李麗群

1927 年MNS 血型系統(tǒng)被發(fā)現(xiàn), 其為被識別的第二個血型系統(tǒng), 第一個是ABO 血型系統(tǒng), 1933 年Johnson和Wolf 發(fā)現(xiàn)了抗-M 抗體, 其為自然產(chǎn)生, 相對常見,大部分為免疫球蛋白M(IgM) 抗體, 37℃下不活躍, 臨床忽略了其在輸血實踐中的存在, 于室溫下大部分抗-M 抗體會有鹽水凝集情況發(fā)生, 屬冷反應(yīng)性的鹽水凝集素, 偶爾可在抗球蛋白階段或37℃有反應(yīng)發(fā)生,可導(dǎo)致遲發(fā)性的溶血性輸血反應(yīng)［1,2］。本文2021 年1 月～2022 年12 月發(fā)現(xiàn)由抗-M 抗體引發(fā)的18 例正反定型不符情況, 經(jīng)對此類抗體檢測結(jié)果展開分析, 探究在臨床治療中抗-M 抗體的影響, 如何及時發(fā)現(xiàn), 讓輸血安全提高, 進(jìn)而對O 型紅細(xì)胞加入后的影響展開分析, 詳細(xì)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本院輸血科于2021 年1 月～2022 年12 月收集首次血型鑒定的8500 例患者, 女性居多, 年齡4～92 歲, 中位年齡58 歲, 大部分源自胃腸外科, 部分源自其他科室, 上述標(biāo)本上清清亮, 未見溶血。

1.2 方法

1.2.1 血型鑒定與抗體鑒定 留取EDTA 抗凝血2 ml,使用全自動微柱凝膠卡法、手工試管法對ABO、RhD血型進(jìn)行鑒定, 按照說明書或者臨床規(guī)定的相關(guān)操作方法進(jìn)行鑒定。進(jìn)行直接抗人球蛋白試驗(DAT)和間接抗球蛋白試驗(IAT), 包括：①使用試管法進(jìn)行DAT, 將1 滴5%三洗紅細(xì)胞待檢標(biāo)與1 滴免疫球蛋白G(IgG)、C3d 抗人球蛋白試劑相互混合, 進(jìn)行離心后, 結(jié)果呈陰性則結(jié)束實驗, 呈陽性為進(jìn)行抗-IgG、抗-C3d；②凝聚胺法：將血清分別與3 份抗體細(xì)胞、5%三洗紅細(xì)胞進(jìn)行混合, 比例為2∶1, 在分別加入0.6 ml低離子液后混勻, 再將2 滴凝聚胺加入進(jìn)行離心, 觀察凝集情況, 棄去上清后加入2 滴解凝聚, 輕搖后觀察1 min 內(nèi)的凝集情況［3,4］。

1.2.2 不規(guī)則抗體影響實驗 ①熱放散實驗：室溫四洗后的1 ml DAT 陽性標(biāo)本壓積紅細(xì)胞與1 ml 生理鹽水在水浴箱中放散, 溫度設(shè)置為56℃, 時間為10 min,離心后取出放散液進(jìn)行IAT。②酸放散實驗：按照試劑說明書操作對放散液進(jìn)行DAT。③吸收實驗：使用抗-M 試劑檢測陽性的O 型壓積紅細(xì)胞與標(biāo)本血清混合, 比例為1∶1, 冰箱溫度設(shè)置為4℃, 吸收時間為1 h,離心后取上清, 對其進(jìn)行ABO 反定型［5］。

1.2.3 配血方法 將患者的血清、5%三洗紅細(xì)胞和獻(xiàn)血者的血清、5%三洗紅細(xì)胞進(jìn)行交叉混合(血清：紅細(xì)胞=2∶1), 使用凝聚胺法、鹽水法、手工卡式法,具體操作如上［6］。

1.2.4 抗-M 抗體效價測定 留取2～3 ml 抗凝靜脈血進(jìn)行離心, 分離出血清, 使用鹽水法, 用生理鹽水倍比稀釋血清100 μl, 再加入50 μl 5% O 型健康人的M 抗原陽性紅細(xì)胞懸液, 在4、24、37 ℃環(huán)境分別放置15 min, 離心觀察并記錄紅細(xì)胞凝集情況［7］。

