鄭 鋼，楊玉琴，杜玉雙，連 玲

（中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，動(dòng)物遺傳資源與分子育種實(shí)驗(yàn)室，北京 100193）

雞馬立克氏?。∕arek's disease，MD）是一種由皰疹病毒科-馬立克氏病病毒（MDV）引起的家禽傳染性疾病，嚴(yán)重影響雞的健康和家禽生產(chǎn)，該病由József Marek 于1907 年首次描述，最初定義是“雞癱瘓病”，后續(xù)Biggs 建議使用馬立克氏病（MD）命名該病，并將其定義為由皰疹病毒引起的淋巴組織增生性疾病?；疾‰u的生長發(fā)育受到抑制，肉質(zhì)和產(chǎn)蛋能力下降，死亡率增加，對(duì)家禽養(yǎng)殖業(yè)造成重大經(jīng)濟(jì)損失[1,2]。為了研究抗馬立克氏病的遺傳機(jī)制，學(xué)者們一直致力于了解該病的發(fā)病機(jī)制和免疫反應(yīng)，并且通過培育抗性雞品系和開發(fā)疫苗等手段來控制該病。

目前，馬立克氏病的預(yù)防和控制主要依賴疫苗，所開發(fā)的疫苗從HVT 到SB-1 以及目前最廣泛使用的CVI988 疫苗，已經(jīng)更迭三代，現(xiàn)國內(nèi)外正在積極開發(fā)和推廣超強(qiáng)毒株（Very virulent，vv）MDV meq 缺失疫苗，以應(yīng)對(duì)MDV 毒力的不斷增強(qiáng)。疫苗的使用對(duì)于減少馬立克氏病的發(fā)生和傳播起到了重要作用，但也側(cè)面助推了MDV 的變異和演化，使得馬立克氏病的控制變得更加復(fù)雜。因此，從宿主自身的抗性以及易感機(jī)制入手研究馬立克氏病，培育MD 高抗品系一直是研究熱點(diǎn)。近年來，隨著基因組學(xué)、免疫學(xué)和生物學(xué)等領(lǐng)域技術(shù)的進(jìn)步，針對(duì)馬立克氏病的研究得以加速。研究人員通過組學(xué)測(cè)序能分析病毒序列的多樣性和致病機(jī)制。有研究發(fā)現(xiàn)，MDV感染后會(huì)操縱宿主細(xì)胞的基因表達(dá)，干擾細(xì)胞的免疫應(yīng)答以實(shí)現(xiàn)免疫逃逸，且宿主雞的免疫系統(tǒng)會(huì)出現(xiàn)損傷，增加雞感染其他病原微生物的風(fēng)險(xiǎn)。多項(xiàng)研究表明，馬立克氏病的抗性和易感性受遺傳因素的影響，通過遺傳分析和基因組評(píng)估，研究人員已鑒定出多個(gè)雞MD 抗性相關(guān)基因位點(diǎn)和遺傳標(biāo)記，這些發(fā)現(xiàn)為進(jìn)一步培育抗性雞品系提供了重要依據(jù)。

總的來說，馬立克氏病是一種嚴(yán)重危害雞養(yǎng)殖業(yè)的疾病，通過利用基因組學(xué)、免疫學(xué)和生物學(xué)等領(lǐng)域的技術(shù)，我們能更好地理解馬立克氏病的發(fā)病機(jī)制和抗性形成的遺傳基礎(chǔ)，為防控該病以及選育抗病系提供了有效的策略，對(duì)保障禽類健康生產(chǎn)意義重大。本文綜述了目前雞馬立克氏病抗性機(jī)制及抗性品系選育進(jìn)展，為深入探究該病的抗性基礎(chǔ)以及抗性系選育提供參考。

1 主要組織相容復(fù)合體與雞馬立克氏病的相關(guān)性

主要組織相容復(fù)合體（Major Histocompatibility Complex，MHC）是一組高度多態(tài)的基因群，發(fā)揮著抗原呈遞作用。雞的MHC 基因簇位于16號(hào)染色體上，其中核心區(qū)域（BF/BL 區(qū)域）包含了一組編碼MHC-I 類和MHC-Ⅱ類分子的基因[3]。研究表明，特定的MHC 單倍型與雞的馬立克氏病抗性/ 易感性存在顯著相關(guān)，在雞上MHC 單倍型又被稱為B 單倍型。早在20 世紀(jì)80 年代，依據(jù)血清學(xué)分型共鑒定了27 種MHC-B 血清單倍型，包括11 個(gè)常見單倍型（B2、B4、B5、B6、B7、B12、B13、B14、B15、B19 和B21）和16個(gè)低頻單倍型（B1、B3、B8、B9、B10、B11、B17、B18、B22、B23、B24、B25、B26、B27、B28 和B29）以及8 個(gè)重組單倍型（以上數(shù)據(jù)78%來自白來航雞），其中B21、B2、B6 單倍型被認(rèn)為對(duì)MD 具有抗性，B5、B13、B19 單倍型對(duì)MD 易感[4]。研究人員通過對(duì)BF/BL 區(qū)域的基因多態(tài)性進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)不同MHC 單倍型的雞體內(nèi)能產(chǎn)生不同的抗體反應(yīng)、細(xì)胞免疫反應(yīng)和免疫調(diào)節(jié)反應(yīng)，從而影響其對(duì)MD 的抵抗力[5]。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，雞MHC-B 區(qū)域（209kb）具有高度多態(tài)性，其中包含45 個(gè)基因[6]。不同的MHC單倍型會(huì)通過其所編碼的MHC 分子與MDV 抗原結(jié)合能力不同，影響免疫系統(tǒng)對(duì)病毒的應(yīng)答。如B2 單倍型的MHC-Ⅱ分子抗原肽結(jié)合區(qū)基序是10 個(gè)氨基酸[7]，而B19 MHC-Ⅱ類分子為9 個(gè)氨基酸，這可能是B2 較B19 單倍型有MD 抗性的原因之一；針對(duì)B15 和B19 的雞MHC-I 類分子結(jié)構(gòu)的研究發(fā)現(xiàn)，BF2*1501 具有更寬和更深的肽結(jié)合槽，這可能是B15 相較于B19 單倍型有更強(qiáng)抗性的原因[8]；B21 單倍型被認(rèn)為對(duì)MDV 具有抗性，研究發(fā)現(xiàn)B21 單倍型的MHC-I 類分子BF2*2101 的結(jié)合槽有一個(gè)大的中心腔，且根據(jù)初步的肽段配體模型，預(yù)測(cè)出BF2*2101 分子可以結(jié)合更多來自MDV 的抗原肽，比B4、B12 和B15 等的MHC-I 類分子預(yù)測(cè)結(jié)合的肽段更多，這可能是B21 單倍型具有更強(qiáng)抗性的原因[9]；Zhang等[10]發(fā)現(xiàn)B4 單倍型的BF2*0401 分子顯示出在其他MHC 分子中未觀察到的高度正電荷表面，以及由于等位基因特異性殘基帶有臃腫側(cè)鏈而導(dǎo)致的異常狹窄的抗原結(jié)合槽，這可能是B4 單倍型雞具有MD 易感性的原因之一。

