滕向龍 朱錫元 鄒武軍

[摘要]?目的?探究CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白B（CCAAT?enhancer?binding?protein?beta，CEBPB）與四連接同源基因（four-jointed?box?kinase?1，F(xiàn)JX1）在結(jié)腸癌（colon?cancer，CC）中的調(diào)控關(guān)系及其對CC惡性進(jìn)展及血管生成的影響。方法?通過生物信息學(xué)分析FJX1和CEBPB在CC中的表達(dá)情況及二者之間的調(diào)控關(guān)系。利用實(shí)時熒光定量核酸擴(kuò)增檢測系統(tǒng)（real-time?quantitative?reverse?transcription?polymerase?chain?reaction，qRT-PCR）驗(yàn)證FJX1與CEBPB在CC細(xì)胞中的表達(dá)情況，利用染色質(zhì)免疫沉淀（chromatin?immunoprecipitation，CHIP）與雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證FJX1與CEBPB之間的結(jié)合關(guān)系。利用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑-8（cell?counting?kit-8，CCK-8）、劃痕試驗(yàn)、Transwell和血管形成實(shí)驗(yàn)檢測FJX1與CEBPB對CC細(xì)胞增殖、遷移、侵襲及血管形成能力的影響。結(jié)果?本研究發(fā)現(xiàn)FJX1在CC中高表達(dá)，抑制FJX1的表達(dá)會顯著抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的細(xì)胞增殖、遷移、侵襲及血管形成能力。CEBPB是FJX1的上游調(diào)控基因，且CEBPB在結(jié)腸癌中高表達(dá)。CHIP與雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，CEBPB可與FJX1相結(jié)合。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，轉(zhuǎn)錄因子CEBPB可通過激活FJX1的表達(dá)，從而促進(jìn)CC細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲及血管生成。結(jié)論?CEBPB/FJX1軸在CC的進(jìn)展中發(fā)揮促癌作用，提示CEBPB和FJX1可能是CC的潛在治療靶點(diǎn)。

[關(guān)鍵詞]?結(jié)腸癌；CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白B；四連接同源基因；血管生成；細(xì)胞增殖

[中圖分類號]?R735????[文獻(xiàn)標(biāo)識碼]?A ????[DOI]?10.3969/j.issn.1673-9701.2024.03.009

The?research?of?transcription?factor?CEBPB?activates?FJX1?to?promote?the?proliferation，?invasion，?migration?and?angiogenesis?of?colon?cancer?cells

TENG?Xianglong，?ZHU?Xiyuan，?ZOU?Wujun

Department?of?Anorectal?Surgery，?Lishui?People’s?Hospital，?Lishui?323000，?Zhejiang，?China

[Abstract]?Objective?To?explore?the?regulatory?relationship?between?CCAAT?enhancer?binding?protein?beta?（CEBPB）?and?four-jointed?box?kinase?1?（FJX1）?in?colon?cancer?and?their?effect?on?colon?cancer?（CC）?malignant?progression?and?angiogenesis.?Methods?Bioinformatics?was?used?to?analyze?the?expression?of?FJX1?and?CEBPB?in?CC?and?the?regulatory?relationship?between?them.?Real-time?quantitative?reverse?transcription?polymerase?chain?reaction?（qRT-PCR）?was?used?to?verify?the?expression?of?FJX1?and?CEBPB?in?CC?cells，?and?chromatin?immunoprecipitation?（CHIP）?and?dual?luciferase?assay?were?used?to?verify?the?binding?relationship?;between?FJX1?and?CEBPB.?The?effects?of?FJX1?and?CEBPB?on?the?viability，?migration，?invasion?and?angiogenesis?of?CC?cells?were?detected?by?cell?counting?kit-8?（CCK-8），?scratch?test，?Transwell?and?angiogenesis?test.?Results?This?study?revealed?that?FJX1?was?highly?expressed?in?CC.?Inhibiting?the?expression?of?FJX1?could?significantly?inhibit?the?cell?viability，?migration，?invasion?and?angiogenesis?of?CC?cells.?Subsequently，?we?found?that?CEBPB?was?an?upstream?regulatory?gene?of?FJX1，?and?CEBPB?was?highly?expressed?in?CC.?CHIP?and?dual?luciferase?experiments?showed?that?CEBPB?could?bind?to?FJX1.?The?results?of?cell?experiments?showed?that?the?transcription?factor?CEBPB?could?promote?the?proliferation，?migration，?invasion?and?angiogenesis?of?CC?cells?by?activating?FJX1.?Conclusion?CEBPB/FJX1?axis?played?a?cancer-promoting?role?in?the?progression?of?CC，?suggesting?that?CEBPB?and?FJX1?may?be?potential?therapeutic?targets?for?CC.