2 結(jié)果

2.1 血型鑒定結(jié)果 血型鑒定時借助微柱凝膠法、全自動血型儀, 結(jié)果顯示8500 份標(biāo)本中, 正反定型相符8432 份, 正反定型不符68 份。僅抽取了18 份典型標(biāo)本結(jié)果展開分析, 見表1。經(jīng)開展反定型試管法結(jié)果可見, A、B、O 細(xì)胞管均呈陽性, 而對照管結(jié)果呈陰性。見表2。經(jīng)處理后, 標(biāo)本血清接受直接抗人球?qū)嶒炓约翱贵w篩查實驗, 其對應(yīng)實驗結(jié)果見表3。

表1 18 份典型標(biāo)本初檢結(jié)果分析

表2 18 份典型標(biāo)本血型鑒定結(jié)果

表3 18 份典型標(biāo)本血型結(jié)果分析

2.2 標(biāo)本交叉配血結(jié)果 在抽取的18 份典型標(biāo)本中,去除標(biāo)本中的2、3、6、8、9、11、12、13、15、17、18 號, 剩余7 份抗-M 抗體標(biāo)本的患者行備血申請, 分別與相應(yīng)血型的供血者開展配血試驗, 利用鹽水法, 篩出陰性供血者, 在借助凝聚胺配血試驗, 無凝集者提示配血成功。

2.3 實驗室結(jié)果分析 在抽取的18 份典型標(biāo)本中,3 例輸血患者監(jiān)測尿常規(guī), 結(jié)果顯示膽紅素、尿膽原均呈陰性, 未見輸血不良反應(yīng)。評價療效顯示輸注有效。見表4。

表4 18 份典型標(biāo)本實驗室結(jié)果分析

3 討論

MNS 血型系統(tǒng)涵蓋了諸多紅細(xì)胞, 而一個紅細(xì)胞可涵蓋約80 萬M 抗原, 其密度十分充足, 乃病毒、細(xì)菌補(bǔ)體的受體?？?M 抗體中大多數(shù)為IgM 抗體, 無需補(bǔ)體激活, 剩余少數(shù)為IgG 型抗體血型, 而同種免疫為之誘發(fā)因素, 可引發(fā)血管外溶血反應(yīng), 可在溫度嚴(yán)格控制下檢測上述兩種類型的抗體, 以此實施鑒別［8］。本文中對抗-M 抗體產(chǎn)生人群展開了分析, 結(jié)果發(fā)現(xiàn)消化道出血、懷孕中和備孕、腫瘤患者、心臟手術(shù)患者4 類人群會有抗-M 抗體產(chǎn)生。而經(jīng)認(rèn)真調(diào)查顯示, 納入病例無輸血史, 而細(xì)菌感染史大都存在?？?M 抗體和冷凝集素(CA)致病機(jī)制十分類似, 某些誘導(dǎo)因素下,低溫程度下可展現(xiàn)特殊效用, 其該作用十分關(guān)鍵, 而其致病性多由熱振幅(TA)決定, 也就是和抗原作用最高溫度(通常為22 ～ 30℃), 與效價無關(guān)［9］?？?M 抗體熱振幅越高, 會增加誘導(dǎo)核心體溫較低患者體內(nèi)溶血,尤其是在各類體溫限制的手術(shù)中, 如心臟、神經(jīng)手術(shù)等,其可發(fā)揮關(guān)鍵效用。因而, 術(shù)前此類患者應(yīng)聯(lián)合會診,輸血科參與會診, 擬定手術(shù)策略, 確保其個體化, 避免將冷抗體激活, 致災(zāi)難性事件發(fā)生, 如溶血等。提示了實際臨床檢測期間, 低溫環(huán)境下檢出抗-M 抗體的幾率相對更高［10］。

