王梓皓, 梁鳳至, 陳學(xué)蓉, 吳 萍, 吳 微

(湖北中醫(yī)藥大學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院, 湖北 武漢 430065)

全氟和多氟化合物(PFASs)是一類(lèi)新興的環(huán)境內(nèi)分泌干擾物,常被用于表面活性劑[1]、洗滌劑[2]、防火泡沫[3]、皮革制品和食品包裝的制造等[4]。PFASs的半衰期很長(zhǎng),其從產(chǎn)品中釋放后可廣泛分布于空氣、水、土壤中[5-7]。除此之外,PFASs也廣泛存在于各種食品中(如蔬菜、乳制品、飲料、雞蛋、肉類(lèi)制品、魚(yú)類(lèi)和貝類(lèi)),而飲食攝入也是人類(lèi)接觸PFASs的另一重要途徑[8-10]。由于PFASs中的C-F鍵具有較強(qiáng)的穩(wěn)定性,PFASs表現(xiàn)出極強(qiáng)的持久性,并具有生物蓄積性和毒性[11]。研究表明,PFASs在人體血液和肝臟中所檢測(cè)到的含量最高[12,13]。血清蛋白是PFASs結(jié)合的主要目標(biāo)物,這可能是因?yàn)镻FASs具有生物富集性[14]。然而,目前PFASs的檢測(cè)基質(zhì)大多局限于水、食品、紡織品等,有關(guān)血液樣品中PFASs的檢測(cè)方法較少。因此,建立血液中多種PFASs的快速、準(zhǔn)確定量檢測(cè)方法,對(duì)監(jiān)測(cè)人群PFASs的暴露水平具有重要意義。

孕婦作為特殊人群,其宮內(nèi)遭遇的環(huán)境應(yīng)激可以決定子代出生后的疾病風(fēng)險(xiǎn)[9,15]。日本的一項(xiàng)研究表明,孕婦體內(nèi)全氟壬酸(PFNA)的含量與新生兒的體長(zhǎng)呈負(fù)相關(guān)[16]。上海市疾病預(yù)防控制中心針對(duì)本轄區(qū)的一項(xiàng)調(diào)查發(fā)現(xiàn),孕期全氟辛酸(PFOA)暴露會(huì)干擾孕婦體內(nèi)的甲狀腺水平,且孕婦體內(nèi)的PFOA含量與新生兒的出生體重呈負(fù)相關(guān)[17]。陳晨春[18]通過(guò)調(diào)查1 000多對(duì)廣西地區(qū)的孕產(chǎn)婦與新生兒發(fā)現(xiàn),孕期全氟辛烷磺酸(PFOS)的暴露水平與胎兒宮內(nèi)生長(zhǎng)受限(intrauterine growth restriction, IUGR)呈正相關(guān)。除此之外,有關(guān)孕期PFASs暴露與新生兒神經(jīng)行為發(fā)育影響的研究較少。

針對(duì)以上問(wèn)題,本課題組建立了基于高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(HPLC-MS/MS)檢測(cè)孕婦血清中7種(PFASs)的分析方法。該方法采用液液萃取作為樣品前處理方法,使用內(nèi)標(biāo)法定量。依托于已經(jīng)建立的出生隊(duì)列,將該法應(yīng)用于孕婦血清中PFASs的監(jiān)測(cè),追蹤并評(píng)估新生兒的神經(jīng)行為發(fā)育,分析孕期PFASs暴露對(duì)新生兒神經(jīng)發(fā)育的影響。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器、試劑與材料

Xevo TQ-S Micro高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國(guó)Waters公司); XH-B渦旋混勻器(江蘇康健醫(yī)療用品有限公司); KQ-500VDE數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司); H2050R冷凍離心機(jī)(湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開(kāi)發(fā)有限公司); QYN100-1水浴氮吹儀(武漢泰仕德科技有限公司)。

