于層 徐麗娟 方超 聶奔

(青島市中醫(yī)醫(yī)院(市海慈醫(yī)院) 青島大學(xué)附屬青島市海慈醫(yī)院 1病理科,山東 青島 266033;2腫瘤科)

我國(guó)癌癥新發(fā)病例約占全球新發(fā)病例的23%,約占全球死亡病例的30%〔1〕。非小細(xì)胞肺癌占癌癥總數(shù)的15%～20%,早期癥狀不典型,容易被忽視,當(dāng)出現(xiàn)聲音嘶啞、血痰、上肢水腫等典型臨床癥狀時(shí)已處于晚期〔2〕。隨著近年來(lái)腫瘤治療技術(shù)的進(jìn)步,涌現(xiàn)出了免疫治療、靶向治療、介入治療等多種新型治療手段,晚期非小細(xì)胞肺癌患者病情復(fù)雜,加之老年患者身體功能出現(xiàn)不同程度降低,準(zhǔn)確評(píng)估預(yù)后對(duì)治療方案的合理制定具有重要意義〔3〕。表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)、細(xì)胞周期蛋白(Cyclin)D1、嗜鉻粒蛋白(CG)A、細(xì)胞角蛋白(CK)7是近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)的腫瘤標(biāo)志物,在乳腺癌、肺癌等患者中表達(dá)特點(diǎn)已有部分研究報(bào)道〔4,5〕,但關(guān)于其在老年非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后評(píng)估中的應(yīng)用價(jià)值仍未見(jiàn)研究報(bào)道。本研究旨在探討老年非小細(xì)胞肺癌患者EGFR、CyclinD1、CGA、CK7與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。

1 對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象 選取2019年1月至2020年3月青島市中醫(yī)醫(yī)院收治的老年非小細(xì)胞肺癌患者95例。入選標(biāo)準(zhǔn):①年齡≥60歲,經(jīng)組織病理學(xué)檢查確診為非小細(xì)胞肺癌;②治療方案參照美國(guó)NCCN非小細(xì)胞肺癌指南進(jìn)行規(guī)范化治療;③符合手術(shù)適應(yīng)證,自愿行手術(shù)治療,出院后自愿接受跟蹤隨訪。排除標(biāo)準(zhǔn):①合并認(rèn)知障礙、重要臟器功能異常、精神性疾病者;②同時(shí)存在其他惡性腫瘤者;③復(fù)發(fā)性非小細(xì)胞肺癌?；颊咂骄挲g(68.52±7.39)歲;本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn),患者簽署知情同意書(shū)。

1.2EGFR、CyclinD1、CGA、CK7表達(dá)檢測(cè) 收集老年非小細(xì)胞肺癌患者手術(shù)切除的腫瘤組織和癌旁正常組織標(biāo)本,常規(guī)石蠟包埋后切片,免疫組化法檢測(cè)EGFR、CyclinD1、CGA、CK7表達(dá)水平。具體過(guò)程:組織切片乙醇水化后用磷酸緩沖液浸洗3次,使用3%過(guò)氧化氫孵育30 min,去除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性,之后磷酸緩沖液浸洗3次;放入枸櫞酸鹽抗原修復(fù)溶液中95 ℃修復(fù)20 min,室溫下冷卻,加入山羊血清封閉液(10%)靜置20 min。滴加鼠抗人EGFR單克隆抗體、鼠抗人CyclinD1單克隆抗體、兔抗人CGA單克隆抗體、兔抗人CK7單克隆抗體,稀釋倍數(shù)均為1∶1 000,同時(shí)滴加鼠抗人β-actin單克隆抗體,稀釋倍數(shù)為1∶2 000;滴加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗,稀釋倍數(shù)1∶4 000,磷酸緩沖液洗片3次,每次3 min;二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色、蘇木素復(fù)染1 min,脫水、封片,梯度乙醇脫水、二甲苯透明、中性樹(shù)膠封片。

