李 敏，賀姍姍，王宏宇，莊家瑩，金永日，李緒文

（1. 鄭州輕工業(yè)大學(xué)食品與生物工程學(xué)院, 鄭州 450001;2. 吉林大學(xué)化學(xué)學(xué)院, 長(zhǎng)春 130012）

雜環(huán)胺（HAAs）是蛋白質(zhì)或氨基酸在加熱過程中產(chǎn)生的熱解產(chǎn)物，具有潛在的致癌致突變性，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)并鑒定出超過30 種HAAs，可在經(jīng)熱處理的富含蛋白質(zhì)的食物［1，2］、 咖啡［3］、 環(huán)境水［4］及香煙煙氣［5，6］中檢測(cè)到. 香煙煙氣是使人類暴露于HAAs 的一種重要途徑，受到了廣泛關(guān)注. 1962 年，Poindexter 和Carpenter［7］首次在香煙煙氣中檢出2 種HAAs：β-咔啉和咔啉. 1997 年，Hoffmann［8］發(fā)現(xiàn)Harman，Norharman，AαC和MeAαC等8種雜環(huán)胺為香煙主流煙氣中的主要有害物質(zhì). AαC是香煙煙霧中含量最多的HAAs，其含量為25～260 ng/支［9］. 香煙煙氣中HAAs含量雖低，但具有顯著的生物毒性，長(zhǎng)期暴露于這些HAAs 中會(huì)對(duì)人體構(gòu)成潛在的健康威脅. 因此，有必要開發(fā)一種靈敏、 快速的評(píng)估和監(jiān)測(cè)HAAs暴露水平的方法.

評(píng)估和監(jiān)測(cè)HAAs 的暴露水平主要是通過檢測(cè)尿液、 血漿、 膽汁、 毛發(fā)和乳汁等生物樣品中的HAAs及其代謝產(chǎn)物的含量. 相比之下，尿液樣品采集方便、 無侵害性，常作為HAAs暴露水平監(jiān)測(cè)的有效生物樣品［5］. 雜環(huán)胺的檢測(cè)方法主要有高效液相色譜（HPLC）法和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS）法.由于尿液中的基質(zhì)干擾和HAAs含量極低（通常為ng/g），為準(zhǔn)確測(cè)定其含量，在進(jìn)行HPLC或LC-MS分析之前，需要進(jìn)行適當(dāng)?shù)臉悠奉A(yù)處理. 目前，尿液中雜環(huán)胺分析常用的樣品前處理方法為液-液萃?。↙LE）串聯(lián)固相萃?。⊿PE）法. Fu 等［5］建立了一種LLE-SPE 法結(jié)合UHPLC-MS/MS 測(cè)定吸煙者尿液中HAAs 的方法，首先使用乙酸乙酯提取HAAs，然后使用ProElutPXC（150 mg）固相萃取柱純化. 但LLE-SPE 方法繁瑣、 耗時(shí)且需使用較多的有機(jī)溶劑. 基于此，Zhang 等［10］建立了一種磁性固相萃取（MSPE）方法用于分析吸煙者尿液中的HAAs，但該方法仍需使用有機(jī)溶劑（乙腈）洗脫目標(biāo)HAAs且磁性吸附劑的制備過程繁瑣且耗時(shí). 因此，開發(fā)簡(jiǎn)單、 快速且環(huán)保的樣品前處理方法對(duì)于尿液中HAAs的檢測(cè)分析具有重要意義.

雙水相體系（ATPS）具有環(huán)保、 分離時(shí)間短及操作簡(jiǎn)便等特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)、 DNA、 金屬離子和抗生素等多種目標(biāo)化合物的提取與分離［11，12］. 按照其兩相物質(zhì)組成的不同，ATPS體系可分為高聚物-高聚物體系、 表面活性劑-表面活性劑體系、 高聚物-鹽體系和離子液體-鹽體系（IL-ATPS）［13，14］等. 與其它ATPS 相比，IL-ATPS 體系具有相分離快、 黏度低、 萃取效率高和無乳化現(xiàn)象等特點(diǎn)，引起了研究者的重點(diǎn)關(guān)注［15，16］. 然而，大多數(shù)ILs制備困難、 成本高，其潛在生物毒性（如吡啶或咪唑基IL）對(duì)環(huán)境也有一定影響［17，18］，從而限制了IL-ATPS的進(jìn)一步發(fā)展.

