聶海波，鄧 飛，李 麗，邱明雙，陳依婷，陳弟詩(shī)*

（1.四川省南充市順慶區(qū)蘆溪畜牧獸醫(yī)中心站，四川 南充 637000；1.四川省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，四川 成都 610041；3.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，四川 成都 611130）

由于長(zhǎng)期受種源疫病影響，四川省種豬利用率相對(duì)較低，各類(lèi)新發(fā)、突發(fā)疫病仍然是制約生豬種業(yè)發(fā)展和養(yǎng)殖健康的頭號(hào)問(wèn)題。要從源頭上阻斷疫病在生豬產(chǎn)業(yè)鏈中的傳播，就必須從種源疫病凈化工作抓起。目前，我國(guó)要求開(kāi)展非洲豬瘟（ASF）無(wú)疫區(qū)、無(wú)疫小區(qū)建設(shè)和主要?jiǎng)游镆卟RRSV、CSFV、PRV 的凈化工作。為了解四川省生豬核心育種場(chǎng)的疫病凈化工作實(shí)施情況，監(jiān)測(cè)種豬疫病防控及免疫情況，增強(qiáng)疫情預(yù)警能力，本研究對(duì)某生豬核心育種場(chǎng)2023年不同群體種豬的90 份扁桃體和270 份血清進(jìn)行了ASFV、PRRSV、CSFV、PRV 病原核酸、野毒及免疫抗體的檢測(cè)，為該場(chǎng)及全省種豬疫病防控和凈化提供參考。

1 材料與方法

1.1 樣品來(lái)源 采集不同階段豬群扁桃體樣品共90 份，來(lái)源于不少于3 棟豬舍的豬只，其中種公豬20頭，經(jīng)產(chǎn)母豬45頭（1～2胎15頭，3～4胎15 頭，5 胎次及以上15 頭），后備豬25 頭（不同體重）；采集血清樣本270 份（血清包含扁桃體樣本生豬對(duì)應(yīng)的血清），其中種公豬70 份，后備種豬100 份，經(jīng)產(chǎn)母豬100 份。扁桃體和血清樣本于-20 ℃冷凍保存。各豬群均按常規(guī)程序免疫豬瘟疫苗和偽狂犬基因缺失疫苗，未免疫藍(lán)耳病疫苗。

1.2 試劑 病毒DNA/RNA 提取試劑盒（磁珠法），購(gòu)自西安天隆公司。病原核酸檢測(cè)試劑：非洲豬瘟病毒熒光PCR檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自國(guó)生研公司；豬瘟病毒和豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒雙重?zé)晒釸T-PCR 檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自世紀(jì)元亨公司。血清ELISA 檢測(cè)試劑：非洲豬瘟阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自青島立見(jiàn)公司；豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體ELISA 檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自ID.vet 公司；PRV-gE 和CSFV 抗體ELISA 檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自美國(guó)IDEXX公司；PRV-gB抗體ELISA檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自Biostoneah公司。

1.3 檢測(cè)方法 90 份扁桃體樣品經(jīng)過(guò)組織破碎儀破碎后，使用全自動(dòng)核酸提取儀和上述試劑盒提取病毒核酸，然后用上述實(shí)時(shí)熒光PCR（RT-PCR）檢測(cè)試劑盒檢測(cè)ASFV、CSFV 和PRRSV 病原核酸；270 份血清樣本使用上述各ELISA 檢測(cè)試劑盒進(jìn)行ASFV、PRRSV、CSFV、PRV-gE、PRV-gB抗體檢測(cè)。嚴(yán)格按照試劑盒使用說(shuō)明進(jìn)行病原核酸和抗體檢測(cè)，并進(jìn)行結(jié)果判定。

2 結(jié)果與分析

2.1 病原核酸檢測(cè) 采用相應(yīng)試劑盒對(duì)該場(chǎng)不同豬群的90 份扁桃體樣本進(jìn)行ASFV、PRRSV 和CSFV 病原核酸檢測(cè)，結(jié)果顯示ASFV、PRRSV 和CSFV三種病原核酸均為陰性（圖1、圖2）。

圖2 CSFV和PRRSV雙重?zé)晒釸T-PCR檢測(cè)

2.2 抗體檢測(cè)

2.2.1 ASFV 抗體 結(jié)果得出該場(chǎng)不同豬群270份血清樣品的ASFV抗體均為陰性。

2.2.2 CSFV抗體 結(jié)果顯示：該場(chǎng)不同豬群270份血清樣品中，CSFV 抗體陽(yáng)性樣品有227 份，平均抗體陽(yáng)性率為84.07%，種公豬、后備種豬、1～2胎次母豬、3～4 胎次母豬、5 胎次及以上母豬的CSFV 抗體陽(yáng)性率分別為62.86%、95%、81.40%、91.30%、94.12%，離散度（CV）在16%～30%之間。不同豬群抗體平均陽(yáng)性率從高到低依次為后備種豬＞5胎次及以上母豬＞3～4胎次母豬＞1～2胎次母豬＞種公豬（表1、圖3）?？梢?jiàn)該場(chǎng)CSFV免疫較好，抗體水平均達(dá)到農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定的70%合格線要求，但種公豬群體的抗體陽(yáng)性率偏低、離散度較高，說(shuō)明種公豬群的免疫整齊度較差，群體個(gè)體差異較大，CSFV免疫有待優(yōu)化。

