黎玉瓊，于有利*，從志鵬，焦曉軍，梁小軍

（1.寧夏農(nóng)林科學(xué)院動(dòng)物科學(xué)研究所 銀川 750002；2.西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院 陜西楊凌 712000；3.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院 廣州 510000）

牛球蟲(chóng)病是由牛源艾美爾球蟲(chóng)引起的一種全球性疾病，是導(dǎo)致牛腹瀉的常見(jiàn)病原[1]。牛球蟲(chóng)病臨床癥狀主要為腹瀉、痢疾、里急后重、體重減少、虛弱和精神萎靡[2]，幾乎所有的牛均易感球蟲(chóng)，1 歲以內(nèi)的犢牛球蟲(chóng)病的發(fā)病率和死亡率較高[3]，成年牛發(fā)病率較低[4]。在我國(guó)，犢牛球蟲(chóng)病多發(fā)生于3月齡，因?yàn)橥ǔ?月齡的犢牛面臨混群、斷奶等應(yīng)激導(dǎo)致機(jī)體免疫力低下，易感球蟲(chóng)病。牛感染球蟲(chóng)后，只有少數(shù)的牛表現(xiàn)出臨床癥狀，大多數(shù)牛呈亞臨床型表現(xiàn)[5]。牛感染球蟲(chóng)后，腸黏膜的功能被破壞，對(duì)腸道造成不可逆的損傷，影響牛的消化能力、降低飼料報(bào)酬、增加養(yǎng)殖成本，青年牛則表現(xiàn)為繁殖障礙等[6-7]。

牛球蟲(chóng)病主要通過(guò)糞-口途徑在動(dòng)物間傳播，該病主要由于短時(shí)間內(nèi)攝入大量卵囊引起的。糞便中的卵囊、污染的飼料和水源以及初乳缺乏、放養(yǎng)密度高、營(yíng)養(yǎng)不良等因素均認(rèn)為是重要的誘發(fā)因素[8]。通過(guò)環(huán)境衛(wèi)生消毒手段對(duì)球蟲(chóng)病控制無(wú)明顯效果，臨床上經(jīng)藥物治療雖可以達(dá)到殺滅體內(nèi)球蟲(chóng)的，但是其治療效果有限，因?yàn)榍蛳x(chóng)幾乎可在腸道內(nèi)完成整個(gè)生命周期，對(duì)腸道造成嚴(yán)重?fù)p害。治療性預(yù)防可阻斷球蟲(chóng)的繁殖和保護(hù)腸黏膜損傷是防治球蟲(chóng)病的首選方法[9]。

本研究選取具有發(fā)病史牛場(chǎng)的3月齡犢牛進(jìn)行球蟲(chóng)檢測(cè)，并選用托曲珠利和癸氧喹酯藥物分別對(duì)犢牛球蟲(chóng)病進(jìn)行治療性預(yù)防,并對(duì)其療效進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，進(jìn)而評(píng)價(jià)兩種藥物的療效、藥物持效期，為進(jìn)一步制定“定期監(jiān)測(cè)、按需適時(shí)驅(qū)蟲(chóng)、綜合評(píng)估、適時(shí)穿梭輪換用藥再驅(qū)蟲(chóng)”高效驅(qū)蟲(chóng)技術(shù)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及養(yǎng)殖環(huán)境

選取寧夏某奶牛場(chǎng)72 頭未使用抗球蟲(chóng)藥物治療且體重?zé)o差異的3月齡體重130 kg 左右的荷斯坦母犢牛。該奶牛場(chǎng)飼養(yǎng)管理、環(huán)境管理良好（運(yùn)動(dòng)場(chǎng)地大、干燥，飼養(yǎng)密度小，糞便清理及時(shí)），但有從同一集團(tuán)球蟲(chóng)高污染牧場(chǎng)調(diào)牛史，曾有兩批犢牛轉(zhuǎn)入后發(fā)生臨床球蟲(chóng)病。

