王金寶 張玉強(qiáng) 韓 越 劉俊英 馬國燕 洪慶文 賈 亮

河北省邢臺市第三醫(yī)院 1 生殖醫(yī)學(xué)科 2 影像科 3 護(hù)理部 4 門診部 054000

據(jù)報道[1],我國目前約有5 000萬不孕不育人群,不孕癥發(fā)病率約為12.5%,隨著近年來不孕癥患者的人數(shù)不斷增加,不孕不育問題也得到越來越多的關(guān)注。在男性不育的發(fā)病原因中,男性生育力下降占有極高的比例,精子質(zhì)量作為評估男性生育力的重要指標(biāo),可反映男性生殖健康情況[2]。精子DNA碎片指數(shù)(DFI)可以代表精子DNA的完整程度,與男性精子質(zhì)量密切相關(guān)[3]。精子存活率指存活精子在所檢測精子總數(shù)中所占的百分比,精子存活率低也是影響男性不育的重要因素之一[4]。目前治療不孕癥的方法有很多,其中輔助生殖技術(shù)是采用醫(yī)療輔助手段幫助不孕不育夫婦妊娠的技術(shù),包括人工授精和體外受精—胚胎移植及衍生技術(shù)[5]。雖然輔助生殖技術(shù)為男性不育帶來了一些突破,但臨床輔助生殖患者的助孕結(jié)局仍受到多種因素影響,許世艷等[6]報道,患者自身的生理?xiàng)l件是輔助生殖技術(shù)成功的重要條件,對臨床輔助生殖患者助孕結(jié)局至關(guān)重要。目前有關(guān)DFI值與精子存活率聯(lián)合作為輔助生殖患者助孕結(jié)局預(yù)測指標(biāo)的報道較少,鑒于此,本研究旨在探究二者共同作用于輔助生殖結(jié)局中的預(yù)測價值,為改善臨床輔助生殖患者助孕結(jié)局提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2018年2月—2020年1月收治的168對不孕夫妻作為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)符合臨床不孕癥診斷標(biāo)準(zhǔn)[7],且同意采用輔助生殖技術(shù)治療;(2)患者夫妻知曉并同意參與本研究;(3)女方為輸卵管因素不孕;(4)男方的輸精管及外生殖器檢查均正常。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)女方存在除輸卵管外其他生殖系統(tǒng)異常;(2)男方存在泌尿生殖系統(tǒng)急性感染、性傳播疾病;(3)夫妻雙方或其中一方具有家族遺傳病或染色體異常。本研究已獲得本院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 方法 所有參與研究的患者均采用輔助生殖技術(shù)進(jìn)行治療,根據(jù)女方的身體情況制定促排卵方案,注射外源性促性腺激素進(jìn)行排卵,注射36h后取卵。根據(jù)男方的精子狀況選擇卵胞漿內(nèi)單精子注射術(shù)或體外受精—胚胎移植方式進(jìn)行受精,根據(jù)患者的情況在取卵后第3天或第5天進(jìn)行移植。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 DFI值的計(jì)算:采用精子染色質(zhì)結(jié)構(gòu)測定(SCSA)法計(jì)算DFI值,使用Diff-Quik試劑盒(浙江星博生物科技有限公司)處理樣品,利用流式細(xì)胞儀檢測樣本,結(jié)合FCS Express流式分析軟件計(jì)算并記錄每個樣品精子的情況,每個樣品至少分析5 000條精子。正常精子呈現(xiàn)綠色熒光,受損精子呈現(xiàn)紅色熒光。DFI=紅色熒光數(shù)/(紅色熒光數(shù)+綠色熒光數(shù))×100%。

1.3.2 精子成活率的計(jì)算:采用伊紅—苯胺黑染色法檢測精子存活率,取精液樣品與伊紅—苯胺黑染色液(南京森貝伽生物科技有限公司)各1滴,混勻并靜置30s,制成薄片,置于顯微鏡下觀察,統(tǒng)計(jì)染色精子(未存活精子)數(shù)與未染色精子(存活精子)數(shù),計(jì)算精子存活率,每個樣本至少統(tǒng)計(jì)200條精子。精子存活率=未染色精子數(shù)/(染色精子數(shù)+未染色精子數(shù))×100%。

2 結(jié)果

2.1 研究對象一般資料比較 根據(jù)DFI值可分為A組108例、B組60例,根據(jù)精子存活率可分為C組121例、D組47例。其中A、B組間DFI值、前向運(yùn)動精子、生化妊娠率(BP)及臨床妊娠率(CP)比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);C、D組間精子存活率、前向運(yùn)動精子、BP及CP比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);A、B組間及C、D組間男女雙方年齡、女方BMI、精子濃度、促卵泡激素、受精卵子數(shù)及流產(chǎn)率比較,無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。見表1、2。

