姚曉偉 劉樹(shù)仁 景艷色 賈晨光

目前,結(jié)核病仍然是一個(gè)威脅全球公共衛(wèi)生安全的嚴(yán)重問(wèn)題。肺外結(jié)核是由肺結(jié)核通過(guò)血液或淋巴系統(tǒng)播散到人體的各個(gè)臟器,發(fā)生在肺部以外部位的結(jié)核病。骨關(guān)節(jié)結(jié)核約占肺外結(jié)核患者的11.3%～34.5%[1]。骨關(guān)節(jié)結(jié)核病變組織由于處于循環(huán)終末端,病灶中結(jié)核分枝桿菌數(shù)量少,加之病灶處病變組織直接獲取困難,傳統(tǒng)檢測(cè)方法陽(yáng)性率低,使得骨關(guān)節(jié)結(jié)核的早期診斷仍然面臨挑戰(zhàn)[2]。近年來(lái),二代測(cè)序技術(shù)(next generation sequencing,NGS)的發(fā)展明顯提高了病原菌檢測(cè)陽(yáng)性率[3-5],但其在骨關(guān)節(jié)結(jié)核診斷中應(yīng)用價(jià)值的研究報(bào)道還較少[6]。本研究旨在通過(guò)回顧性分析疑似骨關(guān)節(jié)結(jié)核患者的NGS與BACTEC MGIT 960分枝桿菌培養(yǎng)(簡(jiǎn)稱“培養(yǎng)”)和利福平耐藥實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增檢測(cè)(GeneXpert MTB/R1F,簡(jiǎn)稱“Xpert”)的檢測(cè)結(jié)果,評(píng)估NGS技術(shù)在骨關(guān)節(jié)結(jié)核診斷中的應(yīng)用價(jià)值。

對(duì)象和方法

一、研究對(duì)象

采用回顧性研究方法,參照入組標(biāo)準(zhǔn)收集2019年12月至2022年12月河北省胸科醫(yī)院骨科收治的185例疑似骨關(guān)節(jié)結(jié)核患者臨床資料,根據(jù)最終臨床診斷,將患者分為結(jié)核組(骨關(guān)節(jié)結(jié)核155例)和非結(jié)核組(非骨關(guān)節(jié)結(jié)核30例),具體見(jiàn)表1。其中,非結(jié)核組患者包括化膿感染性疾病24例、退變性骨關(guān)節(jié)炎和風(fēng)濕免疫性骨關(guān)節(jié)病各3例。所有患者病灶標(biāo)本(包括51份膿液、89份肉芽組織和45份骨組織)均經(jīng)手術(shù)或者穿刺途徑獲取,且均同時(shí)送檢NGS、培養(yǎng)及Xpert。本研究經(jīng)河北省胸科醫(yī)院倫理委員會(huì)審批(審批號(hào):XK2022023)。

表1 患者一般臨床資料在兩組中的分布情況

入組標(biāo)準(zhǔn):(1)存在骨關(guān)節(jié)結(jié)核癥狀及體征,臨床懷疑骨關(guān)節(jié)結(jié)核;(2)實(shí)驗(yàn)室初步檢查提示存在結(jié)核感染;(3)患者臨床特征及影像學(xué)表現(xiàn)支持骨關(guān)節(jié)結(jié)核,且抗結(jié)核治療有效;(4)具有完整的臨床資料。需同時(shí)滿足以上4項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)。

排除標(biāo)準(zhǔn):(1)有精神疾病者;(2)合并HIV/AIDS等免疫系統(tǒng)疾病;(3)經(jīng)臨床癥狀、影像學(xué)、實(shí)驗(yàn)室檢查、病原學(xué)及病理學(xué)等聯(lián)合診斷已排除骨關(guān)節(jié)結(jié)核的患者。

二、研究方法

1.標(biāo)本的采集:所有患者均經(jīng)手術(shù)或穿刺病變部位采集病灶部位標(biāo)本。采集過(guò)程嚴(yán)格按照手術(shù)無(wú)菌操作原則在層流手術(shù)室內(nèi)進(jìn)行。在標(biāo)本采集、轉(zhuǎn)移、分裝過(guò)程中杜絕與環(huán)境空氣接觸,病灶膿液或病灶組織采用無(wú)菌采集瓶進(jìn)口管直接通過(guò)負(fù)壓吸引進(jìn)入專(zhuān)用采集瓶,再通過(guò)無(wú)菌注射器注入相關(guān)封裝容器進(jìn)行送檢與培養(yǎng)。

