●申海龍（長(zhǎng)興縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局 浙江 湖州 313100）

雞沙門氏菌病俗稱雞白痢，沙門氏菌為革蘭氏陰性，屬于兼性厭氧菌。主要易感15～20日齡的雛雞，不同品種的雞易感程度不同。患病雞以及帶菌隱性感染雞都是該病的傳染源。臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、排灰白色黏性狀糞便，具有非常高的流行性和發(fā)病率，且3周齡內(nèi)的雛雞死亡率極高[1]。因雞沙門氏菌感染后會(huì)導(dǎo)致雛雞發(fā)育緩慢、生長(zhǎng)性能降低、蛋雞孵化率、產(chǎn)蛋率下降等，給養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。本文對(duì)浙江省某雞場(chǎng)的3周齡三黃雞群疑似雞白痢感染進(jìn)行了診斷，并針對(duì)雞白痢凈化及綜合防治進(jìn)行分析討論，以期為養(yǎng)殖過(guò)程中該病的防治奠定基礎(chǔ)。

1 臨床癥狀

浙江某雞場(chǎng)3周齡雞突然出現(xiàn)無(wú)癥狀急性死亡，臨床癥狀主要表現(xiàn)為羽毛蓬亂、采食量下降、精神沉郁、雞冠蒼白以及明顯的腹瀉癥狀，主要可見(jiàn)肛門附近沾污、下痢白色稀糞，個(gè)別病雞出現(xiàn)眼盲、跛行、關(guān)節(jié)腫脹等癥狀。

2 診斷

從病死雞中隨機(jī)采集30只進(jìn)行診斷。

2.1 試驗(yàn)材料

普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、沙門菌-志賀菌（SS）瓊脂培養(yǎng)基、鮮血瓊脂培養(yǎng)基和衛(wèi)矛醇及鳥(niǎo)氨酸脫羧酶生化鑒定管均購(gòu)自青島高科園海博生物技術(shù)有限公司；沙門氏菌屬診斷血清購(gòu)自寧波天潤(rùn)生物藥業(yè)有限公司。

2.2 診斷方法

2.2.1 病原分離鑒定剖檢病死雞，于無(wú)菌條件下取肝、脾組織，接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯、普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂、血平板上進(jìn)行增菌培養(yǎng)，挑取鑒別培養(yǎng)基上疑似菌落分別純培養(yǎng)，在SS培養(yǎng)基和麥康凱培養(yǎng)基上進(jìn)行第二次劃線分離，37℃溫箱中培養(yǎng)24 h，觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況及菌落特征。挑取平板上單個(gè)可疑菌落，置于載玻片上制成涂片，進(jìn)行革蘭氏染色，400倍油鏡下觀察細(xì)菌的形態(tài)。結(jié)果：分離病料在血平板上形成圓形、光滑、半透明的細(xì)小菌落；在麥康凱培養(yǎng)基上形成細(xì)小、無(wú)色、透明的菌落；在普通瓊脂培養(yǎng)基上形成無(wú)色透明的小菌落，與麥康凱上菌落形態(tài)基本沒(méi)有區(qū)別，鏡檢見(jiàn)革蘭氏陰性短小桿菌。使用布魯克全自動(dòng)快速生物質(zhì)譜檢測(cè)儀進(jìn)行質(zhì)譜鑒定。穿刺測(cè)定時(shí)，該沙門氏菌株均沒(méi)有鞭毛，根據(jù)O相血清凝集鑒定結(jié)果判斷該沙門氏菌為雞白痢沙門菌或雞傷寒沙門菌。根據(jù)質(zhì)譜鑒定結(jié)果：本研究共分離鑒定出11株沙門氏菌，分離率為36.67%。

2.2.2 血清生化試驗(yàn)在潔凈的載玻片上滴加5 μL沙門菌屬診斷血清，使用牙簽蘸取單個(gè)可疑菌落與血清混合均勻，同時(shí)設(shè)生理鹽水為對(duì)照。挑取瓊脂培養(yǎng)基上單個(gè)無(wú)色、半透明菌落分別接種于衛(wèi)矛醇和鳥(niǎo)氨酸脫羧酶細(xì)菌生化微量鑒定管中，35℃培養(yǎng)24 h觀察試驗(yàn)結(jié)果，進(jìn)一步鑒別沙門氏菌分離株的血清型。將待測(cè)菌株于37℃培養(yǎng)后挑取培養(yǎng)物作純培養(yǎng)，與A-F群多價(jià)抗O血清作玻片凝集，即可判明該菌是否屬于A-F群中的沙門氏菌。衛(wèi)矛醇、鳥(niǎo)氨酸脫羧酶鑒定結(jié)果顯示，鳥(niǎo)氨酸脫羧酶陽(yáng)性，衛(wèi)矛醇陰性，表明菌株均為雞白痢沙門菌。

2.2.3 剖檢剖檢可見(jiàn)肝臟腫大，實(shí)質(zhì)性變質(zhì)，呈黃綠色，表面凹凸不平及有纖維素滲出物被覆，膽囊充盈。個(gè)別患雞出現(xiàn)纖維素性心包炎，心肌上有灰白色壞死點(diǎn)。肺瘀血、水腫，脾臟、腎臟充血腫大，偶見(jiàn)黃棕色斑點(diǎn)。從發(fā)病死亡雛雞的臟器中分離到細(xì)菌，經(jīng)過(guò)純化培養(yǎng)和分離鑒定，與接種菌株相同，可確診感染沙門氏菌。

