陳情情， 周傳社， 鄒彩霞 ， 王凱旋

（1.廣西大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，廣西 南寧 530004；2.中國科學(xué)院亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所，湖南 長沙 410125；3.湖南羴牧有限公司，湖南 城步 422500）

在畜牧生產(chǎn)和動(dòng)物保健中，抗生素、激素化學(xué)合成類藥物， 對(duì)提高畜產(chǎn)品產(chǎn)量和動(dòng)物的生產(chǎn)能力、抵御畜禽疾病等方面能產(chǎn)生重要作用，因此被廣泛用作飼料添加劑使用（劉政等，2020）。但隨著預(yù)防醫(yī)學(xué)和動(dòng)物微生態(tài)學(xué)的發(fā)展， 人們逐漸意識(shí)到使用大量抗生素的弊端， 抗生素在消滅病菌的同時(shí)導(dǎo)致畜禽細(xì)菌耐藥性增強(qiáng)， 不僅引起動(dòng)物機(jī)體出現(xiàn)內(nèi)源性感染和二重感染以及中毒等現(xiàn)象，更會(huì)進(jìn)一步影響人類食品安全， 造成胃腸道正常菌群失衡、免疫功能水平降低等（馬震珠，2019；陳炅然，1996）。 因此農(nóng)業(yè)農(nóng)村部發(fā)布第194 號(hào)公告宣布2020 年7 月1 日起全面禁止在飼料中添加抗生素，飼料禁抗政策的實(shí)施，使復(fù)合微生態(tài)制劑成為理想的替代品之一（陳雷等，2022；劉天旭等，2021）。 泌乳期奶山羊極易受妊娠、泌乳、疾病、轉(zhuǎn)群等各種應(yīng)激因素影響， 這些變化均會(huì)導(dǎo)致泌乳期奶山羊的生產(chǎn)性能和健康狀況下降 （唐小平，2019）。 相關(guān)研究表明，復(fù)合微生態(tài)制劑能夠提高反芻動(dòng)物血清中超氧化物歧化酶、 谷胱甘肽過氧化物酶活性以及免疫球蛋白的含量， 提高抗氧化能力和免疫功能 （李光梅等，2021；Madison 等，1995）。 微生態(tài)制劑具有安全、高效、無藥物殘留、有效調(diào)節(jié)腸道健康、 改善機(jī)體免疫力和健康狀況等作用，符合社會(huì)綠色發(fā)展需求（Idowu 等，2022；Lou 等，2022）。 因此，本試驗(yàn)在奶山羊飼糧中添加復(fù)合微生態(tài)制劑，探究其對(duì)奶山羊生產(chǎn)性能、乳成分、血液指標(biāo)的影響，為復(fù)合微生態(tài)制劑在奶山羊飼養(yǎng)過程中的應(yīng)用提供科學(xué)的數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)于2022 年8 ～10 月在湖南羴牧有限公司進(jìn)行。 試驗(yàn)所用復(fù)合微生態(tài)制劑由湖南民芻生物技術(shù)有限公司提供， 選用干酪乳桿菌、植物乳桿菌、雙歧桿菌、羅伊氏乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、嗜酸乳桿菌等菌劑，通過低溫5 ℃和高溫85 ℃以及特殊的培養(yǎng)基（枯草芽孢桿菌和酵母菌滅活后產(chǎn)物），分別馴化嗜酸乳桿菌、羅伊氏桿菌、植物乳桿菌、干酪乳桿菌得到嗜酸乳桿菌、羅伊氏乳桿菌。 植物乳桿菌、 干酪乳桿菌高效酶解谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸的組合物，并與植物提取物加工后組成復(fù)合微生態(tài)制劑， 其中主要菌種干酪乳桿菌和釀酒酵母的有效活菌數(shù)≥1.0×108CFU/g和0.2×108CFU/g。 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。 選擇26 頭1 ～2 胎次、日均產(chǎn)奶量（1.01±0.38）kg 的西農(nóng)薩能奶山羊， 隨機(jī)分為2 組， 每組13頭。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)組每頭羊在基礎(chǔ)飼糧中添加10 g/d 復(fù)合微生態(tài)制劑。 按照牧場正常生產(chǎn)管理流程， 對(duì)照組和試驗(yàn)組每天各飼喂兩次（8：00，16：00），自由飲水，記錄采食量，將剩料控制在3% ～5%，每天擠奶一次，預(yù)飼期7 d，正試期36 d。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