參照《結(jié)核病診斷實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)規(guī)程》[7],將所有組織標(biāo)本充分研磨,用N-乙酰-L-半胱氨酸-氫氧化鈉(NALC-2%NAOH)適當(dāng)清洗,3000 r/min 離心半徑8 cm,離心20 min。肉芽組織、骨組織加入適量磷酸鹽緩沖液(PBS緩沖液)后,應(yīng)用微型研磨器(Fast-prep24,美國(guó) MPBiomedicals公司)研磨,按組織的堅(jiān)韌度等調(diào)節(jié)設(shè)置按鈕,采用頻率為6.5 m/L,設(shè)置時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)為 20 s,振蕩2～3次形成勻漿,制成懸液,均勻分為3份,分別用于分枝桿菌培養(yǎng)、 Xpert檢測(cè)和NGS檢測(cè)。

2.分枝桿菌培養(yǎng):取2 ml標(biāo)本用于培養(yǎng),嚴(yán)格按照BACTEC MGIT 960系統(tǒng)操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行,培養(yǎng)時(shí)間設(shè)定為42 d。儀器報(bào)告陽(yáng)性后,取儀器報(bào)陽(yáng)培養(yǎng)液進(jìn)行涂片鏡檢,確定菌純度后使用MPB64抗原法和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)進(jìn)行菌群鑒定。

3.NGS檢測(cè):將獲取的標(biāo)本裝入不同的無(wú)菌容器,送至實(shí)驗(yàn)室(中國(guó)上海冰緣醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室)。取500 μl標(biāo)本,經(jīng)玻璃珠混合研磨后按照DNA/RNA Miniprep Kit(R2002,ZymoBIOMICS)試劑盒(北京天根生化科技有限公司生產(chǎn))步驟提取病原體DNA/RNA產(chǎn)物,使用RTIII All-in-One Mix(MR05001,莫納生物科技有限公司)逆轉(zhuǎn)錄試劑盒步驟將RNA產(chǎn)物逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。以cDNA和DNA產(chǎn)物為模板,使用病原體靶向測(cè)序建庫(kù)試劑盒(Pathogeno One標(biāo)準(zhǔn)版,SJ0005,上海冰緣醫(yī)療科技有限公司)進(jìn)行多重PCR擴(kuò)增富集(一輪PCR擴(kuò)增),擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)DNA純化磁珠分選后,再通過(guò)二輪PCR擴(kuò)增,加上測(cè)序接頭試劑盒和用于樣本識(shí)別的barcode序列試劑盒,產(chǎn)物再次經(jīng)DNA純化后,即得到制備好的測(cè)序文庫(kù)。制備好的文庫(kù)使用瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行質(zhì)檢,然后再使用Qubit 4.0熒光計(jì)準(zhǔn)確定量DNA濃度,按照文庫(kù)濃度定量結(jié)果進(jìn)行混庫(kù),再經(jīng)過(guò)稀釋和旋渦振蕩使文庫(kù)變性。其后使用Illumina MiSeq Reagent Nano Kit進(jìn)行高通量測(cè)序,測(cè)序平臺(tái)為Illumina MiSeq,平均每個(gè)文庫(kù)的數(shù)據(jù)量為0.03～0.05 M reads,測(cè)序讀長(zhǎng)為PE60。對(duì)下機(jī)數(shù)據(jù)進(jìn)行引物識(shí)別,并與病原數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì),最終確定樣本中的病原體種類(lèi)和含量?？紤]結(jié)核分枝桿菌為胞內(nèi)致病菌,豐度較低,污染可能性小,本研究設(shè)定了較低的閾值,即當(dāng)至少1個(gè)讀數(shù)被映射到種或?qū)偎綍r(shí),則被視為結(jié)核分枝桿菌陽(yáng)性。