低共熔溶劑（DES）作為一種新興的綠色溶劑，克服了ILs的缺點(diǎn)，它是由氫鍵供體（HBD）和氫鍵受體（通常為季銨鹽，HBA）組合而成的二元或三元共晶混合物，其熔點(diǎn)低于單獨(dú)任一組分的熔點(diǎn)［19，20］.DES被稱為類離子液體混合物，具有與ILs相媲美的理化性質(zhì)，還有制備簡(jiǎn)單、 生物降解性好及成本低等特性，可作為ILs的潛在替代品［21，22］. 2014年，Zeng等［23］首次提出DES-ATPS體系，用于從水溶液中提取牛血清白蛋白. 此后，DES-ATPS在蛋白質(zhì)、 DNA、 RNA和其它目標(biāo)化合物［24～26］的萃取研究中展現(xiàn)出較大的應(yīng)用潛力，成為近幾年研究的熱點(diǎn).

本文制備了7種以氯化膽堿（ChCl）為氫鍵受體的DES，與無機(jī)鹽構(gòu)建成雙水相體系，并結(jié)合UPLC檢測(cè)技術(shù)，用于分析吸煙者尿液中5種HAAs（IQ，IQ［4，5-b］，Harman，Norharman和Phe-P-1），以期為香煙煙氣中HAAs暴露風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供新的研究思路.

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑與儀器

2-氨基-3-甲基-咪唑并［4，5-f］-喹啉（IQ，純度＞98%）、 2-氨基-1-甲基-咪唑并［4，5-b］-喹啉（IQ［4，5-b］，純度＞98%）、 1-甲基- 9H-吡啶并［3，4-b］吲哚（Harman，純度＞98%）、 9H-吡啶并［3，4-b］吲哚（Norharman，純度＞98%）和2-氨基-5-苯基吡啶（Phe-P-1，純度＞95%），加拿大Toronto Research Chemicals公司； 甲醇和乙腈，色譜純，美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司； 乙酸和乙酸銨，色譜純，天津大茂化學(xué)試劑廠； 氯化膽堿、 K2HPO4、 K3PO4、 1，4-丁二醇（1，4-Butanediol）、 乙二醇（Ethylene glycol）、甘油（Glycerol）、 木糖醇（Xylitol）、D-山梨醇（D-Sorbitol）、D-（+）-葡萄糖［D-（+）-Glucose］和meso-赤鮮醇（meso-Erythritol），分析純，上海阿拉丁生化科技股份有限公司.

吸煙者尿液樣本由中國(guó)煙草總公司鄭州煙草研究院提供，包括20名吸煙者（來自煙齡1～3年的健康成年男性）和20名非吸煙者. 在采集樣本前，志愿者禁止攝入肉食和烘烤類食物2天，實(shí)驗(yàn)期間吸煙者沒有吸煙限制. 然后，收集志愿者24 h的尿液樣品，儲(chǔ)存于-80 ℃冰箱中備用.

Agilent 1290 Infinity II 型超高效液相色譜儀（UPLC），美國(guó)Agilent 公司； Bruker Avance Ⅲ 600 M 型超導(dǎo)核磁共振波譜儀（1H NMR，600 MHz，TMS為內(nèi)標(biāo)，DMSO-d6為溶劑），德國(guó)Bruker 公司； Vertex 70型傅里葉變換紅外光譜儀（溴化鉀壓片），德國(guó)Bruker公司.