超純水儀(美國(guó)Millipore公司);甲醇、甲酸(均為HPLC級(jí),美國(guó)Thermo Fisher公司);甲基叔丁基醚(MTBE)、四丁基硫酸氫銨(TBAS)(均為HPLC級(jí),美國(guó)Sigma-Aldrich公司);碳酸鈉(純度≥99.5%)、碳酸氫鈉(純度≥99.8%)和乙酸銨(純度≥99.0%)(國(guó)藥集團(tuán))。

7種PFASs標(biāo)準(zhǔn)品和3種同位素內(nèi)標(biāo)單標(biāo)溶液均購(gòu)于加拿大威靈頓實(shí)驗(yàn)室。7種PFASs標(biāo)準(zhǔn)品:PFOA、PFOS、PFNA、全氟癸酸(PFDA)、全氟己烷磺酸(PFHxS)、全氟庚基磺酸(PFHpS)、全氟辛烷磺酰胺(PFOSA),溶劑均為甲醇,質(zhì)量濃度均為5 μg/mL; 3種同位素內(nèi)標(biāo)單標(biāo)溶液:13C4-PFOS、13C4-PFOA、13C4-PFHxS,溶劑均為甲醇,質(zhì)量濃度均為2 μg/mL。其中,PFOSA、PFHxS以13C4-PFHxS為內(nèi)標(biāo),PFHpS、PFOA以13C4-PFOA為內(nèi)標(biāo),PFDA、PFOS和PFNA以13C4-PFOS為內(nèi)標(biāo)。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液:分別吸取200 μL PFASs標(biāo)準(zhǔn)品(5 μg/mL)至同一5 mL容量瓶中,用甲醇定容,配制成質(zhì)量濃度為200 ng/mL的混合儲(chǔ)備液,于4 ℃保存待用。用甲醇對(duì)混合儲(chǔ)備液進(jìn)行逐級(jí)稀釋,配制成系列質(zhì)量濃度(0.1、0.5、2、10、50、100、200 ng/mL)的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液,并于4 ℃保存。

混合內(nèi)標(biāo)工作液:先分別吸取500 μL的3種同位素內(nèi)標(biāo)單標(biāo)溶液至同一10 mL容量瓶中,用甲醇定容至10 mL,配制成質(zhì)量濃度為100 ng/mL的內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液;再用甲醇依次稀釋成質(zhì)量濃度為1.0、10、50 ng/mL的混合內(nèi)標(biāo)工作液,并分裝為1 mL/支,于-20 ℃保存待用。

表1 7種PFASs及3種同位素內(nèi)標(biāo)的質(zhì)譜參數(shù)

1.3 問(wèn)卷調(diào)查及樣本采集

本課題基于湖北省鄂州市婦幼保健院建立的出生隊(duì)列展開(kāi)研究,該隊(duì)列以2019年招募的孕婦作為研究對(duì)象;在孕婦首次產(chǎn)檢時(shí),由護(hù)士對(duì)孕婦進(jìn)行面對(duì)面問(wèn)卷調(diào)查,以獲得孕產(chǎn)婦的社會(huì)人口學(xué)信息。收集孕婦在孕晚期時(shí)(28～36周)的血液樣本(10 mL),以4 000 r/min離心15 min,之后取出上層血清,置于-20 ℃冰箱中凍存,然后轉(zhuǎn)入-80 ℃冰箱中長(zhǎng)期保存。樣本采集期間共收集456名孕婦孕晚期的血清樣本。隨訪期間,排除流產(chǎn)、引產(chǎn)、信息不完整及子代失訪者等情況,共有379名新生兒完成了新生兒神經(jīng)行為評(píng)估。本研究已得到湖北中醫(yī)藥大學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(No. 2021-IEC-015),招募志愿者均已簽署知情同意書(shū)。

