何 祥 王永龍 白 珍 吳雙英

（呼倫貝爾市蒙醫(yī)醫(yī)院 內(nèi)蒙古海拉爾 021000）

蒙藥材 “地格達(dá)” 名稱來自梵語音譯， 蒙語為“苦”的意思，味苦，具有平息“協(xié)日”清熱、愈傷之功效，為蒙醫(yī)常用藥材之一。 “地格達(dá)”類蒙藥在地格達(dá)-4 湯、地格達(dá)-3 湯、伊赫哈日-12 味散、瑪努-10等100 多種復(fù)方制劑中作為主要或配伍使用， 在蒙醫(yī)藥領(lǐng)域有著非常重要的地位[1]。 其中，哈畢日干·地格達(dá)，漢名肋柱花，為龍膽科植物肋柱花［（Loatogonium rotatum L.） Fries ex Nym］的全草[2]；哈日·特木日·地格達(dá)，漢名扁蕾，為龍膽科屬植物扁蕾（Gentianopsis barbata L.） 的干燥全草[3]；孟根·地格達(dá)，漢名梅花草，為虎耳草科梅花草屬植物梅花草（Parnassia palustris L.）的全草[4-5]，以上3 種植物均屬“地格達(dá)”類蒙藥材。 近年來，隨著蒙醫(yī)藥事業(yè)快速發(fā)展，“地格達(dá)”類藥材的使用量逐漸增加，市場需求量逐步提升。 但由于“地格達(dá)”類蒙藥材經(jīng)過多年的無序采挖，導(dǎo)致野生藥材資源極度缺乏， 遠(yuǎn)遠(yuǎn)滿足不了市場需求量并存在代替藥物[1，6]、出現(xiàn)假藥等問題。 為了滿足市場需求量及混淆使用等狀況，應(yīng)深入研究“地格達(dá)”類蒙藥材種植栽培技術(shù)，建立藥材種植基地并加強(qiáng)野生藥材資源的保護(hù)。 種子的育苗技術(shù)與萌發(fā)條件一直彼此關(guān)聯(lián)，也是改善田間生產(chǎn)性能的重要步驟[7-8]。 本試驗以肋柱花、扁蕾和梅花草種子為研究對象，探究不同配方基質(zhì)、溫度和酸堿度對種子發(fā)率的影響，優(yōu)選出“地格達(dá)”類蒙藥材種子發(fā)芽所需要的最佳條件，從而為其規(guī)范化栽培和合理充分利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

試驗所用肋柱花、扁蕾、梅花草野生種子采集于內(nèi)蒙古呼倫貝爾市海拉爾區(qū)西山公園西南草甸草原， 經(jīng)內(nèi)蒙古民族大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院布和巴特教授鑒定為龍膽科屬植物肋柱花、龍膽科屬植物扁蕾、虎耳草科梅花草屬植物梅花草種子。

1.2 儀器與試劑

101 型烘干箱 （永光明醫(yī)療）、 人工氣候箱子450N（上海森信）、BT25S 型十萬分之一電子分析天平（賽多利斯）、電子顯微鏡（奧林巴斯CX23）、酸堿度測定儀（蘇珀P(guān)HS-3C2C），培養(yǎng)皿、濾紙、蒸餾水、高錳酸鉀，生境土Ⅰ、生境土Ⅱ、生境土Ⅲ（49°11′27″N、119°44′1″E），泥炭土、珍珠巖、蛭石。

1.3 試驗方法

1.3.1 千粒重和凈度檢驗 采用百粒法[9]測定種子千粒重，每份“地格達(dá)”種子隨機(jī)取100 粒為1 組，8 次重復(fù)，由此換算出每1 000 粒種子的質(zhì)量。 再將已抽取的樣品鋪在光潔的桌面上，把凈種子、廢種子和雜質(zhì)分開，分別稱量，重復(fù)3 次，按下式計算種子凈度：種子凈度（%）=［1-（廢種子含量+雜質(zhì)含量）/種子總量］×100%。