1.2 試驗(yàn)樣品采集和分析 試驗(yàn)期間每天記錄采食量和剩料量， 用于計(jì)算干物質(zhì)采食量（DMI）和料奶比（F/G）。 分別于正試期第15 天和最后一天按照牧場擠奶流程采集奶樣50 mL 各兩份，一份加入到放有防腐劑的奶樣管中充分搖勻置于-20 ℃冰箱用于乳成分檢測(cè)， 一份不加防腐劑放入-80 ℃冰箱保存。 使用MilkoScan FT+200 Type 76150 乳成分儀測(cè)定乳脂肪、乳蛋白、乳糖、非脂固形物、尿素氮、總干物質(zhì)等指標(biāo)。

干物質(zhì)采食量（DMI）=采食量×干物質(zhì)比例；

飼料轉(zhuǎn)化率（FCR）=產(chǎn)奶量/采食量；

料奶比（F/R）=采食量/產(chǎn)奶量。

在試驗(yàn)最后一天晨飼前對(duì)奶山羊進(jìn)行頸靜脈血清和血漿的采集， 將采集的血液樣品用低速離心機(jī)3500 r/min 離心15 min，將血清和血漿用2 mL離心管分裝， 在-80 ℃保存待測(cè)血清生化及免疫和抗氧化指標(biāo)。 血液生化通過全自動(dòng)生化分析儀（Cobas c311， 瑞士） 檢測(cè)總蛋白 （TP）、 白蛋白（ALB）、球蛋白（GKOB）、白球比（A/G）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷草/谷丙比（AST/ALT）、堿性磷酸酶（ALP）、尿素氮（BUN）、葡萄糖（GLU）、甘油三酯（TG）、總膽固醇（CHOL）。 免疫和抗氧化指標(biāo)采用酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒檢測(cè)血清中免疫球蛋白G、免疫球蛋白A、免疫球蛋白M 和白細(xì)胞介素-1 （IL-β）、 白細(xì)胞介素-2（IL-2）、白細(xì)胞介素-4（IL-4）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）、白細(xì)胞介素-8（IL-8）、腫瘤壞死因子-α（TNFα），血清總抗氧化能力（T-AOC）、丙二醛（MDA）、總超氧化物歧化酶（T-SOD），ELISA 試劑盒購自江蘇雨桐生物科技有限公司， 具體操作按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3 數(shù)據(jù)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)Excel（2016）初步統(tǒng)計(jì)，后采用SPSS 20.0（SPSS Inc.，Chicago，USA）進(jìn)行T 檢驗(yàn)分析。 試驗(yàn)數(shù)據(jù)用平均值和SEM 表示，0.05 ＜P ≤0.10 表明有差異趨勢(shì)，P ≤0.05 為差異顯著，P＜0.01 為差異極顯著。

2 結(jié)果分析

2.1 復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)奶山羊采食量、產(chǎn)奶量的影響 由表2 可知，試驗(yàn)組與對(duì)照組相比，干物質(zhì)采食量、產(chǎn)奶量、料奶比差異不顯著（P＞0.05）。

表2 復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)奶山羊采食量、產(chǎn)奶量的影響

2.2 復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)奶山羊乳成分的影響由表3 可知， 試驗(yàn)組與對(duì)照組相比第21 天和43天乳蛋白有升高的趨勢(shì)（P = 0.094，P = 0.069），非脂固形物率在第21 天和43 天也有升高的趨勢(shì)（P = 0.082，P = 0.070），體細(xì)胞、乳脂、乳糖、尿素氮、總固形物率指標(biāo)無顯著差異（P＞0.05）。