1.2 主要儀器和試劑

多功能電子天平（型號(hào)為JD500-2），購(gòu)自沈陽(yáng)龍騰電子有限公司產(chǎn)品；重鉻酸鉀（483044），購(gòu)自Sigma-Aldrich 公司產(chǎn)品；生理鹽水（ST341），購(gòu)自上海碧云天有限公司產(chǎn)品；6 %癸氧喹酯預(yù)混劑和5 %托曲珠利混懸液，購(gòu)自浙江匯能動(dòng)物藥品有限公司。

2 方法

2.1 分組和給藥方案

將未使用抗球蟲(chóng)藥物治療過(guò)的3月齡體重?zé)o差異的72 頭犢牛分成3 組，每組24 頭，分別為癸氧喹酯組、托曲珠利組和對(duì)照組，每組的犢牛單獨(dú)飼養(yǎng)。初次糞檢后分組，分組情況、每組陽(yáng)性牛數(shù)及給藥方案見(jiàn)表1。

表1 分組方案及給藥方法

2.2 糞便采集及卵囊計(jì)數(shù)

通過(guò)刺激肛門采集新鮮糞便。各試驗(yàn)組所有犢牛均分別在第0、7、14、21、28、35、42、49、56、84、112 和196 天逐頭采集新鮮犢牛糞便，4 ℃保存，送至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢驗(yàn)。根據(jù)麥克馬斯特法計(jì)算每克糞便中的卵囊數(shù)（oocysts per gram of feces，OPG）：稱取2 g 糞樣置于干凈的100 mL 燒杯內(nèi)，加入8 mL 飽和食鹽溶液，用玻璃棒搗碎混勻。再加入50 mL 飽和食鹽溶液，混勻后立即用60 目篩網(wǎng)過(guò)濾。然后吸取濾液充滿2 個(gè)計(jì)數(shù)室，在顯微鏡載物臺(tái)上靜置3～5 min，在10 倍物鏡下鏡檢計(jì)數(shù)。每個(gè)計(jì)數(shù)室內(nèi)有100 個(gè)方格，其體積為1 cm×1 cm×0.15 cm=0.15 cm3。待分別查完2 個(gè)計(jì)數(shù)室100 個(gè)方格內(nèi)的卵囊數(shù)量n1 和n2，按照如下公式計(jì)算OPG[10]。

OPG=[( n1+ n2)/(2×0.15)]×60÷2

2.3 體重變化監(jiān)測(cè)

不同分組的犢牛分別在第0、7、14、21、28、35、42、49、56、84、112 和196 天進(jìn)行稱重，計(jì)算各組犢牛的平均增重變化。

2.4 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析

利用SPSS 23.0 軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，試驗(yàn)數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。采用卡方檢驗(yàn)對(duì)結(jié)果進(jìn)行差異顯著性分析，p＜0.05 表示差異顯著，p＜0.01 表示差異極顯著，p＞0.05 表示差異不顯著。

3 結(jié)果與分析

3.1 球蟲(chóng)卵囊數(shù)量變化檢測(cè)

通過(guò)對(duì)用藥前后球蟲(chóng)卵囊檢測(cè)并分析，結(jié)果如表2所示，用藥后第7 天，癸氧喹酯組和托曲珠利組陽(yáng)性犢牛數(shù)量均減少為1 頭，卵囊排出率均為4.17 %，癸氧喹酯組平均OPG 為400，托曲珠利組平均OPG 為100，陰性對(duì)照組陽(yáng)性犢牛數(shù)量為6 頭，卵囊排出率為25 %，平均OPG 為217。用藥后第14 天，癸氧喹酯組犢牛球蟲(chóng)陽(yáng)性數(shù)為0 頭，卵囊排出率為0.00 %，平均OPG 為0，托曲珠利組犢牛球蟲(chóng)陽(yáng)性數(shù)為1 頭，卵囊排出率為4.17 %，平均OPG 為100。從第14—49 天，癸氧喹酯組陽(yáng)性犢牛數(shù)一直為0 頭，卵囊排出率為0.00 %，平均OPG 為0；托曲珠利組陽(yáng)性犢牛第7—28 天，陽(yáng)性犢牛數(shù)為1 頭，卵囊排出率均為4.17 %，平均OPG 為100，從35—49 天托曲珠利組陽(yáng)性犢牛數(shù)為2 頭，卵囊排出率均為8.33 %，平均OPG 從150 增加到300。從56—196 天，各組陽(yáng)性犢牛數(shù)、卵囊排出率和OPG 均呈現(xiàn)增加的趨勢(shì)，癸氧喹酯組陽(yáng)性犢牛數(shù)5～7 頭，卵囊排出率為20.83 %～29.17 %，平均OPG 560～807；托曲珠利組陽(yáng)性犢牛數(shù)4～8 頭，卵囊排出率為16.67 %～33.33 %，平均OPG 425～1,394。對(duì)照組從0—196 天，陽(yáng)性犢牛數(shù)量從6 頭增加到11 頭，卵囊排出率從25 %增加到45.83 %，平均OPG 從167 增加到1,123。