表1 不同階段豬群CSFV抗體檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

圖3 不同階段豬群CSFV抗體水平

2.2.3 PRV-gE和PRV-gB抗體 結(jié)果顯示：該場(chǎng)不同豬群270份血清樣品中，PRV-gE（野毒）抗體均為陰性，種公豬、后備種豬、1～2胎次母豬、3～4胎次母豬、5胎次及以上母豬的PRV-gE抗體離散度分別為5.90%、8.29%、6.86%、6.55%、6.83%（表3），均較低；PRV-gB抗體陽(yáng)性樣品有253份，樣品平均陽(yáng)性率達(dá)93.70%，種公豬、后備種豬、1～2 胎次母豬、3～4 胎次母豬、5 胎次及以上母豬的PRV-gB 抗體陽(yáng)性率分別為87.14%、93%、97.67%、100%、100%，離散度分別為19.78%、18.13%、9.35%、9.28%、9.46%（表2、圖4）?？梢?jiàn)該場(chǎng)各養(yǎng)殖階段均無(wú)PRV 野毒感染，PRV 群體免疫抗體水平總體較好，整齊度高；不同胎次生產(chǎn)母豬的PRV-gB 免疫水平和整齊度也非常理想。

表2 不同階段豬群PRV-gB抗體檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

表3 不同階段豬群不同疫病抗體的離散度統(tǒng)計(jì)

圖4 不同階段豬群PRV-gB抗體水平

2.2.4 PRRSV 抗體 結(jié)果顯示：該場(chǎng)不同豬群270 份血清樣品的PRRSV 抗體均為陰性，種公豬、后備種豬、1～2 胎次母豬、3～4 胎次母豬、5胎次及以上母豬的離散度分別為14.78%、7.18%、5.50%、5.34%、5.48%（表3），都較低。該場(chǎng)未免疫過(guò)PRRSV疫苗，病原核酸和抗體檢測(cè)也全為陰性，說(shuō)明該場(chǎng)豬群未感染過(guò)豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒。

3 討論與結(jié)論

3.1 討論 自非洲豬瘟疫情發(fā)生以來(lái)，全國(guó)各地核心育種場(chǎng)都加大了生物安全防控手段和措施，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部要求以種畜禽場(chǎng)為核心，以垂直傳播性疫病和重大疫病為重點(diǎn)，深入開(kāi)展疫病凈化工作，推進(jìn)畜禽種業(yè)振興和畜牧業(yè)高質(zhì)量發(fā)展。全國(guó)各地也積極推進(jìn)生豬相關(guān)疫病凈化工作，四川省獸醫(yī)主管部門(mén)也非常重視，動(dòng)物疫控系統(tǒng)以育種場(chǎng)為起點(diǎn)，指導(dǎo)核心育種場(chǎng)主動(dòng)開(kāi)展凈化。從本次監(jiān)測(cè)情況看，凈化取得了切實(shí)成效，但CSFV、PRRSV、PRV 等疫病仍然是引起豬場(chǎng)繁殖障礙類(lèi)、呼吸道類(lèi)以及免疫抑制類(lèi)疾病的核心病原，種豬場(chǎng)和規(guī)?；瘓?chǎng)仍存在感染。據(jù)2015～2019 年P(guān)RV 流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果，5 年間均未發(fā)現(xiàn)PRV野毒感染，且gB抗體總陽(yáng)性率為97.95%，免疫水平較好［1］。2019～2020年對(duì)四川省5個(gè)片區(qū)17個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)進(jìn)行PRV血清流行病學(xué)調(diào)查，結(jié)果得出PRV-gB 抗體總陽(yáng)性率為84.51%，表明規(guī)模豬場(chǎng)PRV 總體免疫效果較好，但PRV-gE 抗體總陽(yáng)性率為15.63%，哺乳仔豬、育肥豬和經(jīng)產(chǎn)母豬群的野毒感染情況較嚴(yán)重［2］。

