周秀琴

宮頸癌是婦科惡性腫瘤, 對(duì)女性健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅, 宮頸癌篩查是我國(guó)公共衛(wèi)生項(xiàng)目, 大部分宮頸癌的產(chǎn)生均與HPV 感染有關(guān), 臨床對(duì)宮頸癌篩查的主要方式為宮頸液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查(TCT)和HPV DNA 檢查, 但是有關(guān)研究表明, HPV E6/E7 mRNA 的表達(dá)可以反映HPV 基因活性, 能夠以此推斷感染水平以及致癌程度, 所以該項(xiàng)檢測(cè)逐漸被臨床所應(yīng)用［1-3］。本次對(duì)于本院接收的進(jìn)行宮頸高級(jí)別病變?cè)\斷的患者實(shí)施HPV E6/E7 mRNA 檢測(cè)以及HPV DNA 檢測(cè)的效果進(jìn)行探究,報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2019 年12 月～2020 年12 月院內(nèi)3200 例進(jìn)行宮頸癌篩查的患者入組研究, 患者年齡為22～73 歲, 平均年齡為(42.84±10.06)歲。所有患者均進(jìn)行TCT。對(duì)檢測(cè)結(jié)果轉(zhuǎn)陰者進(jìn)行隨訪, 如果持續(xù)陽(yáng)性且細(xì)胞學(xué)篩查沒(méi)有升級(jí), 半年后復(fù)查行TCT, 并進(jìn)行2 年的隨訪。所有患者均了解本研究?jī)?nèi)容, 已經(jīng)簽訂知情協(xié)議, 本研究的開(kāi)展經(jīng)過(guò)醫(yī)學(xué)倫理相關(guān)組織批準(zhǔn)。將患者隨機(jī)分為對(duì)照組與研究組, 每組1600 例。1. 2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：自愿接受宮頸癌篩查者；性生活史為3 年或以上者；TCT 為意義不明的非典型鱗狀上皮細(xì)胞者；檢查前24 h 沒(méi)有性生活者；未接受過(guò)宮頸治療者。

排除標(biāo)準(zhǔn)：已確診為宮頸上皮內(nèi)瘤變者；已確診為宮頸癌者；既往TCT 異常者；妊娠期患者；檢查3 d內(nèi)具有陰道用藥史者；急性生殖道炎癥者；存在盆腔放療史者；具有宮頸手術(shù)史者。

1. 3 方法 對(duì)照組行HPV DNA 檢測(cè), 研究組行HPV E6/E7 mRNA 檢測(cè)。對(duì)照組HPV DNA 陽(yáng)性患者與研究組HPV E6/E7 mRNA 陽(yáng)性患者均進(jìn)行陰道鏡檢查、病理組織學(xué)檢查。在對(duì)照組及研究組陽(yáng)性患者中分別抽取185 例患者, 并分別行HPV E6/E7 mRNA、HPV DNA 檢測(cè), 即共370 例患者同時(shí)行HPV DNA 與HPV E6/E7 mRNA 檢測(cè)。

HPV DNA 分型檢測(cè)：通過(guò)凱普醫(yī)用核酸分子快速雜交因子分型試劑盒實(shí)施病毒分型檢測(cè), 并檢測(cè)21 型別病毒亞型, 含有高危型HPV(16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68)以及低危型HPV。本研究中HPV 陽(yáng)性即高危型HPV 陽(yáng)性。提取宮頸分泌物細(xì)胞DNA, 實(shí)施聚合酶鏈反應(yīng)基因信號(hào)擴(kuò)增, 以基因芯片為基礎(chǔ), 實(shí)施導(dǎo)流充分雜交, 再進(jìn)行顯色。

HPV E6/E7 mRNA 檢測(cè)：通過(guò)美國(guó)Hologic 公司出品的Aptima HPV E6/E7 mRNA 檢測(cè)試劑盒檢測(cè), 以Quantivirus 支鏈DNA 雜交捕獲原理, 對(duì)14 種高危型HPV E6/E7 mRNA 進(jìn)行定量檢測(cè), 檢測(cè)探針針對(duì)14 種高危病毒, 其中任一種存在即顯示陽(yáng)性。操作步驟嚴(yán)格遵循試劑盒說(shuō)明, 結(jié)果涵蓋HPV16、HPV18、其他高危型, 由計(jì)算機(jī)軟件按照E6/E7 mRNA 拷貝數(shù)、產(chǎn)品臨床實(shí)驗(yàn)閾值等判讀。若檢測(cè)值≥1.0 即陽(yáng)性, ＜1.0 即陰性。

