潘福竺,賴華清,吳宏偉,張建永

(1.遵義醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院,貴州 遵義 563099;2.中國中醫(yī)科學(xué)院 中藥研究所,北京 100700)

濕疹是一種受體內(nèi)外多種因素所致的有滲出傾向的過敏性炎性皮膚病,臨床上主要表現(xiàn)為反復(fù)瘙癢及分布對稱的多形性損害[1]。其臨床發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜,目前治療濕疹多是從抗組胺、抗菌、抗前列腺素(PG)等方面進(jìn)行[2]。西醫(yī)常采用糖皮質(zhì)激素類藥物進(jìn)行抑制,但長期使用易出現(xiàn)毛細(xì)血管擴(kuò)張、皮膚萎縮等副作用,停藥后也易復(fù)發(fā)[3]。中藥因其作用溫和、副作用少、能多成分綜合調(diào)理等優(yōu)勢,可為濕疹的治療提供更加和緩的療效,并減輕不良反應(yīng)的發(fā)生。因此,提供一種對濕疹具有較好療效且能夠使其不易復(fù)發(fā)的中藥組合物可為濕疹的臨床治療提供更多的參考及選擇。

香榧(Torreyagrandiscv.Merrillii)為紅豆杉科(Taxaceae)榧屬常綠喬木,是中國特有的珍貴經(jīng)濟(jì)樹種,主要產(chǎn)自江浙等地[4]。香榧含有豐富的脂肪酸、氨基酸、黃酮類及揮發(fā)油等營養(yǎng)物質(zhì)及活性成分,其中揮發(fā)油多存在于香榧假種皮中,對金黃色葡萄球菌等細(xì)菌和真菌均能較好地抑制,因此可通過抑菌來達(dá)到減輕濕疹癥狀的效果[5-6]。徐長卿[7]為蘿摩科草本植物徐長卿[Cynanchumpaniculatum(Bge.)Kitag.]的干燥根和根莖,含有丹皮酚等多種化學(xué)成分,具有止痛、抗炎及抗過敏等藥理作用。楊淑琴[8]的研究表明,徐長卿對蕁麻疹、濕疹等皮膚病均具有一定的治療作用。蛇床子為傘形科蛇床屬植物蛇床[Cnidiummonnieri(L.)Cuss.]的干燥成熟果實(shí),含有香豆素類及揮發(fā)油類等化學(xué)成分[9],宋宜蕾等[10]證明了蛇床子素具有一定的抗炎及抗過敏作用,對特應(yīng)性皮炎及過敏性皮膚病均有治療作用,因此其可能對濕疹的治療也具有一定的療效。

巴布劑是一種在日本泥罨劑的基礎(chǔ)上開發(fā)起來的新型制劑,主要包括背襯層、膏體層和防粘層3個部分,具有載藥量大、生物利用度高、透氣性好及透皮效果好等優(yōu)點(diǎn),現(xiàn)已在多個國家得到廣泛應(yīng)用[11]。巴布劑基質(zhì)是由水溶性高分子材料構(gòu)成,對皮膚的刺激性小、保濕性較好[12]。與口服給藥及注射給藥相比,巴布劑局部作用明顯,安全性高,可降低全身毒副作用的風(fēng)險。此外,其給藥方式引起肝臟首過效應(yīng)的可能也相對較小。

因此,本研究基于香榧假種皮揮發(fā)油抑菌殺菌,徐長卿止痛抗炎以及蛇床子抗炎抗過敏等藥理作用制備一款中藥復(fù)方巴布劑。采用單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn),以感官評分作為評價指標(biāo),對巴布劑基質(zhì)的組成配比及其載藥量進(jìn)行優(yōu)選,旨在為中藥巴布劑的開發(fā)提供一定的借鑒方法,并為濕疹的治療提供一定的參考。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器 香榧假種皮(貴州務(wù)川萬年峰農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司,批號2021090601);徐長卿(康美藥業(yè)股份有限公司,批號210801851);蛇床子(康美藥業(yè)股份有限公司,批號210803261);聚乙烯醇(PVA,上海麥克林生化科技有限公司,批號C14782532);明膠(北京索萊寶科技有限公司,批號712B032);羧甲基纖維素鈉(CMC-Na,北京索萊寶科技有限公司,批號629W022);甘油(北京索萊寶科技有限公司,批號427G033)。