2011～2019 年對(duì)山東省16 個(gè)地市717 個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)的22 465份血清樣品進(jìn)行CSFV抗體檢測(cè)和分析，得出種豬場(chǎng)的場(chǎng)群免疫合格率達(dá)73.84%，個(gè)體合格率達(dá)77.54%，種豬場(chǎng)的免疫效果均優(yōu)于商品代豬場(chǎng)［3］。對(duì)江蘇四個(gè)地區(qū)22 家規(guī)?；i場(chǎng)的妊娠母豬（497份樣品）和保育仔豬（1 060份樣品）血清進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示妊娠母豬CSFV 和PRRSV 的平均抗體陽(yáng)性率分別為83.70%和85.11%，從整個(gè)豬群來(lái)看，該地區(qū)使用的疫苗及免疫手段均能發(fā)揮較好的免疫保護(hù)作用［4］。2018～2021年上海嘉定區(qū)2個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)的CSF、PRRS、PR 免疫抗體平均合格率分別為84.7%、95.6%、95.9%，均超過(guò)了70%的國(guó)家合格線標(biāo)準(zhǔn)，表明CSF、PRRS和PR的免疫抗體水平良好，PR凈化效果明顯［5］。2015～2019年對(duì)湖南省5 個(gè)原種豬場(chǎng)的血清及扁桃體樣品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示：CSFV、PRRSV、HP-PRRSV、PRV 病原陽(yáng)性率分別為0、2.1%、1.3%、9.5%；CSFV、PRRSV、PRV-gB 免疫抗體合格率分別為96.9%、99.7%、98.7%，表明這5 個(gè)原種豬場(chǎng)的CSFV、PRRSV、PRV抗體保護(hù)水平良好，但部分原種豬場(chǎng)仍存在不同程度的PRRSV、PRV 感染［6］。2015～2017年對(duì)國(guó)內(nèi)2 012 個(gè)豬場(chǎng)的PRRSV 抗體進(jìn)行監(jiān)測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)平均抗體陽(yáng)性率逐年升高，由2015 年的75.6%逐步升至2017年的81.3%［7］。2021 年從湖北省7 個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)疑似PRRSV 感染豬群以及所有種公豬群的3 324 份樣品中檢出PRRSV 陽(yáng)性樣品323 份，陽(yáng)性率為9.72%［8］。因此，對(duì)CSFV、PRRSV、PRV等疾病的種源凈化還需要加大多方面投入和力度。

3.2 結(jié)論 本次采樣監(jiān)測(cè)的生豬核心育種場(chǎng)已持續(xù)多年開(kāi)展主要疫病凈化工作，從病原核酸檢測(cè)結(jié)果來(lái)看，公豬、妊娠母豬、后備豬、保育豬和仔豬階段豬群均未發(fā)現(xiàn)ASF、CSF、PRRS、PR帶毒情況；抗體檢測(cè)結(jié)果顯示ASF 和PRRS 抗體均呈陰性，表明該場(chǎng)從未感染過(guò)ASFV 和PRRSV。各階段豬群的CSFV 和PRV-gB 免疫抗體平均陽(yáng)性率達(dá)84.07%和93.70%，均超過(guò)了70%的國(guó)家合格線標(biāo)準(zhǔn)，表明該核心育種場(chǎng)的疫病綜合防治措施到位，實(shí)施的凈化方案可行，凈化效果良好，無(wú)ASFV、PRRSV、CSFV感染，保持PRV和PRRSV陰性場(chǎng)。從不同階段豬群的檢測(cè)結(jié)果來(lái)看，該場(chǎng)3～4胎次母豬的CSFV、PRRSV、PRV三種主要疫病的抗體水平相對(duì)較高，離散度相對(duì)最低，表明該階段豬群相對(duì)比較穩(wěn)定；但公豬CSFV 和PRV抗體陽(yáng)性率、平均阻斷率均相對(duì)最低，各抗體離散度均最高，抗體整齊度較差，可根據(jù)實(shí)際情況合理優(yōu)化和調(diào)整種公豬的免疫措施。該場(chǎng)作為核心育種場(chǎng)，需繼續(xù)堅(jiān)持定期的免疫監(jiān)測(cè)，結(jié)合養(yǎng)殖情況和凈化效果，做好生物安全等綜合措施。

基于目前全國(guó)動(dòng)物疫病形勢(shì)，如ASFV 毒株多樣性，PRRSV 不斷變異，引種帶來(lái)新的病毒如豬圓環(huán)病毒3、4 型（PCV3、4 型）、豬塞內(nèi)卡病毒（SVA）、豬蓋塔病毒（GETV）等，使陰性豬場(chǎng)感染壓力不斷增大。通過(guò)核心育種場(chǎng)疫病凈化，有助于動(dòng)物防疫工作者和養(yǎng)殖場(chǎng)找差距、補(bǔ)短板、堵漏洞、強(qiáng)弱項(xiàng)，從源頭上減輕非洲豬瘟等重大動(dòng)物疫病的防控壓力，降低和阻斷其他疾病傳播風(fēng)險(xiǎn)，不斷提高疫病風(fēng)險(xiǎn)防控水平，保障四川省生豬產(chǎn)業(yè)高質(zhì)量發(fā)展。