1.2 實(shí)驗(yàn)過程

1.2.1 UPLC色譜條件 色譜柱為Agilent ZORBAX XDB C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相由乙腈（A）和水（B，含1 mmol/L 乙酸銨和0.05%乙酸）組成，梯度洗脫條件如下： 0～5.0 min，15%A； 5.0～5.1 min，15%～20%A；5.1～11.0 min，20%A； 11.0～11.1 min，20%～30%A； 11.1～23.0 min，30%A； 柱溫為30 ℃； 流速為1.0 mL/min； 檢測(cè)波長(zhǎng)為248 nm； 進(jìn)樣量為10 μL. 所得UPLC 色譜圖如圖1所示.

Fig.1 UPLC chromatograms of the mixed standardsolution(a), the spiked urine sample extracted with DES-APTS(b), the spiked urine sample extracted without DES-APTS(c) and the blank urine sample(d)Peak 1: IQ; peak 2: IQ[4,5-b]; peak 3: Harman; peak 4:Norharman; peak 5: Phe-P-1.

1.2.2 DES 的制備 以氯化膽堿（ChCl）為HBA，分別與1，4-丁二醇、 乙二醇、 甘油、木糖醇、D-山梨醇、D-（+）-葡萄糖和meso-赤鮮醇按摩爾比1∶1 混合于100 mL 燒杯中，于130 ℃加熱攪拌，直至形成無色透明的溶液. 冷卻至室溫后，置于干燥器（硅膠）中保存，備用. 7種DES的組成見表1.

Table 1 Compositions of the synthesized DES using ChCl as HBA

1.2.3 雙水相體系相圖的繪制 使用濁點(diǎn)滴定法繪制相圖［27］. 準(zhǔn)確稱量一定質(zhì)量的DES于10 mL離心管中，將已知濃度的無機(jī)鹽溶液逐滴加入到該離心管中直到混合溶液變渾濁，記錄此時(shí)加入的無機(jī)鹽溶液的質(zhì)量； 隨后滴加蒸餾水使之變澄清，記錄此時(shí)加入水的質(zhì)量； 然后再逐滴加入已知濃度的無機(jī)鹽溶液，使之再次變混濁，再次記錄此時(shí)加入的無機(jī)鹽溶液的質(zhì)量； 反復(fù)進(jìn)行上述操作，直至獲取足夠多的數(shù)據(jù)來繪制相圖，x和y軸分別代表無機(jī)鹽和DES的質(zhì)量分?jǐn)?shù).

1.2.4 雙水相萃取 將尿液樣本在室溫下自然解凍，取1 mL 尿液樣本與90 μL 12 mol/L HCl 混合，于70 ℃下加熱3 h. 冷卻至室溫后，用10 mol/L NaOH溶液將尿液的pH值調(diào)至中性； 然后向尿液中加入混合標(biāo)準(zhǔn)溶液并渦旋振蕩30 s 使其混合均勻； 隨后加入200 mg ChCl/Buta 和0.8 g K2HPO4，渦旋振蕩3 min，在8000 r/min轉(zhuǎn)速下離心3 min. 從離心機(jī)取出后尿液樣本上下界面清晰，用微量注射器移取上層富DES相并記錄其體積，經(jīng)0.22 μm濾膜過濾，待UPLC檢測(cè).

2 結(jié)果與討論

2.1 DES結(jié)構(gòu)表征

傅里葉變換紅外光譜（FTIR）可以用于檢測(cè)化合物的化學(xué)鍵和官能團(tuán)，從而掌握其結(jié)構(gòu)信息. ChCl和7 種DES 的FTIR 譜圖如圖2 所示. 650.4 和1050.2 cm-1處的吸收峰可分別歸屬為O—H 鍵的彎曲振動(dòng)和醇或糖的C—O 鍵（C—O—H）的伸縮振動(dòng). 7 種DES 在3400 cm-1附近均有顯著寬峰，表明存在大量的氫鍵. 與ChCl（3421.1 cm-1）相比，ChCl/EG，ChCl/G，ChCl/Sor，ChCl/Buta，ChCl/Glu，ChCl/Xyl 和ChCl/Ery 中O—H 鍵的伸縮振動(dòng)峰向低波數(shù)方向發(fā)生了移動(dòng)［28］（3398.0，3394.1，3390.2，3388.3，3380.6，3394.1 和3384.5 cm-1），進(jìn)一步證實(shí)了氫鍵的存在.