1.3.2 種子的選擇及預(yù)處理 將野生種子冷凍儲存1 年后，2022 年初進(jìn)行試驗研究。 肋柱花、扁蕾、梅花草種子用高倍放大鏡篩選出大而飽滿、 光澤鮮亮的黑褐色種子，置于燒杯中，加適量的溫水進(jìn)行清洗，濾去水后自然干燥，備用。

稱取0.5 g 高錳酸鉀試劑， 置于150 mL 的錐形瓶中，加95 mL 蒸餾水，充分?jǐn)嚢杈鶆蚝箪o置1～2 h，即可配置成0.5%的高錳酸鉀溶液， 用于種子的消毒、 殺菌并提升種子的發(fā)芽率。 將選好的肋柱花、扁蕾、 梅花草種子置于培養(yǎng)皿中， 加入配置好的高錳酸鉀溶液浸泡12 h， 再用蒸餾水洗滌干凈后自然干燥， 備用。

1.3.3 種子發(fā)芽 試驗配制8 個不同的配方基質(zhì)，T1 處理為對照（濕潤濾紙），將處理好的肋柱花、扁蕾和梅花草種子播種到鋪有8 個不同配方基質(zhì)培養(yǎng)皿中， 分別放置于15℃、20℃和25℃3 個溫度下培養(yǎng)，并在每個溫度條件下測定酸堿度（pH） 的變化趨勢（表1）。 設(shè)置人工氣候箱光照度為3 600 lx，12 h 光照、12 h 黑暗， 相對濕度為70%， 每個處理50 粒種子，每個試驗重復(fù)3 次。

表1 不同配方基質(zhì)配比

試驗全程應(yīng)及時補(bǔ)水，保持濕潤生長環(huán)境，每天固定時間觀察并記錄1 次發(fā)芽狀況， 以種子露白為萌發(fā)標(biāo)準(zhǔn)，連續(xù)5 d 沒有新發(fā)芽的種子為種子發(fā)芽結(jié)束的標(biāo)準(zhǔn)。 初始萌發(fā)時間為培養(yǎng)皿第1 粒種子萌發(fā)的天數(shù)；初次計數(shù)時間為達(dá)到50%發(fā)芽率的天數(shù)；末次計數(shù)時間為種子萌發(fā)達(dá)到最高時， 以后再無萌發(fā)種子出現(xiàn)時的天數(shù)。

1.4 數(shù)據(jù)處理

利用Microsoft Excel 2010 軟件進(jìn)行繪圖， 試驗數(shù)據(jù)運(yùn)用SPSS 9.0 表進(jìn)行統(tǒng)計。

發(fā)芽率=n/N×100%

式中，n為正常發(fā)芽的種子數(shù)，N為供檢測的種子數(shù)。

發(fā)芽勢=n/N×100%

式中，n為日發(fā)芽種子數(shù)達(dá)到最高峰時的種子數(shù)，N為供檢測的種子數(shù)。

3 結(jié)果與分析

3.1 種子形態(tài)特征

3 種“地格達(dá)”類蒙藥材種粒均特微小，肋柱花種子千粒重為0.027 g，凈度為86%；扁蕾種子千粒重為0.034 g，凈度為72%；梅花草種子千粒重為0.031 g，凈度為83%。經(jīng)400×鏡下拍照分析，肋柱花和扁蕾種子細(xì)小如沙粒，形狀、顏色基本相似，為橢圓或卵形，褐色或黑褐顏色；扁蕾種子表面密被茸毛，肋柱花種子表面皺縮，略有光澤；梅花草種子比肋柱花和扁蕾的種子一絲細(xì)長，外表面棕黃色，有網(wǎng)狀紋理的表皮包著（圖1）。

圖1 3 種“地格達(dá)”種子

3.2 配方基質(zhì)對種子發(fā)芽的影響

土壤基質(zhì)是植物種子萌芽的前提條件[10-12]， 由表2 可知，3 種“地格達(dá)”類蒙藥材種子的發(fā)芽率及發(fā)芽勢均受不同配方基質(zhì)的影響。 由圖2 可知，肋柱花在T2 處理的發(fā)芽率高于其他處理，土壤基質(zhì)為生境土Ⅰ時發(fā)芽率達(dá)68%，與對照相比，除T4 處理外的其他處理的發(fā)芽率均明顯提高； 扁蕾以泥炭∶珍珠巖為8∶1 配比基質(zhì)的T5 處理發(fā)芽率最高，達(dá)56%，與對照相比，僅T4 和T5 處理發(fā)芽率顯著提高；梅花草的發(fā)芽率均偏低，發(fā)芽率較高的是T3 處理，由生境土Ⅱ組成，發(fā)芽率為44%，與對照相比，僅T3 處理的發(fā)芽率略顯提升。

