李 炎,劉鵬飛,劉學(xué)偉,張 博,黃樹明

(1. 揚(yáng)州大學(xué)醫(yī)學(xué)院,江蘇揚(yáng)州 225009;2. 揚(yáng)州大學(xué)附屬醫(yī)院,江蘇揚(yáng)州 225012;3. 黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥研究院,哈爾濱 150040)

肥胖已成為當(dāng)今社會(huì)嚴(yán)重的健康問題,除了人們熟知的肥胖能增加多種疾病如糖尿病、心腦血管疾病和某些癌癥等的患病風(fēng)險(xiǎn)外,越來越多的研究證明肥胖還與認(rèn)知功能下降密切相關(guān)[1]。臨床研究發(fā)現(xiàn)肥胖者腦體積較小,尤其在與認(rèn)知功能相關(guān)的海馬區(qū)更為明顯[2-3]。實(shí)驗(yàn)證明,長(zhǎng)期高脂飲食誘發(fā)的肥胖不僅導(dǎo)致動(dòng)物認(rèn)知功能下降,還會(huì)造成海馬區(qū)突觸可塑性下降、樹突小棘密度降低,以及誘發(fā)氧化應(yīng)激和促進(jìn)神經(jīng)炎癥等病理變化[4-5]。研究還表明,不論年齡大小,肥胖均能誘發(fā)認(rèn)知功能下降,而當(dāng)肥胖動(dòng)物被施以脂肪切除術(shù)或跑步訓(xùn)練減少體質(zhì)量后,其認(rèn)知功能、突觸可塑性及神經(jīng)炎癥水平均能得到改善[6-7]。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)肥胖相關(guān)的認(rèn)知功能下降與腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞向促炎表型(M1型)轉(zhuǎn)化密切相關(guān),M1型小膠質(zhì)細(xì)胞可通過吞噬突觸及釋放炎性因子干擾突觸功能,從而導(dǎo)致認(rèn)知功能下降[8]。因此調(diào)控小膠質(zhì)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化向抗炎/神經(jīng)保護(hù)表型(M2型)傾斜是治療肥胖相關(guān)認(rèn)知障礙的潛在靶點(diǎn)。

開心散出自孫思邈的《備急千金要方》,“主好忘”,大量研究證明其對(duì)多種癡呆動(dòng)物模型的認(rèn)知功能下降有明顯的治療作用[9-12]。還有研究發(fā)現(xiàn)開心散能夠改善氟西汀耐藥的抑郁動(dòng)物的異常行為,具體機(jī)制與抑制海馬區(qū)神經(jīng)炎癥,即升高海馬區(qū)白細(xì)胞介素(interleukin,IL)-10水平、降低腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α水平有關(guān)[13]。在此基礎(chǔ)上提出假說:開心散可能具有通過調(diào)控小膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化、抑制神經(jīng)炎癥改善肥胖相關(guān)認(rèn)知下降的作用。為了驗(yàn)證這一假說,本研究應(yīng)用長(zhǎng)期高脂飲食復(fù)制肥胖相關(guān)認(rèn)知障礙動(dòng)物模型,觀察開心散的改善作用并進(jìn)一步探究其機(jī)制,以期為肥胖相關(guān)認(rèn)知功能下降的中醫(yī)藥防治及開心散的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)遵循國(guó)際動(dòng)物福利標(biāo)準(zhǔn)并通過揚(yáng)州大學(xué)醫(yī)學(xué)院倫理委員會(huì)審查,編號(hào):YXYLL-2021-10。

1 材料

1.1 動(dòng)物

6周齡SPF級(jí)雄性C57BL/6J小鼠,體質(zhì)量(22±2)g,由揚(yáng)州大學(xué)比較醫(yī)學(xué)中心提供,動(dòng)物許可證號(hào):SCXK(蘇)2022-0009。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物提前1周購(gòu)入,于標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物房?jī)?nèi)飼養(yǎng),每天光照與黑暗時(shí)間均為12 h,室溫22～25 ℃,相對(duì)濕度50%～60%。

