陳雪花,陳建平,2*,羅寶湞,李佳睿,李瑞,2,劉曉菲,2,宋兵兵,2,鐘賽意,2

1(廣東海洋大學(xué) 食品科技學(xué)院,廣東省水產(chǎn)品加工與安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣東省海洋生物制品工程實(shí)驗(yàn)室, 廣東省海洋食品工程技術(shù)研究中心,水產(chǎn)品深加工廣東普通高等學(xué)校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣東省亞熱帶果蔬加工科技創(chuàng)新中心, 廣東 湛江,524088)2(海洋食品精深加工關(guān)鍵技術(shù)省部共建協(xié)同創(chuàng)新中心(大連工業(yè)大學(xué)),遼寧 大連,116034)

在全球范圍內(nèi),宮頸癌是所有腫瘤疾病中導(dǎo)致女性死亡的第一或第二大誘因[1]。眾所周知,腫瘤的轉(zhuǎn)移是一個(gè)涉及細(xì)胞遷移和侵襲的復(fù)雜過程[2]?；|(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMPs)被認(rèn)為是與腫瘤侵襲和遷移相關(guān)的重要蛋白酶,其中,基質(zhì)金屬蛋白酶-2(matrix metalloproteinase 2, MMP-2)和基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase 9, MMP-9)在腫瘤轉(zhuǎn)移中起著非常關(guān)鍵的作用,它們參與破壞I型和IV型膠原蛋白細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix, ECM),從而促進(jìn)癌癥的轉(zhuǎn)移[3-4]。因此,下調(diào)MMP-2和MMP-9蛋白的表達(dá)可能是抑制細(xì)胞遷移和侵襲的有效策略。

作為公認(rèn)的微量元素,硒被發(fā)現(xiàn)在納米尺度下,其理化性質(zhì)會(huì)發(fā)生巨大變化,具有高效、低毒、吸收利用率高等獨(dú)特的生物學(xué)效應(yīng)[5-6]。但是,納米硒(selenium nanoparticles, SeNPs)因具有較高的表面能,在水溶液中容易聚集成灰色和黑色元素硒,導(dǎo)致其生物活性和生物利用度降低,從而限制了它的應(yīng)用[7]。因此,為了獲得穩(wěn)定的SeNPs,在制備過程中通常會(huì)加入穩(wěn)定劑,不僅可以防止納米硒聚沉,還能提高其生物活性。目前,常用的穩(wěn)定劑有多糖[8]、蛋白質(zhì)[9]、多肽[10]和多酚等[11]。其中,多糖因其復(fù)雜的支鏈結(jié)構(gòu)和豐富的羥基被認(rèn)為是天然、安全、方便和環(huán)保的分散劑[12]。此外,多糖也具有良好的水溶性和抗腫瘤等生物活性[13]。硫酸軟骨素(chondroitin sulfate, CS)是一種硫酸化的線性黏多糖。研究發(fā)現(xiàn),CS無毒性且生物相容性良好,骨架中含有大量活潑基團(tuán),易于實(shí)現(xiàn)疏水性化學(xué)修飾和聚合物接枝,具有抗氧化、抗腫瘤、抗血栓等多種生理活性[14-17]。

基于上述的優(yōu)點(diǎn),本文選擇CS作為穩(wěn)定劑對(duì)納米硒進(jìn)行修飾制備硫酸軟骨素納米硒(selenium-chondroitin sulfate nanoparticles, SeCS),希望實(shí)現(xiàn)CS和SeNPs協(xié)同抗腫瘤的效果。同時(shí),還未見SeCS抑制人宮頸癌HeLa細(xì)胞遷移和侵襲的相關(guān)報(bào)道。故本文以Hela細(xì)胞為研究對(duì)象,進(jìn)一步考察SeCS對(duì)Hela細(xì)胞遷移和侵襲的影響,為SeCS作為一種新型的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制劑提供理論依據(jù)和數(shù)據(jù)參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