表1 根據(jù)DFI值分組患者夫妻一般資料比較

表2 根據(jù)精子存活率分組患者夫妻一般資料比較

2.2 DFI值及精子存活率與輔助生殖患者助孕結(jié)局的相關(guān)性分析 Spearman相關(guān)性分析顯示,DFI值與輔助生殖患者助孕結(jié)局呈負(fù)相關(guān)(r=-0.366,P<0.05),精子存活率與輔助生殖患者助孕結(jié)局呈正相關(guān)(r=0.374,P<0.05)。

2.3 ROC曲線分析DFI值及精子存活率預(yù)測輔助生殖患者助孕結(jié)局的價值 ROC曲線分析結(jié)果顯示,DFI值聯(lián)合精子存活率預(yù)測輔助生殖患者助孕結(jié)局的AUC值、特異度、敏感度分別為0.863、67.9%、84.8%,均高于上述指標(biāo)單獨(dú)預(yù)測(P<0.05)。見表3、圖1。

圖1 DFI值及精子存活率預(yù)測輔助生殖患者助孕結(jié)局的ROC曲線

表3 DFI值及精子存活率預(yù)測輔助生殖患者助孕結(jié)局

3 討論

近年來,隨著不孕不育問題逐漸突出,輔助生殖技術(shù)也隨之得到了更加廣泛的應(yīng)用,為許多不孕癥患者家庭帶來了希望。雖然輔助生殖技術(shù)經(jīng)過多年的發(fā)展,技術(shù)更加成熟安全,但是目前輔助生殖技術(shù)的成功率也僅有50%左右。研究報道[8],男性精子質(zhì)量與輔助生殖患者助孕結(jié)局具有一定的相關(guān)性,如何更加準(zhǔn)確地預(yù)測精子的受精潛力,對改善輔助生殖助孕結(jié)局具有重要意義。本研究旨在探究精子DNA碎片指數(shù)結(jié)合精子存活率對輔助生殖患者助孕結(jié)局的預(yù)測價值,為臨床改善輔助生殖患者助孕結(jié)局提供參考依據(jù)。

研究顯示[9],精子DNA的完整程度是影響遺傳信息能否準(zhǔn)確傳遞的重要條件。本文結(jié)果顯示,A、B兩組的前向運(yùn)動精子、BP及CP比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,與上述研究結(jié)果一致。提示DFI值可能與輔助生殖患者助孕結(jié)局存在一定的相關(guān)性。Spearman相關(guān)性分析顯示,DFI值與輔助生殖患者助孕結(jié)局呈負(fù)相關(guān),說明DFI值越高,輔助生殖患者的助孕結(jié)局越差。田菁燕等[10]報道,DFI值可通過影響精子完整程度,進(jìn)而影響胚胎質(zhì)量以及妊娠率。本研究應(yīng)用ROC曲線分析證實(shí),DFI值對輔助生殖患者助孕結(jié)局具有一定的預(yù)測作用,與上述研究結(jié)果一致,表明DFI值可以預(yù)測輔助生殖患者的助孕結(jié)局。Heidari等[11]研究顯示,精子存活率低會降低精子質(zhì)量,進(jìn)而影響輔助生殖患者的受孕率。本文結(jié)果顯示,C、D兩組前向運(yùn)動精子、BP及CP比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,與上述研究結(jié)果一致。說明精子存活率與輔助生殖患者助孕結(jié)局具有一定的關(guān)系。Spearman相關(guān)性分析顯示,精子存活率與輔助生殖患者助孕結(jié)局呈正相關(guān),表明精子存活率越高,輔助生殖患者助孕結(jié)局越好。本研究應(yīng)用ROC曲線分析進(jìn)一步證實(shí),精子存活率對輔助生殖患者助孕結(jié)局具有一定的預(yù)測作用。精液質(zhì)量分析可以幫助患者選擇使用何種輔助生殖技術(shù),從而優(yōu)化輔助生殖患者的妊娠結(jié)局,提高患者的受孕率[12]。但由于各個醫(yī)院的實(shí)驗(yàn)室設(shè)施和技術(shù)人員水平并不完全相同,故單一參數(shù)的檢測并不能很好地預(yù)測輔助生殖患者助孕結(jié)局。本研究應(yīng)用ROC曲線分析顯示,DFI值聯(lián)合精子存活率預(yù)測輔助生殖患者助孕結(jié)局的特異度、準(zhǔn)確度、陽性預(yù)測值及AUC值均高于單一精子DFI值及精子存活率預(yù)測。表明DFI值聯(lián)合精子存活率作為預(yù)測輔助生殖患者助孕結(jié)局的指標(biāo)較單一使用一個指標(biāo)的效果更好。

綜上所述,DFI值及精子存活率與輔助生殖患者助孕結(jié)局具有相關(guān)性,且DFI值結(jié)合精子存活率對輔助生殖患者助孕結(jié)局具有一定的預(yù)測價值。