[Key?words]?Colon?cancer;?CEBPB;?FJX1;?Angiogenesis;?Cell?proliferation

結(jié)腸癌（colon?cancer，CC）是常見的消化道惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率均居于癌癥相關(guān)疾病的前列[1]。目前CC的治療手段主要有手術(shù)切除、放化療及靶向治療等，但仍常發(fā)生局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，患者預(yù)后并不理想[2-3]。據(jù)統(tǒng)計(jì)，無轉(zhuǎn)移、局部轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者的5年生存率分別為90%、70%和10%[3]。因此，尋找CC患者的新型治療靶點(diǎn)已成為當(dāng)今研究的主要熱點(diǎn)之一。多項(xiàng)研究證明，CC的侵襲能力與血管生成程度密切相關(guān)[4]。四連接同源基因（four-jointed?box?kinase?1，F(xiàn)JX1）在CC中低表達(dá)，且已有研究證明，F(xiàn)JX1與CC的血管生成相關(guān)[5]。本研究進(jìn)一步探究FJX1在CC細(xì)胞惡性進(jìn)展和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（human?umbilical?vein?endothelial?cells，HUVEC）血管生成中的機(jī)制，為CC的治療提供新的治療靶點(diǎn)和思路。

1??材料與方法

1.1??生信分析

利用TCGA中下載CC?mRNA表達(dá)量數(shù)據(jù)（正常樣本：41，腫瘤樣本：480），利用“edgeR”包對mRNA進(jìn)行差異表達(dá)分析（|logFC|>1，F(xiàn)DR<0.05）獲得DEmRNA。隨后，利用hTFtarget數(shù)據(jù)庫和ChIPBase數(shù)據(jù)庫預(yù)測CC中FJX1上游的潛在轉(zhuǎn)錄因子，通過Pearson相關(guān)性確定轉(zhuǎn)錄因子。利用JASPAR數(shù)據(jù)庫預(yù)測目標(biāo)基因與轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合位點(diǎn)，結(jié)合生信數(shù)據(jù)分析目標(biāo)基因的表達(dá)量。

1.2??細(xì)胞系培養(yǎng)

從美國菌種保存中心獲取人結(jié)腸上皮細(xì)胞系（fetal?human?colon，F(xiàn)HC）和3種CC細(xì)胞系（Caco-2、LoVo和HCT?116）。所有細(xì)胞系在補(bǔ)充10%胎牛血清?（fetal?bovine?serum，F(xiàn)BS）（購自美國Thermo?Fisher?Scientific公司）的RPMI-1640培養(yǎng)基（購自美國Cytiva公司），在含有5%CO2?37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。從中國北納生物科技有限公司購買人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（BNCC342247），利用DMEM+10%FBS培養(yǎng)基，在37℃、5%?CO2條件下的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，24h后，進(jìn)行后續(xù)相關(guān)實(shí)驗(yàn)。