硫酸軟骨素納米硒,實(shí)驗(yàn)室自制;硫酸軟骨素(95%純度,貨號(hào)C107703),阿拉丁試劑(上海)有限公司;胎牛血清、PBS、DMEM高糖培養(yǎng)基、0.25%胰蛋白酶溶液和雙抗溶液,美國(guó)Gibco公司;Hela人宮頸癌細(xì)胞,美國(guó)ATCC公司;Matrigel基質(zhì)膠含酚紅和草酸銨結(jié)晶紫染色液(0.1%),北京索萊寶公司;4%多聚甲醛,廣州碩譜生物科技有限公司;PVDF膜浸潤(rùn)活化液、BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒、RIPA裂解液(強(qiáng))、SDS-PAGE電泳液(Tris-Gly,Powder)、TBSTw(TBS+Tween-20)、Western轉(zhuǎn)膜液、Western一抗稀釋液、Western二抗稀釋液、QuickBlockTMWestern封閉液、BeyoGelTMPlus PAGE預(yù)制膠(Tris-Gly,8%,15孔)、ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒和辣根過氧化物酶標(biāo)記山羊抗兔IgG(H+L),上海碧云天生物技術(shù)公司;GAPDH抗體、MMP-2抗體和MMP-9抗體,維百奧(北京)生物科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

AUW120電子天平,日本島津公司;HL-6數(shù)顯恒溫水浴鍋,常州奧華儀器有限公司;FD8508真空冷凍干燥機(jī),韓國(guó)ilshin公司;JEM-1400plus透射電子顯微鏡,日本JEOL公司;K-Alpha X射線光電子能譜儀,美國(guó)Thermo Scientific公司;傅立葉紅外光譜儀,德國(guó)BRUKER公司;CKX41倒置顯微鏡,日本OLYMPUS公司;Tanon 5200全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光圖像分析系統(tǒng),廣州譽(yù)維生物科技儀器有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 SeCS的制備

參考CHEN等[18]的方法,略作修改。將摩爾質(zhì)量比為1∶8的Na2SeO3和抗壞血酸(維生素C)溶于30 mL 0.1 mg/mL的CS溶液中,在25 ℃下攪拌3 h。經(jīng)透析袋(分子質(zhì)量為3 500 kDa)透析48 h后,冷凍干燥得到所需的樣品SeCS。SeNPs的制備過程同SeCS,只是不添加CS。

1.3.2 SeCS的結(jié)構(gòu)表征

1.3.2.1 透射電鏡(transmission electron microscopy, TEM)觀察

運(yùn)用TEM觀察樣品的微觀形態(tài)。具體操作過程如下:將銅膜網(wǎng)格浸入樣品中,然后用醋酸雙氧鈾染色90 s,待干燥后,觀察樣品的微觀形態(tài)。

1.3.2.2 掃描電鏡(scanning electron microscopy, SEM)觀察

將少量樣品均勻地分散在導(dǎo)電雙面膠上進(jìn)行固定,隨后放入離子濺射鍍膜儀中,在真空環(huán)境下對(duì)樣品進(jìn)行表面噴金處理,鍍金條件為工作電壓15 keV和工作電流15 mA,在不同放大倍數(shù)下觀察樣品形貌。

1.3.2.3 X射線光電子能譜儀(X-ray photoelectron spectroscopy, XPS)分析

運(yùn)用XPS對(duì)樣品的硒價(jià)態(tài)進(jìn)行分析。具體參數(shù)如下:分析室工作時(shí)真空度優(yōu)于5×10-7mBar;使用單色Al Kα源(能量1 486.6 eV)為X光源,在工作電壓12 kV,燈絲電流6 mA條件下進(jìn)行樣品的XPS測(cè)試。

1.3.2.4 傅立葉紅外光譜儀(Fourier transform infrared spectroscopy, FTIR)分析

取2.0 mg樣品與KBr粉末以質(zhì)量比1∶100的比例混合,研磨均勻后壓片至透明薄片,在掃描波長(zhǎng)為4 000～400 cm-1的條件進(jìn)行檢測(cè)。

1.3.3 劃痕試驗(yàn)檢測(cè)Hela細(xì)胞的愈合能力[19]

