田章林 龍 波 董語(yǔ)涵 魏有東

1）重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，重慶 400016 2）重慶神經(jīng)生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶 400016

帕金森?。≒arkinson’s disease，PD）是一種常見(jiàn)的神經(jīng)退行性疾病，主要臨床表現(xiàn)為靜態(tài)震顫、肌強(qiáng)直、運(yùn)動(dòng)遲緩等運(yùn)動(dòng)癥狀，以及嗅覺(jué)障礙、睡眠障礙、心血管功能障礙、難治性便秘等非運(yùn)動(dòng)癥狀［1-4］。PD是僅次于阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s disease，AD）的第二大神經(jīng)退行性疾病，其發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)。據(jù)估計(jì)，到2030 年中國(guó)PD 患者數(shù)量將達(dá)到494 萬(wàn)，給家庭和社會(huì)帶來(lái)沉重的負(fù)擔(dān)［5］。PD 的主要病理特征是黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元選擇性死亡以及路易體（Lewy bodies，LBs）的形成，LBs 主要由α-突觸核蛋白、泛素、神經(jīng)絲蛋白等組成。多種病理機(jī)制共同導(dǎo)致帕金森病的發(fā)生發(fā)展已成為廣泛共識(shí)，近期研究也表明氧化應(yīng)激、線粒體功能障礙、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激引起的蛋白質(zhì)折疊異常、神經(jīng)炎癥、微生物-腸-腦軸及相關(guān)基因改變與PD的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)［6-8］。

tau 蛋白是由位于17 號(hào)染色體上的微管相關(guān)蛋白tau（microtubule-associated protein tau，MAPT）基因編碼的一種穩(wěn)定的細(xì)胞骨架蛋白微管。tau 蛋白在穩(wěn)定微管、與膜結(jié)合、調(diào)節(jié)軸突轉(zhuǎn)運(yùn)等方面發(fā)揮作用。然而，異常磷酸化的tau 蛋白失去了誘導(dǎo)微管組裝和維持微管穩(wěn)定的能力，p-tau 與微管蛋白競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合正常tau 蛋白和其他大分子微管相關(guān)蛋白，導(dǎo)致微管解聚，神經(jīng)元體和神經(jīng)末梢之間的物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)受損，最終引起一系列神經(jīng)病理改變。在尸檢研究中，在路易體中觀察到tau 蛋白和α-syn 的共同積累［9］。在許多PD 模型中，α-syn 已被證明可引起局灶性tau 病理并促進(jìn)tau 磷酸化；此外，PD 患者紋狀體中p-tau 聚集增加［9-10］。Ren 等［11］發(fā)現(xiàn)，與健康對(duì)照組相比，新發(fā)PD 患者血漿中α-syn 和磷酸化tau-181（phosphorylated-tau at threonine-181，p-tau181）水平較高，且較高的血漿p-tau181濃度與較差的H-Y分期有關(guān)。在最近ADNI 和BioFINDER 隊(duì)列的一項(xiàng)縱向研究中，血漿p-tau181濃度預(yù)測(cè)了MCI向癡呆的臨床進(jìn)展［12］。

目前大多研究聚焦在腦脊液相關(guān)生物標(biāo)志物上，少有研究血液中生物標(biāo)志物對(duì)帕金森病的價(jià)值。相較于腦脊液的獲取，血液標(biāo)本的獲取更便利，對(duì)患者傷害更小。有研究顯示血清p-tau181 與腦脊液ptau181 具有密切相關(guān)性，且變化趨勢(shì)相似。本研究旨在評(píng)估PD 患者與HC 患者血清中p-tau181 的水平，并探索其與疾病嚴(yán)重程度、認(rèn)知損害、功能預(yù)后的關(guān)系。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象納入2021-07—2022-02 在重慶醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院或門(mén)診就診的PD 患者40 例（PD 組）及同期健康對(duì)照者35 例（HC組）為研究對(duì)象。