FA2004型電子天平(上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司);WH-10型恒溫水浴槽(杭州佑寧儀器有限公司);Dura 12型實(shí)驗(yàn)室超純水機(jī)[澤拉布儀器科技(上海)有限公司];800 Y型多功能粉碎機(jī)(永康市鉑歐五金制品有限公司);SHB-B95型循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長城科工貿(mào)有限公司);98-1-B型電子調(diào)溫電熱套(天津市泰斯特儀器有限公司);SB-3200D型超聲波清洗機(jī)(寧波新藝超聲設(shè)備有限公司);C21-U59E型電磁爐(浙江蘇泊爾股份有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 中藥提取物的制備方法及工藝流程

1.2.1.1 香榧假種皮揮發(fā)油的制備方法 根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,將干燥的香榧假種皮粉碎后,過10目篩網(wǎng),取篩網(wǎng)下層的假種皮,加入5倍量的蒸餾水浸泡6 h,采用水蒸氣蒸餾法回流提取2.5 h,經(jīng)揮發(fā)油提取器分離后,收集得到香榧假種皮揮發(fā)油。

1.2.1.2 徐長卿浸膏的制備方法 參照文獻(xiàn)[13]方法并進(jìn)行調(diào)整,將干燥的徐長卿飲片粉碎后,過10目篩網(wǎng),取篩網(wǎng)下層的飲片,加入10倍量的蒸餾水浸泡20 min。以武火進(jìn)行第一次煎煮,使得藥液溫度快速上升,從而避免藥性揮發(fā)、藥效降低,煎煮時間為20 min。后以文火繼續(xù)煎煮15 min,使得原料中的有效成分能夠在此溫度下持續(xù)轉(zhuǎn)移至水煎液中,提升有效成分的提取效率,從而保證組合物的治愈效果。最后利用200目篩網(wǎng)趁熱過濾,并將藥液加熱濃縮,即可制得徐長卿浸膏。

1.2.1.3 蛇床子浸膏的制備方法 參照文獻(xiàn)[14-15]方法并進(jìn)行調(diào)整,將干燥的蛇床子飲片粉碎后,過10目篩網(wǎng),取篩網(wǎng)下層的飲片,加入10倍量的蒸餾水浸泡6 h,煎煮30 min,并利用200目篩網(wǎng)趁熱過濾得到煎煮液。后在煎煮液中加入80%的乙醇醇沉24 h,加入乙醇的重量為煎煮液重量的10%。最后減壓過濾、加熱濃縮,制得蛇床子浸膏,見圖1。

圖1 中藥提取物制備工藝流程

1.2.2 巴布劑空白基質(zhì)的制備 參考劉林等[16]的方法并進(jìn)行調(diào)整,得到巴布劑空白基質(zhì)的初始處方為：骨架材料PVA 4.00 g,賦形劑明膠3.00 g,黏合劑CMC-Na 2.00 g,保濕劑甘油10.00 g。

按照初始處方設(shè)計(jì)的量,稱取PVA和明膠,并加入一定量的蒸餾水分別制成22%的PVA膠體和22%的明膠膠體,利用超聲將PVA膠體中的氣泡消除后,將其放置室溫進(jìn)行溶脹,明膠膠體同樣放置室溫進(jìn)行溶脹。最后將兩者放入60 ℃水浴鍋中進(jìn)行加熱,待充分溶解后,將明膠緩慢倒入PVA中,得A相。另稱取CMC-Na,用甘油分散后,于水浴中充分混合,得B相。將B相緩慢加入到A相中,攪拌均勻后,水浴煉和10 min,最終趁熱涂布于無紡布上,覆蓋保護(hù)膜,放置1 d,即得。

1.2.3 巴布劑基質(zhì)處方探究單因素實(shí)驗(yàn)

1.2.3.1 PVA用量對巴布劑基質(zhì)性能的影響 如表1所示,在其它條件不變的情況下,分別添加PVA 3.00、3.50、4.00、4.50、5.00 g,按照1.2.2項(xiàng)下的方法進(jìn)行操作,通過感官評價篩選出其中較好的水平。

