梁婷婷 李麗紅

因母嬰血型不合而引發(fā)的新生兒或胎兒溶血性疾?。╤emolytic disease of the fetus and newborn，HDFN），臨床將其稱為溶血癥。父母雙方的血型決定了胎兒的血型，當(dāng)父方帶給胎兒的是母方?jīng)]有的血型抗原后，此抗原進(jìn)入母體導(dǎo)致母體生成相應(yīng)的免疫抗體；免疫抗體順著胎盤(pán)絨毛膜憑借Ig-G 抗體形式到達(dá)胎兒血液循環(huán)引發(fā)抗原抗體免疫反應(yīng)，進(jìn)而誘發(fā)肝脾腫大、水腫、貧血等臨床癥狀，并會(huì)在出生后發(fā)生進(jìn)行性黃疸加重[1]。ABO 血型不合是引發(fā)該疾病發(fā)生的主要因素，而Rh 血型D 抗體引發(fā)該疾病病情較重，會(huì)引發(fā)髓外造血、膽紅素腦病等病癥，對(duì)新生兒的生命安全以及成長(zhǎng)發(fā)育造成不利影響[2]。流式細(xì)胞儀法、血清學(xué)檢查以及常規(guī)檢查均為HDFN 實(shí)驗(yàn)室檢查常用方式[3]。現(xiàn)對(duì)2019 年1月—2022 年12 月龍巖市第二醫(yī)院收治的100 例疑似HDFN 患兒的血樣進(jìn)行血清學(xué)測(cè)定，以臨床綜合診斷為“金標(biāo)準(zhǔn)”，分析血清學(xué)檢測(cè)在HDFN 診斷中的應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019 年1 月—2022 年12 月龍巖市第二醫(yī)院新生兒科接受治療的高膽紅素血癥患兒100 例，男56 例，女44 例；年齡1 ～15 d，平均（4.03±0.23）d。分娩孕周36 ～40 周，平均（38.03±0.45）周。本研究基本流程已上交至醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)（批號(hào)180729），在其批準(zhǔn)下開(kāi)展。參與研究的100 例患兒家屬均對(duì)本研究知情同意。

HDFN 臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]：（1）紅細(xì)胞抗體釋放試驗(yàn)或直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性。（2）血紅蛋白及紅細(xì)胞量減少（臍帶血＜13 g/dL）。（3）無(wú)其他可能誘發(fā)新生兒溶血的情況。

HDFN 實(shí)驗(yàn)室診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]：抗體放散試驗(yàn)、游離抗體試驗(yàn)、直接抗人球蛋白試驗(yàn)（direct antiglobulin test，DAT）試驗(yàn)中，3 項(xiàng)結(jié)果均為陽(yáng)，可確診為HDFN ；游離抗體試驗(yàn)為陰，另2 項(xiàng)為陽(yáng)性，也可確診為HDFN ；只有抗體放散試驗(yàn)為陽(yáng)，也可確診為HDFN。游離抗體試驗(yàn)、DAT 試驗(yàn)單項(xiàng)或2 項(xiàng)結(jié)果為陽(yáng)性，為疑似HDFN。

納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）100 例患兒的皮膽素均在15 mg/dL以上，出現(xiàn)高膽紅素血癥相關(guān)臨床表現(xiàn)，疑似為母嬰血型不合而引發(fā)的HDFN。（2）臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）經(jīng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)患兒體內(nèi)存在單純皰疹病毒抗體、巨細(xì)胞病毒抗體、風(fēng)疹病毒抗體或合并地中海貧血等。（2）伴有免疫性疾病者。

1.2 方法

測(cè)定試劑：上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)的Rh（D）血型定型試劑以及抗A、抗B 血型定型試劑、反定型標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞。由戴安娜生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的抗人球蛋白檢測(cè)卡以及新生兒血型卡（直抗卡）。邁瑞醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn)的BC-7500 檢測(cè)血細(xì)胞比容、血紅蛋白。西門(mén)子醫(yī)學(xué)診斷有限公司生產(chǎn)的ADVIA 2120 全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)相關(guān)生化項(xiàng)目。