1.4 樣品前處理

將采集的血清樣本從-80 ℃冰箱中取出,放置在4 ℃冰箱中過(guò)夜,充分解凍后再轉(zhuǎn)移至室溫。先將5 μL混合內(nèi)標(biāo)工作液加入至15 mL聚丙烯離心管中,然后再依次加入200 μL血清樣品、2 mL碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖液(pH 9.2)、1 mL TBAS,超聲處理20 min;之后向離心管中加入4 mL MTBE,置于渦旋混勻器上充分振蕩2 min,然后超聲20 min,以4 000 r/min離心15 min。用聚丙烯材質(zhì)吸管將有機(jī)相上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管中,向原離心管中再次加入4 mL MTBE,重復(fù)上述操作,合并兩次上清液,于50 ℃恒溫氮吹至干,再加入200 μL甲醇復(fù)溶,置于渦旋混勻器上充分振蕩2 min,以4 000 r/min離心15 min,最后將上清液轉(zhuǎn)移至進(jìn)樣小瓶中直接用于上機(jī)檢測(cè)。

1.5 分析條件

色譜柱:Waters ACQUITY HPLC BEH C18柱(100 mm×2.1 mm, 1.7 μm);流動(dòng)相:A相為甲醇,B相為2 mmol/L乙酸銨水溶液。梯度洗脫程序:0～5 min, 60%A; 5～10 min, 60%A～80%A; 10～12 min, 80%A～90%A; 12～15 min, 90%A; 15～20 min, 90%A～10%A。流速0.4 mL/min;進(jìn)樣體積10 μL;柱溫40 ℃;樣品室溫度10 ℃。

離子源:電噴霧電離(ESI)源,負(fù)電離模式;掃描模式:多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式;毛細(xì)管電壓:0.5 kV;離子源溫度:150 ℃;脫溶劑氣溫度:550 ℃;脫溶劑氣流量:1 000 L/h;碰撞氣:氬氣。其他質(zhì)譜參數(shù)見(jiàn)表1。

1.6 研究對(duì)象基本信息

納入此次研究的共有379對(duì)孕產(chǎn)婦及其子代新生兒,其中男性新生兒的比例(52.8%)和體重((3 423.4±452.8) g)均略高于女性新生兒(47.2%, (3 326.4±602.8) g)。孕婦的平均孕齡為27.3歲,孕產(chǎn)婦的居住地區(qū)以城區(qū)為主(77.5%),學(xué)歷大多為高中(37.2%)和大專(zhuān)(39.1%),家庭年收入以10萬(wàn)～20萬(wàn)居多(46.4%),且大多數(shù)孕婦為頭胎妊娠(67.5%),居住房屋建筑類(lèi)型主要為鋼筋混凝土(61.0%),人均住房面積為10～20 m2(44.9%),相關(guān)信息見(jiàn)表2。

1.7 新生兒神經(jīng)行為評(píng)價(jià)

依據(jù)北京協(xié)和醫(yī)院鮑秀蘭教授修訂的20項(xiàng)新生兒神經(jīng)行為測(cè)定法(neonatal behavioral neurological assessment, NBNA)[19],于孕婦分娩第3天(即新生兒出生72 h內(nèi)),由兒科醫(yī)師對(duì)新生兒的神經(jīng)行為進(jìn)行評(píng)估。NBNA的評(píng)估內(nèi)容包括行為能力(6項(xiàng))、被動(dòng)肌張力(4項(xiàng))、主動(dòng)肌張力(4項(xiàng))、原始反射(3項(xiàng))和一般反應(yīng)(3項(xiàng)),共20項(xiàng)指標(biāo),每項(xiàng)指標(biāo)有3個(gè)評(píng)分水平(0、1、2分),NBNA滿(mǎn)分為40分,本實(shí)驗(yàn)中共有379名新生兒完成了神經(jīng)行為評(píng)價(jià)。

1.8 實(shí)驗(yàn)室樣本質(zhì)量控制

樣本由統(tǒng)一的調(diào)查員專(zhuān)職采集并登記,運(yùn)輸過(guò)程中確保無(wú)污染。整理問(wèn)卷及實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)數(shù)據(jù),采用EpiData 3.1軟件建立數(shù)據(jù)庫(kù),以平行雙盲的方式錄入數(shù)據(jù),并對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行一致性檢驗(yàn)和詳細(xì)的邏輯糾錯(cuò)。實(shí)驗(yàn)試劑均為HPLC級(jí)或MS級(jí)試劑;前處理過(guò)程中使用的滴管、離心管等均為一次性材料,以避免PFASs污染。