Hela細(xì)胞按2×105個(gè)/孔接種于24孔板,待細(xì)胞融合度達(dá)到90%以上時(shí),用10 μL槍頭于孔板中央做垂直劃痕,再用PBS清洗3遍除去劃下的懸浮細(xì)胞,然后,實(shí)驗(yàn)組每孔分別加入1 mL 20 μg/mL CS、SeNPS和SeCS的無血清培養(yǎng)基;空白對(duì)照組加入1 mL的無血清培養(yǎng)基。將處理后的細(xì)胞放入培養(yǎng)箱(37 ℃、5% CO2)中繼續(xù)培養(yǎng),在劃痕后0、24、48 h對(duì)劃痕區(qū)域隨機(jī)選擇5個(gè)點(diǎn)進(jìn)行拍照,用Image J軟件計(jì)算劃痕愈合率。愈合率的計(jì)算如公式(1)所示:

1.3.4 Transwell小室檢測(cè)Hela細(xì)胞的遷移能力

采用20 μg/mL CS、SeNPs和SeCS分別處理Hela細(xì)胞48 h,然后,細(xì)胞經(jīng)消化、離心和無血清培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后,以5×105個(gè)/孔的細(xì)胞密度接種于Transwell上室,每孔200 μL,下室中加入600 μL含20%(體積分?jǐn)?shù))血清的培養(yǎng)基。然后,Transwell小室放入培養(yǎng)箱(37 ℃、5% CO2)中培養(yǎng)48 h,取出上室經(jīng)PBS反復(fù)潤(rùn)洗后,加入4%多聚甲醛固定30 min,結(jié)晶紫染色5 min,用棉簽蘸取PBS擦去上室內(nèi)未遷移的細(xì)胞,隨機(jī)選取5個(gè)視野(200×)觀察并計(jì)數(shù)穿越小室的細(xì)胞數(shù)目。遷移率的計(jì)算如公式(2)所示:

1.3.5 Transwell小室檢測(cè)Hela細(xì)胞的侵襲能力[20]

將Matrigel基質(zhì)膠涂在Transwell小室上,置于培養(yǎng)箱(37 ℃、5% CO2)固化1 h。采用20 μg/mL CS、SeNPs和SeCS分別處理Hela細(xì)胞48 h,然后,細(xì)胞經(jīng)消化、離心和無血清培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后,以5×105個(gè)/孔的細(xì)胞密度接種于Transwell上室,每孔200 μL,下室中加入600 μL含20%血清的培養(yǎng)基。然后,Transwell小室放入培養(yǎng)箱(37 ℃、5% CO2)中培養(yǎng)48 h,取出上室經(jīng)PBS反復(fù)潤(rùn)洗后,加入4%多聚甲醛固定30 min,結(jié)晶紫染色5 min,用棉簽蘸取PBS擦去上室內(nèi)未遷移的細(xì)胞,隨機(jī)選取5個(gè)視野(200×)觀察并計(jì)數(shù)穿越小室的細(xì)胞數(shù)目。侵襲率的計(jì)算如公式(3)所示:

1.3.6 Western blot檢測(cè)MMP-2和MMP-9蛋白表達(dá)水平

20 μg/mL CS、SeNPs和SeCS分別處理Hela細(xì)胞48 h,經(jīng)胰酶消化后,加入RIPA裂解液提取蛋白,用BCA試劑盒測(cè)定樣品的蛋白濃度。樣品經(jīng)SDS-PAGE垂直板電泳后,電轉(zhuǎn)至PVDF膜上。PVDF膜經(jīng)封閉液封閉1 h后,加入一抗置于4 ℃下過夜孵育。然后,將PVDF膜放入對(duì)應(yīng)的二抗中孵育2 h,經(jīng)TBST洗膜3次后,采用ECL對(duì)膜進(jìn)行顯色,用化學(xué)發(fā)光成像儀進(jìn)行拍照,計(jì)算機(jī)掃描并分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

1.3.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

每次實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,采用單因素方差分析方法分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 TEM觀察SeCS的形態(tài)和大小