Fig.2 FTIR spectra of ChCl and seven DES

為了進(jìn)一步驗(yàn)證DES 的結(jié)構(gòu)，測(cè)定了以DMSO-d6為溶劑的7種DES 的1H NMR 譜圖. 圖3中δ3.17（s，9H），3.46（t，2H）和3.82（t，2H）處均為ChCl的質(zhì)子信號(hào)，其余各信號(hào)均歸屬于相應(yīng)氫鍵供體的質(zhì)子信號(hào)，并未出現(xiàn)其它新化學(xué)鍵的質(zhì)子信號(hào)，說明制備過程中未發(fā)生化學(xué)反應(yīng)［29］，進(jìn)一步說明氯化膽堿與氫鍵供體之間的作用力為氫鍵.

Fig.3 1H NMR spectra of ChCl and seven DES

2.2 DES-ATPS相圖及成相規(guī)律

雙水相相圖的每一條雙結(jié)線均由眾多成相臨界點(diǎn)構(gòu)成. 位于雙結(jié)線之上的區(qū)域代表該濃度下的鹽和低共熔溶劑具有成相能力，為雙水相體系； 雙結(jié)線之下的區(qū)域則是均一液體，無成相能力，為單相體系. 成相能力越強(qiáng)，雙結(jié)線越接近坐標(biāo)原點(diǎn)［30］. 由圖4可知，當(dāng)無機(jī)鹽為K2HPO4時(shí)，其與7種DES的成相能力依次為ChCl/Buta＞ChCl/EG＞ChCl/G＞ChCl/Glu＞ChCl/Sor≈ChCl/Ery＞ChCl/Xyl. 由此可見，DES 種類不同，形成雙水相的能力不同，分析其原因可能與DES的親水性、 黏度和密度等多種因素有關(guān)［24，31］.其中，親水性是影響相形成能力的主要因素之一，通常情況下氫鍵供體中羥基含量越少，親水性越弱，越有利于成相. 7種氫鍵供體［1，4-丁二醇、 乙二醇、 甘油、meso-赤鮮醇、 木糖醇、D-（+）-葡萄糖和D-山梨醇］含有的羥基數(shù)目分別為2，2，3，4，5，5和6，ChCl/Buta，ChCl/EG，ChCl/G，ChCl/Glu，ChCl/Sor與K2HPO4的成相能力符合上述規(guī)律，而ChCl/Ery 和ChCl/Xyl 則不符合，推測(cè)ChCl/Ery 和ChCl/Xyl 的成相能力還與DES 的黏度和密度有關(guān)，進(jìn)一步證明了導(dǎo)致成相能力差異的原因是多種因素共同作用的結(jié)果.

Fig.4 Phase diagrams of DES-based ATPSWsalt, Wwater and WDES represent the weight of inorganic salt, water and DES, respectively; Wtotal is the sum of Wsalt, Wwater, and WDES.

進(jìn)一步比較了不同無機(jī)鹽（K2HPO4和K3PO4）對(duì)ChCl/Buta 相圖形成能力的影響. 由圖4 可知，ChCl/Buta-K2HPO4的成相能力強(qiáng)于ChCl/Buta-K3PO4.

