陳 偉，斯張國，李 靜，祝夕超，李法凱，邵新宇，鄭孟加，藺曉月，孫圣福＊

1 濟(jì)南市動物疫病預(yù)防與控制中心，山東濟(jì)南 250099

2 萊州市程郭畜牧獸醫(yī)站，山東煙臺 261437

3 山東省動物疫病預(yù)防與控制中心，山東濟(jì)南 250100

0 引言

牛副結(jié)核?。˙ovine Paratuberculosis）是由副結(jié)核分枝桿菌（M.Paratuberculosis）引起的傳染性疫病，主要感染家養(yǎng)和野生反芻動物，以牛慢性增生性、頑固性腸炎和進(jìn)行性消瘦為特征的人畜共患傳染病[1]。世界動物衛(wèi)生組織（OIE）將副結(jié)核病列為須通報動物疫病，我國將其列入三類動物疫病。目前，該病主要在奶牛和肉牛產(chǎn)業(yè)發(fā)達(dá)的國家和地區(qū)流行[2]，1973年，韓有庫[3]首次在臨床上從牛身上分離到副結(jié)核分枝桿菌，證實我國存在牛副結(jié)核病。近年來，全國大部分省、市、自治區(qū)均有牛副結(jié)核病報道[4～6]。由于大部分牛場均未進(jìn)行副結(jié)核免疫，臨床多采用血清學(xué)檢測方法進(jìn)行診斷和流行病學(xué)調(diào)查。本研究采集山東省部分規(guī)?；龅呐Ｑ鍢悠?，采用ELISA方法進(jìn)行抗體檢測，了解牛副結(jié)核病流行情況，為該病后續(xù)防控提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗樣品

在山東省抽檢養(yǎng)牛密集地市（濟(jì)南、泰安、日照、東營、德州和聊城等），群體內(nèi)按照發(fā)現(xiàn)疫病策略（置信區(qū)間95%、試驗敏感性100%、預(yù)期流行率10%）進(jìn)行抽樣。每個場點(diǎn)抽檢血清樣品30 份左右，共25 個牛場，采集樣品750 份。去除不合格血清12 份，合格血清樣品共738 份，其中13 個奶牛場采集血清樣品383 份，12 個肉牛場采集血清樣品355 份。

1.2 試驗材料

牛副結(jié)核分枝桿菌抗體檢測試劑盒，由IDEXX公司生產(chǎn)；酶標(biāo)儀Thermo-MK3，由美國賽默飛世爾科技公司生產(chǎn)；移液器Eppendorf。

1.3 試驗方法

試劑使用前需恢復(fù)室溫（18～26 ℃）。待檢血清樣品、陰陽性對照用稀釋液做20 倍稀釋，混勻，18～26 ℃孵育15 min至2 h。將100 μL預(yù)孵育樣品加入包被有抗原的微量反應(yīng)板。封板在18～26 ℃孵育45 min。每孔用300 μL洗滌液洗滌3 次。加入100 μL稀釋好的酶標(biāo)抗體，封板在18～26 ℃孵育30 min，再次洗滌，加入100 μL TMB底物液，避光在18～26 ℃孵育10 min，加入100 μL終止液，450 nm波長下檢測，計算結(jié)果。

1.4 結(jié)果判定

若樣品的S/P值小于或等于45%，判為MAP 抗體陰性。

若樣品的S/P值大于45%且小于55%，判為MAP抗體可疑，應(yīng)重新檢測。

若樣品的S/P值大于或等于55%，判為MAP 抗體陽性。

待檢樣品MAP抗體檢測為陽性，判定該份樣品為陽性；場群內(nèi)有1 份及以上樣品檢測為陽性，則該場群判定為陽性場。

2 結(jié)果與分析

2.1 奶牛場副結(jié)核分枝桿菌抗體檢測情況

共采集13 個奶牛場血清樣品383 份，采用ELISA方法進(jìn)行副結(jié)核分枝桿菌抗體檢測，其中6 個場點(diǎn)檢測到陽性樣品，群體陽性率46.15%，陽性群體中的個體陽性率為3.33%～30.00%，383 份樣品中有23 份樣品為陽性，總個體陽性率6.01%（表1）。