1.3??細(xì)胞轉(zhuǎn)染

sh-FJX1、oe-CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白B（CCAAT?enhancer?binding?protein?beta，CEBPB）及對應(yīng)的陰性對照均購自中國銳博生物科技有限公司。使用購自美國Thermo?Fisher?Scientific公司的Lipofectamine?2000試劑盒，并根據(jù)試劑盒操作說明書將sh-FJX1、oe-CEBPB及對應(yīng)的陰性對照轉(zhuǎn)染到CC細(xì)胞中，48h后通過RT-qPCR評估轉(zhuǎn)染效率。

1.4??CCK-8檢測細(xì)胞活力

利用購自中國碧云天生物技術(shù)有限公司的細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑（cell?counting?kit-8，CCK-8）試劑盒評估細(xì)胞活力。轉(zhuǎn)染24h后，將細(xì)胞懸浮液接種至96孔板（8×103細(xì)胞/孔），隨后在0、24、48、72h時使用培養(yǎng)基稀釋10μl?CCK-8溶液并加入96孔板中，將細(xì)胞在37℃下培養(yǎng)1h。使用購自美國Thermo?Fisher?Scientific公司的分光光度計(jì)檢測450nm下的吸光度（A值）。

1.5??劃痕試驗(yàn)

將細(xì)胞接種在6孔板中（1×106細(xì)胞/孔），利用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)12h。當(dāng)細(xì)胞的融合率達(dá)到80%時，利用20μl的無菌槍頭垂直于細(xì)胞平面在細(xì)胞層面上進(jìn)行劃痕，利用顯微鏡進(jìn)行拍照。在37℃下培養(yǎng)48h后，利用顯微鏡再次進(jìn)行拍照，并使用購自美國National?Institutes?of?Health公司的ImageJ軟件測量劃痕寬度變化。

1.6??Transwell分析

采用Transwell實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞侵襲能力。將購自美國BD公司的Matrigel涂抹到Transwell上室中。轉(zhuǎn)染的細(xì)胞消化成單細(xì)胞后，將細(xì)胞（1×105）接種到腔室中并在無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)。然后，將含有10%?FBS的RPMI-1640加入下室中。在37℃、5%?CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，取出培養(yǎng)基。將入侵板上的細(xì)胞用4%多聚甲醛固定30min，隨后用PBS清洗3～5次，用0.1%結(jié)晶紫染色15min后用自來水洗滌。隨后，在購自日本Nikon公司的顯微鏡下觀察入侵的細(xì)胞。

1.7??體外血管形成實(shí)驗(yàn)

利用購自英國Abcam公司的Angiogenesis?Assay試劑盒，根據(jù)說明書要求，將細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular?matrix，ECM）溶液置于4℃下過夜，將其加入在預(yù)冷的24孔板中，隨后置于37℃下孵育固化1h。隨后將CC細(xì)胞的濃度調(diào)整為2×104細(xì)胞/100μl并接種到每孔中，將HUVEC加入培養(yǎng)基中37℃下孵育24h，然后將培養(yǎng)基倒置于顯微鏡下進(jìn)行拍照。觀察HUVEC血管形成情況，通過對血管形成數(shù)量和血管分支數(shù)量進(jìn)行計(jì)數(shù)，以評估血管形成能力。實(shí)驗(yàn)選取3個不同的視野進(jìn)行計(jì)數(shù)[6]。

1.8??實(shí)時熒光定量核酸擴(kuò)增檢測

使用購自日本TaKaRa公司的TRIzol?試劑提取總RNA，具體操作步驟參考Sun等[7]的實(shí)驗(yàn)。引物序列見表1。

1.9??ChIP實(shí)驗(yàn)

利用購自美國Cell?Signaling?Technology公司的SimpleChIP??Enzymatic?Chromatin?IP?Kit，參照試劑盒說明書，根據(jù)Sun等[7]的研究方法確定CEBPB與FJX1之間的結(jié)合關(guān)系。使用購自英國Abcam公司的anti-CEBPB（ab32358）及美國Cell?Signaling?Technology公司的ChIP-Grade?Protein?G?Magnetic?Beads進(jìn)行免疫沉淀，并通過實(shí)時熒光定量核酸擴(kuò)增檢測系統(tǒng)（real-time?quantitative?reverse?transcription?polymerase?chain?reaction，qRT-PCR）對量化基因表達(dá)進(jìn)行分析。此次研究中的結(jié)合位點(diǎn)引物序列見表2。