TCT 檢測(cè)：患者體位為膀胱截石位, 使用窺陰器徹底展現(xiàn)宮頸, 使用無(wú)菌棉簽擦拭宮頸表面分泌物, 使用宮頸刷順相同方向刷取脫落細(xì)胞, 放置毛刷于取樣瓶中進(jìn)行檢測(cè)。通過(guò)南京鍵邦錦源公司出品的TCT 制片系統(tǒng), 依據(jù)國(guó)際癌癥協(xié)會(huì)推薦的伯塞斯達(dá)系統(tǒng)分類標(biāo)準(zhǔn)分成6 種類型, 分別為未見(jiàn)上皮內(nèi)病變和惡性細(xì)胞、不確定意義的非典型鱗狀細(xì)胞、低級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)瘤變、高級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)瘤變、宮頸癌。

陰道鏡及病理組織學(xué)檢查：病理標(biāo)本均由兩位正高級(jí)病理醫(yī)師閱片、診斷, 包括宮頸炎、宮頸上皮內(nèi)瘤變(CINⅠ)、CINⅡ、CINⅢ及宮頸癌, 若CINⅡ級(jí)或以上則定性為高級(jí)別宮頸上皮內(nèi)病變。若檢測(cè)結(jié)果顯示異常, 如不確定意義的非典型鱗狀細(xì)胞、更高級(jí)別細(xì)胞學(xué)異常結(jié)果, 或者出現(xiàn)HPV DNA、HPV E6/E7 mRNA 檢測(cè)陽(yáng)性者, 則實(shí)施陰道鏡檢查和宮頸活檢病理學(xué)檢查, 病理組織學(xué)診斷結(jié)果包括以下5 種：慢性宮頸炎、宮頸浸潤(rùn)癌、CINⅠ級(jí)、CINⅡ級(jí)、CINⅢ級(jí)。通過(guò)電子陰道鏡系統(tǒng)對(duì)宮頸表面色澤、形態(tài)、血管和邊界情況進(jìn)行觀察。涂抹4%醋酸溶液于整個(gè)宮頸, 仔細(xì)觀察后使用碘液涂抹。對(duì)可疑病變處進(jìn)行多點(diǎn)活檢, 如白色病變、碘不著色等, 對(duì)3 型轉(zhuǎn)化區(qū)進(jìn)行宮頸管搔刮術(shù)。

1. 3 觀察指標(biāo) 比較兩組患者的檢測(cè)結(jié)果及病理檢查結(jié)果；比較兩種檢測(cè)方法的檢測(cè)結(jié)果、病理檢查結(jié)果及診斷高級(jí)別宮頸病變的準(zhǔn)確率、特異度、靈敏度。準(zhǔn)確率=(真陰性+真陽(yáng)性)/(真陰性+真陽(yáng)性+假陰性+假陽(yáng)性)×100%；特異度=真陰性/(真陰性+假陽(yáng)性)×100%；靈敏度=真陽(yáng)性/(真陽(yáng)性+假陰性)×100%。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 兩組患者的檢測(cè)結(jié)果及病理檢查結(jié)果比較 對(duì)照組患者HPV DNA 檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性415 例, 陽(yáng)性檢出率為25.94%；研究組患者HPV E6/E7 mRNA 檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性400 例, 陽(yáng)性檢出率為25.00%。兩組的陽(yáng)性檢出率比較, 不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.370, P=0.5423＞0.05)。研究組高級(jí)別宮頸上皮內(nèi)病變患者72 例, 陽(yáng)性率為4.50%(72/1600)；對(duì)照組高級(jí)別宮頸上皮的病變者76 例, 陽(yáng)性率為4.75%(76/1600)。兩組高級(jí)別宮頸上皮的病變陽(yáng)性率比較, 不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.013,P=0.908＞0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩組患者的檢測(cè)結(jié)果及病理檢查結(jié)果比較［n(%)］

2. 2 HPV DNA 檢測(cè)、HPV E6/E7 mRNA 檢測(cè)的高級(jí)別宮頸病變檢查結(jié)果及病理檢查結(jié)果分析 370 例患者同時(shí)進(jìn)行HPV DNA、HPV E6/E7 mRNA 檢測(cè)及陰道鏡及病理組織學(xué)檢查。陰道鏡、病理組織學(xué)檢查結(jié)果顯示陽(yáng)性88 例, 陰性282 例。HPV DNA 檢測(cè)結(jié)果顯示, 陽(yáng)性188 例, 陰性182 例；HPV E6/E7 mRNA 檢測(cè)結(jié)果顯示, 陽(yáng)性168 例, 陰性202 例。見(jiàn)表2。

表2 HPV DNA 檢測(cè)、HPV E6/E7 mRNA 檢測(cè)高級(jí)別宮頸病變檢查結(jié)果及病理檢查結(jié)果分析(n)

2. 3 HPV DNA 檢測(cè)、HPV E6/E7 mRNA 檢測(cè)診斷高級(jí)別宮頸病變的準(zhǔn)確率、特異度、靈敏度比較 HPV DNA 檢測(cè)的特異度、靈敏度、準(zhǔn)確率分別為56.38%、73.86%、60.54%, HPV E6/E7 mRNA 檢測(cè)的特異度、靈敏度、準(zhǔn)確率分別為67.73%、87.50%、72.43%。HPV E6/E7 mRNA 檢測(cè)的特異度、靈敏度、準(zhǔn)確率均高于HPV DNA 檢測(cè), 存在明顯差異(P＜0.05)。見(jiàn)表3。