表1 奶牛場副結(jié)核分枝桿菌抗體檢測結(jié)果

表2 肉牛場副結(jié)核分枝桿菌抗體檢測結(jié)果

2.2 肉牛場副結(jié)核分枝桿菌抗體檢測情況

共采集12 個肉牛場血清樣品355 份，采用ELISA方法進(jìn)行副結(jié)核分枝桿菌抗體檢測，其中6 個場點(diǎn)檢測到陽性樣品，群體陽性率50.00%，陽性群體的個體陽性率3.33%～13.33%，355 份樣品中有12 份樣品為陽性，總個體陽性率為3.38%。

納稅人在學(xué)歷（學(xué)位）繼續(xù)教育期間按照每月400元定額扣除。個人接受本科及以下學(xué)歷（學(xué)位）繼續(xù)教育，符合規(guī)定條件的，可以選擇由其父母扣除，也可以選擇由本人扣除。

3 結(jié)論

3.1 山東省部分規(guī)模化牛場存在牛副結(jié)核病

從檢測結(jié)果分析，采用IDEXX牛副結(jié)核分枝桿菌抗體檢測試劑盒對待檢25 個牛場的738 份樣品進(jìn)行抗體檢測，群體陽性率和個體陽性率分別為48.00%和4.74%，由于待檢牛均未進(jìn)行牛副結(jié)核病的免疫，表明該省部分規(guī)?；龃嬖谂８苯Y(jié)核病感染。

3.2 不同品種牛對副結(jié)核分枝桿菌的易感性不同

奶牛場群體陽性率和個體陽性率分別為46.15%和6.01%，肉牛場的群體陽性率和個體陽性率分別為50.00%和3.38%。肉牛場的群體陽性率略高于奶牛場，可能與奶牛場管理水平較高有關(guān)。奶牛個體陽性率較肉牛高，且奶牛場陽性群體的個體陽性率比肉牛場高，說明奶牛對牛副結(jié)核病的易感性較肉牛高，這與其他學(xué)者對不同品種牛的牛副結(jié)核病檢測結(jié)果基本一致[7]。由于采樣場點(diǎn)和數(shù)量局限，本研究不能完全反映山東省牛副結(jié)核病的流行情況，但能反映部分牛場牛副結(jié)核病的流行情況。

4 討論

4.1 牛副結(jié)核病的危害

牛副結(jié)核病的危害主要是引起患牛消瘦、生產(chǎn)性能下降、飼料轉(zhuǎn)化率降低、產(chǎn)奶量下降、受胎間隔時間延長，引發(fā)乳房炎和繁殖障礙、易感染其他病原甚至造成死亡等。該病呈全球性分布，尤其是養(yǎng)牛發(fā)達(dá)國家如美國、英國、澳大利亞等受害更嚴(yán)重。2013 年美國奶牛的該病個體陽性率為5%～10%，牛群陽性率為91.1%[8]。英格蘭的調(diào)查材料表明，該病在英格蘭的流行率為18%。英國1969—1970年統(tǒng)計報告指出，該病是淘汰奶牛的第一病因，其次是不孕癥和流產(chǎn)[9]。牛副結(jié)核病可通過患病牛的乳、肉制品及內(nèi)臟器官或被污染環(huán)境、水源等感染人，表現(xiàn)為潰瘍性腸炎、過敏性腸道癥狀，未見人與人直接傳播的報道[10]。

4.2 牛副結(jié)核病的防控

國內(nèi)尚無商品化的牛副結(jié)核病疫苗，因此該病防控主要采用引種檢測、消毒滅源、生物安全管理等綜合性措施。該病主要發(fā)生在新生犢牛，年齡越小越易感，因此強(qiáng)化圍產(chǎn)期母牛及犢牛管理，減少犢牛接觸病原是預(yù)防該病的關(guān)鍵。此外，養(yǎng)牛企業(yè)應(yīng)嚴(yán)格做好引種檢疫，不從疫區(qū)引種。場外引種時做好檢測，檢測合格牛做好隔離，隔離45 天后方可混群飼養(yǎng)。同時，做好場區(qū)消毒滅源工作，副結(jié)核病可感染包括牛、羊、馬、豬、黃鼠狼在內(nèi)的多種動物，病畜和潛伏感染的帶菌畜是主要傳染源，其分泌乳汁和排出糞便、尿液，以及水源、生產(chǎn)工具等都是潛在傳染源，因此，做好場區(qū)消毒工作是該病防控的有效措施之一。

該病是一種人畜共患傳染病，科學(xué)防控不僅減少畜牧業(yè)經(jīng)濟(jì)損失，也是貫徹“人病獸防、關(guān)口前移”人畜共患病的防控策略之一。