3 討論

3.1 分離鑒定

雞群有發(fā)病跡象時(shí)養(yǎng)殖場(chǎng)一般采取就地取樣的方法，分為在體取樣和解剖收集病料，在體取鼻腔和氣管內(nèi)分泌物，解剖取肺臟、氣管、法氏囊等器官。病料無(wú)菌處理后，可直接在普通瓊脂、血瓊脂或鑒別培養(yǎng)基平板上劃線分離，但對(duì)于已經(jīng)被污染的待檢材料包括飲水、糞便、飼料、腸內(nèi)容物等，可能含有大量雜菌，因此常用增菌培養(yǎng)基擴(kuò)增菌量后再分離[2]。雞沙門氏菌的鑒別培養(yǎng)基常用麥康凱、伊紅美蘭、SS和HE等瓊脂培養(yǎng)基。

3.2 血清學(xué)檢測(cè)

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)（ELISPOT）、血清平板凝集試驗(yàn)（SPA）、血凝抑制試驗(yàn)（HI）和膠體金等方法。其中ELISA與SPA試驗(yàn)方法因其快速、高效、穩(wěn)定的特點(diǎn)已成為理想的實(shí)驗(yàn)室診斷方法，適用于群體檢測(cè)[3]。

3.3 分子生物學(xué)診斷

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）和蛋白質(zhì)免疫印跡（Western Blot）等方法。其中PCR方法是最常用的診斷方法，針對(duì)16S rRNA或者雞白痢特異性基因（SEP、pagC）設(shè)計(jì)引物，抽提基因組，利用PCR技術(shù)進(jìn)行特異性擴(kuò)增，完成對(duì)樣本中沙門氏菌的檢測(cè)，此方法操作簡(jiǎn)單、靈敏度高、成本較低且特異性強(qiáng)[4]。

4 雞白痢的防治措施

4.1 加強(qiáng)飼養(yǎng)管理

該病發(fā)生無(wú)明顯的季節(jié)性，一年四季均可發(fā)病。特別在春季和冬季，受到氣候變化的影響，雞舍內(nèi)寒冷潮濕，通風(fēng)頻率減少，易導(dǎo)致雞沙門氏菌感染。同時(shí)雞舍內(nèi)飼養(yǎng)密度過(guò)大，雞群擁擠，溫度過(guò)高，濕度過(guò)大，空氣不流通等因素不僅可引起雞群應(yīng)激，降低免疫力，還可導(dǎo)致雞呼吸道黏膜產(chǎn)生炎癥，引起雞白痢的感染及傳播。可通過(guò)合理通風(fēng)、選用干凈的水源和營(yíng)養(yǎng)豐富的飼料來(lái)控制感染風(fēng)險(xiǎn)，設(shè)定合理的飼養(yǎng)空間，避免飼養(yǎng)密度過(guò)大，定期消毒，完善飼養(yǎng)管理制度[5]。

4.2 雞群凈化

垂直傳播是雞白痢傳播途徑之一，也是雞白痢能夠在雞場(chǎng)中持續(xù)感染的主要原因之一，垂直傳播可控性較差，一旦感染便代代相傳，無(wú)法徹底根治，因此首先要確保無(wú)雞白痢病源，確保雞群安全，臨床上通常采用加熱法和抗生素處理法來(lái)抑制種蛋內(nèi)雞沙門氏菌傳播[6]。

4.2.1 加熱法種蛋在46.1℃維持14 h，待溫度冷卻至37.8℃時(shí)移入常規(guī)孵化溫度繼續(xù)孵化。該方法可以較為徹底地消滅種蛋內(nèi)雞沙門氏菌病原體，但也會(huì)造成種蛋的孵化率下降。

4.2.2 抗生素處理法將種蛋放在裝有對(duì)雞沙門氏菌有治療作用的抗生素溶液的密閉容器中，或直接注射抗生素溶液，但這種處理法對(duì)雞沙門氏菌的清除不夠徹底，且影響孵化率。

4.3 藥物治療

因雞沙門氏菌對(duì)抗生素耐藥性較為普遍，普通抗生素藥物對(duì)治療雞白痢效果較差，因此治療前應(yīng)先進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，再選擇合理的治療藥物，臨床上常對(duì)患病雞用慶大霉素混飲，但是抗菌藥物一般只能緩解雞白痢感染急性期癥狀，停用后易復(fù)發(fā)。此外，濫用抗菌藥物會(huì)導(dǎo)致家禽體內(nèi)菌株耐藥性加重，還會(huì)造成藥物殘留，影響禽類相關(guān)食品安全，危害人類健康[7]。研究表明在防治雞白痢的藥物選擇方面，中藥具有較好的療效，如白頭翁、白術(shù)、茯苓、蒲公英、甘草等中藥配伍的中藥提取液對(duì)雞白痢感染具有良好的治療效果[8]，但是中藥作用機(jī)制不明，成分復(fù)雜，在獸醫(yī)臨床應(yīng)用上仍有許多工作需要完成。