1.10??雙熒光素酶報(bào)告分析

將含有CEBPB結(jié)合位點(diǎn)的野生型和突變型FJX1序列插入pGL3熒光素酶報(bào)告載體中，構(gòu)建pGL3-promoter-FJX1-MUT、pGL3-promoter-FJX1-WT。然后分別將oe-NC/oe-CEBPB與上述兩個質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染到結(jié)腸癌細(xì)胞培養(yǎng)48h，根據(jù)說明書利用購自美國Promega公司的Luciferase?Activity?Assay?Kit檢測各轉(zhuǎn)染組熒光素酶活性。具體實(shí)驗(yàn)操作參考Liu等[8]的實(shí)驗(yàn)。

1.11??統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用GraphPad?Prism?7統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析，以3次獨(dú)立測量值的均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，采用Student-t和單因素方差分析組間差異。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2??結(jié)果

2.1??FJX1在CC中高表達(dá)

為探究FJX1在CC中的表達(dá)情況，本研究使用TCGA數(shù)據(jù)庫分析發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)JX1在CC組織中高表達(dá)，見圖1A，同時利用生存曲線進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)FJX1高表達(dá)與患者預(yù)后不良相關(guān)，見圖1B。隨后采用qRT-PCR對CC細(xì)胞系中FJX1的表達(dá)情況進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)與正常人FHC相比，CC細(xì)胞系中FJX1的表達(dá)水平顯著升高，見圖1C。與其他細(xì)胞系相比，HCT?116中FJX1表達(dá)量高（2.36±0.12），LoVo中FJX1的表達(dá)量低（1.86±0.16），因此，選取HCT?116和LoVo細(xì)胞系用于后續(xù)細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)。綜合以上結(jié)果可以看出，F(xiàn)JX1在CC中高表達(dá)。

2.2??FJX1過表達(dá)促進(jìn)CC惡性進(jìn)展

為探究FJX1與CC惡性進(jìn)展的關(guān)系，本研究構(gòu)建FJX1異常表達(dá)細(xì)胞系，分別為sh-NC/HCT?116（陰性對照組）和sh-FJX1/HCT?116（敲低FJX1組）、oe-NC/LoVo（陰性對照組）和oe-FJX1/LoVo（過表達(dá)FJX1組），利用qRT-PCR檢測細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率。結(jié)果顯示，在oe-FJX1組細(xì)胞中FJX1呈顯著上調(diào)表達(dá)，在sh-FJX1組細(xì)胞中FJX1呈顯著下調(diào)表達(dá)，見圖2A。CCK-8結(jié)果顯示，F(xiàn)JX1過表達(dá)可增加腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞活力，而沉默F(xiàn)JX1則表現(xiàn)出相反的結(jié)果，見圖2B。劃痕試驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，過表達(dá)FJX1，細(xì)胞的遷移和侵襲能力顯著增強(qiáng)；沉默F(xiàn)JX1則會抑制細(xì)胞的遷移和侵襲能力，見圖2C～2D。以上結(jié)果表明FJX1可促進(jìn)CC細(xì)胞遷移和侵襲能力，進(jìn)而促進(jìn)CC的惡性進(jìn)展。

2.3??FJX1過表達(dá)誘導(dǎo)CC血管生成

研究證明，血管生成在CC的發(fā)生和轉(zhuǎn)移中起至關(guān)重要的作用[5]。為進(jìn)一步探究FJX1與CC血管形成的關(guān)系，本研究利用不同處理組的細(xì)胞上清液與HUVEC細(xì)胞共培養(yǎng)。結(jié)果顯示，與對照組相比，過表達(dá)FJX1顯著刺激血管和分支點(diǎn)的形成；而沉默表達(dá)FJX1則表現(xiàn)出顯著抑制血管數(shù)量和分支點(diǎn)的形成，見圖3A～3B。綜上表明FJX1過表達(dá)誘導(dǎo)CC血管生成。