需要注意的是，MHC 單倍型對(duì)馬立克氏病抗性的影響并非絕對(duì)的，因?yàn)镸DV 具有遺傳多樣性和適應(yīng)性進(jìn)化能力，可以借此逃避宿主免疫系統(tǒng)的監(jiān)視。除了MHC，其他基因和免疫系統(tǒng)組分的相互作用也會(huì)在馬立克氏病的抗性或易感性中發(fā)揮作用。因此，需要進(jìn)一步研究揭示MHC 與其他基因和免疫系統(tǒng)組分的相互作用，以及這些相互作用與MD 抗性的關(guān)系，才能更好地解釋抗性/易感性的遺傳基礎(chǔ)。

2 與MD 相關(guān)的群體遺傳標(biāo)記

除了目前公認(rèn)的主效基因MHC 基因簇外，研究人員還在尋找與MD 抗性/ 易感性相關(guān)的其他遺傳標(biāo)記[11]，其中包括基于微衛(wèi)星標(biāo)記、單核苷酸多態(tài)性（Single nucleotide polymorphism，SNP）標(biāo)記，以及拷貝數(shù)變異（Copy number variation，CNV）等。

微衛(wèi)星標(biāo)記是一種常用的分子標(biāo)記，是DNA序列中的短重復(fù)序列，其重復(fù)次數(shù)在不同個(gè)體中可能不同。早期研究發(fā)現(xiàn)了17 個(gè)與MDV 感染后的存活率有關(guān)的微衛(wèi)星標(biāo)記（表1）[12]。通過微衛(wèi)星標(biāo)記的分析，鑒定可能與MD 抗性相關(guān)的候選基因或基因座，檢測(cè)這些基因座的遺傳變異，并與MD 抗性進(jìn)行關(guān)聯(lián)，可以進(jìn)一步分析MD 相關(guān)的變異位點(diǎn)。

表1 與感染馬立克氏病病毒后的存活率相關(guān)的標(biāo)記[12]

單核苷酸多態(tài)性是基因組中常見的遺傳變異形式，SNP 芯片和測(cè)序技術(shù)的廣泛應(yīng)用使研究人員能全面分析雞的基因組。目前，已有多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)SNP 和結(jié)構(gòu)變異與MD 相關(guān)。Li 等[14]對(duì)67只MDV 感染雞進(jìn)行了全基因組關(guān)聯(lián)分析（Genome-Wide Association Studies，GWAS），搜索了38655 個(gè)有效基因組標(biāo)記后，發(fā)現(xiàn)2 個(gè)SNPs與宿主的MD 抗性有關(guān)，分別是rs14527240（位于SPARC 相關(guān)模塊鈣結(jié)合蛋白1，SMOC1 基因上）和GGaluGA156129（位于非受體型蛋白酪氨酸磷酸 酶3，PTPN3 基因上），其中SMOC1 在MDV 感染后的易感雞脾臟中表達(dá)上調(diào)，表明其在MD 腫瘤發(fā)生中起到重要作用。Perumbakkam等[15]在具有抗性差異的肉雞群體（Cobb-Vantress純系雞或其F1 代雞）和MD 抗性63 系、易感72系雜交后的F1 代雞中分別識(shí)別了與MDV 抗性相關(guān)的等位基因特異性表達(dá)（Allele-specific expression，ASE）的SNPs 6132 個(gè)和4528 個(gè)，分別位于4768 個(gè)和3718 個(gè)基因中，其中只有72 個(gè)SNPs 和850 個(gè)基因在2 個(gè)群體中同時(shí)顯示等位基因特異性表達(dá)，且上述兩群體在MDV 感染后分別有548 個(gè)和434 個(gè)基因差異表達(dá)，其中只有20個(gè)基因是兩群體共有的，富集分析發(fā)現(xiàn)Toll 樣受體（Toll-like receptors，TLR）以及JAK/STAT 信號(hào)通路等在2 個(gè)群體中都出現(xiàn)富集。Cheng 等[16]利用上述4528 個(gè)ASE SNPs 中的1824 個(gè)，以及3097 個(gè)隨機(jī)選擇的SNPs 設(shè)計(jì)芯片，結(jié)果顯示，1824 個(gè)在MDV 感染后表現(xiàn)出ASE 的SNPs 可以解釋83%以上的遺傳變異，且ASE SNP 預(yù)測(cè)育種值的準(zhǔn)確度（0.736）比傳統(tǒng)基于血緣關(guān)系的最佳線性無偏預(yù)測(cè)（Best Linear Unbiased Prediction，BLUP）方法（0.325）高很多。筆者課題組針對(duì)3 只63 系個(gè)體，3 只72系個(gè)體進(jìn)行全基因組重測(cè)序，在馬立克氏病抗性系中共找到4904832 個(gè)SNPs 和742041 個(gè)小片段插入以及缺失（Insertion and Deletion，InDels），在馬立克氏病易感系中共找到4882010 個(gè)SNPs 和744783 個(gè)InDels；其 中1676196 個(gè)SNPs 和242126 個(gè)In-Dels 是抗性品系特有的，1510499 個(gè)SNPs 和227013 個(gè)InDels 是易感品系內(nèi)特有的。