帕金森病納入標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)歐洲神經(jīng)病學(xué)協(xié)會(huì)聯(lián)盟（European Federation of Neurological Societies,EFNS）和運(yùn)動(dòng)障礙協(xié)會(huì)歐洲分會(huì)（Movement Disorder Society-European Section, MDS-ES）推薦診斷原發(fā)性帕金森病。帕金森病組和健康對(duì)照組排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）帕金森綜合征或繼發(fā)性帕金森??；（2）有嚴(yán)重全身性疾?。ㄈ缒[瘤、慢性心力衰竭、慢性阻塞性肺疾病、肝炎、腎炎)或傳染病的患者；（3）有卒中、顱腦手術(shù)或外傷、阿爾茨海默病、運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元疾病或其他中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病史；（4）局部或全身性感染性疾病患者（如肺部感染、尿路感染、膿毒癥、顱內(nèi)感染等）；（5）近半年有手術(shù)、外傷等應(yīng)激性因素，近3 個(gè)月有服用非甾體類抗炎藥物，近2 個(gè)月有酗酒，近1 個(gè)月服用中樞神經(jīng)系統(tǒng)抑制藥物、神經(jīng)活性物質(zhì)；（6）有內(nèi)分泌系統(tǒng)相關(guān)疾病（如甲狀腺功能亢進(jìn)和減退、糖尿病等）；（7）有精神分裂、癲癇、抑郁等神經(jīng)精神疾病。

1.2 量表評(píng)估及標(biāo)本采集入院或就診時(shí)采用帕金森病統(tǒng)一評(píng)分量表（unified Parkinson’s disease rating scale，UPDRS）和Hoehn-Yahr（H-Y）分期量表，以評(píng)估PD 患者的疾病嚴(yán)重程度。根據(jù)H-Y 分期將PD 患者分為早期（H-Y 分期＜2.5）和中晚期（H-Y 分期≥2.5）。認(rèn)知狀態(tài)由蒙特利爾認(rèn)知評(píng)估（Montreal cognitive assessment，MoCA）量表測(cè)量，排除受教育因素后將受試者分為認(rèn)知受損帕金森病患者（PD patients with impaired cognition，PD-IC）組（MoCA＜26分）和認(rèn)知正常帕金森病患者（PD patients with normal cognition，PD-NC）組（MoCA≥26 分）。采集血樣6 個(gè)月后，再次隨訪評(píng)估帕金森患者的UPDRS 評(píng)分和H-Y 分級(jí)，將UPDRS 總分或H-Y 分級(jí)結(jié)果升高的分為預(yù)后不佳組，UPDRS 總分和H-Y 分級(jí)結(jié)果減低或不變的分為預(yù)后良好組。所有帕金森病量表由兩名觀察員評(píng)估并記錄，通過(guò)討論解決差異。

記錄所有受試者的性別、年齡、病程時(shí)間、詳細(xì)病史等一般資料。入院后第2 天07：00 或門(mén)診就診時(shí)抽取患者肘正中靜脈血，高速離心后于—80 ℃下儲(chǔ)存。使用p-tau181 的商業(yè)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）試劑盒測(cè)定血清p-tau181水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 26.0 軟件（IBM，USA）和GraphPad Prism 8.0 軟件（GraphPad Prism software，Inc，USA）進(jìn)行數(shù)據(jù)分析處理及繪制圖片。正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；非正態(tài)分布的計(jì)量資料以中位數(shù)（四分位數(shù)間距）表示，用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較；計(jì)數(shù)資料以構(gòu)成比（%）表示，對(duì)有序分類變量使用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較，對(duì)無(wú)序分類變量使用卡方檢驗(yàn)（χ2檢驗(yàn)）進(jìn)行組間比較。相關(guān)性分析采用Pearson 相關(guān)分析，相關(guān)系數(shù)（r值）在0.5～1.0 表示相關(guān)良好。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 受試者基線資料比較2 組受試者年齡（P=0.13）、性別（P=0.17）差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與HC 相比，PD 患者血清p-tau181水平升高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義［1.01（0.28～2.63）ng/L比0.53（0.04～3.72）ng/L，P=0.55）］。見(jiàn)表1。