采用TEM對(duì)SeCS和SeNPs的形態(tài)和尺寸進(jìn)行表征。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1所示。由圖1-a和圖1-c可知,SeNPs嚴(yán)重聚集形成大顆粒,表明SeNPs極不穩(wěn)定。由圖1-b和圖1-d可知,SeCS為尺寸相對(duì)較小的單分散且均勻的球形顆粒,表明SeNPs經(jīng)CS修飾后能夠阻止SeNPs顆粒的聚集從而起到分散和穩(wěn)定SeNPs的作用。此外,由圖1可知,SeCS的粒徑明顯小于SeNPs。

a,c-SeNPs;b,d-SeCS圖1 SeNPs和SeCS的透射電鏡圖Fig.1 TEM of SeNPs and SeCS

2.2 SEM觀察SeCS的表面形貌

采用SEM對(duì)SeCS的表面形貌進(jìn)行檢測(cè),實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2所示。由圖2-a和圖2-c可知,SeNPs易聚集,形成拐棗形狀的聚集體。而SeNPs經(jīng)CS修飾形成SeCS后,形成大小均一的球形顆粒,說明CS可有效防止SeNPs的團(tuán)聚沉淀(圖2-b、圖2-d)。

a,c-SeNPs; b,d-SeCS圖2 SeNPs和SeCS的掃描電鏡圖Fig.2 SEM of SeNPs and SeCS

2.3 XPS測(cè)定SeCS的硒價(jià)態(tài)

采用XPS分析SeCS中硒元素的價(jià)態(tài),實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖3所示。由圖3-a可知,SeNPs中Se的電子結(jié)合能為54.78 eV,根據(jù)HAN等[21]報(bào)道零價(jià)硒的電子結(jié)合能位于54.6～57.5 eV可知,該峰為零價(jià)硒電子結(jié)合能峰位。由圖3-b可知,SeCS中Se的電子結(jié)合能峰位為54.58 eV,與SeNPs中Se的電子結(jié)合能峰位相近,表明SeCS中的Se也是以零價(jià)硒的形式存在。

a-SeNPs; b-SeCS圖3 SeNPs和SeCS的XPS圖Fig.3 XPS diagrams of SeNPs and SeCS

2.4 FTIR測(cè)定SeCS的特征基團(tuán)

采用FTIR技術(shù)表征SeCS中CS與SeNPs的結(jié)合方式,實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖4所示。SeNPs的紅外光譜圖沒有出現(xiàn)明顯的特征吸收峰,這跟前人的報(bào)道基本一致[22]。然而,相比SeNPs,SeCS在3 400 cm-1附近有一寬峰,這可能是由于CS中羥基的伸縮振動(dòng)引起的。此外,在1 620和1 415 cm-1附近出現(xiàn)了CS中乙酰氨基的N-H伸縮振動(dòng)和羧基的振動(dòng),且在1 200～800 cm-1有硫酸基的特征吸收峰[23]。綜上可知,SeCS中存在CS的特征吸收峰,提示CS可能通過吸附作用修飾在SeNPs的表面。

圖4 SeNPs和SeCS的紅外光譜圖Fig.4 FTIR diagrams of SeNPs and SeCS

2.5 劃痕試驗(yàn)檢測(cè)Hela細(xì)胞的愈合能力

采用劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)SeCS對(duì)Hela細(xì)胞愈合能力的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖5所示。由圖5-a可知,細(xì)胞經(jīng)SeNPs和SeCS分別處理24和48 h后,SeCS處理組中劃痕留下的空隙大于SeNPs,說明SeCS處理后的細(xì)胞劃痕愈合的程度弱于SeNPs。而且,當(dāng)處理時(shí)間為48 h時(shí),SeCS處理組中的細(xì)胞愈合率僅為(6.85±1.30)%,顯著低于SeNPs處理組中的愈合率(19.06±1.61)%(圖5-b),表明SeCS抑制細(xì)胞愈合的能力強(qiáng)于SeNPs。而CS在24 h時(shí)沒有表現(xiàn)出明顯的抑制細(xì)胞愈合的能力,隨著時(shí)間的延長(zhǎng),雖然相比空白對(duì)照組,愈合率有所下降,但沒有顯著差異。綜上可知,CS與SeNPs結(jié)合形成SeCS后,抑制細(xì)胞愈合的能力顯著上升。

a-20 μg/mL CS、SeNPs和SeCS處理0、24、48 h后劃傷Hela 細(xì)胞的顯微鏡照片(50×);b-Hela細(xì)胞劃痕愈合率柱狀圖圖5 不同處理對(duì)Hela細(xì)胞愈合能力的影響Fig.5 Effects of different treatments on healing ability of Hela cells 注:與空白對(duì)照組相比:*P<0.05,與SeNPs組相比: ##P<0.01(下同)。