2.3 DES-ATPS萃取條件的優(yōu)化

2.3.1 DES類型的選擇 制備了以ChCl為氫鍵受體的7種DES，雖然氫鍵受體相同，但由于氫鍵供體的極性、 親水性等性質(zhì)的不同，制備得到的DES性質(zhì)也不同，影響了萃取溶劑與目標(biāo)物之間的相互作用，進(jìn)而影響萃取率［32］. 考察了7種不同DES對(duì)尿液中雜環(huán)胺回收率的影響，平行測(cè)定3次. 如圖5所示，當(dāng)使用ChCl/Xyl，ChCl/Glu和ChCl/Sor為萃取劑時(shí)，雜環(huán)胺的回收率均低于40%，其原因可能是氫鍵供體［木糖醇、D-（+）-葡萄糖、D-山梨醇］含有—OH的數(shù)量較多，形成的DES（ChCl/Xyl，ChCl/Glu和ChCl/Sor）黏度較大，阻礙了ChCl/ATPS體系與雜環(huán)胺目標(biāo)分子之間的相互作用，故而出現(xiàn)較低的回收率. 相比之下，ChCl/Buta體系表現(xiàn)出較好的雜環(huán)胺回收率，且結(jié)合雙水相相圖的分相能力，實(shí)驗(yàn)選擇DES類型為ChCl/Buta.

Fig.5 Effect of the type of DES on recovery

2.3.2 DES用量的選擇 DES的用量直接影響到萃取效率，是能否將目標(biāo)分析物提取完全的關(guān)鍵性因素. 考察了不同DES使用量（50～350 mg）對(duì)雜環(huán)胺回收率的影響，平行測(cè)定3 次，結(jié)果如圖6所示. 結(jié)果表明，隨著DES使用量的不斷增加，回收率也不斷升高，當(dāng)DES 使用量增加到200 mg 時(shí)，回收率達(dá)到最大值； 再繼續(xù)增大DES 的使用量，回收率略有下降，這可能是隨著DES使用量的進(jìn)一步增加，DES 相的黏度也會(huì)增加，不利于HAAs向DES相轉(zhuǎn)移，從而導(dǎo)致回收率的輕微下降. 因此，實(shí)驗(yàn)選擇ChCl/Buta使用量為200 mg.

Fig.6 Effect of the amount of DES on recoverySpiked concentration in 1 mL urine sample: IQ, 1.5 μg/mL; IQ[4,5-b], 3.0μg/mL; Harman, 1.5 μg/mL; Norharman, 1.5 μg/mL; Phe-P-1, 3.0 μg/mL.

2.3.3 無機(jī)鹽類型的選擇 無機(jī)鹽的加入能夠促進(jìn)雙水相的形成，不同種類的鹽與DES的成相能力不同，進(jìn)而影響目標(biāo)分析物的提取效率［33］. 首先，考察了4 種含鉀無機(jī)鹽（K2HPO4，KCl，K3PO4和KH2PO4）與ChCl/Buta的成相能力. 實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，KH2PO4和KCl與ChCl/Buta均不能形成雙水相體系，可能是因?yàn)镵H2PO4和KCl的水溶性較低. 然后，重點(diǎn)考察了ChCl/Buta-K2HPO4和ChCl/Buta-K3PO4兩種雙水相體系對(duì)雜環(huán)胺回收率的影響，平行測(cè)定3次，結(jié)果如圖7所示. 結(jié)果表明，ChCl/Buta-K2HPO4雙水相體系中雜環(huán)胺回收率稍高于ChCl/Buta-K3PO4體系. 另外，結(jié)合相圖可知K2HPO4比K3PO4具有更強(qiáng)的成相能力，且得到體積相同的DES 相時(shí)，K2HPO4的用量少于K3PO4. 綜合考慮，實(shí)驗(yàn)選擇K2HPO4作為雙水相的無機(jī)鹽.

Fig.7 Effect of the type of inorganic salt on recoverySpiked concentration in 1 mL urine sample: IQ, 1.5μg/mL; IQ[4,5-b], 3.0 μg/mL; Harman, 1.5 μg/mL;Norharman, 1.5 μg/mL; Phe-P-1, 3.0 μg/mL.