Yan 等[17]隨后利用全基因組重測(cè)序?qū)D 抗性63 系和易感72 系進(jìn)行了CNV 分析，共鑒定到5680 個(gè)CNV 區(qū)域（Copy Number Variation Region，CNVR），其中1546 個(gè)和1866 個(gè)分別在MD 抗性和易感系中特異存在（被認(rèn)為已固定），易感性系內(nèi)固定的CNVRs 所涉及的基因顯著富集在MAPK 信號(hào)通路上。Xu 等[18]使用Affymetrix Axiom HD 600 K SNP 基因分型芯片檢測(cè)了MD抗性6 系、易感7 系以及它們的重組同類系（Recombinant Congenic Strain，RCS）一共10 個(gè)純系雞中的CNV，共檢測(cè)到393 個(gè)CNVs 片段，其中12 個(gè)CNVs 為72 系雞中特有，有2 個(gè)CNVs（chr10：5716844-5717897 和chr26：1927477-1931663）的缺失很可能對(duì)MD 易感性起到貢獻(xiàn)作用，同時(shí)還發(fā)現(xiàn)66 個(gè)CNVs 與MD 相關(guān)的數(shù)量性狀基因座（Quantitative Trait Loci，QTL）區(qū)域重疊。Bai 等[19]基于MD 抗性63 系和易感72系以及它們的F1 代和6 個(gè)具有不同易感性的重組同類系共9 個(gè)群體，鑒定出1649 個(gè)CNVRs，其中90 個(gè)CNVRs 在所有雞系中共享，共涉及1360 個(gè)基因。此外，在63 和72 系中分別特異性地鑒定到包含62 個(gè)基因的55 個(gè)CNVRs 和包含57 個(gè)基因的44 個(gè)CNVRs。

為了更好地理解MD 抗性的遺傳機(jī)制，研究還將遺傳標(biāo)記與表型數(shù)據(jù)進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，如全基因組關(guān)聯(lián)分析和基因組選擇信號(hào)分析。通過結(jié)合遺傳標(biāo)記和表型數(shù)據(jù)，可以鑒定出與MD 抗性相關(guān)的遺傳變異，并了解這些變異如何影響抗性的表現(xiàn)。在雞馬立克氏病抗性研究中，已經(jīng)鑒定和報(bào)道了多個(gè)與該抗性相關(guān)的QTLs。Smith 等[20]基于2 個(gè)MD 抗性不同的商業(yè)白來航品系雜交產(chǎn)生的F6 群體進(jìn)行600k 芯片的GWAS 分析，找到與MD 相關(guān)的38 個(gè)QTLRs，如表2 所示。這些QTLs 位點(diǎn)的鑒定和研究對(duì)理解雞馬立克氏病抗性的遺傳機(jī)制起到了重要作用。除上述QTLs 位點(diǎn)之外，Lipkin 等[21]挖掘得到了7 個(gè)位于Z 染色體上的與MD 關(guān)聯(lián)的QTLs，通過生物信息學(xué)分析找到了一些可能的候選基因，如磷酸二酯酶8B（PDE8B）、一般轉(zhuǎn)錄因子IIH 亞基2（GTF2H2）等，這些基因與免疫和疾病相關(guān)，這也是MDV在公母雞上的感染存在差異性的原因之一。

表2 與馬立克氏病相關(guān)的QTL 位點(diǎn)信息[20]

3 宿主與病毒基因互作

大量研究表明，宿主與病毒基因之間的相互作用在馬立克氏病的發(fā)病和抗性中起著重要作用。這些互作調(diào)控過程包括病毒入侵宿主細(xì)胞、病毒基因的表達(dá)與調(diào)控、免疫逃逸和免疫抑制、宿主的免疫應(yīng)答以及病毒復(fù)制和釋放等。MDV感染的第一步是病毒入侵宿主細(xì)胞，MDV 依賴于其表面的糖蛋白與宿主細(xì)胞膜上的特定受體結(jié)合，一旦病毒與宿主細(xì)胞結(jié)合，它可以通過膜融合或內(nèi)吞過程進(jìn)入細(xì)胞。具體來說，MDV 的入侵過程可能涉及多種細(xì)胞表面受體。CD30 是T細(xì)胞表面分子，也稱CD30 抗原，可能作為MDV的受體之一。研究發(fā)現(xiàn)，MDV 主要感染T 淋巴細(xì)胞，且腫瘤細(xì)胞表型從低表達(dá)CD30（lo）轉(zhuǎn)變?yōu)楦弑磉_(dá)CD30（hi）[22]。有研究報(bào)道，雞CD30啟動(dòng)子具有15 個(gè)預(yù)測(cè)的高嚴(yán)格MDV 主要致瘤基因（meq）結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子識(shí)別基序，Meq 可在體外增強(qiáng)CD30 啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄[23]。Zhang 等[24]研究發(fā)現(xiàn)，熱休克蛋白-70（Heat shock protein 70，HSP-70）可能是MDV 糖蛋白gH 的潛在細(xì)胞受體，體外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了HSP-70 參與MDV 進(jìn)入雞胚胎成纖維細(xì)胞（CEF）的早期階段。因不同MDV亞型可能利用不同的受體，也可能存在侵入不同類型細(xì)胞時(shí)利用不同受體的情況，目前MDV 的入侵機(jī)制仍在研究中。