4.Xpert檢測(cè):按照利福平耐藥實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增檢測(cè)系統(tǒng)儀器使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作(美國(guó)Cepheid公司)。取2 ml標(biāo)本置于螺旋蓋的無(wú)菌管中,加入2 ml標(biāo)本處理液,旋緊管蓋,在渦旋振蕩器上渦旋振蕩10 s,室溫靜置10 min,在渦旋振蕩器上再次渦旋振蕩10 s,室溫靜置5 min,使標(biāo)本充分液化。吸取2 ml液化標(biāo)本至Xpert反應(yīng)試劑盒,將其放置到Xpert MTB/RIF模塊中,儀器開(kāi)始進(jìn)行自動(dòng)化檢測(cè)。反應(yīng)結(jié)束后,檢測(cè)結(jié)果自動(dòng)判讀,在檢測(cè)系統(tǒng)窗口下即可直接觀察測(cè)試結(jié)果。

5.臨床診斷標(biāo)準(zhǔn):參考《WS 288—2017肺結(jié)核診斷》[8]與《WS 196—2017結(jié)核病分類(lèi)》[9]進(jìn)行骨關(guān)節(jié)結(jié)核的臨床診斷。符合以下全部條件則臨床診斷為骨關(guān)節(jié)結(jié)核:(1)患者臨床癥狀、體征與影像學(xué)(包括X線攝影、CT及MRI檢查)發(fā)現(xiàn)的局部膿腫、死骨與結(jié)核病表現(xiàn)相符;(2)標(biāo)本病理學(xué)提示干酪樣壞死為朗罕細(xì)胞肉芽腫形成;(3)病灶標(biāo)本的微生物學(xué)檢測(cè)(培養(yǎng)法或者Xpert檢測(cè))證實(shí)為結(jié)核分枝桿菌感染;(4)規(guī)律抗結(jié)核藥物治療6個(gè)月以上,結(jié)核中毒癥狀及局部癥狀消失。

6.病原學(xué)檢測(cè)質(zhì)量控制:(1)陽(yáng)性質(zhì)控:使用企業(yè)自制的參考品,構(gòu)建3個(gè)重復(fù)文庫(kù)并上機(jī)測(cè)序,以測(cè)試擴(kuò)增的靈敏度。同批次試劑購(gòu)買(mǎi)到貨后,進(jìn)行質(zhì)粒(即已知混菌)性能測(cè)試。(2)陰性質(zhì)控:使用無(wú)菌無(wú)酶水與當(dāng)日樣本一起提取質(zhì)控,查看其提取過(guò)程是否存在污染。(3)純化質(zhì)控:使用無(wú)菌無(wú)酶水從一輪擴(kuò)增開(kāi)始參與試驗(yàn),查看建庫(kù)過(guò)程是否存在污染。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

使用SPSS 20.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以“例(百分率,%)”描述,兩組間差異的比較采用χ2檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。以最終臨床診斷為參考標(biāo)準(zhǔn),計(jì)算并比較NGS、分枝桿菌培養(yǎng)及Xpert檢測(cè)標(biāo)本中結(jié)核分枝桿菌的敏感度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值、符合率、Kappa值及約登指數(shù),并計(jì)算NGS檢測(cè)各臨床標(biāo)本中結(jié)核分枝桿菌的陽(yáng)性檢出率,以了解NGS檢測(cè)不同臨床標(biāo)本的診斷準(zhǔn)確性。繪制受試者工作特征(ROC)曲線,計(jì)算ROC曲線下面積(AUC),以判斷不同檢測(cè)方法對(duì)臨床診斷結(jié)果的診斷價(jià)值。其中,Kappa值在0.00～0.20為極低一致性、0.21～0.40為一般一致性、0.41～0.60為中度一致性、0.61～0.80為高度一致性、0.81～1.00為幾乎完全一致;AUC的取值范圍為0.5～1,AUC值越大說(shuō)明該分類(lèi)效果越好。