2.3.4 無機(jī)鹽使用量的選擇 無機(jī)鹽的用量決定著是否能形成雙水相體系，同時(shí)也會(huì)降低目標(biāo)物在水相的溶解度，促使更多的目標(biāo)物轉(zhuǎn)移到DES 相，進(jìn)而影響萃取效率［34］.考察了不同K2HPO4的使用量（0.2～1.4 g）對(duì)雜環(huán)胺回收率的影響，平行測(cè)定3 次. 如圖8 所示，當(dāng)K2HPO4加入量增加至0.4 g時(shí)，還不能形成DES-ATPS 雙水相體系. 當(dāng)加入量為0.6 g 時(shí)，開始形成雙水相體系，呈現(xiàn)清晰的兩相，此時(shí)雜環(huán)胺回收率急劇增加. 當(dāng)K2HPO4達(dá)到0.8 g 時(shí)，雜環(huán)胺回收率達(dá)到最大值. 當(dāng)K2HPO4使用量繼續(xù)增加至1.2 g，雜環(huán)胺回收率趨于平穩(wěn)，可能是因?yàn)镈ES 相中DES 含量趨于飽和，萃取效率增加緩慢； 當(dāng)K2HPO4用量大于1.2 g時(shí)，可能是因?yàn)槿芤后w系黏度的增加不利于HAAs向DES相擴(kuò)散，導(dǎo)致萃取效率略有下降. 因此，實(shí)驗(yàn)選擇無機(jī)鹽用量為0.8 g.

Fig.8 Effect of the amount of K2HPO4 on recovery

2.3.5 pH值的選擇 由于HAAs是兩性物質(zhì)，體系的pH值影響著溶液中HAAs的存在狀態(tài)，進(jìn)而影響其萃取效率［35］. 實(shí)驗(yàn)中通過在尿液樣品中加入適量的氨水來調(diào)節(jié)體系的pH 值，考察了體系pH 值從7.5 到11.5 對(duì)雜環(huán)胺回收率的影響，平行測(cè)定3 次，結(jié)果如圖9 所示. 結(jié)果表明，當(dāng)體系的pH=10.5時(shí)，雜環(huán)胺的回收率最高，這可能是因?yàn)榇藭r(shí)雜環(huán)胺以游離堿形式存在于樣品溶液中，更容易被萃取到DES相中. 因此，實(shí)驗(yàn)選擇體系pH值為10.5.

Fig.9 Effect of pH value of sample solution on recovery

2.3.6 萃取時(shí)間的選擇 采用渦旋振蕩輔助的方式提取目標(biāo)物，渦旋振蕩能夠促進(jìn)DES與樣品溶液充分接觸，促進(jìn)目標(biāo)物向DES相轉(zhuǎn)移，進(jìn)而提高雜環(huán)胺的萃取效率. 渦旋萃取時(shí)間太短會(huì)導(dǎo)致雜環(huán)胺提取不完全，時(shí)間過長(zhǎng)又會(huì)增加時(shí)間成本［36］. 考察了不同萃取時(shí)間（1～11 min）對(duì)雜環(huán)胺回收率的影響，平行測(cè)定3次. 如圖10所示，當(dāng)萃取時(shí)間從1 min增加到3 min時(shí)，雜環(huán)胺回收率略有增加，繼續(xù)增加萃取時(shí)間，回收率變化不大. 因此，實(shí)驗(yàn)選擇萃取時(shí)間為3 min.

Fig.10 Effect of vortex time on recovery

2.3.7 離心時(shí)間的選擇 離心可以促進(jìn)DES相與水相之間形成清晰穩(wěn)定的界面，實(shí)驗(yàn)考察了不同離心時(shí)間（1～11 min）對(duì)界面清晰度的影響，平行測(cè)定3 次. 結(jié)果表明，當(dāng)離心時(shí)間為3 min 時(shí)，上下兩相界面即能達(dá)到清晰.

2.4 方法學(xué)考察

通過測(cè)定線性、 檢出限（LODs）、 定量限（LOQs）、 準(zhǔn)確度和精密度，評(píng)估了所建立方法的分析性能，結(jié)果列于表2. 以待測(cè)樣品中雜環(huán)胺的濃度為橫坐標(biāo)（x），相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)（y）繪制工作曲線，其相關(guān)系數(shù)（R2）均大于0.999，表明該方法線性關(guān)系良好. 分別用3倍和10倍信噪比（S/N）確定方法的檢出限（LODs）和定量限（LOQs），分別為0.020～0.097 ng/g和0.19～0.39 ng/g.