1.2 主要藥物與試劑

開心散由人參、茯苓、石菖蒲、遠(yuǎn)志組成,中藥飲片均購(gòu)于揚(yáng)州市中醫(yī)院;小鼠IL-6 ELISA試劑盒(貨號(hào):F11836)、TNF-α ELISA試劑盒(貨號(hào):F12044)、IL-10 ELISA試劑盒(貨號(hào):F11829)及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(transforming growth factor,TGF)-β1 ELISA試劑盒(貨號(hào):F12041),均購(gòu)自上海研謹(jǐn)生物有限公司;兔抗小鼠CD16+CD32抗體(貨號(hào):ab228971)、兔抗小鼠CD206抗體(貨號(hào):ab64693),購(gòu)自英國(guó)Abcam公司;免疫熒光染色試劑盒-抗兔Alexa Fluor 555(貨號(hào):P0179)、4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-Diamidino-2-phenylindole dihydrochloride,DAPI)染色液(貨號(hào):C1005),購(gòu)自上海碧云天生物有限公司;小鼠單克隆Arg-1抗體(貨號(hào):MA5-31577)購(gòu)自德國(guó)Thermo Fisher科技公司;內(nèi)參 GAPDH抗體(貨號(hào):AB-P-R001)購(gòu)自中國(guó)賢至生物有限公司;辣根酶標(biāo)記山羊抗小鼠IgG(貨號(hào):ZB-2305)購(gòu)自中杉金橋生物有限公司;辣根酶標(biāo)記山羊抗兔IgG(貨號(hào):ab6721)購(gòu)自英國(guó)Abcam公司。

1.3 主要儀器

SuperMaze型Morris水迷宮視頻分析系統(tǒng),上海欣軟科技有限公司;5804R型冷凍離心機(jī),德國(guó)EPPENDORF公司;ELX800型酶標(biāo)儀,美國(guó)伯騰儀器有限公司;NI-U型正置熒光顯微鏡,日本尼康公司;Citadel 2000型組織脫水機(jī)、包埋機(jī),美國(guó)Thermo Fisher科技公司;SM2010R型切片機(jī),德國(guó)徠卡公司;小型垂直電泳轉(zhuǎn)印系統(tǒng)、PowerPac HC型高電流電源、ChemiDoc XRS+型化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng),均購(gòu)自美國(guó)BIO-RAD科技公司。

2 方法

2.1 分組與造模

將小鼠隨機(jī)分為普通飲食組、高脂飲食組及開心散高(開心散-高)、低劑量(開心散-低)組,共4組,每組10只。普通飲食組小鼠給予普通飼料(含4%的脂肪,購(gòu)自江蘇美迪森生物醫(yī)藥有限公司,批號(hào):MD17121)喂養(yǎng)。其余各組均給予高脂飼料(含45%的脂肪,購(gòu)自江蘇美迪森生物醫(yī)藥有限公司,批號(hào):MDDZ001)和酥糖(由花生、蔗糖和葡萄糖組成,含13.2%的脂肪、73.6%的碳水化合物,購(gòu)自齊齊哈爾市泰來縣鑫源食品廠)喂養(yǎng),實(shí)驗(yàn)周期為16周,以建立肥胖相關(guān)認(rèn)知障礙小鼠模型。每周記錄各組小鼠體質(zhì)量。

2.2 給藥

造模13～16周期間,開心散高、低劑量組小鼠分別灌胃高、低劑量的開心散溶液。開心散(人參、茯苓、遠(yuǎn)志、石菖蒲,按3:3:2:2的質(zhì)量比組成)經(jīng)60%乙醇提取后制備成凍干粉,干燥避光保存[14]。以成人(體質(zhì)量70 kg)每日服用生藥劑量50 g換算出小鼠等效劑量6.5 g/kg,作為開心散低劑量,其2倍藥量作為開心散高劑量。普通飲食組和高脂飲食組小鼠灌胃等體積的0.9%氯化鈉溶液。灌胃體積均為10 mL/kg。