結(jié) 果

一、不同檢測(cè)方法陽(yáng)性結(jié)果的檢出情況

185例疑似骨關(guān)節(jié)結(jié)核患者中,NGS檢測(cè)陽(yáng)性117例(63.24%),Xpert檢測(cè)陽(yáng)性100例(54.05%),培養(yǎng)陽(yáng)性66例(35.68%)。其中,單一NGS檢測(cè)陽(yáng)性74例,單一Xpert檢測(cè)陽(yáng)性55例,單一培養(yǎng)陽(yáng)性30例,NGS+Xpert+培養(yǎng)均陽(yáng)性32例,NGS+Xpert均陽(yáng)性10例,NGS+培養(yǎng)均陽(yáng)性1例,培養(yǎng)+Xpert均陽(yáng)性3例;在Xpert檢測(cè)陰性的85例患者中,NGS檢測(cè)陽(yáng)性75例(88.24%);在培養(yǎng)陰性的119例患者中,NGS檢測(cè)陽(yáng)性84例(70.59%)。NGS檢測(cè)骨關(guān)節(jié)結(jié)核的陽(yáng)性率明顯高于Xpert和分枝桿菌培養(yǎng),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=24.982,P<0.001;χ2=37.934,P<0.001)。

二、不同檢測(cè)方法對(duì)骨關(guān)節(jié)結(jié)核的檢測(cè)效能

以最終臨床診斷為標(biāo)準(zhǔn),NGS、Xpert和培養(yǎng)法診斷骨關(guān)節(jié)結(jié)核的敏感度分別為74.84%、64.52%和42.58%,特異度分別為 96.67%、100.00%和100.00%,診斷符合率分別為78.38%、70.27%和51.89%,Kappa值分別為0.799、0.590和0.504,NGS與臨床診斷結(jié)果的一致性程度較強(qiáng),Xpert和培養(yǎng)與臨床診斷結(jié)果的一致性中等。具體見(jiàn)表2。30例非結(jié)核組患者中,1例患者NGS檢測(cè)陽(yáng)性(為術(shù)中搔刮傷口竇道處病灶標(biāo)本測(cè)得陽(yáng)性,考慮外界污染可能性,后根據(jù)典型影像學(xué)歸為“腰椎化膿性脊柱炎”,誤診率為3.33%(1/30),而Xpert和培養(yǎng)法均未在非結(jié)核組患者中檢測(cè)出陽(yáng)性,特異度均為100.00%。

表2 185例疑似骨關(guān)節(jié)結(jié)核患者經(jīng)NGS、Xpert及培養(yǎng)法檢測(cè)情況

針對(duì)NGS、Xpert和培養(yǎng)法構(gòu)建ROC曲線(圖1),結(jié)果顯示:NGS、Xpert和培養(yǎng)法檢測(cè)的AUC值(95%CI)分別為0.867(0.693～0.941)、0.703(0.612～0.784)和0.623(0.529～0.717),三者對(duì)臨床診斷結(jié)果的診斷價(jià)值均較高,以NGS檢測(cè)為最高(圖1)。

圖1 NGS、Xpert和分枝桿菌培養(yǎng)診斷骨關(guān)節(jié)結(jié)核的受試者操作特征曲線

三、 NGS檢測(cè)不同標(biāo)本的檢出情況

51例送檢膿液標(biāo)本患者中,47例最終診斷為骨關(guān)節(jié)結(jié)核,其中41例NGS檢測(cè)陽(yáng)性。89例送檢肉芽組織標(biāo)本患者中,79例最終診斷為骨關(guān)節(jié)結(jié)核,其中56例NGS檢測(cè)陽(yáng)性。45例送檢骨組織患者中,29例最終診斷為骨關(guān)節(jié)結(jié)核,其中20例NGS檢測(cè)陽(yáng)性。NGS檢測(cè)膿液標(biāo)本的陽(yáng)性率高于肉芽組織及骨組織送標(biāo)本,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.560,P=0.031;χ2=13.335,P<0.001);檢測(cè)膿液標(biāo)本的陽(yáng)性率高于Xpert和培養(yǎng),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=2.468,P=0.016;χ2=16.452,P<0.001);檢測(cè)肉芽組織的陽(yáng)性率高于Xpert和培養(yǎng),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.480,P=0.024;χ2=15.208,P<0.001);NGS檢測(cè)骨組織標(biāo)本的陽(yáng)性率高于培養(yǎng),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.169,P=0.028)。具體見(jiàn)表3。