圖2 不同配方基質(zhì)條件下3 種“地格達(dá)”種子的發(fā)芽率

3.3 溫度對種子發(fā)芽的影響

不同溫度對3 種“地格達(dá)”類蒙藥材種子的萌發(fā)情況影響很大，不同發(fā)芽溫度間呈顯著差異。由表3、圖3 可知，肋柱花、扁蕾和梅花草在15℃度時均不發(fā)芽，溫度為20～25℃時均能發(fā)芽，隨著溫度的變化，發(fā)芽率、發(fā)芽勢也隨著發(fā)生變化，具體表現(xiàn)為隨著溫度的升高，肋柱花、扁蕾和梅花草種子的發(fā)芽率增加，在25℃時達(dá)最大，肋柱花的發(fā)芽率達(dá)68%、扁蕾的發(fā)芽率達(dá)56%、 梅花草的發(fā)芽率達(dá)44%。 綜上可知，這3 種“地格達(dá)”類蒙藥材種子在低于20℃溫度條件 下不發(fā)芽，適當(dāng)升高溫度可提升種子的發(fā)芽率。

圖3 不同溫度條件下3 種“地格達(dá)”種子的發(fā)芽率

表3 不同溫度條件下3 種“地格達(dá)”種子的萌發(fā)情況

3.4 pH 對種子發(fā)芽的影響

由表4 可知，pH 變化對3 種“地格達(dá)”類蒙藥材種子發(fā)芽率和發(fā)芽勢有一定影響，3 種種子發(fā)芽率的變化趨勢見圖4。 隨著pH 的升高，肋柱花的發(fā)芽率逐漸增加，在pH 7.2～7.8 的發(fā)芽率上升最快，穩(wěn)定高于其他水平；梅花草在pH 5.5～6.6 的發(fā)芽率較低，當(dāng)pH＞6.6 時其種子發(fā)芽率迅速上升，pH 7.2 時發(fā)芽率最大， 說明肋柱花和梅花草種子在弱堿性環(huán)境下發(fā)芽狀況較佳； 扁蕾的發(fā)芽率在pH 5.5～6.6 呈凸形曲線，表示扁蕾種子在弱酸性環(huán)境下發(fā)芽情況較好，pH 6.3 時發(fā)芽率最大。綜上可知，3 種“地格達(dá)”類蒙藥材種子的發(fā)芽條件與pH 密切相關(guān)，扁蕾、肋柱花和梅花草種子發(fā)芽的最適pH 不同。

圖4 不同pH 條件下3 種“地格達(dá)”類蒙藥材種子的發(fā)芽率

表4 不同pH 對3 種“地格達(dá)”種子萌發(fā)的影響

4 討論與結(jié)論

本研究所用的3 種“地格達(dá)”類蒙藥材種子均采自內(nèi)蒙古自治區(qū)呼倫貝爾市海拉爾區(qū)西上公園西南側(cè)，該地屬灌叢草甸、河灘濕地，降雨量多，寒冷濕潤，晝夜溫差變化較大，環(huán)境較為復(fù)雜，并且種子細(xì)小，發(fā)芽率較低，幼苗生長緩慢易枯萎，苗期長，人工播種栽培十分困難。 近年來，有學(xué)者選用不同的發(fā)芽床、浸種溫度、貯存溫度和赤霉素溶液對肋柱花種子進(jìn)行發(fā)芽試驗，找出了適宜種子發(fā)芽的條件[13-14]。 高宏等[15]探索了濕生扁蕾的種子發(fā)芽特性和幼苗生長特性。 劉寶光等[16]對梅花草進(jìn)行組織培養(yǎng)研究，建立了無性繁殖體系，縮短了其育種周期，為長白山野生梅花草的栽培和有性繁殖的生產(chǎn)實踐提供了科學(xué)指導(dǎo)。 本試驗通過對不同配方基質(zhì)、溫度和酸堿度條件對肋柱花、扁蕾、梅花草種子萌發(fā)的影響進(jìn)行研究，結(jié)果表明，3 種因素均對種子發(fā)芽率影響較大，且3 種“地格達(dá)”類蒙藥材適宜萌發(fā)條件有一定差異。