表3 復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)奶山羊乳成分的影響

2.3 復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)奶山羊血液生化指標(biāo)的影響 由表4 可知，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組BUN有降低的趨勢(shì)（P = 0.082），GLU 顯著提高66.20%（P＜0.05）； 兩組血清TP、ALB、CLOB、A/G、AST/ALT、TG、CHOL 含量及ALT、ALP、AST 活性均無顯著差異（P＞0.05）。

表4 復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)奶山羊血液生化指標(biāo)的影響

2.4 復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)奶山羊血清免疫指標(biāo)的影響 由表5 可知，各組血清IgG、IgM、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-8 含量均差異不顯著（P＞0.05），但試驗(yàn)組血清免疫球蛋白中IgA 含量較對(duì)照組顯著提高了25.06%（P＜0.01），IL-1、IL-6 含量較對(duì)照組顯著降低了33.23%和15.80%（P＜0.01）。

表5 復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)奶山羊血清免疫指標(biāo)的影響

2.5 復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)奶山羊血清抗氧化指標(biāo)的影響 由表6 可知， 試驗(yàn)組丙二醛含量較對(duì)照組顯著降低16.16%（P＜0.05）， 超氧化物歧化酶含量較對(duì)照組顯著升高35.01%（P＜0.01）， 谷胱甘肽過氧化物酶含量較對(duì)照組顯著提高15.08%（P＜0.05），兩組血清中總抗氧化能力差異不顯著（P＞0.05）。

表6 復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)奶山羊血清抗氧化指標(biāo)的影響

3 討論

3.1 復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)奶山羊生產(chǎn)性能和乳成分的影響 產(chǎn)奶量和乳品質(zhì)是評(píng)價(jià)泌乳奶山羊生產(chǎn)性能的兩個(gè)重要指標(biāo)， 產(chǎn)奶量直接影響奶山羊養(yǎng)殖場的經(jīng)濟(jì)效益，乳品質(zhì)中乳蛋白、乳脂、乳糖等是乳制品的主要成分， 涉及食品安全與消費(fèi)者健康，乳品質(zhì)直接影響乳制品的營養(yǎng)價(jià)值（Kulkami，2022）。 Souza 等（2017）研究發(fā)現(xiàn)，在高乳體細(xì)胞數(shù)的奶牛日糧中添加枯草芽孢桿菌能夠提高產(chǎn)奶量，本試驗(yàn)結(jié)果與其不一致。Sun 等（2013）研究表明， 在飼糧中補(bǔ)充枯草芽孢桿菌能夠線性增加奶牛的乳蛋白率和乳糖產(chǎn)量。 恩和道力格爾（2017）研究發(fā)現(xiàn)，日糧中添加酵母和枯草芽孢桿菌可以提高奶牛乳蛋白的含量， 但對(duì)產(chǎn)奶量無顯著影響，本試驗(yàn)結(jié)果與其一致。 在本研究中，復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)奶山羊生產(chǎn)性能無明顯效果， 但乳蛋白和非脂固形物率都略有提高， 對(duì)其他乳成分體細(xì)胞、乳脂、乳糖、尿素氮、總固形物無不利影響。綜上，關(guān)于復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)提高反芻動(dòng)物生長性能的作用效果存在差異。 造成研究結(jié)果不同的原因可能與試驗(yàn)動(dòng)物的種類、年齡、飼養(yǎng)環(huán)境、疾病感染與機(jī)體免疫力以及微生態(tài)制劑組成成分、活菌數(shù)量等不同有關(guān)。