一旦MDV 進(jìn)入宿主細(xì)胞，其基因組會(huì)被釋放，而后病毒基因開始被表達(dá)和調(diào)控。MDV 的基因組是一個(gè)將近180kb 的雙鏈DNA，不同毒株略有不同，強(qiáng)毒株GA 株全基因長174kb[25]，超強(qiáng)毒株Md5 株約178kb，編碼了100 多個(gè)基因。MDV 感染后通過多種方式逃避宿主的免疫反應(yīng)。Meq 基因編碼的蛋白是MDV 的主要致癌蛋白[26]，其本身是一種轉(zhuǎn)錄因子[27]，參與細(xì)胞溶解性感染，并且對(duì)于體內(nèi)淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化至關(guān)重要。研究表明，Meq 與干擾素刺激因子（STING）和干擾素調(diào)節(jié)因子7（IRF7）結(jié)合，中斷STING-TBK1-IRF7 復(fù)合物的形成，從而抑制干擾素β（IFN-β）的表達(dá)。US3 是單純皰疹病毒中的一個(gè)多功能基因，其編碼的病毒蛋白激酶通過靶向IRF7 抑制IFN-β 的產(chǎn)生促進(jìn)MDV 復(fù)制，阻斷cGAS-STING信號(hào)通路[28]，同時(shí)也有研究顯示，US3 蛋白激酶可磷酸化雞組蛋白去乙?；福℉DAC）1 和2并調(diào)節(jié)病毒復(fù)制和發(fā)病機(jī)制[29]；另外病毒基因RLORF4、UL46 和VP23 也能通過調(diào)節(jié)cGASSTING 信號(hào)通路來抑制一型干擾素（IFN-I）的產(chǎn)生。

vIL-8 基因編碼的蛋白是宿主白細(xì)胞介素-8（IL-8）的同源物，編碼一種CXC 趨化因子，能募集B 細(xì)胞和CD4+CD25+T 細(xì)胞，分別是病毒復(fù)制和MDV 誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化的靶細(xì)胞，vIL-8 在腫瘤發(fā)生中發(fā)揮著重要功能，從MDV 基因組中刪除vIL-8基因后，幾乎完全消除了疾病和腫瘤的形成[30]。vTR 基因編碼一種非編碼RNA-vTR RNA[31]，其被認(rèn)為是一種轉(zhuǎn)座酶RNA（Telomerase RNA），vTR 和雞源的端粒酶RNA（TR）具有88%的同源性，vTR RNA 在MDV 感染過程中起到調(diào)節(jié)細(xì)胞端粒酶活性的作用，其與宿主細(xì)胞的端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶（TERT）相互作用，幫助形成端粒酶的活性復(fù)合物，從而促進(jìn)端粒延長以提高M(jìn)DV 的生存能力和感染能力。vBCL-2 基因編碼的蛋白是宿主BCL-2 的同源物，BCL-2 是一種重要的抗凋亡蛋白，MDV 通過表達(dá)vBCL-2，抑制細(xì)胞凋亡，從而提高病毒的生存能力[32]。

在MDV 進(jìn)入宿主細(xì)胞后，宿主免疫系統(tǒng)會(huì)對(duì)MDV 感染作出反應(yīng)，這包括先天免疫反應(yīng)以及適應(yīng)性免疫反應(yīng)。先天免疫應(yīng)答是宿主對(duì)病毒感染的第一道防線，宿主的免疫系統(tǒng)會(huì)通過識(shí)別病毒的病原相關(guān)分子模式（Pathogen-associated molecular patterns，PAMPs）來激活先天免疫應(yīng)答。這個(gè)過程主要涉及TLR 和RIG-I 樣受體（RLRs）等基因的表達(dá)，這些受體可以識(shí)別PAMPs，激活下游的信號(hào)通路，產(chǎn)生干擾素和炎性細(xì)胞因子，從而抑制病毒的復(fù)制和擴(kuò)散。研究發(fā)現(xiàn)，血清淀粉樣蛋白A 能參與MDV 誘導(dǎo)的宿主先天免疫，在感染期間血清淀粉樣蛋白A（Serumamyloid A，SAA）激活Toll 樣受體2/4（TLR2/4）下游通路中的IFN-β 和IRF7 基因的啟動(dòng)子活性[33]。適應(yīng)性免疫應(yīng)答是宿主對(duì)病毒感染的第二道防線，在MDV 感染之后，宿主的免疫系統(tǒng)會(huì)產(chǎn)生針對(duì)病毒的特異性免疫應(yīng)答。這個(gè)過程主要涉及B 細(xì)胞和T 細(xì)胞等免疫細(xì)胞的活化和增殖，以及抗體和細(xì)胞毒性T 細(xì)胞（CTLs）等免疫效應(yīng)分子的產(chǎn)生。這個(gè)過程涉及多種基因的表達(dá)，包括抗原呈遞基因（MHC）、T 細(xì)胞受體（TCR）、B 細(xì)胞受體（BCR）、細(xì)胞因子基因（如白細(xì)胞介素2（IL-2）、IFN-γ 等）等。

在易感個(gè)體中，病毒感染的最終過程是病毒大量復(fù)制和釋放，這個(gè)過程涉及許多基因的調(diào)控，主要體現(xiàn)在毛囊中病毒粒子的釋放。病毒的裝配和成熟過程涉及許多結(jié)構(gòu)蛋白的表達(dá)，如VP5、VP13/14 等，其中Jarosinski 等[34]研究發(fā)現(xiàn)，早在感染后8d 的羽毛囊上皮細(xì)胞中就能檢測(cè)到MDV 的晚期蛋白UL47 表達(dá)。

值得注意的是，MDV 是一種細(xì)胞結(jié)合型病毒，其傳播主要依賴于細(xì)胞間的直接接觸。在病毒復(fù)制和釋放過程中，病毒粒子并不直接從宿主細(xì)胞中釋放出來，這些新的病毒顆粒會(huì)被包裹在核膜和細(xì)胞膜之間，形成成熟的病毒粒子。通過細(xì)胞膜的融合，將病毒直接傳遞給相鄰的宿主細(xì)胞。這種傳播方式可以避免病毒暴露在宿主免疫系統(tǒng)的攻擊下，有利于病毒的持久性感染。而在單純皰疹病毒的感染過程中，病毒的鞘膜蛋白（如gB、gH、gL 等）和宿主細(xì)胞受體（如HVEM、Nectin 等）的相互作用是促使皰疹病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞的一種機(jī)制[35,36]，但對(duì)于MDV 來說，目前還不清楚具體是哪些病毒蛋白和宿主細(xì)胞受體參與了病毒的細(xì)胞間傳播。

以上感染過程涉及病毒與宿主基因間復(fù)雜的互作，系統(tǒng)解析了馬立克氏病的發(fā)病機(jī)制、免疫應(yīng)答，有助于探明雞MD 抗性形成的分子基礎(chǔ)。

4 基因表達(dá)調(diào)控與MD 遺傳抗性

4.1 宿主相關(guān)抗性基因表達(dá)