A.qRT-PCR檢測構(gòu)建FJX1異常表達(dá)細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染情況；B.CCK-8檢測不同處理組CC細(xì)胞的細(xì)胞活性；C.劃痕試驗(yàn)檢測不同處理組CC細(xì)胞遷移情況；D.Transwell實(shí)驗(yàn)檢測不同處理組CC細(xì)胞侵襲情況。*P<0.05

2.4??CEBPB是FJX1上游調(diào)控因子

為進(jìn)一步探究FXJ1調(diào)控CC惡性進(jìn)展及血管生成的作用機(jī)制，本研究利用hTFtarget數(shù)據(jù)庫和ChIPBase數(shù)據(jù)庫對CC中FJX1基因的轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)行預(yù)測，分別獲取343個潛在轉(zhuǎn)錄因子和33個潛在轉(zhuǎn)錄因子，將2個數(shù)據(jù)庫預(yù)測得到的轉(zhuǎn)錄因子與2985個差異上調(diào)基因取交集獲取5個差異的潛在轉(zhuǎn)錄因子，見圖4A。Pearson相關(guān)性發(fā)現(xiàn)FJX1與CEBPB之間呈正相關(guān)（R=0.49，P<0.05），利用t檢驗(yàn)分析CEBPB在CC中的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)CEBPB在CC中顯著高表達(dá)，見圖4B～C。此外，本研究發(fā)現(xiàn)CEBPB與FJX1轉(zhuǎn)錄本上游2000bp位置存在潛在結(jié)合位點(diǎn)，見圖4D。為驗(yàn)證結(jié)果的準(zhǔn)確性，本研究首先利用qRT-PCR檢測CEBPB在CC細(xì)胞系中的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)CEBPB在CC細(xì)胞系中顯著高表達(dá)，見圖4E。隨后，通過ChIP實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證CEBPB與FJX1之間的啟動子結(jié)合關(guān)系，發(fā)現(xiàn)CEBPB與FJX1之間存在結(jié)合關(guān)系，見圖4F。雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)也進(jìn)一步證實(shí)兩者之間存在結(jié)合關(guān)系，過表達(dá)CEBPB使野生型FJX1熒光素酶活性提高，而對突變型FJX1熒光素酶活性沒有影響，見圖4G。以上結(jié)果證明CEBPB是FJX1的上游轉(zhuǎn)錄因子。

2.5??CEBPB通過調(diào)節(jié)FJX1影響CC的惡性進(jìn)展及血管形成

為進(jìn)一步探究CEBPB對FJX1的影響，本研究利用HCT?116細(xì)胞系構(gòu)建異常表達(dá)細(xì)胞，分別為oe-NC+sh-NC、oe-CEBPB+sh-NC、oe-NC+sh-FJX1及oe-CEBPB+?sh-FJX1，并利用qRT-PCR檢測FJX1的表達(dá)情況，見圖5A。CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，CEBPB過表達(dá)可促進(jìn)CC細(xì)胞的細(xì)胞活力，進(jìn)一步沉默F(xiàn)JX1可逆轉(zhuǎn)CEBPB過表達(dá)對結(jié)腸癌細(xì)胞活性的促進(jìn)作用，見圖5B。劃痕試驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，CEBPB過表達(dá)促進(jìn)CC細(xì)胞的遷移和侵襲能力，CEBPB過表達(dá)的同時沉默F(xiàn)JX1使CC細(xì)胞遷移和侵襲情況恢復(fù)到oe-NC+sh-NC組水平，見圖5C～5D。血管形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在oe-CEBPB+sh-NC組中，?A.檢測在不同F(xiàn)JX1表達(dá)情況下HUVEC血管形成情況，并利用顯微鏡對血管形成情況進(jìn)行計(jì)數(shù)，其中虛線圓所指位置代表血管，箭頭所指位置代表血管分支；B.顯微鏡下血管分支計(jì)數(shù)，*P<0.05A.利用生信篩選FJX1的潛在上游轉(zhuǎn)錄因子；B.FJX1與CEBPB之間的Pearson相關(guān)性分析；C.CEBPB在CC組織和正常組織中的表達(dá)水平；D.CEBPB與FJX1的潛在結(jié)合位點(diǎn)；E.CEBPB在不同細(xì)胞系中的表達(dá)情況；F～G.?ChIP實(shí)驗(yàn)和雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證CEBPB與FJX1之間的啟動子結(jié)合關(guān)系；*P<0.05