2.3 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)

第16周進(jìn)行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn),包括定位航行實(shí)驗(yàn)與空間探索實(shí)驗(yàn)。定位航行實(shí)驗(yàn):水池被分為4個(gè)象限,水溫控制在(26±1)℃,在第2象限中央放置平臺(tái)。每只小鼠連續(xù)訓(xùn)練6 d,每天在同一時(shí)間進(jìn)行訓(xùn)練。每次訓(xùn)練需確保小鼠分別從4個(gè)不同的位點(diǎn)下水以避免偏差,訓(xùn)練時(shí)間為60 s,記錄它們找到平臺(tái)所需的時(shí)間(逃離潛伏期),60 s內(nèi)未找到平臺(tái)則計(jì)為60 s,并幫助該小鼠游到平臺(tái)上后停留20 s?？臻g探索實(shí)驗(yàn):在完成第6天的定位航行實(shí)驗(yàn)后2 h,移除第2象限中央的平臺(tái),進(jìn)行空間搜索實(shí)驗(yàn)。每只小鼠只測(cè)試1次,時(shí)間60 s,從同一起點(diǎn)下水,記錄各組小鼠穿越平臺(tái)區(qū)次數(shù)及在各象限的游泳時(shí)間。

2.4 處死與取材

行為學(xué)實(shí)驗(yàn)后,小鼠經(jīng)脫頸處死并迅速冰上取腦,將腦組織切分為左右兩半,一半腦組織浸泡于4%多聚甲醛中,4 ℃固定24 h后用于免疫熒光實(shí)驗(yàn),另一半腦組織迅速投入液氮內(nèi)凍存,用于ELISA和Western blot實(shí)驗(yàn)。

2.5 ELISA法檢測(cè)全腦及海馬區(qū)細(xì)胞因子

應(yīng)用ELISA法測(cè)定全腦及海馬區(qū)促炎因子IL-6、TNF-α及抗炎因子IL-10、TGF-β1含量。具體實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按試劑盒說明書操作。

2.6 免疫熒光法標(biāo)記海馬區(qū)M1/M2型小膠質(zhì)細(xì)胞

經(jīng)4%多聚甲醛固定后的腦組織經(jīng)脫水、透明、石蠟包埋及切割,制作成5 μm厚的石蠟切片。再經(jīng)脫蠟、抗原熱修復(fù)、內(nèi)源性過氧化物酶封閉、8%脫脂奶粉封閉,4 ℃下孵育一抗(兔抗小鼠CD16+CD32抗體或兔抗小鼠CD206抗體,稀釋比例均為1:1 000)過夜,室溫下避光孵育熒光標(biāo)記二抗(1:1 000) 60 min,DAPI染色液覆蓋3 min后封片,正置熒光顯微鏡下拍照并對(duì)小鼠海馬CA1區(qū)與齒狀回之間460 μm2×700 μm2區(qū)域內(nèi)CD16+CD32及CD206免疫熒光標(biāo)記的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。每個(gè)樣本均由3人計(jì)數(shù)后取平均值。

2.7 Western blot法測(cè)定海馬區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞Arg-1表達(dá)

海馬組織經(jīng)細(xì)胞裂解、總蛋白提取、蛋白定量及變性后,取各樣本等量蛋白進(jìn)行電泳、轉(zhuǎn)膜及脫脂奶粉封閉,4 ℃孵育小鼠單克隆Arg-1抗體(1:1 000)過夜,次日室溫下孵育二抗(1:7 000)40 min,增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法(enhanced chemiluminescence,ECL)成像,以Arg-1條帶與內(nèi)參GAPDH條帶灰度比值作為結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 開心散對(duì)肥胖小鼠體質(zhì)量的影響