在宿主對(duì)MD 的研究中，除MHC 和免疫相關(guān)基因外，還有一些差異基因的表達(dá)值得關(guān)注。白來航雞中生長激素1（GH1）的多態(tài)性與MHC B2/B15 單倍型的個(gè)體感染后MD 腫瘤數(shù)量有關(guān)，推斷GH1 是與MD 相關(guān)的抗性基因。Sarson 等[37]比較MD 抗性單倍型B21 和易感單倍型B19 個(gè)體感染MDV 后的基因表達(dá)譜，發(fā)現(xiàn)一些差異表達(dá)基因，包括趨化因子AH221、B 細(xì)胞標(biāo)記物1（Bu-1）、免疫球蛋白家族（IgG、IgA、IgM）、MHC-II β 鏈、顆粒酶A（GZMA）和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子2（STAT2）編碼基因。Smith 等[38]分析了抗性61 系和易感72 系雞在感染MDV 后的反應(yīng)以及感染后2 個(gè)系之間的基因表達(dá)差異，發(fā)現(xiàn)感染后4d 含有HIC ZBTB 轉(zhuǎn)錄抑制因子1（HIC1）結(jié)合位點(diǎn)的基因表達(dá)下調(diào)，同時(shí)將基因表達(dá)數(shù)據(jù)與先前的QTL 數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，確定了候選基因AVD、IFNA、MX1、IL-6、FN1、IRG1、DDT、DNAJC3、SFTPA2、GNG12 可能與MD 抗性有關(guān)。在未感染狀態(tài)下，一些已知的先天免疫反應(yīng)基因的表達(dá)量在61 系和72 系上存在差異，如DNAJC3、DDT、NMU、GSTO1、VIP、HPS5、MMP7、FGFR3、HSCB、E2F4、SFTPA2 和GNG12 在61 系高表達(dá)，在72 系低表達(dá)，這暗示易感和抗性系之間存在基因表達(dá)的固有差異；感染后，兩系之間也觀察到基因的差異表達(dá)（脾臟中有539 個(gè)差異表達(dá)基因，胸腺中有156 個(gè)差異表達(dá)基因）。在抗性系中，IgG-H、AMIGO2、MMP13 和CLEC3B 等免疫基因表達(dá)更高，在易感系中，AVD、IRG1、HSP25、ART1、IL-18、NOS2A、CXCL13、CCLi2、MX1、SOCS1 和IL-6基因表達(dá)更高，說明在感染后2 個(gè)系存在不同免疫基因的表達(dá)上調(diào)。Subramaniam 等[39]通過比較來自MD 抗性6 系和易感性7 系的CEF 對(duì)MDV感染的反應(yīng)，鑒定了以下可能與MD 遺傳抗性相關(guān)的候選基因：凋亡相關(guān)基因（如Caspase3、Caspase6、Caspase8 等）在抗性6 系中上調(diào)；抗凋亡基因（如BIRC2 和Bcl-2 家族成員）在抗性6 系中下調(diào)；MAPK 信號(hào)通路相關(guān)基因，如MEK2 在抗性6 系中下調(diào)，Ras 在易感7 系中上調(diào)；JAK-STAT 信號(hào)通路相關(guān)基因在易感7 系中上調(diào)。IRG1 基因在易感7 系中下調(diào)；還發(fā)現(xiàn)了直接受meq 調(diào)控，且具有變異位點(diǎn)的24 個(gè)基因，如BRAF、GPS1 等；還有其他可能參與細(xì)胞凋亡、增殖調(diào)控的轉(zhuǎn)錄因子編碼基因，如AP1M1、OPTN 等。同樣分離6 系和7 系CEF 攻毒后，Haunshi 等[40]發(fā)現(xiàn)，MDV 感染明顯提高了易感性和抗性雞中Toll 樣受體3（TLR3）、IL6 和白細(xì)胞介素8（IL8）的mRNA 表達(dá)水平。此外，在未感染狀態(tài)下，TLR3、Toll 樣受體7（TLR7）等基因在抗性雞CEF 中的基礎(chǔ)表達(dá)水平高于易感雞。還有很多研究鑒定得到了與MD 抗性相關(guān)的基因位點(diǎn)，如淋巴細(xì)胞抗原6 復(fù)合物（LY6E）[41]，干擾素調(diào)節(jié)因子（IRF2）[19]，髓細(xì)胞白血病1 基因（MCL1）[42]等。

4.2 DNA 甲基化調(diào)控

表觀遺傳學(xué)是研究遺傳信息的表達(dá)和調(diào)控的科學(xué)，主要涉及DNA 甲基化、組蛋白修飾和RNA 干擾等方面。DNA 甲基化在MD 遺傳抗性中的作用是多方面的。一方面，DNA 甲基化可影響宿主對(duì)MDV 的抵抗能力。Tian 等[43]發(fā)現(xiàn)在MDV 感染后，抗性63 系的甲基化水平下降，研究共鑒定了11512 個(gè)感染誘導(dǎo)的差異甲基化區(qū)域（iDMRs），其中易感72 系的iDMRs 數(shù)量較抗性63 系更多，進(jìn)一步證明，體外甲基化水平與MDV 復(fù)制直接相關(guān)，通過藥物抑制DNA 甲基化可以限制感染細(xì)胞中的MDV 傳播，推斷宿主的DNA 甲基化可能與MD 抗性或易感性相關(guān)。Li等[44]研究發(fā)現(xiàn)，CD30 在MDV 感染的脾臟中顯示出較低的DNA 甲基化水平和較高轉(zhuǎn)錄水平。Wang 等[45]研究發(fā)現(xiàn)，MDV 感染后細(xì)胞抗原受體復(fù)合物相關(guān)蛋白β 基因（CD79B）表達(dá)的降低很可能是DNA 甲基化水平升高所導(dǎo)致。Luo 等[46]發(fā)現(xiàn)MDV 感染引起的DNA 甲基化波動(dòng)在MD 抗性63 系和易感72 系雞之間不同，一些候選基因在72 系雞中具有比63 系雞更高的啟動(dòng)子甲基化水平，其中參與細(xì)胞成分、刺激響應(yīng)、細(xì)胞黏附和免疫過程的高甲基化基因可能通過調(diào)控表達(dá)在疾病易感性中發(fā)揮重要作用。Yuan 等[47]結(jié)合甲基化、轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)60%差異表達(dá)基因與差異甲基化區(qū)域中CpG 位點(diǎn)的甲基化水平顯著相關(guān)，其中CD4 和HMBG1 基因在腫瘤組織中異常高表達(dá)，體外過表達(dá)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其能促進(jìn)淋巴瘤細(xì)胞的增殖。另一方面，MDV 的DNA 也可能被甲基化。在肝臟原發(fā)性腫瘤中，Brown 等[48]研究發(fā)現(xiàn)，在感染后不到2 個(gè)月，CpG 甲基化主要集中在ICP4 基因內(nèi)，并提出非隨機(jī)新生DNA 甲基化發(fā)生在淋巴瘤發(fā)生的早期。Rasschaert 等[49]研究發(fā)現(xiàn)，ICP4 的遠(yuǎn)端啟動(dòng)子在裂解期和潛伏期與基因表達(dá)相關(guān)，而近端啟動(dòng)子在再激活階段與該基因的表達(dá)相關(guān)，2 種啟動(dòng)子在病毒周期中都受到DNA 甲基化的調(diào)節(jié)，并且在潛伏期中被高甲基化。這些研究表明，DNA 甲基化在MD 的抗性機(jī)制中起著重要作用。