Table 2 Analytical performances of the method

通過日內(nèi)和日間重復(fù)性實(shí)驗(yàn)考察了方法的精密度，5種雜環(huán)胺的日內(nèi)和日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）分別低于2.9%和3.2%，表明該方法具有較好的精密度和穩(wěn)定性.

通過加標(biāo)回收率考察了方法的準(zhǔn)確性，結(jié)果表明，在低、 中、 高3個(gè)加標(biāo)水平下雜環(huán)胺的回收率分別為81.9%～100.6%，82.5%～106.2%和84.0%～99.5%，均處于70%～120%之間，表明該方法準(zhǔn)確性良好.

2.5 方法對(duì)比

將本文方法的加樣回收率、 檢出限、 精密度和有機(jī)溶劑消耗量等參數(shù)與文獻(xiàn)報(bào)道的其它方法進(jìn)行了比較，結(jié)果列于表3. 結(jié)果表明，LLE-SPE串聯(lián)法和兩步固相萃取串聯(lián)法需使用大量的有機(jī)溶劑，預(yù)處理過程繁瑣且耗時(shí)，而本文方法不使用有機(jī)溶劑、 操作簡(jiǎn)單且前處理時(shí)間短； 磁性固相萃取法中磁性材料的制備步驟繁瑣、 操作麻煩、 耗時(shí)長(zhǎng)，本文方法中DES合成簡(jiǎn)單，成本低廉且更綠色環(huán)保.

此外，表3數(shù)據(jù)還表明，DES-APTS方法具有更好或相當(dāng)?shù)臏?zhǔn)確度和精密度，檢出限高于LC-MS測(cè)定的檢出限，但在可接受的范圍內(nèi)，符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)； 與LC-MS 相比，HPLC 儀器更易實(shí)現(xiàn)普及. 以上結(jié)果驗(yàn)證本文方法具有快速、 簡(jiǎn)便、 單樣品成本低及不使用有機(jī)溶劑等特點(diǎn)，適用于尿液樣品中HAAs分析.

Table 3 Comparison of the present method with other methods

2.6 實(shí)際樣品分析

利用本文方法對(duì)20份非吸煙者和20份吸煙者尿液樣本進(jìn)行了分析，結(jié)果表明，僅在其中2份吸煙者尿液中檢測(cè)出Harman，但均低于定量限.

3 結(jié) 論

建立了一種低共熔溶劑/無機(jī)鹽雙水相萃取（DES-APTS）結(jié)合超高效液相色譜法測(cè)定吸煙者和非吸煙者尿液中5種雜環(huán)胺含量的方法. 首先，以氯化膽堿為氫鍵受體，與不同的氫鍵供體制備7種不同的DES，利用FTIR和1H NMR對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行了表征，并討論了不同的氫鍵供體對(duì)成相能力的影響規(guī)律； 其次，通過單因素實(shí)驗(yàn)確定了DES-APTS體系的最優(yōu)萃取條件，并評(píng)價(jià)了其分析性能. 結(jié)果表明，本文方法具有良好的線性、 準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性. 與文獻(xiàn)報(bào)道的方法相比，本文方法具有環(huán)境友好、 操作簡(jiǎn)單、 快速及單樣品成本低等特性，為評(píng)估香煙煙氣中雜環(huán)胺的暴露水平提供一種有效方法，為卷煙危害性評(píng)價(jià)提供新的研究思路，同時(shí)拓寬了DES-ATPS體系的應(yīng)用領(lǐng)域. 此外，低共熔溶劑合成簡(jiǎn)單，成本低廉且更綠色環(huán)保，可作為離子液體的潛在替代品，在樣品前處理領(lǐng)域具有良好的發(fā)展前景和應(yīng)用潛力.