3.2 復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)奶山羊血液生化的影響血液生化指標(biāo)能夠在一定程度上反映動(dòng)物機(jī)體的生理代謝和健康狀況， 血清蛋白含量高則表明機(jī)體蛋白代謝水平高， 血清蛋白含量低則表明機(jī)體代謝水平低。本試驗(yàn)中，反映機(jī)體營養(yǎng)狀況的TP、ALB 和GLOB 等指標(biāo)以及反映機(jī)體肝臟、腎臟和心臟等臟器功能的ALT、AST 和ALP 等指標(biāo)兩組之間均無差異， 說明飼喂復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)奶山羊的物質(zhì)代謝和臟器機(jī)能沒有負(fù)面影響。 GLU 作為重要的營養(yǎng)性單糖， 有賴于體內(nèi)酶活性和激素的調(diào)節(jié)， 是動(dòng)物代謝活動(dòng)快速應(yīng)變需能的最有效營養(yǎng)素，是大腦神經(jīng)系統(tǒng)、肌肉、脂肪組織、胎兒生長發(fā)育以及乳腺等代謝的唯一能源 （郭東升等，2011）。 GLU 供應(yīng)不足，牛易發(fā)酮病，妊娠羊易發(fā)毒血癥， 嚴(yán)重影響動(dòng)物的生長和健康 （蔡杰，2020）。 本研究中，試驗(yàn)組GLU 顯著提高，對(duì)改善反芻動(dòng)物的健康具有重要意義。 BUN 是蛋白質(zhì)代謝的最終產(chǎn)物，機(jī)體攝入過量蛋白時(shí)，未被利用的蛋白最終會(huì)代謝為BUN，造成日糧營養(yǎng)物質(zhì)的浪費(fèi)，而當(dāng)機(jī)體處于氮負(fù)平衡時(shí)，會(huì)加劇蛋白質(zhì)和氨基酸的分解作用， 引起血液中BUN 含量的升高（李闖，2016）。 本研究中試驗(yàn)組血清BUN 的含量有降低趨勢(shì)， 這與乳酸菌和芽孢桿菌可以降低綿羊和犢牛血液BUN 含量（張志軍等，2012）及復(fù)合微生態(tài)制劑可顯著降低犢牛BUN 含量的結(jié)果相似（魏小霜等，2021），說明復(fù)合微生態(tài)制劑可提高機(jī)體對(duì)蛋白的利用率，減少對(duì)飼糧蛋白的浪費(fèi)，有利于機(jī)體蛋白質(zhì)沉積。

3.3 復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)奶山羊血清免疫指標(biāo)的影響 血清免疫指標(biāo)主要是細(xì)胞因子和免疫球蛋白， 其含量可反映動(dòng)物對(duì)疾病抵抗能力的強(qiáng)弱以及動(dòng)物機(jī)體的免疫器官是否正常， 主要起免疫調(diào)節(jié)作用的是免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM）。其中，IgA參與黏膜免疫反應(yīng)，具有抗菌、抗病毒和抗毒素等免疫學(xué)活性， 是阻礙病原體入侵動(dòng)物機(jī)體的第一道防線；IgM 具有很強(qiáng)的殺菌、溶菌、促吞噬和凝集功能，是機(jī)體免疫中出現(xiàn)最早的抗體；IgG 具有中和毒素、凝集沉淀抗原及激活補(bǔ)體等免疫作用；機(jī)體內(nèi)免疫球蛋白含量越高，免疫功能越強(qiáng)。本試驗(yàn)中復(fù)合微生態(tài)制劑組較對(duì)照組免疫球蛋白A的含量顯著提高。 研究表明， 復(fù)合微生態(tài)制劑可以提高杜寒雜交羊血清中的IgA、IgM 和IgG 含量（惠文，2020）。 崔瑩等（2019）研究結(jié)果也證實(shí)，復(fù)合微生態(tài)制劑可以提高肉羊血清IgA、IgM、IgG 和IFN-α 含量，本研究結(jié)果與之相似，表明復(fù)合微生態(tài)制劑可以促進(jìn)反芻動(dòng)物免疫球蛋白和細(xì)胞因子的分泌合成， 提高反芻動(dòng)物的體液免疫和細(xì)胞免疫水平，提高機(jī)體免疫功能。細(xì)胞因子是由免疫細(xì)胞合成和分泌的小分子多肽，具有調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答、參與炎癥反應(yīng)等多種生物學(xué)功能， 腫瘤壞死因子能夠活化巨噬細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞， 調(diào)節(jié)機(jī)體免疫應(yīng)答反應(yīng)， 啟動(dòng)宿主早期防御系統(tǒng) （沈菲等，2020；Suzue 等2003）。 常見的促炎性白細(xì)胞介素包括IL-1、IL-2、IL-6、IL-8 等， 常見的抗炎性白細(xì)胞介素包括IL-4 和IL-10 等 （Vazirinejad 等，2014）。 本研究中，試驗(yàn)組較對(duì)照組IL-1 和IL-6的含量顯著降低， 這可能是由于奶山羊存在乳房炎，復(fù)合微生物制劑能減少促炎因子的產(chǎn)生，從而減輕奶山羊的炎癥反應(yīng)。

