陸 榮 王儀含 陳 穎

1 江蘇省蘇州市中心血站檢驗(yàn)科 215000; 2 蘇州市立醫(yī)院檢驗(yàn)科

梅毒是一種慢性傳染性疾病,由梅毒螺旋體感染所致,性接觸是其主要傳播途徑,有病程長(zhǎng)、危害大、累及全身多個(gè)器官等特點(diǎn)[1]。在發(fā)病早期,會(huì)對(duì)患者的皮膚黏膜造成損傷,隨著病情的發(fā)展,慢慢地?fù)p傷骨骼、神經(jīng)、心血管等,對(duì)人體健康及社會(huì)產(chǎn)生了嚴(yán)重危害。由于該疾病有較明顯的個(gè)體差異性,加上典型性不足,因此常存在誤診、漏診等情況,導(dǎo)致患者無(wú)法盡早獲得合理有效的干預(yù)與治療[2]。目前,臨床診斷梅毒的主要方法是血清學(xué)檢測(cè),常用方法有梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)(TPPA)、甲苯胺紅不加熱血清學(xué)試驗(yàn)(TRUST)和梅毒螺旋體—酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(TP-ELISA),不同檢測(cè)方法的診斷效能有所不同,選擇靈敏度、特異性較高的檢測(cè)方法可以在確保診斷準(zhǔn)確性的同時(shí),避免漏診、誤診的發(fā)生[3]。本文對(duì)TPPA、TRUST、TP-ELISA三種方法在梅毒血清學(xué)檢測(cè)中的效果進(jìn)行探討,并將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2021年1月—2022年2月于我院接受檢查的128例疑似梅毒患者作為觀察對(duì)象。其中男77例,女51例;年齡25～69歲,平均年齡(48.61±4.87)歲。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)與2015年美國(guó)疾病控制中心傳播疾病診斷和治療指南[4]中的梅毒診斷標(biāo)準(zhǔn)相符;(2)血清和腦脊液快速血漿反應(yīng)素試驗(yàn)(RPR)檢查呈陽(yáng)性者;(3)精神狀態(tài)良好,具備正常的溝通、理解和交流能力;(4)對(duì)本文所用檢查方式耐受;(5)對(duì)本研究的目的、步驟等內(nèi)容均已知曉并自愿參與研究。排除標(biāo)準(zhǔn):存在免疫系統(tǒng)疾病者;合并其他類(lèi)型性傳播疾病者;采血后需要行手術(shù)治療者;依從性差者。