2.6 Transwell小室檢測(cè)Hela細(xì)胞遷移能力

采用Transwell法測(cè)定SeCS對(duì)Hela細(xì)胞遷移能力的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖6所示。由圖6-a可知,細(xì)胞經(jīng)CS和SeNPs處理后,與空白對(duì)照組相比,遷移至下室的細(xì)胞雖有所減少,但效果不明顯。而SeCS處理細(xì)胞后,與CS和SeNPs相比,遷移至下室的細(xì)胞明顯減少,細(xì)胞聚集的密度顯著降低,表明SeCS使細(xì)胞的遷移穿透能力減弱。而且,SeCS處理細(xì)胞后,細(xì)胞的遷移率為(59.19±7.74)%,顯著低于CS組的遷移率(85.23±4.47)%和SeNPs處理組的遷移率(92.84±9.06)%(圖6-b),表明SeCS抑制細(xì)胞遷移的能力強(qiáng)于CS和SeNPs。

a-20 μg/mL CS、SeNPs和SeCS處理48 h后Hela細(xì)胞 遷移的顯微照片(200×);b-Hela細(xì)胞遷移率柱狀圖圖6 不同處理對(duì)Hela細(xì)胞遷移能力的影響Fig.6 Effects of different treatments on migration ability of Hela cells

2.7 Transwell小室檢測(cè)Hela細(xì)胞侵襲能力

采用Transwell法測(cè)定SeCS對(duì)Hela細(xì)胞侵襲能力的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖7所示。由圖7-a可知,細(xì)胞經(jīng)CS和SeNPs處理后,與空白對(duì)照組相比,侵襲至下室的細(xì)胞雖有所減少,但效果不明顯。而SeCS處理細(xì)胞后,與CS和SeNPs相比,侵襲至下室的細(xì)胞明顯減少,下室中的侵襲細(xì)胞數(shù)目越少,說明SeCS使細(xì)胞侵襲穿透基質(zhì)膠的能力減弱。而且,SeCS處理細(xì)胞后,細(xì)胞的侵襲率為(82.43±4.21)%,顯著低于CS組的侵襲率(103.28±6.14)%和SeNPs處理組的侵襲率(98.75±6.28)%(圖7-b),表明SeCS抑制細(xì)胞侵襲的能力強(qiáng)于CS和SeNPs。

a-20 μg/mL CS、SeNPs和SeCS 處理48 h后Hela 細(xì)胞侵襲的顯微照片(200×);b-Hela細(xì)胞侵襲率柱狀圖圖7 不同處理對(duì)Hela細(xì)胞侵襲能力的影響Fig.7 Effects of different treatments on invasion ability of Hela cells

2.8 Western blot檢測(cè)MMP-2和MMP-9蛋白的表達(dá)水平

MMP有助于腫瘤細(xì)胞的侵襲、血管生成和惡性進(jìn)展,MMP-2和MMP-9蛋白在人宮頸癌中高表達(dá),可能影響其侵襲性[24-25]。為了進(jìn)一步探究SeCS抑制Hela細(xì)胞遷移和侵襲的可能機(jī)制,采用Western blot方法檢測(cè)SeCS處理細(xì)胞后對(duì)細(xì)胞內(nèi)MMP-2和MMP-9蛋白表達(dá)量的影響。由圖8-a可知,相比CS和SeNPs處理組,SeCS處理細(xì)胞后,MMP-2和MMP-9的蛋白條帶變淡,表明SeCS能夠抑制MMP-2和MMP-9的表達(dá)。進(jìn)一步對(duì)其條帶的灰度值進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn),MMP-2和MMP-9的蛋白表達(dá)量從SeNPs處理組的(112.69±11.53)%和(89.76±6.35)%下降到SeCS處理組的(75.75±7.32)%和(81.98±7.02)%,說明SeCS顯著下調(diào)了MMP-2和MMP-9的表達(dá)水平(圖8-b)。