不同于CA 的是, 還有IgG 型抗-M 抗體存在,且其有IgG 同種抗體一般特性存在, 本文結(jié)果可見,18 份典型標(biāo)本中, IgG 型抗-M 抗體存在11 份, 約占65.0%, 大部分為免疫性病癥、惡性腫瘤患者, 然在正常人群中其大部分為天然抗體, 說明一旦在免疫性病癥、惡性腫瘤患者體內(nèi)檢測出抗-M 抗體, 在低溫、輸血治療執(zhí)行期間, 應(yīng)格外重視配合型輸血、溫度等因素,若必要, 可取MN 血型同型血輸注［11］。

胎兒、新生兒HDFN 中抗-M 抗體可對紅系前體細(xì)胞產(chǎn)生抑制, 以致新生兒有紅細(xì)胞發(fā)育不全等情況出現(xiàn), 有關(guān)資料顯示［12］, 抗-M 抗體可引發(fā)新生兒溶血病(HDN), 且無HDN 典型特征, DAT 結(jié)果呈現(xiàn)陰性為其具體表現(xiàn), 處于新生兒期則表現(xiàn)為長期貧血。由于抗-M 抗體可將紅系祖細(xì)胞破壞, 極易出現(xiàn)孕早期流產(chǎn)等情況, 本文中就發(fā)現(xiàn)1 例妊娠中期孕婦, 由于該孕婦并未在本院繼續(xù)檢查, 因而未能繼續(xù)追蹤其結(jié)果, 有關(guān)文獻(xiàn)指出, IgG 型抗-M 抗體存在于血清中可引發(fā)新生兒嚴(yán)重溶血、多次死胎, 檢測直抗結(jié)果為陰性, 在給予M抗原陰性懸浮紅細(xì)胞(1單位)后, 膽紅素數(shù)值降低,Hb 升高, 二者程度均較為明顯, 病癥好轉(zhuǎn), 提示抗-M抗體致HDFN 直抗結(jié)果最終可能為陰性, 誤診、漏診情況極易發(fā)生［13］。

本文所選微柱凝膠卡屬ABO-CDE 卡, 無O 細(xì)胞孔, A、B 細(xì)胞二者均為反定型孔。本文納入8500 份標(biāo)本, 經(jīng)檢測可見, 正反定型不符68 份, 從中抽取的18 份典型標(biāo)本中, O 型標(biāo)本2 份, 這2 份標(biāo)本微住凝膠卡數(shù)值顯示, 其正反定型不符合, 經(jīng)檢測有含鹽水類的不規(guī)則抗體存在, 由于常規(guī)檢測項目中并無反定型檢測O 細(xì)胞的項目, 極易出現(xiàn)漏診情況。人類遺傳學(xué)曾記載, 人群中P1 抗原占比約為34.28%, 而M 抗原約為70.36%, Le(a+)占比約為21.0%。需注意的是抗-Leb抗體、天然抗-M 抗體均可導(dǎo)致溶血性輸血反應(yīng), 獻(xiàn)血者血清內(nèi)若含有此抗體, 則不適宜獻(xiàn)血［14］。

所以, 在大批量檢測血型時, 將O 細(xì)胞對照組加入能顯著升高鹽水類中不規(guī)則抗體檢出率。而實踐中,抗-M 抗體在不同條件下表現(xiàn)不同, 有一定差異性存在, 不同患者應(yīng)給予不同管理, 明確抗-M 抗體臨床價值, 需要開展熱振幅檢測、測定抗體類別、抗體滴定等［15］。因而, 若需開展相關(guān)操作, 如移植評估等, 供體應(yīng)行小規(guī)模檢測, 含抗體篩查、交叉匹配, 確保了解供體抗體的水平, 移植成功率提高。本文僅有3 例患者接受了配合型對輸注, 并取得了確切療效, 無輸血不良反應(yīng)。因而, 檢測結(jié)果若顯示輸血者有潛在意義的抗體, 即使未檢測到此類抗體, 紅細(xì)胞輸注時, 還需關(guān)注確認(rèn)無對應(yīng)抗原, 以免再次發(fā)生免疫應(yīng)答。所以, 結(jié)合抗-M 抗體自身不同特性, 事前掌握自身有無抗-M抗體, 對于疾病診斷、治療手段選擇、優(yōu)選獻(xiàn)血者均可發(fā)揮較好的參照效果。