2 結(jié)果與討論

2.1 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

按照1.5節(jié)分析條件,對(duì)待測(cè)物的母離子、子離子和碰撞能量等參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化。先通過(guò)HPLC分離和一級(jí)質(zhì)譜全掃描獲得每種待測(cè)物的保留時(shí)間和母離子,然后優(yōu)化碰撞能量獲得子離子,最后采用MRM模式對(duì)待測(cè)物進(jìn)行定性和定量分析。7種PFASs及3種同位素內(nèi)標(biāo)的總離子流色譜圖見(jiàn)圖1,相應(yīng)的質(zhì)譜參數(shù)見(jiàn)表1。

圖 1 7種PFASs及3種同位素內(nèi)標(biāo)的總離子流色譜圖Fig. 1 Total ion current chromatogram of the seven PFASs and three isotope internal standards

2.2 方法學(xué)評(píng)價(jià)

2.2.1線性范圍、檢出限與定量限

配制質(zhì)量濃度為0.1、0.5、2、10、50、100、200 ng/mL的系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液并進(jìn)樣分析,以目標(biāo)物與對(duì)應(yīng)內(nèi)標(biāo)的定量離子峰面積之比為縱坐標(biāo)(y)、目標(biāo)物的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(x,ng/mL),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果如表3所示,7種PFASs在0.1～200 ng/mL內(nèi)線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)(r2)均≥0.993;以3倍信噪比計(jì)算方法的檢出限(LOD)、10倍信噪比計(jì)算定量限(LOQ), 7種PFASs的LOD為0.006～0.020 ng/mL, LOQ為0.020～0.066 ng/mL。

2.2.2回收率和精密度

在空白胎牛血清中分別添加低、中、高3個(gè)水平(1、10、50 ng/mL)的7種PFASs,進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn),每個(gè)加標(biāo)水平進(jìn)行6次平行試驗(yàn),并計(jì)算加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)。如表4所示,7種PFASs在3個(gè)加標(biāo)水平下的回收率分別為84.6%～116.8%、85.7%～112.5%和84.6%～107.8%,對(duì)應(yīng)的RSD分別為5.8%～16.8%、3.8%～18.2%和6.7%～18.0%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明,該方法準(zhǔn)確可靠,能夠用于實(shí)際樣品的檢測(cè)。

表3 7種PFASs的線性范圍、回歸方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限

表4 7種PFASs在胎牛血清中的加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=6)

2.3 與其他方法的比較

由于PFASs的種類(lèi)較多,且血清基質(zhì)較為復(fù)雜,一次檢測(cè)血清中多種PFASs的方法并不多見(jiàn)[20,21]。Shafique等[21]基于氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)建立了血清中多種PFASs的分析方法,但所得到的回收率波動(dòng)較大。Mazzoni等[22]開(kāi)發(fā)了一種基于在線凈化-液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜同時(shí)測(cè)定血清中兩種全氟烷基磺酸鹽(PFOS、PFHxS)、3種全氟烷基羧酸鹽(PFOA、PFNA、PFDA)和一種全氟烷基磺酰胺(N-MeFOSA)的分析方法,6種目標(biāo)物的回收率為84.0%～120.1%,LOD為0.16～0.34 ng/mL,但該方法在操作過(guò)程中需要兩根色譜柱,且在線處理步驟較為復(fù)雜,樣品用量大,因此推廣性有限(見(jiàn)表5)。本方法可檢測(cè)的PFASs種類(lèi)多,準(zhǔn)確度與精密度高,且試劑用量少,適用于人群中多種PFASs的快速分析測(cè)定。