4.3 組蛋白修飾調(diào)

組蛋白修飾是調(diào)控基因表達(dá)的重要方式，通過改變?nèi)旧|(zhì)的結(jié)構(gòu)影響轉(zhuǎn)錄因子和RNA 聚合酶等調(diào)控因子對(duì)基因啟動(dòng)子的識(shí)別和結(jié)合，從而影響基因的轉(zhuǎn)錄過程。MDV 感染過程中，組蛋白修飾可能起到關(guān)鍵作用[50]。Luo 等[51]針對(duì)MDV抗性和易感系雞進(jìn)行了全基因組組蛋白修飾的研究，發(fā)現(xiàn)組蛋白H3 賴氨酸4 三甲基化（H3K4me3）與蛋白編碼基因及microRNA（miRNA）基因的表達(dá)呈正相關(guān)，而組蛋白H3 賴氨酸27 三甲基化（H3K27me3）與蛋白編碼基因及microRNA（miRNA）基因的表達(dá)負(fù)相關(guān)，另外還發(fā)現(xiàn)抗性雞中被激活的免疫應(yīng)答和細(xì)胞黏附相關(guān)基因存在獨(dú)特的H3K4me3 修飾區(qū)域。

Brown 等[48]研究發(fā)現(xiàn)，meq 和非編碼RNA 的啟動(dòng)子周圍的染色質(zhì)與H3K9 乙?；虷3K4 三甲基化相關(guān)，這些是轉(zhuǎn)錄活躍的染色質(zhì)標(biāo)記，而溶解基因pp38 的溶解復(fù)制起始點(diǎn)（OriLyt）附近區(qū)域缺乏活性標(biāo)記，這與其周圍存在抑制性組蛋白修飾（H3K27 和H3K9 三甲基化）有關(guān)。因此，組蛋白修飾在MD 中可能發(fā)揮著重要作用，包括促進(jìn)病毒的復(fù)制和擴(kuò)散，以及調(diào)控宿主的抗病毒免疫反應(yīng)等。

4.4 非編碼RNA

MDV-1 基因組可以編碼產(chǎn)生26 種miRNAs[52]。Mdv1-miR-M4-5p[53,54]是MDV 編碼的最為重要的miRNA 之一，它可以靶向宿主的免疫相關(guān)基因，如IFN-γ，抑制宿主的免疫反應(yīng)。此外，mdv1-miR-M4-5p 還可以靶向宿主細(xì)胞周期相關(guān)基因，如CDK6，從而促進(jìn)病毒復(fù)制；Mdv1-miR-M11-5p 靶向宿主MAFB、LOC776816 和RFX7 基因[55]，miR-M11-5p 敲除可顯著增強(qiáng)MDV 致病性及致瘤性，表明其可能是MD 腫瘤抑制因子；研究發(fā)現(xiàn)編碼3 個(gè)miRNAs（mdv1-miR-M8-M9-M10）的MDV 基因簇缺失不影響細(xì)胞培養(yǎng)中的病毒復(fù)制和噬斑大小，但增加了母雞MDV 的早期細(xì)胞溶解復(fù)制，且缺失后導(dǎo)致外周血淋巴細(xì)胞的病毒再激活的量顯著增加，此外還會(huì)導(dǎo)致淋巴器官更嚴(yán)重的萎縮和平均死亡時(shí)間的縮短[56]；Zhu等[57]研究發(fā)現(xiàn)，MDV-1 編碼的miR-M2-5p 同時(shí)通過RBM24 和MYOD1 介導(dǎo)的信號(hào)通路促進(jìn)細(xì)胞增殖并抑制細(xì)胞凋亡，潛在參與病毒誘導(dǎo)的T細(xì)胞淋巴瘤發(fā)生。有關(guān)MDV 編碼lncRNA 的報(bào)道相對(duì)較少，研究人員發(fā)現(xiàn)了一個(gè)名為ERL 的lncRNA 基因[58]，它可能作為MDV 的致癌基因meq 和miRNA 簇的自然反義轉(zhuǎn)錄本（NAT）；通過轉(zhuǎn)錄組研究發(fā)現(xiàn)ERL lncRNA 在MDV 感染過程中受到高度編輯，可能對(duì)MDV 的感染和致病過程具有重要影響。Alexis 等[59]對(duì)MDV 感染的不同階段（溶細(xì)胞感染、潛伏期、再激活期）進(jìn)行分析，挖掘得到了由meq、潛伏相關(guān)轉(zhuǎn)錄物（LATs）、pp14、ERL 以及一些重復(fù)序列區(qū)域表達(dá)的circRNA 分子，推測(cè)這些環(huán)狀RNA 分子可能發(fā)揮著重要的生物學(xué)功能。