表3 HPV DNA、HPV E6/E7 mRNA 檢測(cè)診斷高級(jí)別宮頸病變的準(zhǔn)確率、特異度、靈敏度比較(%)

3 討論

宮頸癌是病因明確且能夠預(yù)防的惡性腫瘤, 早期發(fā)現(xiàn)癌前病變、宮頸癌的患者通過(guò)及時(shí)有效的治療,能夠降低發(fā)病率和死亡率, 我國(guó)兩癌篩查的終極目標(biāo)為消滅宮頸癌, 主要篩查方式為T(mén)CT 檢查, 但因?yàn)殚喥叩闹饔^因素會(huì)影響診斷結(jié)果, 加之該項(xiàng)檢測(cè)的重復(fù)性較差, 所以檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確率并不高, 檢出率波動(dòng)幅度也較大, 檢測(cè)結(jié)果并不理想［4］。宮頸癌的發(fā)生、進(jìn)展通常與高危型HPV 感染相關(guān), 因此HPV DNA 檢測(cè)篩查成為宮頸癌的主要輔助篩查方式, 也是意義不明的非典型鱗狀上皮細(xì)胞患者的主要分流管理方式, 但大部分HPV 感染屬于一過(guò)性, 在2 年內(nèi)可清除, 不會(huì)致病, 所以該項(xiàng)檢查下假陽(yáng)性率較高, 檢測(cè)效果也不盡如人意［5］。因此, 尋求一種高危型HPV 持續(xù)感染患者的有效檢查方式, 提升宮頸癌篩查準(zhǔn)確率, 是醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)［6］。

相關(guān)研究顯示, HPV 病毒種引起宮頸癌的致病基因主要為E6/E7 基因, 其中E6 基因會(huì)阻斷細(xì)胞凋亡過(guò)程, 對(duì)細(xì)胞抗癌效果產(chǎn)生影響；E7 基因會(huì)影響細(xì)胞周期, 促使炎性細(xì)胞增殖惡變進(jìn)而形成癌癥, 而HPV E6/E7 mRNA 水平可以預(yù)測(cè)HPV 病毒活性和癌變風(fēng)險(xiǎn), 從而區(qū)分一過(guò)性感染以及宮頸病變, 進(jìn)而對(duì)意義不明的非典型鱗狀上皮細(xì)胞患者進(jìn)行分流［7］。HPV E6/E7 mRNA 是一種HPV 病毒致癌活動(dòng)提示指標(biāo), 也是宮頸上皮細(xì)胞癌變進(jìn)展預(yù)測(cè)指標(biāo), 該項(xiàng)指標(biāo)的表達(dá)說(shuō)明HPV 整合入宿主細(xì)胞DNA 種, 癌基因轉(zhuǎn)錄異常造成E6/E7 癌蛋白表達(dá)過(guò)度, 導(dǎo)致細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化, 說(shuō)明HPV 癌基因E6/E7 處在表達(dá)活動(dòng)期, 會(huì)促使癌變進(jìn)展［8］。HPV E6/E7 mRNA 表達(dá)伴隨宮頸病變級(jí)別的上升而上升, 隨著其陽(yáng)性率的提升, 高級(jí)別病變的陽(yáng)性檢出率也會(huì)提升, 其高表達(dá)表示HPV 處在持續(xù)感染狀態(tài), 因?yàn)樵擁?xiàng)檢測(cè)更關(guān)注病變情況, 能夠更好地反映宮頸病變嚴(yán)重程度, 所以屬于高級(jí)別病變的特異性標(biāo)志物［9-11］。

劉曉旭等［12］研究中顯示, 宮頸病變?cè)\治中應(yīng)用HPV E6/E7 mRNA 檢測(cè)的靈敏度為87.50%, 高于HPVDNA 檢測(cè)；本文研究中, HPV E6/E7 mRNA 檢測(cè)的靈敏度高于HPV-DNA 檢測(cè), 和劉曉旭等研究結(jié)果一致,表明HPV E6/E7 mRNA 檢測(cè)靈敏度更高, 且本文研究中HPV E6/E7 mRNA 檢測(cè)的準(zhǔn)確率也更高, 說(shuō)明該項(xiàng)檢測(cè)方式可以作為宮頸高級(jí)病變患者分流管理方式,能夠更精確地預(yù)測(cè)細(xì)胞向高度病變、癌癥病變轉(zhuǎn)變的風(fēng)險(xiǎn)。

綜上所述, 將HPV E6/E7 mRNA 檢測(cè)作為宮頸高級(jí)病變篩查指標(biāo), 能夠?qū)m頸癌、高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變進(jìn)行有效檢測(cè), 對(duì)于宮頸高級(jí)病變?cè)\斷具有積極的指導(dǎo)價(jià)值。