表3 NGS檢測(cè)骨關(guān)節(jié)結(jié)核患者不同臨床標(biāo)本的MTB檢出情況

討 論

盡管分枝桿菌培養(yǎng)是診斷結(jié)核病的“金標(biāo)準(zhǔn)”,但其培養(yǎng)條件要求高、周期長(zhǎng)、敏感度低,使得臨床中大部分的骨關(guān)節(jié)結(jié)核患者的病原學(xué)檢測(cè)多為陰性[10]。本研究中185例疑似骨關(guān)節(jié)結(jié)核患者的傳統(tǒng)分枝桿菌培養(yǎng)陽(yáng)性率僅為35.68%,提示僅依靠分枝桿菌培養(yǎng)進(jìn)行骨關(guān)節(jié)結(jié)核診斷,會(huì)導(dǎo)致大量的病原學(xué)陰性患者被漏診。但隨著分子生物學(xué)診斷技術(shù)的飛速發(fā)展,尤其是Xper技術(shù)的出現(xiàn),大大提高了結(jié)核分枝桿菌的檢出率,具有檢測(cè)快速、準(zhǔn)確性高、操作簡(jiǎn)便、多重檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn),可用于早期診斷和感染篩查。但其試劑成本較貴,檢測(cè)費(fèi)用高,不利于基層廣泛使用,尚需在臨床工作中進(jìn)一步實(shí)踐和探索[11]。

2019年,通過(guò)NGS技術(shù)首先發(fā)現(xiàn)了新型冠狀病毒的遺傳學(xué)信息測(cè)序。作為一種新興的病原學(xué)檢測(cè)方法,NGS技術(shù)克服了傳統(tǒng)檢測(cè)方法的局限性,可對(duì)樣本中所有核酸進(jìn)行平行檢測(cè),被用于病原菌和耐藥基因的檢測(cè),以及調(diào)查流行病來(lái)源等方面[12],在目前的臨床工作中主要用于病原菌的檢測(cè)。由于NGS是對(duì)臨床樣本直接進(jìn)行無(wú)假設(shè)性、培養(yǎng)獨(dú)立的病原體檢測(cè),使其可檢測(cè)任意病原體,包括生長(zhǎng)緩慢及較難培養(yǎng)的結(jié)核分枝桿菌,因此,理論上NGS技術(shù)檢測(cè)分枝桿菌的敏感度應(yīng)該為100%,但這與臨床實(shí)際尚有出入,分析原因主要為:(1)檢測(cè)標(biāo)本復(fù)雜;(2)臨床檢測(cè)標(biāo)本均含有大量人類(lèi)基因,使得測(cè)序結(jié)果中99%以上為人源序列,微生物序列僅占極小部分,降低其檢測(cè)的敏感度;(3)檢測(cè)成本高,限制了測(cè)序的深度[13]。針對(duì)這一問(wèn)題,目前現(xiàn)有技術(shù)可以消耗部分宿主核酸,以減少人類(lèi)宿主背景序列在數(shù)據(jù)中的相對(duì)比例,進(jìn)而提高病原體的檢測(cè)敏感度[14],但該技術(shù)尚未成熟;(4)在采樣過(guò)程及環(huán)境中,甚至檢測(cè)試劑中均無(wú)法避免污染菌[15]和定植菌的存在,使得NGS可檢測(cè)出包括病原菌、污染菌及定植菌在內(nèi)的所有微生物,但目前尚無(wú)明確的標(biāo)準(zhǔn)用于鑒別病原菌、污染菌及定植菌,僅可測(cè)定微生物序列占總序列的百分比,這對(duì)結(jié)果的臨床判斷也帶來(lái)了巨大挑戰(zhàn)[16]。臨床工作者應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作,并在檢測(cè)過(guò)程中加入陰性對(duì)照,并結(jié)合序列濃度及其他輔助化驗(yàn)檢查、臨床特點(diǎn)做出綜合判斷。