A.qRT-PCR檢測不同處理組FJX1的表達(dá)情況；B.CCK8法檢測不同處理組CC細(xì)胞的細(xì)胞活性；C.劃痕試驗(yàn)檢測不同處理組CC細(xì)胞遷移能力；D.Transwell實(shí)驗(yàn)檢測不同處理組CC細(xì)胞侵襲變化情況；E.血管形成實(shí)驗(yàn)檢測HUVEC血管形成情況，其中虛線圓所指位置代表血管，箭頭所指位置代表血管分支；F.統(tǒng)計(jì)不同處理組血管數(shù)量形成情況；G.統(tǒng)計(jì)不同處理組血管分支情況。與oe-NC+sh-NC組比較，*P<0.05；與oe-NC+sh-FJX1組比較，#P<0.05

HUVEC細(xì)胞血管形成情況和分支點(diǎn)數(shù)量明顯增加，而oe-CEBPB+sh-FJX1組中HUVEC細(xì)胞血管形成數(shù)量和分支點(diǎn)數(shù)量明顯多于oe-NC+sh-FJX1組，表明過表達(dá)CEBPB可逆轉(zhuǎn)沉默F(xiàn)JX1對CC細(xì)胞血管形成的影響，見圖5E～G。由此可見，CEBPB可通過激活FJX1的表達(dá)，促進(jìn)CC細(xì)胞的惡性進(jìn)展及HUVEC細(xì)胞血管形成。

3??討論

CC的發(fā)展涉及多種生理過程，血管生成在腫瘤的增殖、遷移、侵襲中起重要的作用[9]。同時，血管生成也涉及細(xì)胞的增殖、遷移及管腔形成[10]?？刂瓢┌Y的血管生成是腫瘤治療的關(guān)鍵。目前，已有研究證明FJX1是血管生成的調(diào)節(jié)因子，且FJX1與腫瘤的惡性進(jìn)展密切相關(guān)。Cheng等[11]研究發(fā)現(xiàn)，miR-532-2p可通過抑制FJX1的表達(dá)，抑制結(jié)腸腺癌的惡性進(jìn)展。本研究發(fā)現(xiàn)FJX1在CC組織和細(xì)胞中均高表達(dá)，抑制FJX1的表達(dá)可減弱腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲能力和HUVEC細(xì)胞的血管形成能力，這與之前的研究報(bào)道一致。

本研究通過生信預(yù)測發(fā)現(xiàn)CEBPB是FJX1的上游轉(zhuǎn)錄因子，隨后利用分子實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證CEBPB與FJX1之間存在結(jié)合關(guān)系。已有研究證明CEBPB可調(diào)節(jié)多種細(xì)胞增殖、分化和凋亡。Yang等[12]的研究證實(shí)，抑制CEBPB/NF-κB信號軸，可抑制結(jié)直腸癌的生長，本研究結(jié)果與之一致，同時進(jìn)一步證實(shí)CC中CEBPB可通過調(diào)節(jié)FJX1的表達(dá)，促進(jìn)血管生成，進(jìn)一步完善FJX1在CC血管生成的作用機(jī)制。

本研究的不足為僅從細(xì)胞水平驗(yàn)證CEBPB與FJX1之間的調(diào)控關(guān)系及其對CC惡性進(jìn)展及血管生成的作用。未來仍需在動物水平上對這一結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。

[參考文獻(xiàn)]

[1] SUNG?H，?FERLAY?J，?SIEGEL?R?L，?et?al.?Global?cancer?statistics?2020：?GLOBOCAN?estimates?of?incidence?and?mortality?worldwide?for?36?cancers?in?185?countries[J].?CA?Cancer?J?Clin，?2021，?71（3）：?209–249.