在雞MD 抗性研究中，一些宿主非編碼RNA在MDV 感染后表達(dá)量也會(huì)發(fā)生改變，這些非編碼RNA 可能通過調(diào)控宿主基因表達(dá)，影響宿主對(duì)MDV 的抵抗能力。Stik 等[60]研究發(fā)現(xiàn)，病毒癌基因meq 可與TMEM10 基因啟動(dòng)子結(jié)合，從而反式激活gga-miR-21 表達(dá)并靶向雞程序性死亡細(xì)胞4（PDCD4），進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長和細(xì)胞凋亡及免疫逃逸。Lian 等[61]發(fā)現(xiàn)gga-miR-181a在MDV 誘導(dǎo)的淋巴瘤中下調(diào)，其靶基因是類骨髓增生病毒癌基因同源物1（MYBL1），體外試驗(yàn)表明gga-miR-181a 對(duì)MDV 轉(zhuǎn)化淋巴瘤細(xì)胞系（MSB1）細(xì)胞增殖具有抑制作用。Lian 等[62]還發(fā)現(xiàn)，gga-miR-199-3p、gga-miR-140-3p 和gga-miR-221 對(duì)MSB1 細(xì)胞增殖也有抑制作用，表明這些miRNAs 可作為MD的腫瘤抑制因子；Yao 等[63]通過芯片分析了7個(gè)不同MDV 轉(zhuǎn)化細(xì)胞系中的miRNA 表達(dá)譜，研究發(fā)現(xiàn)，miR-155 在MDV 轉(zhuǎn)化的腫瘤細(xì)胞中特異表達(dá)下調(diào)。該現(xiàn)象被認(rèn)為是MD 腫瘤細(xì)胞的獨(dú)特表達(dá)特征；Xu 等[64]發(fā)現(xiàn)miR-26a 在許多禽淋巴瘤細(xì)胞中均處于全局下調(diào)狀態(tài)，且miR-26a 有直接靶向雞IL-2 的潛力，腫瘤細(xì)胞中miR-26a 的下調(diào)可以減輕對(duì)IL-2 表達(dá)的抑制作用，有助于轉(zhuǎn)化淋巴細(xì)胞系的增殖特征；Li 等[65]發(fā)現(xiàn)miR-26a 還能靶向NEK6，抑制MSB1細(xì)胞增殖。lncRNA GAS5 和lncRNA MALAT1在MDV 感染后的雞體內(nèi)表達(dá)量發(fā)生改變。He 等[66]研究發(fā)現(xiàn)，linc-GALMD1 通過調(diào)節(jié)MDV 基因和腫瘤相關(guān)基因的表達(dá)以及調(diào)節(jié)對(duì)MDV 感染的免疫反應(yīng)來促進(jìn)腫瘤抑制的功能，另外He 等[67]還發(fā)現(xiàn)，linc-satb1 通過調(diào)節(jié)附近的蛋白編碼基因SATB1 在MD 免疫反應(yīng)中發(fā)揮關(guān)鍵作用，對(duì)MDV 誘導(dǎo)的T 細(xì)胞腫瘤產(chǎn)生很大影響。You 等[68]針對(duì)馬立克氏病腫瘤的全轉(zhuǎn)錄組分析發(fā)現(xiàn)，差異表達(dá)的 lncRNAs（MSTRG.360.1、MSTRG.6725.1、MSTRG.6754.1、MSTRG.15539.1 和MSTRG.7747.5）與MD 抗性候選基因（如IGFI、CTLA4、HDAC9、SWAP70、CD72、JCHAIN、CXCL12 和CD8B）之間存在強(qiáng)烈的相關(guān)性，表明lncRNAs 可能通過它們的靶基因影響MD 抗性和腫瘤發(fā)生。Wang 等[69]在攻毒脾臟組織中鑒定得到有113 個(gè)差異表達(dá)的circRNAs，發(fā)現(xiàn)gga-miR-155 不僅與circGTDC1 和circMYO1B 相互作用，還靶向免疫相關(guān)基因，如Gata4，提示非編碼RNA 在介導(dǎo)免疫響應(yīng)基因中的重要作用。

4.5 m6A 修飾

N6-甲基腺苷（m6A）是一種在真核生物mRNA 中普遍存在的內(nèi)源性修飾，已被證明在包括細(xì)胞分化、發(fā)育、應(yīng)激反應(yīng)和免疫反應(yīng)在內(nèi)的過程中起到重要作用。Zhuang 等[70]研究了體內(nèi)MDV 感染期間病毒和mRNA 水平m6A 修飾的變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，甲基轉(zhuǎn)移酶樣3/14（METTL3/14）復(fù)合物在MDV 生命周期的裂解和再激活階段受到抑制，而在潛伏期和MDV 誘導(dǎo)的腫瘤中表達(dá)增加，且過表達(dá)METTL3/14 會(huì)抑制MDV 基因的表達(dá)和復(fù)制，而敲低METTL3/14 則增強(qiáng)MDV 基因表達(dá)和復(fù)制。Sun 等[71,72]通過對(duì)MDV 體外感染的CEF 細(xì)胞中l(wèi)ncRNA 和circRNA 的m6A 修飾進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)lncRNA 和circRNA 的m6A 修飾在MDV 感染中高度保守；MDV 感染增加了lncRNA m6A 修飾位點(diǎn)的表達(dá)，且與MDV 感染相關(guān)的信號(hào)通路密切相關(guān)，而circRNA m6A 修飾與胰島素信號(hào)通路調(diào)控相關(guān)。這些研究表明m6A 甲基化可能在MD 抗性中發(fā)揮作用。