表1 PD組與健康對(duì)照組臨床特資料比較Table 1 Comparison of clinical data between PD group and healthy control group

2.2 血清p-tau181與疾病嚴(yán)重程度相關(guān)性入院或門(mén)診就診時(shí)評(píng)估患者UPDRS、H-Y分期，根據(jù)患者HY 分期將PD 組受試者分為早期PD（PD patients in the early stage，PDE）組（H-Y 分期＜2.5）和中晚期PD（PD patients in the advanced stage，PDA）組（H-Y 分期≥2.5），結(jié)果顯示2組患者的年齡（P=0.42）和性別（P=0.90）差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p-tau181 水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義［1.06（0.14～2.16）ng/L 比0.83（0.31～3.47）ng/L，P=0.80，表2、圖1］。此外，p-tau181 與疾病持續(xù)時(shí)間（r=-0.14，P=0.37，圖2）和UPDRS 評(píng)分（r=0.02，P=0.89，圖3）無(wú)關(guān)。

圖1 血清p-tau181水平箱形圖Figure 1 A Box plot of serum p-tau181 levels

圖2 血清p-tau181與病程的相關(guān)性Figure 2 Correlation between serum p-tau181 and disease duration

圖3 血清p-tau181與UPDRS評(píng)分的相關(guān)性Figure 3 Correlation between serum p-tau181 and UPDRS

表2 早期PD患者與中晚期PD患者的臨床特征Table 2 Clinical characteristics of early and advanced stage PD patients

2.3 血清p-tau181與認(rèn)知損害的相關(guān)性入院或門(mén)診就診時(shí)使用MoCA 量表評(píng)估患者認(rèn)知功能，根據(jù)MoCA 評(píng)分將患者分為PD-NC 組（MoCA 評(píng)分≥26 分）和PD-IC 組（MoCA 評(píng)分＜26 分），PD-IC、PD-NC 和HC 間血清p-tau181 水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.63，圖1）。Spearman 相關(guān)分析顯示血清p-tau181濃度與MoCA評(píng)分無(wú)相關(guān)性（r=0.16，P=0.32，圖4）。

圖4 血清p-tau181與認(rèn)知損害的相關(guān)性Figure 4 Correlation between serum p-tau181 and MoCA

2.4 血清p-tau181與功能預(yù)后的相關(guān)性采集血樣6 個(gè)月后，再次隨訪評(píng)估帕金森病患者的UPDRS 評(píng)分和H-Y 分期，共隨訪39 例患者（其中1 例因意外死亡，退出隨訪組），其中預(yù)后良好組25例，預(yù)后不佳組14 例，預(yù)后良好組與預(yù)后不佳組的年齡（P=0.81）、性別（P=0.76）、病程（P=0.55）差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。預(yù)后良好組與預(yù)后不佳組血清p-tau181 水平表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.74，表3）。

表3 預(yù)后良好組和預(yù)后不佳組的臨床特征Table 3 Clinical characteristics of the good and poor prognosis groups

3 討論

帕金森病的主要病理特征是多巴胺能神經(jīng)元壞死和路易體形成，神經(jīng)炎癥在帕金森病中起重要作用，也是多巴胺能神經(jīng)元退化的主要導(dǎo)火索。α-syn作為路易體的主要組成成分，在帕金森病神經(jīng)炎癥中起重要作用，其引發(fā)神經(jīng)炎癥的重要途徑是活化小膠質(zhì)細(xì)胞，活化的小膠質(zhì)細(xì)胞可產(chǎn)生IL-1β，激活神經(jīng)元p38 MAPK，引起tau 蛋白的過(guò)度磷酸化，P38 MAPK 在體內(nèi)可磷酸化tau 蛋白Thr181 位點(diǎn)。Ren等［11］研究發(fā)現(xiàn)PD患者血清p-tau181表達(dá)增加。因此p-tau181 可能在帕金森病發(fā)病通過(guò)特定通路發(fā)揮一定作用，最終導(dǎo)致多巴胺能神經(jīng)元死亡。