表5 本方法與其他文獻(xiàn)方法的比較

2.4 孕婦血清中PFASs的暴露水平

456份孕婦血清樣本中,暴露水平最高的是PFOA,中位數(shù)水平為19.4 ng/mL,檢出率為100%;其次為PFOS,中位數(shù)水平為7.5 ng/mL,檢出率為100%; PFHpS的中位數(shù)水平為5.62 ng/mL,檢出率為98.5%; PFDA的中位數(shù)水平為2.01 ng/mL,檢出率為97.6%; PFNA的中位數(shù)水平為1.92 ng/mL,檢出率為100%; PFHxS的中位數(shù)水平為1.20 ng/mL,檢出率為100%; PFOSA的中位數(shù)水平為0.55 ng/mL,檢出率為97.4%。PFOA是血清中PFASs的最主要貢獻(xiàn)者,其暴露水平最高的原因可能是其半衰期較長(zhǎng)且使用廣泛。研究發(fā)現(xiàn),在食品包裝、服裝、家具、電器、炊具、化妝品等日常生活品中,PFOA的含量遠(yuǎn)高于其他PFASs[24]。此外,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明,血清中的白蛋白是PFASs的主要靶標(biāo),而PFOA與白蛋白的結(jié)合能力要強(qiáng)于其他PFASs,從而導(dǎo)致其在血清中的蓄積最高[25]。

2.5 新生兒神經(jīng)行為評(píng)分

本研究中,379名新生兒的行為能力(滿(mǎn)分12分)、被動(dòng)肌張力(滿(mǎn)分8分)、主動(dòng)肌張力(滿(mǎn)分8分)、原始反射(滿(mǎn)分6分)、一般反應(yīng)(滿(mǎn)分6分)及NBNA總分(滿(mǎn)分40分)分別為11.12±0.62、7.37±0.62、7.50±0.50、5.48±0.52、5.41±0.48和37.03±1.27分。如表6所示,性別分層分析結(jié)果顯示,女性新生兒的行為能力(P=0.013)、主動(dòng)肌張力(P=0.009)和原始反射(P=0.026)均高于男性新生兒。

表6 新生兒神經(jīng)行為測(cè)定結(jié)果(n=379)

2.6 孕期PFASs暴露對(duì)新生兒各功能區(qū)得分的影響

由于血清中PFASs的水平呈偏態(tài)分布,在隨后的分析中將PFASs的水平值作對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換,使其呈正態(tài)分布,再采用線性回歸分析方法來(lái)探究孕期PFASs暴露與新生兒神經(jīng)行為間的關(guān)系。

在對(duì)總?cè)巳旱母鱾€(gè)混雜因素進(jìn)行調(diào)整后發(fā)現(xiàn),孕期母體體內(nèi)的PFOS每增加一個(gè)自然對(duì)數(shù)(ln)水平,新生兒的主動(dòng)肌張力及一般反應(yīng)分別降低0.36分(95%置信區(qū)間(CI): -0.64～-0.08,P=0.036)和0.34分(95% CI: -0.61～-0.07,P=0.040);孕期母體體內(nèi)的PFNA每增加一個(gè)ln水平,新生兒的被動(dòng)肌張力和NBNA總分分別降低0.38分(95%CI: -0.74～-0.01,P=0.042)和0.37分(95% CI: -0.68～-0.06,P=0.042); PFDA每增加一個(gè)ln水平,新生兒的行為能力降低0.28分(95% CI: -0.54～-0.01,P=0.044);而PFHxS每增加一個(gè)ln水平,新生兒的NBNA總分上升0.27分(95% CI: 0.05～0.48,P=0.038),詳細(xì)結(jié)果如圖2所示。美國(guó)[26]和日本[27]的兩項(xiàng)研究使用貝利嬰幼兒發(fā)展量表第3版(BSID-Ⅲ)來(lái)評(píng)估新生兒的神經(jīng)行為發(fā)育,結(jié)果顯示,孕婦產(chǎn)前暴露PFOS和PFNA與新生兒的認(rèn)知行為下降和語(yǔ)言功能評(píng)分降低有關(guān);雖然這兩項(xiàng)研究與本次研究所使用的評(píng)分方法不一致,但均能說(shuō)明孕期PFASs暴露對(duì)兒童神經(jīng)行為發(fā)育有負(fù)面影響。