基質(zhì)對種子出苗的影響主要與土壤空隙度、土壤pH 和水溶物質(zhì)含量有關(guān)[17-20]。從土壤基質(zhì)方面看，肋柱花、扁蕾、梅花草的發(fā)芽率分別在T2、T6、T3 處理最大，不同基質(zhì)因其保溫、保水、透氣性、營養(yǎng)成分存在差異， 對植物種子萌發(fā)及幼苗生長的影響具有顯著差異[21]，各處理從不同的基質(zhì)著手，以濕潤濾紙（T1 處理）為對照，T2、T3 處理的生境土Ⅰ、Ⅱ土壤特點為半濕地、土壤顆粒大小均衡、空隙適中、營養(yǎng)成分含量大、 保水保溫較好；T4、T5 處理的泥炭土、泥炭∶珍珠巖為8∶1 基質(zhì)配比的土壤顆粒也適中， 保水保溫性好；T6～T8 處理加入了蛭石和珍珠巖， 土壤顆粒比例和透氣性增加，持水、保營養(yǎng)性能下降。 溫度在25℃時，3 種“地格達(dá)”類蒙藥材種子的發(fā)芽率、發(fā)芽勢最大，平均發(fā)芽率達(dá)56%，溫度低于20℃時，種子受低溫的影響均不發(fā)芽，不宜播種。 由于本研究結(jié)合當(dāng)?shù)氐沫h(huán)境、 寒冷氣候等條件將最高溫度設(shè)為25℃，但從試驗結(jié)果來看，其發(fā)芽率隨著溫度升呈上升趨勢，因此，在該基礎(chǔ)上應(yīng)當(dāng)選用更高的溫度進(jìn)一步加以研究。土壤基質(zhì)的pH 也是影響種子發(fā)芽的因素，關(guān)于pH 對種子發(fā)芽的研究有許多報道，不同的植物種子對pH 要求也不盡相同。 胡選萍等[22]的研究表明，pH 4 的偏酸條件更有利于藍(lán)莓種子的萌發(fā)；陸維超等[23]的研究表明，銀杏種子在微酸性（pH 6）和微堿性（pH 8）條件下均能正常萌發(fā)，且幼苗生長正常；于秋良等[24]采用pH 7.5 的溶液浸泡綠豆時種子萌發(fā)效果最佳；本試驗中肋柱花、扁蕾、梅花草分別在pH為7.8、7.2、6.3 時發(fā)芽率最大。在微酸性條件時，肋柱花和梅花草種子的發(fā)芽率較小，種子發(fā)芽勢也較小，說明過酸性基質(zhì)會抑制肋柱花和梅花草種子的萌發(fā)；扁蕾在微酸時，則更有利于其種子的萌發(fā)，偏堿性可降低種子的發(fā)芽率，這說明3 種“地格達(dá)”類蒙藥材發(fā)芽要求的pH 條件不同。

由此可知， 肋柱花和梅花草種子在生境土處理中的發(fā)芽率高于泥炭土、蛭石和珍珠巖的混合基質(zhì)，表明提高肋柱花和梅花草發(fā)芽率時， 在25℃條件下宜采用生境土進(jìn)行育苗， 要保證半濕的土壤和種子萌發(fā)過程中的堿性條件及保水、保溫性；而扁蕾種子在泥炭∶珍珠巖為8∶1 時的發(fā)芽率高于生境土和其他配方基質(zhì)，在25℃條件下宜選用泥炭土∶珍珠巖為8∶1的混合基質(zhì)土壤并注意pH 條件（pH＜7）。 本研究對該3 種“地格達(dá)”類蒙藥材的種子育苗和野生馴化種植提供了理論依據(jù)和技術(shù)支撐。