本研究發(fā)現(xiàn),NGS檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的陽(yáng)性檢出率均明顯高于Xpert和培養(yǎng)法,并可檢出Xpert陰性和培養(yǎng)陰性患者中大于1/2的患者,提示NGS診斷骨關(guān)節(jié)結(jié)核優(yōu)于Xpert和培養(yǎng)法,具有重要臨床價(jià)值。以最終臨床診斷為參考標(biāo)準(zhǔn),3種檢測(cè)方法均表現(xiàn)出較高的特異度,與姚黎明等[17]報(bào)道m(xù)NGS診斷骨關(guān)節(jié)結(jié)核的敏感度(57.68%)及特異度(97.65%)相符。說(shuō)明NGS技術(shù)不僅可提高結(jié)核分枝桿菌的陽(yáng)性檢出率,還可以避免環(huán)境污染、送檢污染及實(shí)驗(yàn)交叉污染,具有較高的特異度,對(duì)早期診斷骨關(guān)節(jié)結(jié)核具有重要價(jià)值。研究還發(fā)現(xiàn),NGS診斷骨關(guān)節(jié)結(jié)核的符合率(78.38%)明顯高于Xpert(70.27%)和培養(yǎng)(51.89%),且AUC值(0.867)也高于Xpert(0.703)和培養(yǎng)法(0.623)。說(shuō)明與Xpert和培養(yǎng)相比,NGS檢測(cè)結(jié)果與臨床診斷的一致性較強(qiáng),診斷價(jià)值也較高。提示NGS對(duì)骨關(guān)節(jié)結(jié)核具有更好的診斷效能,可提供重要的臨床指導(dǎo)。

目前,NGS應(yīng)用于臨床的研究還較少,而通過(guò)檢測(cè)不同臨床標(biāo)本診斷骨關(guān)節(jié)結(jié)核準(zhǔn)確性的研究更少[18-19]。本研究發(fā)現(xiàn),NGS檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌陽(yáng)性率的高低還與檢測(cè)的標(biāo)本類(lèi)型相關(guān),即檢測(cè)膿液的陽(yáng)性率(80.39%)明顯高于肉芽組織(62.92%)和骨組織(44.44%),說(shuō)明標(biāo)本組織密度越低陽(yáng)性檢出率越高,這為臨床標(biāo)本的送檢提供了有利參考。分析各種標(biāo)本檢測(cè)陽(yáng)性率差異的原因可能為:骨關(guān)節(jié)結(jié)核病變發(fā)展早期,病灶處菌量較多,機(jī)體處于較強(qiáng)變態(tài)反應(yīng)期,組織器官中血管的滲透性較高,炎性介質(zhì)及蛋白質(zhì)向血管外滲出,此時(shí)處于以滲出為主的膿液性病理表現(xiàn),主要表現(xiàn)為漿液性、纖維蛋白炎性滲出,經(jīng)過(guò)滲出、壞死、增生變化逐漸形成結(jié)核性肉芽組織及干酪樣壞死物,干酪物質(zhì)進(jìn)一步鈣化,最后形成硬化骨組織,此時(shí)菌量減少。因此,在病理過(guò)程的不同階段,結(jié)核分枝桿菌濃度分布情況不同,致不同標(biāo)本檢測(cè)陽(yáng)性率不同[20-22]。

本研究仍存在一定的局限性。首先,本研究為單中心研究,樣本收集前的一些臨床資料可能不夠完善;其次,由于本單位就診患者多為高度疑似結(jié)核病患者,導(dǎo)致非結(jié)核組患者樣本量較小,可能會(huì)使結(jié)果產(chǎn)生一定的偏倚,影響結(jié)論的精準(zhǔn)度和可靠性。未來(lái)還需持續(xù)開(kāi)展大樣本多中心研究以提高研究結(jié)果的可靠性。

綜上所述,NGS可明顯提高骨關(guān)節(jié)結(jié)核患者的病原學(xué)陽(yáng)性檢出率,為臨床早期發(fā)現(xiàn)、早期治療骨關(guān)節(jié)結(jié)核提供了有效方法。并建議臨床優(yōu)先送檢膿液標(biāo)本行NGS檢測(cè)。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突

作者貢獻(xiàn)姚曉偉:搜集病案信息、撰寫(xiě)文章;劉樹(shù)仁和景艷色:搜集病案信息;賈晨光:搜集病案信息、對(duì)文章的知識(shí)性內(nèi)容作批評(píng)性審閱和指導(dǎo)