5 抗性品系培育進(jìn)展

5.1 美國農(nóng)業(yè)部抗性6 系/易感7 系培育

從1939 年開始，美國農(nóng)業(yè)部（USDA-ARS）Nelson[73]使用9 個(gè)不同來源的白來航蛋雞群作為基礎(chǔ)群體，通過300d 存活率等指標(biāo)進(jìn)行選育，經(jīng)過5 年形成15 個(gè)近交系，初步將1、4、6、7、8、10、12、13 號(hào)定義為較高的抗性，2、3、5、9、11、14、15 號(hào)系定義為易感。1940 年將來自于1、2、5、7 號(hào)系的公雞與來自于2、3 號(hào)系的母雞雜交，后代是6 系選育的基礎(chǔ)，開始系譜記錄，每個(gè)家系中選留對(duì)淋巴瘤發(fā)展有抗性的種雞進(jìn)行交配，到1961 年近交程度是95%，1962 年停止疾病選擇，開始每個(gè)近交系內(nèi)使用同胞交配。因?yàn)? 系是幾個(gè)抗性系中生產(chǎn)性能最好的，所以用來供研究使用，自1980 年以來，63 系通過選擇產(chǎn)蛋性能高的母雞后代中的1～2 只公雞，與同胞（sib）或堂/ 表（first cousin）交配的方式繁育后代。與此同時(shí)1940 年將1 號(hào)和7 號(hào)系公雞與2 號(hào)和7 號(hào)系母雞雜交，作為7 系的基礎(chǔ)，選擇家系中對(duì)馬立克氏病腫瘤最易感的雞進(jìn)行育種。經(jīng)過溫和到強(qiáng)烈的近交，1961 年7 號(hào)品系近交率達(dá)95%，同樣在1962 年停止疾病選擇，開始每個(gè)近交系內(nèi)使用同胞交配，產(chǎn)生71 系和72系。7 系長期用于研究馬立克氏病易感性研究。從血清單倍型的角度來說，6 系和7 系均是B2 單倍型，這常常被用來佐證除MHC 外還有其他的因素與MD 抗性有關(guān)。

5.2 海蘭公司抗MD 品系培育

針對(duì)美國育種公司的抗病品系培育工作資料有限，僅有趙淑娟等[74]報(bào)道中提到美國先鋒公司用抗一般不良環(huán)境的B2 品系和幼雛生活力強(qiáng)的B14 品系培育了生活力強(qiáng)的B18 品系，用抗MD的B21 品系和抗一般不良環(huán)境的B2 品系培育了生活力強(qiáng)、抗MD 的934E 品系；另外美國海蘭公司用B2 和B21 培育出抗病性強(qiáng)的HL W36 蛋用商品雞品系?？赡苁芟抻谏虡I(yè)育種公司的行業(yè)機(jī)密，目前并沒有公開的資料報(bào)道這些培育品系進(jìn)MDV 感染后的抗病效果。

5.3 俄羅斯雪白雞培育

俄羅斯育種工作者在俄羅斯白雞的基礎(chǔ)上，自1978 年起，經(jīng)過20 年的遺傳選擇，育成了一個(gè)蛋雞新品種-俄羅斯雪白雞（Russian Snow-White），該新品種抗MD 能力強(qiáng)。選擇前，基礎(chǔ)群1439 只雞在攻毒的情況下帶有臨床MD 癥狀的雞占12.4%。通過抗MD 選擇到第7 代，在3180 只雞中MD 的發(fā)病率降到2%。最終培育出兩個(gè)MD 抗性品系-16 系和10 系。在第7 代，16系MD 發(fā)生率為0.3%，10 系為3.5%。在俄家禽科學(xué)研究所實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行的強(qiáng)毒PBIB1 攻毒實(shí)驗(yàn)證實(shí)了新品種的抗MD 的特性，在這項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中，16系淋巴瘤發(fā)生率為4%，10 系為14%，對(duì)照組為41.7%（表3）[75]。

表3 16 系和10 系抗馬立克氏病能力的比較[75]

5.4 國內(nèi)抗MD 品系培育工作

為了有效控制馬立克氏病的發(fā)生，保證養(yǎng)雞業(yè)的發(fā)展，李康然等[76]經(jīng)過3 年的研究，采用MDV 強(qiáng)毒株攻擊霞煙雞雛雞，選留幸存者作為零世代進(jìn)行繁育，其F1 代不經(jīng)疫苗接種，以自然感染衡量其抗病性能，同時(shí)結(jié)合后裔攻毒測(cè)定，通過后代MD 發(fā)生情況評(píng)估其父母即F1 代的抗病性能，根據(jù)上述指標(biāo)進(jìn)行選育直至第3 世代。第3 世代雛雞1 日齡攻毒后，10 周齡總保護(hù)率為74%（對(duì)照組35%），其中自然死亡雞的腫瘤陽性率為16%（零世代為48.1%，對(duì)照組37.5%）。1 日齡雞經(jīng)火雞皰疹病毒疫苗（HVT）免疫，14 日齡以強(qiáng)MDV 攻毒，MD 總保護(hù)率為96.9%（對(duì)照組87%）。該研究經(jīng)過三個(gè)世代的選擇，初步培育出抗馬立克氏病的霞煙雞品系，填補(bǔ)了我國家禽抗病育種的空白。

國內(nèi)科研工作者在構(gòu)建疾病研究群體上也取得很好的進(jìn)展，Gao 等[77]成功利用微衛(wèi)星標(biāo)記從BWEL 雞群（中國養(yǎng)禽遺傳資源實(shí)驗(yàn)動(dòng)物國家中心培育并發(fā)展的無特定病原體（SPF）雞）中建立了6 個(gè)MHC-B 單倍體雞群體，分別命名為BW/G（1、2、3、5、6、7）系，并將其基因型與6 個(gè)血清學(xué)定義的MHC-B 單倍體（B13、B15、B2、B5、B21、B19）相對(duì)應(yīng)。通過比較MD 引起的死亡率、組織病變以及病毒負(fù)荷，證實(shí)相比于BW/G3 系（B2 單倍型），BW/G7（B19單倍型）對(duì)MDV 表現(xiàn)出更大的易感性。

6 展望

雞馬立克氏病抗性的研究已經(jīng)取得了重要進(jìn)展，一些影響雞馬立克氏病抗性的關(guān)鍵基因和遺傳因素已被識(shí)別，這些發(fā)現(xiàn)為揭示馬立克氏病抗性機(jī)制，創(chuàng)制抗馬立克氏病品系提供了理論依據(jù)。未來的研究方向包括：①雞馬立克氏病抗性關(guān)鍵基因功能驗(yàn)證和分子機(jī)制解析；②免疫系統(tǒng)與病毒的互作機(jī)制解析，探索利用免疫調(diào)節(jié)提高雞馬立克氏病抗性的可能性；③雞馬立克氏病抗性品系培育；④通過基因編輯手段，創(chuàng)制雞抗馬立克氏病育種新素材。