1.3免疫組化結(jié)果判讀 將切片放于光學(xué)顯微鏡下計(jì)數(shù),放大倍數(shù)400倍,隨機(jī)計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞,計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞比例,根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞比例和染色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分。陽(yáng)性細(xì)胞比例:0%～4%(0分)、5%～19%(1分)、20%～49%(2分)、≥50%(3分)。染色強(qiáng)度:無(wú)色(0分)、淺棕色(1分)、棕黃色(2分)、棕褐色(3分)。以陽(yáng)性細(xì)胞比例評(píng)分與染色強(qiáng)度評(píng)分的乘積判定結(jié)果,陰性(0分)、弱陽(yáng)性(1～2分)、中等陽(yáng)性(3～4分)、強(qiáng)陽(yáng)性(>4分),將中等陽(yáng)性和強(qiáng)陽(yáng)性記為陽(yáng)性。

1.4資料收集與隨訪 收集患者人口學(xué)特征(性別、年齡、吸煙史),臨床病理指標(biāo)(組織學(xué)類型、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、分化程度、被膜侵犯情況、腫瘤直徑)。出院后進(jìn)行3年隨訪,采取定期來(lái)院復(fù)查、患者自感不適時(shí)隨訪的方式進(jìn)行,通過(guò)影像學(xué)結(jié)合病理檢查進(jìn)行診斷,將腫瘤手術(shù)切除的殘端發(fā)生病變納入復(fù)發(fā)組,其余納入未復(fù)發(fā)組。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS25.0軟件進(jìn)行方差分析、LSD-t檢驗(yàn)及χ2檢驗(yàn)。使用受試者工作特征(ROC)曲線檢測(cè)EGFR、CyclinD1、CGA、CK7陽(yáng)性率對(duì)老年非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的評(píng)估價(jià)值。

2 結(jié) 果

2.1腫瘤組織與癌胚組織EGFR、CyclinD1、CGA、CK7陽(yáng)性表達(dá)率比較 肺癌組織EGFR、CyclinD1、CGA、CK7陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于癌旁組織(P<0.01)。見(jiàn)表1。

表1 腫瘤組織與癌胚組織EGFR、CyclinD1、CGA、CK7陽(yáng)性表達(dá)率比較〔n(%),n=95〕

2.2不同預(yù)后患者EGFR、CyclinD1、CGA、CK7陽(yáng)性率比較 95例老年非小細(xì)胞肺癌患者隨訪期間病情復(fù)發(fā)57例(60.00%)。復(fù)發(fā)組EGFR、CyclinD1、CGA、CK7陽(yáng)性率明顯高于未復(fù)發(fā)組(P<0.01)。見(jiàn)表2。

2.3不同臨床病理特征患者EGFR、CyclinD1、CGA、CK7陽(yáng)性表達(dá)率比較 EGFR、CyclinD1、CGA、CK7陽(yáng)性表達(dá)率在不同性別、年齡、吸煙史、腫瘤直徑患者間比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);EGFR、CyclinD1、CGA、CK7陽(yáng)性表達(dá)率在不同組織學(xué)類型、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、被膜侵犯情況比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見(jiàn)表3。

2.4不同預(yù)后患者臨床病理特征比較 兩組性別、年齡、吸煙史、組織學(xué)類型比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);兩組被膜侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、分化程度、腫瘤直徑比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見(jiàn)表4。

表4 不同預(yù)后患者臨床病理特征比較〔n(%)〕

2.5老年非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后多因素Logistic回歸分析 以老年非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后情況為因變量(未復(fù)發(fā)=0,復(fù)發(fā)=1),被膜侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、分化程度、腫瘤直徑及EGFR、CyclinD1、CGA、CK7表達(dá)情況為自變量,進(jìn)行多因素Logistic回歸分析顯示,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、分化程度、EGFR、CyclinD1、CGA、CK7是患者預(yù)后的獨(dú)立影響因素。見(jiàn)表5。

表5 老年非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的多因素Logistic回歸分析

2.6EGFR、CyclinD1、CGA、CK7對(duì)老年非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的評(píng)估價(jià)值分析 EGFR、CyclinD1、CGA、CK7陽(yáng)性率對(duì)患者預(yù)后均具有較高的評(píng)估價(jià)值(P<0.01);其中各指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)對(duì)患者預(yù)后的評(píng)估價(jià)值最高〔曲線下面積(AUC)=0.950〕,特異度、陽(yáng)性評(píng)估值均明顯高于各指標(biāo)單獨(dú)檢測(cè)。見(jiàn)圖1、表6。