圖1A示小鼠造模16周期間體質(zhì)量增長(zhǎng)百分?jǐn)?shù)變化趨勢(shì)。圖1B示,與普通飲食組比較,高脂飲食喂養(yǎng)12周時(shí)高脂飲食組、開心散低劑量組及開心散高劑量組小鼠體質(zhì)量均明顯增加(P<0.001),且高脂飲食的各組小鼠間比較體質(zhì)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。圖1C示,灌胃給藥4周后,與普通飲食組比較,高脂飲食組小鼠體質(zhì)量仍明顯高于普通飲食組(P<0.001);與高脂飲食組比較,開心散低劑量和高劑量組小鼠體質(zhì)量明顯降低(P<0.05),且體質(zhì)量增加百分?jǐn)?shù)呈下降趨勢(shì),見圖1A。圖1D示,灌胃給藥4周后,與高脂飲食組比較,開心散低劑量和高劑量組小鼠體質(zhì)量的變化值較大(P<0.05)。

注:*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,ns代表差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義圖1 各組小鼠體質(zhì)量變化

3.2 開心散對(duì)肥胖小鼠認(rèn)知能力的影響

圖2示,與普通飲食組比較,高脂飲食組小鼠在定位航行實(shí)驗(yàn)第6天逃離潛伏期明顯延長(zhǎng)(P<0.01),見圖2B,空間搜索實(shí)驗(yàn)中在平臺(tái)區(qū)象限游泳時(shí)間百分?jǐn)?shù)及穿越平臺(tái)期次數(shù)明顯減少(P<0.01),見圖2C、圖2D;與高脂飲食組比較,開心散高劑量組小鼠逃離潛伏期減短(P<0.05),見圖2B,平臺(tái)區(qū)象限游泳時(shí)間百分?jǐn)?shù)及穿越平臺(tái)區(qū)次數(shù)均增加(P<0.05),見圖2C、圖2D;與高脂飲食組比較,開心散低劑量組小逃離潛伏期、平臺(tái)區(qū)象限時(shí)間百分?jǐn)?shù)及穿越平臺(tái)區(qū)次數(shù)雖然均有改善趨勢(shì),但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

注:*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001圖2 各組小鼠Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較

3.3 開心散對(duì)肥胖小鼠全腦和海馬區(qū)IL-6、TNF-α、IL-10及TGF-β1含量的影響

圖3示,與普通飲食組比較,高脂飲食組小鼠全腦和海馬區(qū)的IL-6、TNF-α含量均明顯升高(P<0.001),而IL-10、TGF-β1含量均明顯降低(P<0.01);與高脂飲食組比較,開心散高劑量組小鼠全腦和海馬區(qū)的IL-6、TNF-α含量均降低(P<0.01),而IL-10、TGF-β1含量均明顯升高(P<0.05);與高脂飲食組比較,開心散低劑量組小鼠全腦和海馬區(qū)IL-6、TNF-α含量均明顯降低(P<0.05),海馬區(qū)IL-10、全腦和海馬區(qū)TGF-β1含量均明顯升高(P<0.05),而全腦IL-10含量變化不顯著,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

注:*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,ns代表差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;白細(xì)胞介素6(IL-6),腫瘤壞死因子α(TNF-α),轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF- β1)圖3 各組小鼠腦內(nèi)IL-6、TNF-α、IL-10、TGF-β1含量比較

3.4 開心散對(duì)肥胖小鼠海馬區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響

圖4示,與普通飲食組比較,高脂飲食組小鼠海馬區(qū)M1型小膠質(zhì)細(xì)胞(CD16+CD32蛋白免疫熒光標(biāo)記,見圖4D)的數(shù)量明顯增多(P<0.01);與高脂飲食組比較,開心散高劑量組小鼠M1型小膠質(zhì)細(xì)胞明顯減少(P<0.05)。與普通飲食組比較,高脂飲食組小鼠M2型小膠質(zhì)細(xì)胞(CD206蛋白免疫熒光標(biāo)記,見圖4E)的數(shù)量明顯減少(P<0.05);與高脂飲食組比較,開心散低劑量組和開心散高劑量組小鼠M2型小膠質(zhì)細(xì)胞均顯著增多(P<0.05)。