3 結(jié)論

本文采用氧化還原法制備SeCS,通過TEM、SEM、XPS和FTIR對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定,發(fā)現(xiàn)成功制備得到的SeCS為零價(jià)態(tài)的球形納米粒,這一研究結(jié)果與其他多糖如石榴多糖[26]、殼聚糖[27]和阿拉伯樹膠[28]修飾納米硒的報(bào)道相似。

癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和侵襲是腫瘤細(xì)胞的典型特征。腫瘤轉(zhuǎn)移是一個(gè)涉及細(xì)胞遷移、侵襲和黏附的復(fù)雜過程[29]。其中,遷移是癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[30]。為了進(jìn)一步考察SeCS對(duì)Hela細(xì)胞遷移能力的影響,本文采用劃痕實(shí)驗(yàn)考察了20 μg/mL CS、SeNPs和SeCS處理細(xì)胞0、24、48 h后細(xì)胞的愈合效果,發(fā)現(xiàn)與CS和SeNPs相比,SeCS劃痕愈合速率顯著低于CS和SeNPs,說明SeCS能抑制細(xì)胞的橫向遷移。此外,本研究還運(yùn)用Transwell實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步考察了SeCS抑制Hela細(xì)胞縱向遷移的效果,發(fā)現(xiàn)相比CS和SeNPs,細(xì)胞經(jīng)SeCS處理后,遷移細(xì)胞數(shù)目減少,說明SeCS能夠抑制Hela細(xì)胞的縱向遷移。而且,通過考察SeCS抑制Hela細(xì)胞侵襲的研究也發(fā)現(xiàn),相比CS和SeNPs,SeCS處理后的細(xì)胞通過基質(zhì)膠的能力變?nèi)?說明SeCS能夠抑制Hela細(xì)胞的侵襲。這可能是SeCS處理Hela細(xì)胞后因不能降解ECM導(dǎo)致其侵襲能力減弱[31-32]。

研究發(fā)現(xiàn),MMPs參與細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜的降解,其中,MMP家族成員MMP-2和MMP-9通過降解細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分膠原蛋白來參與多種癌細(xì)胞的侵襲[33]。為了闡明SeCS抑制Hela細(xì)胞遷移和侵襲的可能機(jī)制,采用Western blot對(duì)SeCS處理細(xì)胞后的MMP-2和MMP-9蛋白表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果發(fā)現(xiàn)相比SeNPs,SeCS處理組中MMP-2和MMP-9蛋白的表達(dá)量更低,這可能是由于SeCS的尺寸小于SeNPs,使得SeCS更容易穿過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞,從而提高了細(xì)胞內(nèi)SeCS的含量,增強(qiáng)了SeCS的抗腫瘤活性。同時(shí),值得注意的是,相比空白對(duì)照組,CS組中的MMP-2和MMP-9蛋白沒有表現(xiàn)出下調(diào)趨勢(shì),這一結(jié)果跟Transwell的實(shí)驗(yàn)結(jié)果是一致的,說明CS沒有表現(xiàn)出抑制Hela細(xì)胞遷移和侵襲的作用。但是,這與前人報(bào)道的CS能夠抑制黑色素瘤細(xì)胞[17]、肺癌細(xì)胞[34]、乳腺癌[35]等細(xì)胞增殖和遷移的研究結(jié)果不一致,推測(cè)可能是CS對(duì)不同的腫瘤細(xì)胞具有不同的細(xì)胞選擇性,此外與CS處理細(xì)胞的濃度也密切相關(guān)。

綜上所述,本研究制備的SeCS能夠通過下調(diào)MMP-2和MMP-9的表達(dá)抑制Hela細(xì)胞的遷移和侵襲,為其后續(xù)的臨床應(yīng)用奠定理論基礎(chǔ)和數(shù)據(jù)參考。