圖1 EGFR、CyclinD1、CGA、CK7評(píng)估老年非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的ROC曲線

表6 EGFR、CyclinD1、CGA、CK7對(duì)老年非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的評(píng)估價(jià)值

3 討 論

肺癌位居我國(guó)惡性腫瘤致死疾病的第一位,呈上升趨勢(shì)〔6〕,非小細(xì)胞肺癌是原發(fā)性肺癌最常見(jiàn)的類型,具有惡性程度高、侵襲力強(qiáng)的特點(diǎn),超過(guò)60%的肺癌患者就診時(shí)已達(dá)到晚期〔7〕。EGFR屬于表皮生長(zhǎng)因子受體家族,在人體成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞等細(xì)胞表面均有分布,能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化等過(guò)程〔8〕。超過(guò)50%的非小細(xì)胞肺癌患者腫瘤組織中EGFR呈不同程度高表達(dá),EGFR基因突變率約為48%〔9〕。亦有研究顯示,EGFR過(guò)表達(dá)參與腫瘤細(xì)胞的增殖、分化、轉(zhuǎn)移、血管生成等過(guò)程〔10〕。CyclinD1在細(xì)胞周期調(diào)控中發(fā)揮重要作用,能夠使細(xì)胞從G1期轉(zhuǎn)化為S期,當(dāng)其過(guò)表達(dá)時(shí)會(huì)縮短細(xì)胞周期,促進(jìn)細(xì)胞增殖,導(dǎo)致細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化〔11〕。CGA是一種神經(jīng)肽類物質(zhì),為可溶性抗原顆?；堑鞍?具有親水性,廣泛存在于神經(jīng)系統(tǒng)、腎上腺髓質(zhì)系統(tǒng)等正常細(xì)胞中。神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤中普遍存在CGA高表達(dá)〔12〕;CGA參與調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)中活性物質(zhì)的儲(chǔ)存、釋放,動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)可用于評(píng)估腫瘤預(yù)后〔13〕。CK7是一種堿性細(xì)胞角蛋白,穩(wěn)定表達(dá)于上皮組織中,在肺、乳腺、胰腺等組織中也存在表達(dá)〔14〕。相關(guān)研究顯示,CK7能夠誘發(fā)細(xì)胞惡性病變,作為惡性病變和進(jìn)展的啟動(dòng)因子,在惡性腫瘤組織中高表達(dá)〔15〕;CK7可誘導(dǎo)形成腫瘤細(xì)胞侵襲性偽足,加速細(xì)胞增殖和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,是不良預(yù)后的主要原因之一〔16〕。

本研究結(jié)果提示,EGFR、CyclinD1、CGA、CK7在老年非小細(xì)胞肺癌患者中高表達(dá),且與組織學(xué)類型、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、被膜侵犯情況密切相關(guān)。臨床病理特征與患者病情嚴(yán)重程度密切相關(guān),通過(guò)EGFR、CyclinD1、CGA、CK7檢測(cè)可以有效評(píng)估老年非小細(xì)胞肺癌患者的病情嚴(yán)重程度,為指導(dǎo)臨床治療提供參考依據(jù)。本文老年非小細(xì)胞肺癌患者疾病復(fù)發(fā)率(60.00%)與相關(guān)研究中老年非小細(xì)胞肺癌患者3年復(fù)發(fā)率58.2%、61.75%基本一致〔17,18〕,說(shuō)明患者總體預(yù)后仍不理想,需要在治療方案選擇上進(jìn)一步優(yōu)化。本研究結(jié)果表明,有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期高、分化程度低的患者腫瘤惡性程度高,治療難度大,預(yù)后不理想。EGFR、CyclinD1、CGA、CK7陽(yáng)性率對(duì)患者預(yù)后均具有較高的評(píng)估價(jià)值,其中各指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)的評(píng)估價(jià)值最高,可用于老年非小細(xì)胞肺癌患者的預(yù)后評(píng)估,為治療方案的選擇提供參考依據(jù)。