatics of L.vannamei exposed to Na+/K+ 87,showing a small number of B cells ruptured.(e) hepatopancreatics of L.vannamei exposed to Na+/K+107,showing a deformed lumen,a small number of B cells ruptured and an increased number of B cells.

3 討論

3.1 Na+/K+對(duì)凡納濱對(duì)蝦存活和生長(zhǎng)的影響

鉀作為水生動(dòng)物體內(nèi)的常量元素，在參與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化、維持機(jī)體電解質(zhì)平衡以及提高生長(zhǎng)和繁殖性能等方面發(fā)揮著重要作用[14]。由于實(shí)際養(yǎng)殖中地下水的鹽度因地區(qū)變化而不同，相比研究某種單一離子的特定濃度，以離子比例為指標(biāo)研究離子對(duì)養(yǎng)殖生物的作用更為合適，因此，學(xué)者們多以Na+/K+為衡量標(biāo)準(zhǔn)研究養(yǎng)殖環(huán)境以及飼料中鉀含量的適宜范圍[15-16]。朱長(zhǎng)波等[17]在鹽度為15，Na+/K+為27.7～68.4 的環(huán)境開(kāi)展為期30 d 的養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明在Na+/K+為27.7～44.8 的環(huán)境下的凡納濱對(duì)蝦的養(yǎng)成體重、增重率和特定生長(zhǎng)率顯著高于51.9～68.4 環(huán)境下的對(duì)蝦，Na+/K+為57.8 和68.4 組對(duì)蝦的食物轉(zhuǎn)化效率顯著低于同鹽度海水組。Liu 等[12]以鹽度4、Na+/K+為60 的地下井水為基礎(chǔ)，在Na+/K+為14～60 范圍內(nèi)開(kāi)展了為期8 周的凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示Na+/K+為60 組的凡納濱對(duì)蝦的餌料系數(shù)顯著高于Na+/K+為23、33、42 的各實(shí)驗(yàn)組，存活率、特定增長(zhǎng)率顯著低于Na+/K+為23 的實(shí)驗(yàn)組。本研究中，在鹽度為2、Na+/K+為107 的條件下，凡納濱對(duì)蝦的存活率、增重、濕重顯著低于Na+/K+為27～87各組，餌料系數(shù)則顯著高于各組。其他4 組增重率、存活率和餌料系數(shù)均無(wú)顯著差異。上述結(jié)果表明，在長(zhǎng)期養(yǎng)殖中，較低鹽度養(yǎng)殖水體中凡納濱對(duì)蝦對(duì)Na+/K+異常的適應(yīng)性要高于高鹽度環(huán)境，這與Zhu 等[13]的研究結(jié)果相似。本研究中E 組對(duì)蝦餌料系數(shù)最高，對(duì)蝦濕重在第10 日起小于其他組并與大多數(shù)組差異顯著。表明在極度缺鉀環(huán)境下可能會(huì)引起對(duì)蝦的食物轉(zhuǎn)化效率下降，從而抑制其生長(zhǎng)。此外，各實(shí)驗(yàn)組存活率在10～50 d 中無(wú)顯著差異，表明缺K+脅迫在低鹽度下對(duì)對(duì)蝦存活產(chǎn)生顯著影響需要較長(zhǎng)時(shí)間。缺鉀對(duì)凡納濱對(duì)蝦免疫、存活的影響機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

3.2 低鹽水體Na+/K+對(duì)凡納濱對(duì)蝦體成分的影響

在環(huán)境脅迫下，蝦類(lèi)體內(nèi)的代謝能力增強(qiáng)，某些營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)會(huì)快速耗竭或者合成途徑受阻[18-19]。加上動(dòng)物機(jī)體通常自身合成組織蛋白的能力有限，外界吸收到體內(nèi)的氨基酸又會(huì)優(yōu)先被用于組織蛋白的更新與修復(fù)，然后是合成蛋白用于生長(zhǎng)發(fā)育，最后剩余的部分氨基酸會(huì)作為能源被消耗[20-22]。在長(zhǎng)期饑餓條件下，凡納濱對(duì)蝦仔蝦的粗蛋白、粗脂肪含量下降，而水分與灰分明顯上升[23]。本研究中E 組對(duì)蝦蛋白質(zhì)含量最低、水分含量最高、生長(zhǎng)速率最慢，灰分含量與對(duì)照組無(wú)明顯差異，表明高度缺K+的水環(huán)境可能引起凡納濱對(duì)蝦組織損傷或免疫反應(yīng)，對(duì)蝦需要較多的蛋白質(zhì)來(lái)進(jìn)行修復(fù)，同時(shí)會(huì)對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育產(chǎn)生不利影響。Roy 等[24]的研究結(jié)果顯示，在鹽度為4，Na+/K+為29～119的人工鹽堿水中，凡納濱對(duì)蝦血清鉀含量與同鹽度淡化海水組無(wú)顯著差異。本實(shí)驗(yàn)中各組蝦體內(nèi)的鉀元素含量無(wú)顯著差異，表明對(duì)蝦在低滲缺鉀環(huán)境下仍然通過(guò)自身調(diào)節(jié)以維持體鉀的相對(duì)穩(wěn)定。