表2 不同組犢牛球蟲(chóng)檢測(cè)結(jié)果

在整個(gè)試驗(yàn)周期內(nèi)，對(duì)照組陽(yáng)性犢牛頭數(shù)呈現(xiàn)增長(zhǎng)趨勢(shì)，2 組藥物治療組陽(yáng)性犢牛頭數(shù)先減少后增加，但是均顯著低于對(duì)照組（圖1）。不同組卵囊排出總量與陽(yáng)性犢牛頭數(shù)變化趨勢(shì)一致，呈線性相關(guān)（圖2）。

圖1 不同組陽(yáng)性犢牛頭數(shù)及卵囊排出率統(tǒng)計(jì)

圖2 不同組陽(yáng)性牛卵囊排出量及變化趨勢(shì)

3.2 體重變化

通過(guò)對(duì)不同組犢牛體重變化分析，結(jié)果見(jiàn)表3所示，試驗(yàn)開(kāi)始后0—35 天，各組犢牛體重均無(wú)差異（p＞0.05）；試驗(yàn)第49 天，癸氧喹酯組與對(duì)照組犢牛體重相比差異顯著（p＜0.05），托曲珠利組和對(duì)照組犢牛體重相比差異不顯著（p＞0.05）；試驗(yàn)第56 天，托曲珠利組與對(duì)照組犢牛體重相比差異顯著（p＜0.05），癸氧喹酯組與對(duì)照組犢牛體重相比差異顯著（p＜0.05）；試驗(yàn)第84、112 和196 天癸氧喹酯組和托曲珠利組犢牛體重均與對(duì)照組相比差異極顯著（p＜0.01）；整個(gè)試驗(yàn)周期內(nèi)癸氧喹酯組和托曲珠利組犢牛體重相比均無(wú)差異（p＞0.05）。

表3 不同時(shí)間點(diǎn)不同組犢牛體重變化

4 討論

隨著規(guī)?；蹋ㄈ猓┡ｐB(yǎng)殖業(yè)迅猛發(fā)展，由艾美爾球蟲(chóng)等寄生蟲(chóng)感染引起的奶（肉）牛腹瀉和呼吸道疾病發(fā)病率和死亡率急劇攀升，嚴(yán)重威脅著奶（肉）牛產(chǎn)業(yè)和地區(qū)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展。球蟲(chóng)感染前期使用藥物抑制卵囊排出是控制球蟲(chóng)病的最有效途徑，因此預(yù)防牛球蟲(chóng)病，牛群應(yīng)該進(jìn)行早期的藥物預(yù)防而非發(fā)病后治療。當(dāng)出現(xiàn)臨床癥狀或排出蟲(chóng)卵時(shí)，球蟲(chóng)已經(jīng)損傷腸道并完成繁殖過(guò)程[6]。為了阻止球蟲(chóng)的大量繁殖及隨后的黏膜損傷，選用的預(yù)防藥物必須可以破壞寄生蟲(chóng)的早期階段如裂殖生殖階段。癸氧喹酯屬喹啉類抗球蟲(chóng)藥，主要作用是阻礙球蟲(chóng)子孢子發(fā)育，具有廣譜抗球蟲(chóng)活性，可用于防治各類球蟲(chóng)病，用藥時(shí)間一般需要覆蓋球蟲(chóng)的整個(gè)生命周期[6,10]。托曲珠利對(duì)球蟲(chóng)的作用時(shí)期較廣泛，對(duì)球蟲(chóng)的兩個(gè)無(wú)性周期均有作用，如抑制裂殖體、小配子體的核分裂和小配子體的壁形成體過(guò)程?？诜星槔诜淮?，不僅可以治療球蟲(chóng)病而且可促進(jìn)動(dòng)物獲得球蟲(chóng)終生免疫力。因此從臨床實(shí)踐中驗(yàn)證藥物的作用效果可為預(yù)防球蟲(chóng)病的暴發(fā)和制定有效的用藥程序提供科學(xué)依據(jù)。