表1 PVA用量的單因素實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.2.3.2 明膠用量對巴布劑基質(zhì)性能的影響 如表2所示,在其它條件不變的情況下,分別添加明膠2.00、2.50、3.00、3.50、4.00 g,按照1.2.2項(xiàng)下的方法進(jìn)行操作,通過感官評價篩選出其中較好的水平。

表2 明膠用量的單因素實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.2.3.3 CMC-Na用量對巴布劑基質(zhì)性能的影響 如表3所示,在其它條件不變的情況下,分別添加CMC-Na 1.00、1.50、2.00、2.50、3.00 g,按照1.2.2項(xiàng)下的方法進(jìn)行操作,通過感官評價篩選出其中較好的水平。

表3 CMC-Na用量的單因素實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.2.3.4 甘油用量對巴布劑基質(zhì)性能的影響 如表4所示,在其它條件不變的情況下,分別添加甘油6.00、8.00、10.00、12.00、14.00 g,按照1.2.2項(xiàng)下的方法進(jìn)行操作,通過感官評價篩選出其中較好的水平。

表4 甘油用量的單因素實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.2.4 巴布劑基質(zhì)處方優(yōu)化的正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 如表5所示,根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果,確定各因素用量的大致范圍,設(shè)計(jì)中藥復(fù)方巴布劑基質(zhì)四因素3水平正交實(shí)驗(yàn)。按照1.2.2項(xiàng)下的方法進(jìn)行操作,以感官評價分?jǐn)?shù)為評價指標(biāo),篩選出制備巴布劑基質(zhì)的最優(yōu)處方。

表5 正交設(shè)計(jì)因素及水平

1.2.5 巴布劑載藥量實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 通過預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,將香榧假種皮揮發(fā)油、徐長卿浸膏及蛇床子浸膏以1∶1∶1的比例進(jìn)行混合得到中藥復(fù)合物,后將中藥復(fù)合物迅速倒入按1.2.2項(xiàng)下制備得到的空白基質(zhì)中,于60 ℃水浴鍋中攪拌均勻并趁熱涂布,進(jìn)行載藥量分別為10%、20%、30%、40%、50%的載藥量實(shí)驗(yàn),以感官評價分?jǐn)?shù)為評價指標(biāo),篩選出巴布劑的最佳載藥量。

1.2.6 中藥復(fù)方巴布劑的感官評價標(biāo)準(zhǔn) 按照表6中的感官評分標(biāo)準(zhǔn)[17-18],選取8位有相關(guān)專業(yè)背景的評價員進(jìn)行感官評價,并取平均值作為中藥復(fù)方巴布劑評價指標(biāo)的結(jié)果。

表6 中藥復(fù)方巴布劑感官評分標(biāo)準(zhǔn)

1.3 數(shù)據(jù)處理 以上每個實(shí)驗(yàn)均平行重復(fù)3次,取其平均值作為實(shí)驗(yàn)結(jié)果。采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,P<0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,并采用GraphPad Prism 8.0.2軟件進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)及載藥量實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 PVA用量對巴布劑基質(zhì)性能的影響 如圖2所示,當(dāng)PVA用量為3.50 g時,巴布劑基質(zhì)成型性好,黏性適中,皮膚追隨性好;當(dāng)PVA用量為3.00 g時,膏體稍硬,皮膚追隨性較差;當(dāng)PVA用量為5.00 g時,膏體較軟,涂布時易斷條且揭帖于皮膚后殘留量較多。

圖2 PVA用量的單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1.2 明膠用量對巴布劑基質(zhì)性能的影響 如圖3所示,當(dāng)明膠用量為3.50 g時,膏體成型性好,容易涂布且黏性適中;當(dāng)明膠用量為2.00 g時,膏體較硬,涂展性較差;當(dāng)明膠用量為4.00 g時,膏體成型性較差,殘留量較多。