血樣采集：抽取母親靜脈血以及新生兒臍帶血各3 ～5 mL，分別置入含EDTA-K2 抗凝劑試管中，混勻送檢。

實(shí)驗(yàn)室檢查：（1）母親血清抗體效價(jià)檢測(cè)：將樣本血清中的Ig-M 抗A、抗B 抗體用2-Me 試劑處理后，對(duì)干擾進(jìn)行消除；對(duì)Ig-G 抗體效價(jià)進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定方式為鹽水倍比稀釋法。（2）游離抗體試驗(yàn)檢測(cè)：將標(biāo)準(zhǔn)A、B 紅細(xì)胞懸液各1 滴以及新生兒血清2 滴分別加入試管中，在37 ℃溫育箱內(nèi)反應(yīng)30 min ；再通過(guò)生理鹽水進(jìn)行3 次洗滌，將上清液去除；將抗人球蛋白試劑Ig-G 加入各個(gè)試管中，每個(gè)試管加2 滴，1 500g離心15 s ；根據(jù)是否出現(xiàn)凝集判定結(jié)果。（3）新生兒血樣抗體釋放試驗(yàn)：在試管中加入等體積的生理鹽水以及壓積紅細(xì)胞，混勻后置入56 ℃水浴箱內(nèi)反應(yīng)10 min，在1 500g的條件下進(jìn)行3 min 的離心；將上層放散液提取到另一潔凈試管中，加入相應(yīng)抗原紅細(xì)胞，再放置37 ℃水浴箱內(nèi)反應(yīng)30 min ；再通過(guò)生理鹽水進(jìn)行3 次洗滌，加入抗人球蛋白試劑，1 500g離心15 s。根據(jù)是否出現(xiàn)凝集判定結(jié)果。（4）新生兒血樣直接抗人球蛋白試驗(yàn)：依據(jù)抗人球蛋白檢測(cè)卡說(shuō)明書(shū)操作，洗滌3 次待檢紅細(xì)胞制成紅細(xì)胞懸液，與抗人球蛋白試劑一起加入試劑管后1 500g離心15 s。根據(jù)是否出現(xiàn)凝集判定結(jié)果。（5）母親不規(guī)則抗體篩查檢測(cè)：依據(jù)抗人球蛋白檢測(cè)卡說(shuō)明書(shū)操作。（6）通過(guò)試管法鑒定母親與新生兒血樣標(biāo)本。

1.3 觀察指標(biāo)

（1）記錄100 例患兒中母嬰血型不合的發(fā)生情況，并分析造成血型不合的系統(tǒng)類型以及各系統(tǒng)引發(fā)的母嬰血型不合中發(fā)生HDFN 的情況[6]。（2）母親A、B血型發(fā)生HDFN 的情況。（3）記錄31 例HDFN 患兒的血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果。（4）31 例HDFN 患兒采血送檢結(jié)果中，出生天數(shù)不同與其結(jié)果陽(yáng)性的關(guān)系。（5）產(chǎn)前母體采血送檢結(jié)果與產(chǎn)后嬰兒采血送檢結(jié)果對(duì)比。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 26.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析。計(jì)數(shù)資料用n（%）表示，行χ2檢驗(yàn)。P＜ 0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同血型系統(tǒng)發(fā)生HDFN 的情況對(duì)比

100 例患兒中，有58 例患兒出現(xiàn)母嬰血型不合，其中ABO 血型系統(tǒng)50 例，Rh 血型系統(tǒng)8 例。ABO 血型系統(tǒng)HDFN 發(fā)生率顯著高于Rh 血型系統(tǒng)（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 不同血型系統(tǒng)發(fā)生HDFN 的情況對(duì)比 [例（%）]