本研究利用癸氧喹酯和托曲珠利分別治療犢牛7 d 后發(fā)現(xiàn)癸氧喹酯組和托曲珠利組的犢牛球蟲(chóng)感染率顯著低于對(duì)照組，表明兩種藥物對(duì)球蟲(chóng)均有有效的抑制和殺滅作用。在用藥后30 天到第49 天時(shí)，癸氧喹酯組犢牛一直無(wú)球蟲(chóng)卵囊排出，OPG 值和感染率均為0；同時(shí)期僅給藥一次的托曲珠利組，犢牛球蟲(chóng)感染頭數(shù)增加，OPG 值和球蟲(chóng)感染率也呈上升趨勢(shì)，表明持續(xù)給藥的癸氧喹酯組在治療性預(yù)防方面效果優(yōu)于托曲珠利組；用藥后第56 天至196 天，三組犢牛的球蟲(chóng)陽(yáng)性頭數(shù)、卵囊排出率、卵囊排出總量及平均OPG 值均呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，但癸氧喹酯組和托曲珠利組的各指標(biāo)均明顯低于陰性對(duì)照組，兩個(gè)給藥組之間差異不顯著。根據(jù)給藥療程和試驗(yàn)結(jié)果，可推算出癸氧喹酯藥物治療性預(yù)防的周期約為19 d，托曲珠利藥物治療性預(yù)防的周期約為49 d。本研究同時(shí)證明了托曲珠利在用藥1 次后能在一定程度上而不是完全抑制球蟲(chóng)卵囊的排出，后期仍會(huì)發(fā)生球蟲(chóng)病，因此托曲珠利不能達(dá)到一次用藥，終生免疫的效果。另外，托曲珠利僅能通過(guò)灌服方式進(jìn)行給藥，不適用于體型較大的犢牛，而癸氧喹酯可通過(guò)拌料的方式飼喂，更便于給藥。

通過(guò)統(tǒng)計(jì)分析不同組犢牛體重變化發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)第49 天到196天，癸氧喹酯組和托曲珠利組均與陰性對(duì)照組犢牛體重相比差異顯著，藥物治療性預(yù)防后的犢牛體重增加量明顯高于對(duì)照組，尤其在治療后期更明顯，而整個(gè)治療周期中癸氧喹酯組和托曲珠利組犢牛體重相比均無(wú)差異。究其原因可能是由于對(duì)照組犢牛一直處于球蟲(chóng)感染狀態(tài)，嚴(yán)重影響犢牛的消化能力，降低飼料報(bào)酬。連續(xù)使用同種抗球蟲(chóng)藥物則會(huì)產(chǎn)生耐藥性，因此在治療犢牛球蟲(chóng)病時(shí)應(yīng)選取多種藥物輪換或穿梭使用，不可長(zhǎng)期使用同類藥物[5]。預(yù)防球蟲(chóng)病不能僅依賴藥物治療，準(zhǔn)確的診斷和流行病學(xué)調(diào)查也是科學(xué)合理控制球蟲(chóng)病的前提[11,12]?！?/p>