3.3 低鹽水體Na+/K+對(duì)凡納濱對(duì)蝦鰓組織結(jié)構(gòu)的影響

鰓作為氣體交換和離子調(diào)節(jié)的關(guān)鍵部位，通常由鰓軸和鰓葉兩部分組成，鰓葉是最基本的功能單位，其由角質(zhì)層、呼吸上皮和微血腔組成，在水生動(dòng)物受到環(huán)境脅迫后往往最先受到影響并造成損傷[25]。韓曉林等[26]研究表明低鹽脅迫會(huì)造成三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)血腔增大，血細(xì)胞增多，上皮層破壞?？耸显r(Procambarus clarkii)受到低pH[27]或慢性硫酸鋅[28]脅迫后，會(huì)出現(xiàn)鰓葉腫大，鰓膜和呼吸上皮細(xì)胞分離，呼吸上皮細(xì)胞壞死等現(xiàn)象。目前，水體中離子缺乏對(duì)對(duì)蝦鰓組織結(jié)構(gòu)的影響尚無(wú)報(bào)道。本研究結(jié)果顯示，在正常條件下，凡納濱對(duì)蝦鰓葉結(jié)構(gòu)清晰，細(xì)胞排列整齊；隨著Na+/K+升高，凡納濱對(duì)蝦組織結(jié)構(gòu)形態(tài)發(fā)生改變，包括角質(zhì)層增厚，紅細(xì)胞數(shù)量變少，鰓小葉間距增大。本實(shí)驗(yàn)中，Na+/K+為107 時(shí)，鰓組織的結(jié)構(gòu)破壞程度最高。鰓葉角質(zhì)層出現(xiàn)破裂，使鰓葉更容易受到細(xì)菌、病毒的感染或外部不良環(huán)境的侵蝕。鰓葉內(nèi)呼吸上皮細(xì)胞的壞死可導(dǎo)致凡納濱對(duì)蝦與外界進(jìn)行物質(zhì)交換的能力逐漸減弱，影響凡納濱對(duì)蝦的生長(zhǎng)存活。

3.4 低鹽水體Na+/K+對(duì)凡納濱對(duì)蝦肝胰腺組織結(jié)構(gòu)的影響

肝胰腺是甲殼動(dòng)物進(jìn)行解毒、排泄和代謝的重要器官，該器官組織結(jié)構(gòu)的變化反映了機(jī)體生理狀態(tài)的改變。肝胰腺小管是其結(jié)構(gòu)和功能的基本單位，各小管由薄層結(jié)締組織被膜包裹與分隔。肝小管內(nèi)主要由分泌細(xì)胞(B 細(xì)胞)、存儲(chǔ)細(xì)胞(R細(xì)胞)、纖維細(xì)胞(F 細(xì)胞)和胚細(xì)胞(E 細(xì)胞)構(gòu)成，其中B 細(xì)胞和R 細(xì)胞數(shù)量較多。已有研究表明，環(huán)境的改變可能會(huì)引起甲殼動(dòng)物肝胰腺體的細(xì)胞組成比例發(fā)生變化，特別是B 細(xì)胞和R 細(xì)胞[26-27,29]?？耸显r在低pH 脅迫下，肝胰腺B細(xì)胞數(shù)量增加且其細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)泡體積增大[26]；三疣梭子蟹在低鹽暴露下R 細(xì)胞減少，B 細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)泡數(shù)量增多，體積增大[25]。在本研究中，Na+/K+高于87 時(shí)會(huì)導(dǎo)致肝胰腺內(nèi)B 細(xì)胞的轉(zhuǎn)運(yùn)空泡體積增大，并對(duì)肝小管結(jié)構(gòu)造成一定的損傷。此外，本研究結(jié)果顯示，高Na+/K+提高了凡納濱對(duì)蝦的餌料系數(shù)，而肝胰腺中B 細(xì)胞及內(nèi)部轉(zhuǎn)運(yùn)泡增多、體積增大也有利于餌料的消化吸收，為其提供更多的能量，表明高Na+/K+可能會(huì)促使凡納濱對(duì)蝦需要更多的能量物質(zhì)用于維持自身的基礎(chǔ)代謝。實(shí)驗(yàn)期間各組凡納濱對(duì)蝦攝食正常，肝胰腺組織的R 細(xì)胞數(shù)量也未發(fā)生明顯變化，R 細(xì)胞可以儲(chǔ)藏營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)并有一定的吞噬作用，表明凡納濱對(duì)蝦在面對(duì)低鉀脅迫時(shí)，首先通過(guò)依靠外界營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)提供能量并維持自身離子平衡，較少使用自身儲(chǔ)存的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。隨著Na+/K+的升高，E 組肝小管結(jié)構(gòu)出現(xiàn)損傷，消化功能減弱，對(duì)蝦開(kāi)始利用自身儲(chǔ)存的物質(zhì)抵御低鉀脅迫，導(dǎo)致生長(zhǎng)速率降低。

研究表明，在鹽度2 時(shí)，鈉鉀離子比為107環(huán)境下的凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)和存活均低于鈉鉀離子比為27～87 范圍內(nèi)各組。在極度缺鉀環(huán)境下，凡納濱對(duì)蝦肝胰腺小管B 細(xì)胞數(shù)量增加，小管腔明顯變形，鰓組織血細(xì)胞減少，小片破損。水體中缺鉀在前期即可對(duì)對(duì)蝦的生長(zhǎng)產(chǎn)生明顯影響，而對(duì)存活的影響隨著養(yǎng)殖時(shí)間的增加而增大。

（作者聲明本文無(wú)實(shí)際或潛在的利益沖突）