2.2 母親A、B 血型發(fā)生HDFN 的情況對(duì)比

50 例ABO 血型系統(tǒng)母嬰不合者中，O-A 型HDFN 發(fā)生率顯著高于O-B 型（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 母親A、B 血型發(fā)生HDFN 的情況對(duì)比[例（%）]

2.3 31 例HDFN 患兒的血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果

抗體放散試驗(yàn)、游離抗體試驗(yàn)、DAT 試驗(yàn)中，3項(xiàng)結(jié)果均為陽(yáng)者1 例，占比3.23% ；前兩項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性，DAT 試驗(yàn)結(jié)果為陰性2 例，占比6.45% ；DAT 試驗(yàn)以及抗體放散試驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性，游離抗體試驗(yàn)結(jié)果為陰性3 例，占比9.68% ；單獨(dú)抗體放散試驗(yàn)為陽(yáng)性者25 例，占比80.65%。單獨(dú)抗體放散試驗(yàn)為陽(yáng)性的HDFN 患兒占比率顯著高于其他類型（χ2＝5.362，P＜0.05）。

2.4 31 例HDFN 患兒采血送檢結(jié)果中，出生天數(shù)不同與其結(jié)果陽(yáng)性的關(guān)系

31 例HDFN 患兒中，出生天數(shù)為4 ～7 d 者其陽(yáng)性率顯著高于其他出生天數(shù)的患兒（χ2＝6.152，P＜0.05），及生命安全[9]。因此，對(duì)孕婦產(chǎn)前進(jìn)行篩查，早檢測(cè)、見(jiàn)表3。

表3 31 例HDFN 患兒采血送檢結(jié)果中，出生天數(shù)不同與其結(jié)果陽(yáng)性的關(guān)系（例）

2.5 產(chǎn)前母體采血送檢結(jié)果與產(chǎn)后嬰兒采血送檢結(jié)果對(duì)比

產(chǎn)前檢測(cè)IgG 抗A 或抗B 效價(jià)結(jié)果與產(chǎn)后采血對(duì)比，產(chǎn)前檢測(cè)準(zhǔn)確率為90.32%（28/31），產(chǎn)前母體采血送檢結(jié)果與產(chǎn)后嬰兒采血送檢結(jié)果對(duì)比見(jiàn)表4。

表4 產(chǎn)前母體采血送檢結(jié)果與產(chǎn)后嬰兒采血送檢結(jié)果對(duì)比

3 討論

母體與胎兒之間血型不一致是因?yàn)樘簭母阁w獲得了母體不具備的紅細(xì)胞抗原，這對(duì)母體造成刺激，導(dǎo)致母體發(fā)生免疫反應(yīng)，生成抗體IgG。該抗體通過(guò)母嬰之間的胎盤(pán)進(jìn)入胎兒體內(nèi)，與胎兒血液中對(duì)應(yīng)抗原結(jié)合而破壞胎兒血液中的紅細(xì)胞，誘發(fā)血管外溶血的發(fā)生[7]。該疾病是誘發(fā)新生兒黃疸以及高膽紅素血癥的主要因素，而母體中的抗體數(shù)量、新生兒自身造血功能以及抗體與胎兒體內(nèi)紅細(xì)胞結(jié)合量均會(huì)對(duì)溶血病的患病程度造成影響，引發(fā)不同程度的水腫、貧血、黃疸[8]。而高膽紅素血癥是該疾病引發(fā)的最危險(xiǎn)并發(fā)癥，它會(huì)對(duì)新生兒腦干中各類神經(jīng)造成損害，會(huì)對(duì)患兒的運(yùn)動(dòng)、智力均造成影響，威脅患兒的生活質(zhì)量以早診斷、早治療對(duì)該疾病患兒具有重要意義，可為其生命安全做出保障，符合我國(guó)的優(yōu)生優(yōu)育政策[10]。