3.4 復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)奶山羊血清抗氧化指標(biāo)的影響 動(dòng)物機(jī)體的抗氧化功能主要依靠抗氧化酶系統(tǒng)發(fā)揮作用， 當(dāng)動(dòng)物機(jī)體受到自身或者外在因素的刺激后，動(dòng)態(tài)平衡被破壞，機(jī)體發(fā)生氧化應(yīng)激反應(yīng)。 氧化應(yīng)激會(huì)產(chǎn)生大量的氧自由基，使生物膜上的多不飽和脂肪酸發(fā)生過氧化，生成脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛（MDA）。 MDA 是體內(nèi)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的終產(chǎn)物，作為細(xì)胞膜質(zhì)的過氧化產(chǎn)物，其含量可以間接反映細(xì)胞的損傷程度，即活性氧自由基攻擊導(dǎo)致的動(dòng)物機(jī)體脂質(zhì)損害（劉冬等，2021）。 MDA會(huì)破壞細(xì)胞膜的完整性，還會(huì)引起細(xì)胞突變，損傷抗氧化防御系統(tǒng)，使動(dòng)物生病甚至死亡。 而機(jī)體同樣存在著可以清除氧自由基的酶促系統(tǒng)，以維持機(jī)體氧化還原的動(dòng)態(tài)平衡（孟子琪，2018）；SOD 是體內(nèi)氧自由基清除系統(tǒng)的主要防線，可以通過清除氧自由基保護(hù)細(xì)胞膜不被氧化，在維持氧自由基代謝平衡方面起著重要作用（程園園等，2012）；T-AOC體現(xiàn)機(jī)體抗氧化酶系統(tǒng)對(duì)外刺激的代償能力；GSH-Px 能夠調(diào)解氧化與抗氧化的平衡。 研究發(fā)現(xiàn)，益生菌在胃腸道內(nèi)發(fā)酵時(shí)能夠產(chǎn)生GSH-Px 和SOD，清除動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生的自由基，進(jìn)而增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化性能， 保護(hù)細(xì)胞膜的完整性（張愛忠等，2010）。王改芳（2020）研究發(fā)現(xiàn)，在肉羊基礎(chǔ)日糧中添加10.0%酵母菌復(fù)合微生態(tài)制劑可顯著提高血清中SOD 活性和T-AOC。 田猷良（2022）發(fā)現(xiàn)，在荷斯坦奶?；A(chǔ)日糧中添加0.10%復(fù)合微生態(tài)制劑可顯著提高奶牛血清中SOD 和T-AOC， 降低MDA 的含量。王英等（2019）研究發(fā)現(xiàn)，乳酸桿菌能顯著提高動(dòng)物血清中GSH-Px 和SOD 含量。 這說明復(fù)合微生態(tài)制劑能夠改善機(jī)體氧化與還原的動(dòng)態(tài)平衡，提高奶山羊機(jī)體消除自由基的能力，從而提高奶山羊的抗氧化功能。

4 結(jié)論

在本試驗(yàn)中，復(fù)合微生態(tài)制劑能夠改善奶山羊乳成分，提高機(jī)體免疫系統(tǒng)和抗氧化能力，減輕氧化應(yīng)激造成的損害，并且對(duì)生產(chǎn)性能無不利影響。