圖3 明膠用量的單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1.3 CMC-Na用量對巴布劑基質(zhì)性能的影響 如圖4所示,當(dāng)CMC-Na用量為2.00 g時,膏體成型性及皮膚追隨性適中,揭帖于皮膚后基本無殘留;當(dāng)CMC-Na用量為1.00 g時,膏體較軟,不易涂布且殘留量較多;當(dāng)CMC-Na用量為3.00 g時,膏體偏硬,涂展性及皮膚追隨性較差。

圖4 CMC-Na用量的單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1.4 甘油用量對巴布劑基質(zhì)性能的影響 如圖5所示,當(dāng)甘油用量為12.00 g時,膏體光澤度好,成型性及皮膚追隨性適中;當(dāng)甘油用量為6.00 g時,膏體顆粒感明顯,無光澤度,皮追隨性較差;當(dāng)甘油用量為14.00 g時,膏體較軟,揭帖于皮膚后殘留量較多。

圖5 甘油用量的單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表7和表8所示。根據(jù)極差R可知,各因素對巴布劑基質(zhì)性能的影響順序?yàn)椋篊>B>A>D。中藥復(fù)方巴布劑基質(zhì)的最優(yōu)處方為A2B3C2D2,即PVA用量為3.50 g,明膠用量為4.00 g,CMC-Na用量為1.50 g,甘油用量為10.00 g。

表7 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表8 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果方差分析

2.3 處方優(yōu)化驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 由于巴布劑基質(zhì)的最優(yōu)處方未出現(xiàn)在正交實(shí)驗(yàn)的9組處方中,因此進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn),并重復(fù)3次平行實(shí)驗(yàn)。結(jié)果如表9所示,對得到的巴布劑基質(zhì)進(jìn)行感官評分,所得平均值為92.46分,制作的巴布劑基質(zhì)成型性好,涂展性和皮膚追隨性適中,揭帖于皮膚后無殘留。

表9 處方優(yōu)化驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.4 載藥量實(shí)驗(yàn) 結(jié)果如圖6所示,當(dāng)載藥量在10%～30%時性能比較穩(wěn)定,超過30%之后綜合評分明顯降低。在不影響性能的前提下應(yīng)當(dāng)使巴布劑的載藥量盡可能多以保證藥效,因此設(shè)定其最大載藥量為30%。

圖6 巴布劑載藥量實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3 討論

聚乙烯醇具有一定的表面活性,研制過程中由于其定向吸附作用,使得氣液界面的表面張力降低產(chǎn)生氣泡,從而對巴布劑的黏性及均勻性等指標(biāo)造成了一定的影響。因此消泡是制備工藝中的重要步驟。本研究參照江國榮等[19]在化癥止痛巴布劑的制備中所采用的方法,利用超聲儀進(jìn)行消泡,并發(fā)現(xiàn)該方法不僅能達(dá)到消除氣泡的目的,還能加快聚乙烯醇的溶脹,提高了巴布劑的性能。

巴布劑是經(jīng)皮給藥制劑的一種[20],是通過皮膚進(jìn)入血液循環(huán)并達(dá)到有效血藥濃度,從而實(shí)現(xiàn)疾病預(yù)防或治療的一類制劑[21]。該制劑可避免口服用藥引起的藥物有效成分降解及肝臟首過效應(yīng),減少口服用藥引起的個體差異。巴布劑膏體冰涼,能夠覆蓋患病部位而起到明顯的局部作用,因此可有效解決因濕疹瘙癢劇烈、反復(fù)發(fā)作,致使患者過度抓撓造成皮損從而導(dǎo)致感染加重這一問題,所以巴布劑是一種安全且有效的劑型。

本研究通過單因素實(shí)驗(yàn)及正交實(shí)驗(yàn),確定了聚乙烯醇、明膠、羧甲基纖維素鈉及甘油的添加量對中藥復(fù)方巴布劑性能的影響,確定其最優(yōu)處方為：聚乙烯醇3.50 g,明膠4.00 g,羧甲基纖維素鈉1.50 g,甘油10.00 g,載藥量30%。按照該處方制作的巴布劑成型性好,涂展性和皮膚追隨性適中,揭帖于皮膚后無殘留,可為中藥巴布劑的制作提供一定的參考方法,并為濕疹的治療提供新的制劑及手段。