1.2 方法 (1)標(biāo)本采集:在患者晨起空腹?fàn)顟B(tài)下抽取其肘靜脈血5ml,然后將血液標(biāo)本置于離心機(jī)進(jìn)行離心處理,轉(zhuǎn)速為3 500r/min,半徑為10cm,時(shí)間為10min,隨后取上清液待測(cè)。(2)儀器與試劑:儀器設(shè)備有KDC-3000R低速冷凍離心機(jī),Hamilton MicroStar Venus加樣儀,FAME24/20全自動(dòng)酶免分析儀,上海DK-8AD型電熱恒溫水槽,賽默飛世爾Multiskan FC型酶標(biāo)儀,賽默飛世爾Microplate Washer 888型洗板機(jī),貝克曼庫(kù)爾特PK7300全自動(dòng)血型儀,SH微孔板脫水儀,香林寺LY923型立體脫色搖床。TPPA試劑盒由日本富士瑞必歐株式會(huì)社珠海麗珠有限公司生產(chǎn),國(guó)械注進(jìn)為20173406813;TRUST試劑盒由上海榮盛生物科技有限公司生產(chǎn),國(guó)藥準(zhǔn)字為S10940098;TP-ELISA試劑盒由廈門(mén)英科新創(chuàng)科技有限公司生產(chǎn),國(guó)藥準(zhǔn)字為S20000066。(3)血清檢測(cè)方法:①TPPA?？贵w是由精致菌體主要成分所致而成的致敏顆粒,包被梅毒螺旋體Nichols株,將顆粒與抗體結(jié)合,便會(huì)產(chǎn)生凝集現(xiàn)象。若觀察發(fā)現(xiàn)凝集均一或呈較大環(huán)狀,則為陽(yáng)性;若凝集較小,且呈環(huán)狀分布,外緣光滑完整,則為可疑;若顆粒呈紐扣狀分布且邊緣光滑,則為陰性。將血清標(biāo)本置于U形板上用稀釋溶液進(jìn)行稀釋,然后加入顆粒,將其靜置2h,若致敏粒子孔稀釋倍數(shù)≥1∶80則為陽(yáng)性。②TRUST。將包被心磷脂的膽固醇作為載體,經(jīng)非特異性抗體反應(yīng)形成膠體微粒,取甲苯膠紅溶液上懸浮抗原微粒,將其與血清抗體進(jìn)行反應(yīng),若肉眼觀察到有紅色凝結(jié)塊存在則為陽(yáng)性,若無(wú)則為陰性。③TP-ELISA。以Nichol株為抗原,在微反應(yīng)孔中包被高純度梅毒螺旋體特異抗原,然后加入血清標(biāo)本和酶標(biāo)抗原,形成梅毒螺旋體抗原—毒螺旋體抗體—酶標(biāo)梅毒螺旋體抗原復(fù)合夾心物,通過(guò)酶底物色原液反應(yīng)來(lái)對(duì)顯色情況進(jìn)行觀察,若顯色明顯則說(shuō)明抗體水平較高;將酶標(biāo)儀波長(zhǎng)設(shè)置為450nm,空白孔調(diào)零,測(cè)量光密度,若光密度/被檢分析物量值<1則為陰性,≥1為陽(yáng)性。

1.3 觀察指標(biāo) 對(duì)比三種檢測(cè)方法的梅毒抗體陽(yáng)性檢出率,比較三種方法單獨(dú)檢測(cè)和聯(lián)合使用時(shí)的梅毒抗體檢出結(jié)果。參考《梅毒的診斷與治療》[5]中關(guān)于梅毒的診斷標(biāo)準(zhǔn),以病理檢查結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn),對(duì)單一檢測(cè)方法、聯(lián)合檢測(cè)方法的診斷效能進(jìn)行比較,包括敏感性、特異性、準(zhǔn)確性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,計(jì)數(shù)資料以率表示,兩組間比較采用χ2檢驗(yàn),P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三種檢測(cè)方法對(duì)梅毒抗體的陽(yáng)性檢出率 TPPA、TRUST、TP-ELISA三種方法檢測(cè)梅毒抗體的陽(yáng)性率分別為32.03%(41/128)、23.44%(30/128)、31.25%(40/128)。TPPA、TP-ELISA的陽(yáng)性檢出率無(wú)明顯差異(P>0.05),且均高于TRUST的陽(yáng)性檢出率(P<0.05)。

2.2 不同方法檢出梅毒抗體結(jié)果比較 128例患者經(jīng)病理檢查有34例確診為梅毒,三種檢測(cè)方法單獨(dú)檢測(cè)和聯(lián)合檢測(cè)時(shí)的真陽(yáng)、假陽(yáng)、真陰、假陰例數(shù)統(tǒng)計(jì)見(jiàn)表1。

表1 不同方法檢出梅毒抗體結(jié)果比較(n)

2.3 不同檢測(cè)方法診斷效能比較 TPPA、TP-ELISA的診斷敏感性、特異性、準(zhǔn)確性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值均無(wú)明顯差異(P>0.05),且除陰性預(yù)測(cè)值與TRUST對(duì)比無(wú)明顯差異(P>0.05)外,敏感性、特異性、準(zhǔn)確性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值均高于TRUST(P<0.05)。三種方式聯(lián)合檢測(cè)的診斷敏感性、準(zhǔn)確性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值高于單一檢測(cè)(P<0.05),而在特異性方面與TPPA、TP-ELISA對(duì)比無(wú)明顯差異(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 不同方法診斷效能比較(%)