3.5 開心散對(duì)肥胖小鼠海馬區(qū)Arg-1表達(dá)的影響

注:*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001;精氨酸酶1(Arg-1)A.各組小鼠海馬區(qū)Arg-1蛋白的免疫印跡圖;B.Arg-1表達(dá)水平;圖5 各組小鼠海馬區(qū)Arg-1蛋白表達(dá)比較

圖5示,與普通飲食組比較,高脂飲食組小鼠海馬區(qū)Arg-1表達(dá)明顯減少(P<0.01);與高脂飲食組比較,開心散高劑量組和開心散低劑量組小鼠海馬區(qū)Arg-1表達(dá)明顯增多(P<0.05)。

4 討論

本研究發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)期高脂飲食的小鼠體質(zhì)量快速增長(zhǎng),明顯高于普通飲食小鼠。Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)中,與普通飲食小鼠比較,高脂飲食小鼠逃離潛伏期變化曲線下降平緩,逃離潛伏期明顯延長(zhǎng),而其穿越平臺(tái)區(qū)次數(shù)及平臺(tái)區(qū)象限探索時(shí)間百分?jǐn)?shù)均明顯減少。體質(zhì)量監(jiān)測(cè)和行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果再一次證明長(zhǎng)期高脂飲食誘發(fā)的肥胖動(dòng)物伴有認(rèn)知能力下降,實(shí)驗(yàn)結(jié)果與近年臨床和基礎(chǔ)研究一致[15]。有研究發(fā)現(xiàn),海馬區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞向促炎性M1型轉(zhuǎn)化及其所引起的神經(jīng)炎癥是肥胖誘發(fā)認(rèn)知功能下降的核心機(jī)制。小膠質(zhì)細(xì)胞激活后主要有M1和M2兩種不同的功能表型,M1型能被炎性細(xì)胞因子激活,如脂多糖、IL-1β、IL-6、TNF-α以及干擾素γ,而M2型能夠被抗炎細(xì)胞因子激活,如IL-4和IL-10等[16]。正常情況下,小膠質(zhì)細(xì)胞的兩種轉(zhuǎn)化形式處于相對(duì)平衡的狀態(tài)[17]。肥胖被認(rèn)為是一種慢性炎癥性疾病,長(zhǎng)期的高脂飲食誘發(fā)脂肪細(xì)胞過度肥大,并釋放IL-1β、TNF-α等炎性細(xì)胞因子,這些因子可進(jìn)一步觸發(fā)外周的免疫反應(yīng),使巨噬細(xì)胞滲入脂肪組織中并激活,引起更多的炎性因子釋放而導(dǎo)致周身炎癥性反應(yīng),外周脂肪細(xì)胞所釋放的炎性因子可透過血腦屏障并激活腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞向M1型轉(zhuǎn)化,引起包括海馬區(qū)的腦部炎癥[18]。在本研究中亦證明高脂飲食小鼠全腦及海馬區(qū)炎性細(xì)胞因子IL-6、TNF-α濃度明顯高于普通飲食小鼠,而抗炎細(xì)胞因子IL-10、TGF-β1濃度明顯低于普通飲食小鼠,說明長(zhǎng)期高脂飲食誘發(fā)的肥胖小鼠全腦及海馬區(qū)發(fā)生了神經(jīng)炎癥。進(jìn)一步研究中,高脂飲食小鼠海馬區(qū)M1型小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量明顯多于普通飲食小鼠,而M2型小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量及其標(biāo)志物Arg-1表達(dá)量明顯低于普通飲食小鼠,表明高脂飲食小鼠海馬區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化方向已向M1型傾斜。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為,久食肥甘厚味(長(zhǎng)期高脂飲食習(xí)慣)可誘發(fā)肥胖[19],如《素問·通評(píng)虛實(shí)論篇》曰“肥貴人,則高粱之疾也”,同時(shí)常伴有“脾”“心”等臟腑功能的失調(diào)。久食肥甘厚味傷脾,脾傷生濕,脾失健運(yùn)則水濕運(yùn)化失利,濕聚生痰,如《素問·至真要大論篇》所云“諸濕腫滿,皆屬于脾”。