本研究顯示，與HC 相比，PD 患者的血清ptau181 濃度升高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。由于帕金森病是一種進(jìn)展性疾病，隨著疾病的進(jìn)展血清ptau181 濃度可能由于某種機(jī)制而發(fā)生不同的變化，因此本研究進(jìn)一步分析了早期和中晚期組血清ptau181 的濃度，結(jié)果顯示早期和中晚期PD 患者之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Spearman 相關(guān)分析也顯示，ptau181 水平與病程、UPDRS 評(píng)分、疾病嚴(yán)重程度無(wú)相關(guān)性。Lin等［13］發(fā)現(xiàn)PD 組與HC組相比血清p-tau181濃度顯著增加，與本研究結(jié)果不一致?？赡茉颍菏紫龋壳按罅垦芯勘砻?，氧化應(yīng)激及神經(jīng)炎癥在PD發(fā)生發(fā)展中起重要作用，氧化應(yīng)激促進(jìn)tau 蛋白磷酸化［14-15］，但也有研究表明，氧化應(yīng)激在一定條件下可抑制tau 蛋白的磷酸化［16-17］，因此血清p-tau181 在整個(gè)帕金森病病程中變化特點(diǎn)不明確，需更深入地研究PD 中p-tau181 的多方面和長(zhǎng)期變化趨勢(shì)。其次，相互矛盾的結(jié)果可能歸因于兩個(gè)隊(duì)列的患者數(shù)量較勢(shì)。其次，相互矛盾的結(jié)果可能歸因于兩個(gè)隊(duì)列的患者數(shù)量較少。最后，有研究使用基于免疫磁減量（immunomagnetic reduction，IMR）的方法檢測(cè)血漿p-tau181 水平，本研究應(yīng)用ELISA 檢測(cè)，應(yīng)考慮不同測(cè)定方法對(duì)結(jié)果的影響。

本研究還表明，血清p-tau181 水平在認(rèn)知正常PD患者、認(rèn)知損害PD患者及HC之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且與MoCA 評(píng)分無(wú)關(guān)。既往部分研究顯示p-tau181 與認(rèn)知之間的潛在聯(lián)系［18-19］，表明p-tau181水平越高，認(rèn)知狀態(tài)越差，但也有研究表明血清p-tau181 與認(rèn)知功能下降無(wú)明顯關(guān)系［20-21］。血清p-tau181 與帕金森病患者認(rèn)知功能障礙的關(guān)系需更多試驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)。

本研究局限性：第一，樣本量相對(duì)較小，需對(duì)更多PD 患者進(jìn)行進(jìn)一步研究，發(fā)現(xiàn)循環(huán)p-tau181 水平與PD之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性。第二，這是一項(xiàng)橫斷面研究，未動(dòng)態(tài)檢測(cè)患者血清p-tau181 濃度，未來(lái)需進(jìn)行更多縱向研究進(jìn)一步明確。第三，用藥史及實(shí)驗(yàn)室檢查（如全血計(jì)數(shù)、血糖、凝血、肝臟和腎功能等）不完整，因此未考慮其對(duì)p-tau181水平的潛在影響。本研究未能證實(shí)p-tau181 在帕金森病患者血液中的分布特征，以及其與帕金森病認(rèn)知損害、功能預(yù)后的關(guān)系。

本研究發(fā)現(xiàn)，與HC相比，PD患者血清p-tau181無(wú)顯著差異。此外，血清p-tau181與患者疾病嚴(yán)重程度、認(rèn)知損害、功能預(yù)后無(wú)顯著相關(guān)性。未來(lái)需更多多中心、大樣本試驗(yàn)進(jìn)一步探究p-tau181與帕金森病的相關(guān)性及其在帕金森病發(fā)生發(fā)展中的具體作用機(jī)制。