[2] LI?C，?LIANG?X，?LIU?Y.?lncRNA?USP30-AS1?sponges?miR-765?and?modulates?the?progression?of?colon?cancer[J].?World?J?Surg?Oncol，?2022，?20（1）：?73.

[3] ZHU?X，?SHEN?Z，?MAN?D，?et?al.?miR-152-3p?Affects?the?progression?of?colon?cancer?via?the?KLF4/IFITM3?axis[J].?Comput?Math?Methods?Med，?2020，?2020：?8209504.

[4] HANSEN?T?F，?QVORTRUP?C，?PFEIFFER?P.?Angiogenesis?inhibitors?for?colorectal?cancer.?A?review?of?the?clinical?data[J].?Cancers?（Basel），?2021，?13（5）：?1031.

[5] AL-GREENE?N?T，?MEANS?A?L，?LU?P，?et?al.?Four?jointed?box?1?promotes?angiogenesis?and?is?associated?with?poor?patient?survival?in?colorectal?carcinoma[J].?PLoS?One，?2013，?8（7）：?e69660.

[6] GALIMBERTI?C，?PIEPOLI?T，?LETARI?O，?et?al.?CR13626：?A?novel?oral?brain?penetrant?tyrosine?kinase?inhibitor?that?reduces?tumor?growth?and?prolongs?survival?in?a?mouse&nbsp;model?of?glioblastoma[J].?Am?J?Cancer?Res，?2021，?11（7）：?3558–3574.

[7] SUN?X，?JEFFERSON?P，?ZHOU?Q，?et?al.?Dominant-?negative?ATF5?compromises?cancer?cell?survival?by?targeting?CEBPB?and?CEBPD[J].?Mol?Cancer?Res，?2020，?18（2）：?216–228.

[8] LIU?Y，?LIANG?L，?JI?L，?et?al.?Potentiated?lung?adenocarcinoma?（LUAD）?cell?growth，?migration?and?invasion?by?lncRNA?DARS-AS1?via?miR-188-5p/?KLF12?axis[J].?Aging?（Albany?NY），?2021，?13（19）：?23376–23392.

[9] YI?M，?JIAO?D，?QIN?S，?et?al.?Synergistic?effect?of?immune?checkpoint?blockade?and?anti-angiogenesis?in?cancer?treatment[J].?Mol?Cancer，?2019，?18（1）：?60.

[10] ZHANG?S，?WANG?Y，?CHEN?M，?et?al.?CXCL12?methylation-mediated?epigenetic?regulation?of?gene?expression?in?papillary?thyroid?carcinoma[J].?Sci?Rep，?2017，?7：?44033.

[11] CHENG?T，?ZHU?X，?LU?J，?et?al.?MiR-532-3p?suppresses?cell?proliferation，?migration?and?invasion?of?colon?adenocarcinoma?via?targeting?FJX1[J].?Pathol?Res?Pract，?2022，?232：?153835.

[12] YANG?X，?ZOU?J，?CAI?H，?et?al.?Ginsenoside?Rg3?inhibits?colorectal?tumor?growth?via?down-regulation?of?C/EBPbeta/NF-kappaB?signaling[J].?Biomed?Pharmacother，?2017，?96：?1240–1245.

（收稿日期：2022–12–21）

（修回日期：2023–12–15）

《中國現(xiàn)代醫(yī)生》雜志誠聘審稿專家的啟事

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