陳修圓也提出“大抵素稟之盛,從無所苦,惟是濕痰頗多”[20]。若痰濕隨氣機(jī)升降蒙蔽清竅,則神失所用,就會(huì)出現(xiàn)健忘甚則癡呆等表現(xiàn),如《名醫(yī)指掌》曰“痰迷心竅,則遇事多忘”[21],《石室秘錄》中也提到“痰勢(shì)最盛,呆氣最深”[22]。因此,肥胖相關(guān)認(rèn)知障礙的中醫(yī)學(xué)病因病機(jī)為久食肥甘厚味誘發(fā)肥胖,同時(shí)脾失健運(yùn),水濕內(nèi)停,濕聚生痰,上擾清竅,腦髓失聰,則出現(xiàn)健忘、癡呆等神明失用表現(xiàn)。因此,肥胖相關(guān)認(rèn)知下降可辨為痰濁蒙竅證健忘。在治療上首先要祛痰濕以利清竅;再者,善治痰者當(dāng)治生痰之源,還需健脾益氣減少痰濕的生成。開心散具有“健脾益氣,祛痰開竅”的功用,與該證治法一致。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)經(jīng)開心散干預(yù)后的高脂飲食小鼠體質(zhì)量減輕,認(rèn)知能力出現(xiàn)明顯改善,全腦及海馬區(qū)IL-6、TNF-α、IL-10、TGF-β1的含量變化呈現(xiàn)逆轉(zhuǎn),海馬區(qū)M1型小膠質(zhì)細(xì)胞減少,而M2型小膠質(zhì)細(xì)胞及Arg-1表達(dá)明顯增多,且上述結(jié)果均呈現(xiàn)出劑量依賴性,證明開心散能夠改善長(zhǎng)期高脂飲食誘發(fā)的肥胖相關(guān)認(rèn)知障礙,其改善機(jī)制可能為通過調(diào)控海馬區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化向M2型傾斜,減輕海馬區(qū)神經(jīng)炎癥,進(jìn)而起到神經(jīng)保護(hù)及改善認(rèn)知功能的作用。開心散調(diào)控小膠質(zhì)細(xì)胞向M2型傾斜的作用機(jī)制可能包括兩方面途徑,一方面,開心散中的人參[23-24]、茯苓[25-26]及遠(yuǎn)志[27]均被證明具有調(diào)節(jié)能量代謝、抑制肥胖的作用,因此,開心散可能通過控制脂肪細(xì)胞肥大、降低體質(zhì)量、減輕周身炎癥反應(yīng),進(jìn)而抑制神經(jīng)炎癥及小膠質(zhì)細(xì)胞的M1型轉(zhuǎn)化;另一方面,開心散在多種非肥胖動(dòng)物模型,如抑郁癥模型動(dòng)物、阿爾茨海默病模型動(dòng)物中均被證明具有抗神經(jīng)炎癥的作用[28],說明開心散可直接抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的M1型轉(zhuǎn)化。因此推斷開心散可通過直接或間接的途徑調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細(xì)胞向M2型轉(zhuǎn)化,對(duì)抗神經(jīng)炎癥,改善肥胖相關(guān)認(rèn)知障礙。開心散對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞的干預(yù)機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。此外,針對(duì)肥胖相關(guān)認(rèn)知障礙,已報(bào)道的干預(yù)措施中還未見合適的化學(xué)藥物,僅有脂肪組織手術(shù)切除和強(qiáng)迫運(yùn)動(dòng)等措施,再者本研究的目的為證明開心散對(duì)該模型的有效性并探索其作用機(jī)制,因此實(shí)驗(yàn)中未設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照藥組。

本研究證明開心散可通過減輕體質(zhì)量及促進(jìn)腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞向M2型轉(zhuǎn)化、干預(yù)神經(jīng)炎癥,進(jìn)而改善高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖相關(guān)認(rèn)知下降。同時(shí)本研究也為開心散治療痰濁蒙竅證健忘奠定了生物學(xué)基礎(chǔ)。