3 討論

梅毒可通過(guò)輸血、哺乳、性接觸等途徑傳播,其病原體是梅毒螺旋體,人體在感染梅毒螺旋體后4～10周,其血清中會(huì)產(chǎn)生抗類(lèi)脂質(zhì)抗原的非特異性反應(yīng)素抗體,以免疫球蛋白G和免疫球蛋白M為主,因此臨床常采用免疫學(xué)方法來(lái)對(duì)患者進(jìn)行抗體檢測(cè),以協(xié)助醫(yī)生進(jìn)行疾病診斷[6]。此外,梅毒螺旋體在人體內(nèi)可呈潛伏狀態(tài),多年無(wú)明顯癥狀,極易存在誤診與漏診的情況,當(dāng)孕婦受到感染,便可經(jīng)胎盤(pán)將梅毒傳染給胎兒,從而增加流產(chǎn)、早產(chǎn)的風(fēng)險(xiǎn),對(duì)新生人口質(zhì)量造成嚴(yán)重影響。因此,為有效控制梅毒傳播,盡早對(duì)患者進(jìn)行診斷與治療,需對(duì)該疾病的檢測(cè)工作給予重視。

臨床針對(duì)人體感染梅毒螺旋體后外周血清出現(xiàn)的兩種抗體(即非特異性抗體與特異性抗體)原理將梅毒血清檢測(cè)方法分為兩類(lèi):非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)與梅毒特異性抗體檢測(cè)。其中,非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)有TRUST、性病實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)(VDRL),是以牛心肌磷脂為抗原,對(duì)待檢樣本中是否出現(xiàn)抗心磷脂抗體進(jìn)行檢測(cè);梅毒特異性抗體檢測(cè)有TPPA、TP-ELISA,以梅毒螺旋體的成分為抗原,對(duì)待檢樣本中的抗梅毒螺旋體抗體進(jìn)行檢測(cè)[7]。本文結(jié)果顯示,TPPA、TP-ELISA的診斷敏感性、特異性、準(zhǔn)確性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值均無(wú)明顯差異(P>0.05),且除陰性預(yù)測(cè)值與TRUST對(duì)比無(wú)明顯差異(P>0.05)外,敏感性、特異性、準(zhǔn)確性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值均高于TRUST(P<0.05)。三種方式聯(lián)合檢測(cè)的診斷敏感性、準(zhǔn)確性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值高于單一檢測(cè)(P<0.05),而在特異性方面與TPPA、TP-ELISA對(duì)比無(wú)明顯差異(P>0.05)。TRUST的滴度與患者病程具有一定相關(guān)性,當(dāng)患者病毒感染或再次發(fā)作時(shí)可將滴度增加,給予患者相關(guān)干預(yù)措施后,待其病情緩解便可降低滴度。該方法價(jià)格實(shí)惠,且操作簡(jiǎn)單,可反映對(duì)抗體滴度的變化,有助于醫(yī)生對(duì)患者病情進(jìn)展情況進(jìn)行判斷[8]。但是,TRUST的陽(yáng)性檢出率較低,本文中為23.44%,當(dāng)患者處于梅毒螺旋體感染的早期或潛伏期,使用該方法檢測(cè)時(shí)若非特異性抗體滴度不足,難以檢測(cè)出陽(yáng)性,便會(huì)出現(xiàn)假陰性的結(jié)果,誤診、漏診風(fēng)險(xiǎn)較大。TPPA被美國(guó)疾病預(yù)防控制中心定為梅毒的確診方法,其使用雙抗體夾心法,因此具有較高的敏感性與特異性,是目前國(guó)內(nèi)外公認(rèn)的梅毒血清確認(rèn)試驗(yàn)。當(dāng)人體感染梅毒螺旋體后,體內(nèi)便會(huì)終身有抗體存在,使用該方法對(duì)患者進(jìn)行檢測(cè)不會(huì)受治療方法、病情發(fā)展及干預(yù)措施等因素的影響,檢測(cè)結(jié)果有良好的穩(wěn)定性,假陽(yáng)性較少,對(duì)各期梅毒的檢測(cè)也具有良好作用。但是,該方法自動(dòng)化檢測(cè)的難度較高,無(wú)法儲(chǔ)存原始數(shù)據(jù),需檢驗(yàn)人員用肉眼進(jìn)行觀察,且在檢測(cè)時(shí)需對(duì)樣本進(jìn)行檢測(cè),當(dāng)樣本數(shù)量較多時(shí),便難以實(shí)現(xiàn)批量篩查,不僅操作步驟煩瑣,而且所花時(shí)間較長(zhǎng),難以達(dá)到快速檢測(cè)的目的,這也是該方法在梅毒鑒別診斷中未能得到推廣應(yīng)用的原因。TP-ELISA屬于基因工程檢測(cè)技術(shù),其通過(guò)純化基因工程包被微孔板,標(biāo)記梅毒螺旋體抗原示蹤物,通過(guò)檢測(cè)血清、血漿標(biāo)本中的免疫球蛋白G和免疫球蛋白M來(lái)對(duì)梅毒進(jìn)行確診。當(dāng)血清中有較高含量的抗體時(shí),會(huì)產(chǎn)生前代效應(yīng),導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)假陰性,從而使診斷的準(zhǔn)確性降低,因此單獨(dú)使用TP-ELISA對(duì)患者進(jìn)行診斷的效能并不高,為提高診斷的準(zhǔn)確性,建議將該方法與其他檢測(cè)方法結(jié)合使用。