本研究表明，100 例患兒中58 例出現(xiàn)母嬰血型不合，其中ABO 血型系統(tǒng)50 例，Rh 血型系統(tǒng)8 例。ABO 血型系統(tǒng)HDFN 發(fā)生率顯著高于Rh 血型系統(tǒng)（P＜0.05）；50 例ABO 血型系統(tǒng)母嬰不合者中，O-A 型HDFN 發(fā)生率顯著高于O-B 型（P＜0.05）。這提示ABO 血型系統(tǒng)引發(fā)的HDFN 發(fā)生率更高。這是因?yàn)锳BO 溶血病為同種免疫疾病類型，胎兒體內(nèi)的紅細(xì)胞抗原會(huì)對(duì)母體造成影響并誘發(fā)免疫反應(yīng)，進(jìn)而導(dǎo)致母體內(nèi)生成為抵抗胎兒紅細(xì)胞抗原而出現(xiàn)的IgG 抗體。該抗體在胎盤(pán)的借助下進(jìn)入到胎兒的血液內(nèi)，損害胎兒血液中的紅細(xì)胞，引發(fā)溶血[11-12]。而母親為O 型血，胎兒為A型或B 型血是主要的ABO 溶血病類型，這與O 型血母體中具有一定的抗A 或抗B 免疫抗體有關(guān)。

本研究還得出，31 例HDFN 患兒的血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果中，單獨(dú)抗體放散試驗(yàn)為陽(yáng)性的HDFN 患兒占比率顯著高于其他類型（P＜0.05）。這提示血清學(xué)檢測(cè)在HDFN 檢測(cè)中具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值，可為疾病的早期診斷提供有價(jià)值的輔助依據(jù)。這與龐建等[13]在《臨床血液學(xué)雜志》中發(fā)表的《血型血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)對(duì)新生兒溶血病的診斷價(jià)值》一文中相應(yīng)觀點(diǎn)一致，證實(shí)了本研究結(jié)果的可靠性。對(duì)其分析，抗體放散試驗(yàn)、游離抗體試驗(yàn)、DAT 試驗(yàn)屬于ABO 型溶血病檢驗(yàn)的主要方式，抗體放散試驗(yàn)屬于直接檢驗(yàn)，對(duì)有無(wú)發(fā)病進(jìn)行判定；游離抗體試驗(yàn)是對(duì)血清中游離抗體反應(yīng)進(jìn)行檢驗(yàn)，進(jìn)而對(duì)疾病的進(jìn)展情況進(jìn)行判定[14]。DAT 試驗(yàn)是對(duì)紅細(xì)胞中IgG 抗體反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)。單獨(dú)抗體放散試驗(yàn)基本可以評(píng)定患兒是否患病，而另2種檢驗(yàn)方式屬于補(bǔ)充檢驗(yàn)，三者聯(lián)合應(yīng)用可提高診斷結(jié)果準(zhǔn)確性[15]。另外，本研究還對(duì)31 例患兒檢出時(shí)間進(jìn)行了研究，得出出生天數(shù)為4 ～7 d 者其陽(yáng)性率顯著高于其他出生天數(shù)的患兒（P＜0.05）。這說(shuō)明新生兒出生1 周內(nèi)其被檢出的概率最大。而產(chǎn)前檢測(cè)IgG 抗A 或抗B 效價(jià)結(jié)果與產(chǎn)后采血對(duì)比，產(chǎn)前檢測(cè)準(zhǔn)確率為90.32%，這說(shuō)明母親體內(nèi)IgG 抗A 或抗B 效價(jià)越高，新生兒娩出后患有該疾病的風(fēng)險(xiǎn)越大。文章中體現(xiàn)了中國(guó)輸血協(xié)會(huì)擬定的《胎兒新生兒溶血病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)專家共識(shí)》的臨床參考標(biāo)準(zhǔn)[16]。

綜上所述，在HDFN 診斷中血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果具有較高的輔助價(jià)值，對(duì)于O 型血母體、A 型血嬰兒應(yīng)格外注意，以便于及時(shí)檢出疾病，為新生兒的生命安全以及健康成長(zhǎng)提供保障。