2.7 孕期PFASs暴露對(duì)新生兒神經(jīng)行為影響的性別差異

經(jīng)性別分層后,孕期PFASs暴露對(duì)新生兒神經(jīng)行為的影響如表7所示。在對(duì)各項(xiàng)混雜因素進(jìn)行調(diào)整后,PFOS每增加一個(gè)ln水平,男性新生兒的主動(dòng)肌張力及一般反應(yīng)分別降低0.54分(95% CI: -0.73～-0.35)和0.50分(95% CI: -0.88～-0.13); PFNA每增加一個(gè)ln水平,男性新生兒的被動(dòng)肌張力和NBNA總分分別降低0.67分(95% CI: -1.20～-0.14)和0.45分(95% CI: -0.91～-0.01); PFDA每增加一個(gè)ln水平,男性新生兒的行為能力降低0.44分(95% CI: -0.71～-0.17);而PFHxS每增加一個(gè)ln水平,男性新生兒的NBNA總分上升0.41分(95% CI: 0.02～0.80);同時(shí),該性別分層研究未觀察到PFASs與原始反射之間的統(tǒng)計(jì)關(guān)聯(lián)。

在對(duì)各項(xiàng)混雜因素進(jìn)行調(diào)整后,孕期母體PFASs暴露對(duì)女性新生兒神經(jīng)行為的影響較小。如表7所示,僅觀察到PFOA與一般反應(yīng)之間呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(回歸系數(shù)(regression coefficient,β)=-0.27; 95% CI: -0.51～-0.02),而PFDA與行為能力之間呈正相關(guān)關(guān)系(β=0.46; 95% CI: 0.40～0.52)。這一結(jié)果與丹麥的一項(xiàng)出生隊(duì)列研究類(lèi)似,即PFASs對(duì)男性新生兒身長(zhǎng)、體重、認(rèn)知發(fā)育等方面的影響大于女性新生兒[28]。原因可能是孕期PFASs暴露會(huì)干擾母體甲狀腺相關(guān)激素(如促甲狀腺激素、游離三碘甲狀腺原氨酸)的合成及轉(zhuǎn)運(yùn),甲狀腺相關(guān)激素的分泌又會(huì)影響兒童的神經(jīng)行為發(fā)育;而由于性別差異,不同性別新生兒對(duì)甲狀腺激素的敏感度不同,導(dǎo)致PFASs對(duì)神經(jīng)行為的影響存在性別差異[29]。

圖 2 孕期PFASs暴露對(duì)新生兒各功能區(qū)得分的影響Fig. 2 Effects of PFASs exposure during pregnancy on the scores of newborn functional areas * Significant difference (P<0.05). All models were adjusted for maternal age, pre-pregnancy BMI, living zone, mother’s schooling time, annual household income, parity, residential building type and average living space.

表7 孕期PFASs暴露對(duì)不同性別新生兒神經(jīng)行為的影響

3 結(jié)論

本研究建立了測(cè)定孕婦血清中7種PFASs的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法,該方法檢出限低,回收率及精密度良好,且樣品用量少。將該方法應(yīng)用于已建立的出生隊(duì)列,結(jié)果顯示,孕婦血清中PFOA的暴露水平最高;同時(shí),我們隨訪并測(cè)定了子代新生兒的神經(jīng)行為評(píng)分,結(jié)果證實(shí),孕期PFOS、PFNA和PFDA的暴露與新生兒NBNA的評(píng)分呈負(fù)相關(guān)。對(duì)子代新生兒進(jìn)行性別分層分析后發(fā)現(xiàn),孕期PFASs暴露對(duì)男性新生兒的神經(jīng)行為影響更為明顯。由于本研究只采集了孕婦孕晚期的血清樣本,未能探索孕早期及孕中期PFASs暴露對(duì)新生兒神經(jīng)發(fā)育的影響,無(wú)法確定孕婦暴露PFASs的敏感窗口期。今后可通過(guò)動(dòng)物模擬實(shí)驗(yàn),探究PFASs神經(jīng)發(fā)育毒性的敏感窗口期及其致病機(jī)制。