上述三種檢測(cè)方法在梅毒診斷中均發(fā)揮了一定作用,三種檢測(cè)方法各有優(yōu)缺點(diǎn),隨著梅毒患者病情改善、治愈或非特異性抗體消失,TRUST結(jié)果會(huì)轉(zhuǎn)陰,適用于療效觀察隨訪或復(fù)發(fā)輔助診斷者,也可在人群篩查、健康檢查及產(chǎn)前檢查中應(yīng)用;TPPA雖然特異性好、靈敏度高,但是由于操作煩瑣、反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng),不適用于大批量的樣本檢測(cè)中,僅適用于經(jīng)TRUST、TP-ELISA檢測(cè)后呈陽(yáng)性患者的再次確證中;TP-ELISA在實(shí)施過(guò)程中會(huì)運(yùn)用到全自動(dòng)酶免疫,因此可以實(shí)現(xiàn)對(duì)大批量樣本的檢測(cè),適用于大批量樣本篩查和獻(xiàn)血體檢中,但是梅毒免疫球蛋白G抗體在治愈后的相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)仍然會(huì)有較高的陽(yáng)性率存在,甚至還會(huì)終身攜帶,所以運(yùn)用該方法檢測(cè)出陽(yáng)性?xún)H能說(shuō)明患者曾經(jīng)受過(guò)感染或正在感染,并不能對(duì)梅毒是否活動(dòng)進(jìn)行判定,無(wú)法為患者的治療提供指導(dǎo)[9]。國(guó)內(nèi)很多實(shí)驗(yàn)室對(duì)梅毒進(jìn)行檢測(cè)的流程是先采用TRUST、TP-ELISA進(jìn)行初篩,初篩結(jié)果呈陽(yáng)性者再用TPPA進(jìn)行確認(rèn),以最大限度地降低檢測(cè)成本,又能有效能避免誤診與漏診,本文結(jié)果顯示,三種方式聯(lián)合檢測(cè)的診斷效能優(yōu)于單一檢測(cè)的診斷效能(P<0.05)。

綜上所述,TPPA、TRUST、TP-ELISA三種方法在梅毒血清學(xué)檢測(cè)中均具有一定效果,在條件允許的情況下,可對(duì)患者采用三種檢測(cè)方法聯(lián)合使用的方式,既能提高診斷的敏感性與特異性,還能減少檢測(cè)時(shí)由于其他因素影響而產(chǎn)生的假陽(yáng)性、假陰性結(jié)果,確保診斷的準(zhǔn)確性。